Nghiên cứu về đặc điểm thực vật và thành phần hóa học cả một loài xuyên tiêu ở tỉnh hua phăn nước cộng hòa dân chủ nhân dân lào

BỘ Y TÊ TRƯỜNG ĐẠI HỌC D ư ợ c HÀ NỘI APHINANH SENGTHONGKHAM NGHIÊN CỨU VỂ ĐẶC ĐlỂM THựC v ậ t VÀ THÀNH PHẦN HOÁ HỌC CỦA MỘT LOÀI XUYÊN TIÊU Ở TỈNH HUA PHĂN NƯỚC CỘNG HOÀ DÂN CHỦ NHÂN DÂN LÀO (KHOÁ LUẬN TỐT NGHIỆP Dược SỸ ĐẠI HỌC KHOÁ 2002-2000 Người hướng dẫn DS : Hồ Trung Chiến ThS : Thipthaviphone SOULINHO : Bộ môn dược liệu - Đại học Dược Nơi thưc • hiên • • Thời gian thực hiện • • • • • Từ 12/2006- 5/2007 )ìĩ /vlỉ ro Hà Nội, Tháng 5 Năm 2007 . LỜI CẢM ƠN Với lòng kính trọng và biết ơn sâu sắc, tôi xin bày tỏ lời cảm ơn chân thành tới thầy giáo DS. Hồ Trung Chiến, thầy giáo Ts. Nguyễn Viết Thân và ThS. Thipthaviphone SULINHO, người thầy đã tận tình hướng dẫn giúp đỡ tôi trong thời gian học tập và thực hiện khoá luận. Tôi xin chân thành cảm ơn các thầy cô giáo, các cán bộ Bộ môn Dược liệu đã giúp đỡ tạo điều kiện về thời gian, trang thiết bị trong xuất quá trình tôi thực hiện khoá luận tại bộ môn. Tôi cũng xin cảm ơn Nhà trường, gia đình, bạn bè, những người đã tạo điều kiện, cổ vũ động viên tôi trong suất thời gian qua. Hà Nội ngày 16 tháng 3 năm 2007 Sinh viên Aphinanh Sengthongkham MỤC LỤC ĐẶT VẤN Đ Ề .............................................................................. ............................... 1 PHẦN 1:TỔNG QUAN............................................................................................. 2 1. Những nghiên cứu về thực vật chi Zanthoxylum............................................... 2 1.1 Chi Zanthoxylum trong hệ thống phân loại......................... .............................. 2 1.1.1. Những nghiên cứu về chi Zanthoxylum trên thế giới..... ..............................4 1.1.2 Một số loài Zanthoxylum thường gặp................................. ...........................6 2. Những nghiên cứu về hoá học............................................................. ................10 2.1. Hoá học tinh dầu trên thế giới...................................................... ................... 10 2.2. Những nghiên cứu về hoá học của chi Zanthoxylum...................................... 11 2.3. Tác dụng và công dụng...................................................................................... 12 PHẦN 2: THỰC NGHIỆM VÀ KẾT QUẢ........................................................... 16 2.1. Nguyên liệu và phương pháp nghiên cứu.............................. .......................... 16 2.1.1. Nguyên liệu và thu mẫu nghiên cứu...............................................................16 2.1.2 Xử lý và bảo quản mẫu.................................................................................... 16 2.1.3 Thiết bị nghiên cứu.......................................................................................... 16 2.2. Phương pháp nghiên cứ u ........................................................... ....................... 16 2.2.1. Nghiên cứu đặc điểm thực vật: vi phẫu và b ộ t..............................................16 2.2.2. Phương pháp sắc ký lớp mỏng........................................................................17 2.2.3. Phương pháp cất kéo hơi nước........................................................................17 2.3. Kết quả thực nghiệm và nhận xét....................................................................17 2.3.1. Về thực vật....................................................................................................... 17 2.3.1.1. Đặc điểm thực vật........................................................................................ 17 2.3.1.2. Nghiên cứu đặc điểm vi học........................................................................17 2.3.2. Về thành phân hoá học................................................................................. 21 2.3.2.1. Xác định hàm lượng tinh dầu trong quả [15].............................................21 + Phân tích tinh dầu bằng sắc ký lớp mỏng và GC/MS.......................................... 23 • Phương pháp SKLM....................................................................................... 23 • Phân tích tinh dầu Zanthoxylum sp bằng phương pháp GCMS.................. 25 2.3.2.2. Định tính các nhóm chất chính trong dượcliệu.......................................28 A. Các nhóm chất trong quả.................................................................................... 28 • Định tính Flavonoid.....................................................................................28 • Định tính Courmarin: .............. ....................................................................29 • Định tính Anthranoid...................................................................................30 • Định tính alcaloid......................................................................................... 30 • Định tính Saponin..........................................................................................31 B. Các nhóm chất trong r ễ ........................................................................................ 33 c. Phân tích sơ bộ một nhóm chất chính trong dượcliệu- Nhóm Flavonoid...... 34 PHẦN 3: KẾT LUẬN VÀ ĐỀ x u ấ t ..................................................................... 39 1. Kết luận................................................................................................................ 39 2. Đề xuất.................................................................................................................. 40 DANH MỤC BẢNG B ảngl: Kết quả xác định hàm lượng tinh dầu trong quả............... ........... 22 Bảng 2 : Kết quả phân tích tinh dầu sơ bộ bằng GCMC............................ 27 Bảng 3 : tóm tắt kết quả định tính của quả Zanthoxylum........................... 32 Bảng 4 : tóm tắt kết quả định tính của rễ Zanthoxyỉum............................ 33 Bảng 5 : Giá trị Rf và độ đậm các vết Flavonoid............................ ............ 36 Bảng 6 : Giá trị Rf và độ đậm các vết Flavonoid ở ánh sáng tử ngoại 37 254nm............................................................................................................. Bảng 7: Giá trị Rf và độ đậm các vết Flavonoid ở ánh sáng tử ngoại 37 366nm............................................................................................................. Ả nhl: Các đặc điểm bột qủa cây Xuyên tiêu.............................................. 17 Ảnh 2: Các đặc điểm bột rễ của cây Xuyên tiêu......................................... 19 Ảnh 3: Vi phẫu lá cây Xuyên tiêu................................................................ 21 DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT T.T Thuốc thử Pư Phản ứng DD dung dịch SKLM sắc ký lớp mỏng CHDCND Lào Cộng Hoà Dân Chủ Nhân Dân Lào GC-MS Gas chromatography-mass spectrometry ĐẶT VẤN ĐỂ Nước Cộng Hoà Dân Chủ Nhân Dân Lào (CHDCND Lào) là một nước nằm trong khu vực nhiệt đới mùa ẩm Đông Nam Á với điều môi trường tự nhiên thuận lợi tạo nên một hệ thực vật rất đa dạng và phong phú đặc biệt là cây tinh dầu và cây thuốc đặc biệt là dân Lào có truyền thống chữa bệnh bằng cây cỏ. Người dân đã sử dụng tri thức bản địa để tự phòng và chữa bệnh cho mình và cộng đồng. Cây Mạc Khèn (MạcKhạch, Mạcmạt,.. .tên gọi theo tiếng địa phương) là loại cây thuộc chi Zanthoxylum, thường cây mọc hoang ở các rừng núi cao phía Đông Bắc của Lào. Trong Đông y cây này được dùng làm thuốc. Quả được dùng chữa viêm họng sổ mũi, đau bụng, đau răng, tê thấp dạng thấp,... Rễ dùng để chữa đau nhức xương, khớp, phong thấp, đau răng,... Lá dùng để đắp vào các vết thương bầm dập do ngã rất có hiệu quả. Cho đến nay, ở nứoc CHDCND Lào chưa có công trình nghiên cứu nàovề tác dụng chữa bệnh của loài Zanthoxylum này. Với mong muốn làm sáng tỏkinh nghiệm sử dụng trong dân gian, nâng cao tính hiệu quả, an toàn của dược liệu, đưa dược liệu vào sử dụng một cách khoa học hơn và có thể đẩy mạnh khai thác sử dụng cây thuốc này vào việc phòng và chữa bệnh cho nhân dân trong cộng đồng các dân tộc Lào, chúng tôi đãtiến hành thực hiện đề tài: “ Nghiên cửư đặc điểm thực vật và thành phần hoá học của một loài Xiiyên tiều ịZanthoxylum) ở Cộng hoà dân chủ nhân dân Lào ” với các nội dung sau: • Nghiên cứu đặc điểm hình thái thực vật của cây • Nghiên cứu thành phần hoá học của cây I PHẦN 1:TỎNG QUAN 1. Những nghiên cứu về thực vật chi Zanthoxylum 1.1 Chi Zanthoxylum trong hệ thống phân loại Zanthoxylum là một chi lớn bao gồm rất nhiều loài và nhiều tên gọi khác nhau: Hoa tiêu, Hoa tiêu thích, Sơn hồ tiêu thích, Ba tiêu, Sưng, Hoàng lực, Dã hoa tiêu, Lưỡng diện châm, Lưỡng phù chắm, Sơn tiêu, Mác khen(Tày), Xuyên tiêu,... [10] A. Guillaumin đã thu thập nghiên cứu ở Đông dương, trong quá trình nghiên cứu của Ông đã thu được 10 loài được xác định tên và tổng hợp theo khoá phân loài thực vật thành một trong 18 chi thuộc họ Cam quýt (Rutaceae), bộ cam (Rutales), liên bộ cam (Rutanea), phân phối Hoa Hồng (Rosidea), lớp cây Hai Lá mầm (Liliopsida) của ngành Ngọc Lan (Magnoliophyta) [11],[16] Có thể mô tả khoá phân loại vị trí của chi Zanthoxylum như: [11],[16] 2 Sơ đồ 1 : Khoá phân loại thực vật về chi Zanthoxylum 1.1.1. Những nghiên cứu về chi Zanthoxylum trên thê giới Trên thế giới, theo ước tính có khoảng 200 loài Zanthoxlum, phân bố chủ yếu ở vùng nhiệt đới, nhiều nhất ở Nam Mỹ, sau đến vùng Đông Nam Á; chỉ có một số ít loài ở vùng ôn đới ấm Đông Á, Bắc Mỹ,các quần đảo ở Thái Bình Dương và Australia. Xuyên tiêu phân bô rải rác từ vùng Đông- Bắc ẤN Độ, kéo dài sang phía Đông đến Trung Quốc(cả Đài Loan) và đảo Ryukyu của Nhật Bản. Vùng phân bố của cây còn gồm cả các nước Đông Nam Á như: Malaysia, Thái lan, Campuchia, Lào, Việt Nam, Indonexia, đảo Solomon [1] tuy nhiên hiện nay người ta đã nghiên cứu được một số loài như: 1. Zanthoxylum acanthopodium DC.- cây sẻn. Hoa tiêu lông gai 2. Zanthoxylum ailanthoides Sieb. Et Zucc..Hoa tiêu lá (cây) xứ 3. Zanthoxylum armatum DC. Cây sẻn gai. 4. Zanthoxylum americanum. Hoa tiêu bắc 5. Zanthoxylum avicenae (Lamb.) DC.- cây Hoàng mộc dài. 6. Zanthoxylum aubertia DC. 7. Zanthoxylum beecheyanum 8. Zanthoxylum bi/oỉiolatum - Hoa tiêu Maricao 9. Zanthoxylum bungaenum Maxim - Hoa tiêu 10. Zanthoxylum capense Harvey 11. Zanthoxylum caribaeum - Hoa tiêu vàng 12. Zanthoxylum clava herculis - Hoa tiêu nam 13. Zanthoxylum coreanum - Hoa tiêu Triều Tiên 14. Zanthoxylum coriaceum - Hoa tiêu Biscayne 15. Zanthoxylum cucullipetalum Guill. Hoàng mộc cách bầu 16. Zanthoxylum cuspidatum Champ et Beth. Đắng cay leo 4 17. Zanthoxylum dipetalum - kawa’u 18. Zanthoxylum dimorphophyllum - Hoa tiêu gai lá lạ 19. Zanthoxylum dissitum - Đơn diện châm 20. Zanthoxylum esquirolii - Nam tiêu 21. Zanthoxylum ỷarala - Hoa tiêu chanh 22. Zanthoxỵlumýlavum - Sơn tiêu Tây ấn 23. Zanthoxylum hawaiiense - Hoa tiêu Hawaii 24. Zanthoxylum hirsutum 25. Zanthoxỵlum Hamiltoniatum Wall. 26. Zanthoxylum kauaense - Hoa tiêu Kauai 27. Zanthoxylum evodỉaỷoliiim Guill. Đắng cay ba lá 28. Zanthoxyỉum leatum Drake. Hoàng mộc sai 29. Zanthoxylum martinicense - Hoa tiêu trắng 30. Zanthoxylum molle - Đoá tiêu 31. Zanthoxylum monophyllum - Tiêu vàng 32. Zanthoxylum nitidum (Roxb) DC. Hoàng lực, Trưng, Xuyên tiêu 33. Zanthoxylum nitiolum - Sung sân 34. Zanthoxylum oahuense - Hoa tiêu Oahu 35. Zanthoxylum ochroxulum DC. 36. Zanthoxylum ovlỉỷolium Wight 37. Zanthoxylum parvum 38. Zanthoxylum pỉacezkỉi - Hoa tiêu Tứ Xyuên Thẩm Tây 39. Zanthoxylum peckoltianum 40. Zanthoxylum piperitum DC. - Hoa tiêu Nhật Bản 41. Zanthoxylum planispinum Siet.et Zucc. 5 Đắng cay, sẻn gai 42. Zanthoxylum punctatum - Hoa tiêu đốm 43. Zanthoxylum rhetsa (Roxb.)DC. sẻn hôi, Hoàng mộc hôi 44. Zanthoxylum rhetsoide Drake. sẻn lá to, Hoàng mộc nhiều gai 45. Zanthoxylum sancho 46. Zanthoxylum scabrum Guill Dây khúc khắc 47. Zanthoxylum schiniỷolium Sieb.Et Zucc. - Hương tiêu 48. Zanthoxylum setosum Hemls. 49. Zanthoxylum senegalense DC. 50. Zanthoxylum simulans - Xuyên tiêu, Hoa tiêu dại 51. Zanthoxyỉum spiniỷex - niaragato 52. Zanthoxylum stenophyllum - Hoa tiêu lá hẹp 53. Zanthoxylum thomasianum - Hoa tiêu st Thomas 1.1.2 Một sô loài Zanthoxylum thường gặp Ở Việt Nam có 12 loài, trong đó có cây Xuyên tiêu, ở Việt Nam Xuyên tiêu cũng phân bố rải rác khắp các tỉnh từ vùng núi thấp(dưới 600m) đến trung du và đôi khi cả ở đồng bằng. Cây có nhiều ở các tỉnh Phú Thọ, Vĩnh phúc, Hà Tây, Hoà Bình và khu vực miền Trung từ Thanh Hóa trở vào. Zanthoxylum L. Cây nhỡ hay cây gỗ có thân thẳng. Nhánh thòng hay trải ra, có gai thẳng hay cong. Lá không lông hay có lông nhung, kép lông chim lẻ, mọc so le, lá chét mọc đối hay không, thường có gai. Cụm hoa ở nách hay ở ngọn; hoa đa tính, khác gốc, không cuống hay có cuống. Lá đài rời, lớp nhiều hay ít, dính nhau, cánh hoa 4-5, rời, lợp hay xếp van gập trong hay không. Hoa đực có 4-5 nhị, rời; bầu có lá noãn thô sơ hình nón, hoa gái có đĩa mật dưới bầu có lá noãn rời nhiều hay ít, vòi nhụy rời hay hợp, thường ở bên đầu nhụy rời hay 6 hợp, mỗi lá noãn là một ô, noãn 2 ở bên, của hình cầu hay gần hình cầu, khô, mảnh vỏ 1-5, rời có tuyến, mở bởi một rãnh dọc, hạt một trong mỗi mảnh vỏ, vỏ sẫm, bóng, cán noãn ngắn và khá phát triển, phôi nhũ nạc, phôi thẳng hay hơi cong, lá mầm mỏng. 1). Zanthoxylum acanthopodium DC. - cây sẻn Cây gỗ nhỏ cao 4m, thơm, cành có lông ngắn, cứng, gai thẳng, cao đến 2cm. Lá rất thơm, có từ 5-11 lá phụ, không cuống phụ, không lông, mép có răng, có 10-15 cặp gân phụ, mặt tròn màu nâu, mặt dưới màu nâu vàng; trục có cánh. Chùm ngắn như xim co; hoa đơn tính màu xanh; nhị cao l-2,5mm; bao phấn đỏ; ở hoa cái có 3-5 lá noãn, đĩa mật cao. Quả nang có 1-5 ô, mỗi ô một hạch đỏ [8],[9]. 2). Zanthoxylum armatum DC = (Z.alatum Roxb.),- cây sẻn gai Cây gỗ nhỏ cao 4m. thân to 20cm; gai thẳng, dẹp. Lá có sống có cánh rộng 2mm, mang 3-5(-7) lá chét thon, dài đến 13 cm. Phát hoa ở phần nhánh già, cao 4-7cm; hoa trăng trắng, lá đài 5, hoa cái có nhị lép, bầu 2-5 lá noãn. Quả đại có 1 hạt hình tròn, màu đỏ; hạt có màu đen [8],[9]. 3). Zanthoxylum avicennae (Lam)DC. - Muồng truống, Hoàng mộc dài Cây gỗ nhỏ cao đến 8m; thân có gai, có màu vàng sáng; cành cũng mang nhiều gai thẳng đứng và ngắn. Lá kép lông chim lẻ có 3-11 đôi lá chét hình ngọn giáo, gốc lá chét không cân, hai bên có góc, mép nguyên hay hơi có răng. Cụm hoa hình tán kép mọc ở ngọn cành, dài hơn lá. Hoa màu trắng nhạt. Quả dài 4mm, chia 1-3 ụ, có lớp trong không tách được với lớp vỏ ngoài; mồi ô chứa 1 hạt màu đen [8],[9]. 4). Zanthoxyỉum cucullỉpetalum Guill.- Hoàng mộc cánh, bầu 7 Cây thân gỗ cao 5m, vỏ màu trắng; gai ít, ngay; cành non có lông. Lá thơm, dài 14cm; lá phụ dài 4-8cm, mỏng, không có lông. Hoa mọc thành chùm có lông, cao 12cm; hoa màu vàng, rất thơm; cánh hoa 4, cao lmm; nhị 4. Quả nang màu đỏ, cao 5mm; có một hột màu đen [8],[9]. 5). Zanthoxylum cuspidatum Champ. Ex Beth.(Z.scandens Blume.),- Đắng cay leo, Hoàng mộc leo. Cây bụi leo với các nhánh có gai ngắn và cong về phía dưới. Lá kép lông chim lẻ, với 13-17 đôi lá chét, mọc so le không cân đối; trục lá có khi có gai. Hoa mọc thành chim xim ở nách lá. Quả nang, có 1-4 hạch, với lớp ngoài có rãnh, với lóp trong như giấy da tách ra dễ, mỗi hoạch chứa một hạt đen nhánh [8],[9]. 6). Zanthoxylum evodiaefolium Guill,- Đắng cay ba lá, Hoàng mộc phi Cây gỗ nhỏ cao 8m, thân to 2cm, gai cong cong, cành yếu, có lông màu sét. Lá có cuống ngắn, l,5-2cm, mang ba lá chét thon, dài đến lOmm, không lông. Chùm hoa cao 5cm; hoa trắng, thơm, đài không lông, 5 răng nhọn; cánh hoa 5, dài 2mm; nhỊ5 0 hoa đực. Quả nang có 1 hạt [8],[9]. 7). Zanthoxylum leatum Drake,- Hoàng mộc sai Cây gỗ cao 3-4m; thân có nhiều gai cong; cành non không lông, xám hay nâu xám. Lá mang 5-9 lá phụ bầu dục, to 5-7 X 2,5-3,5cm, không lông, mỏng, gân phụ rất mảnh mặt trờn, lồi ở mặt dưới, 7-8 cặp; súng dài hơn 20cm, Hoa ngắn mọc ở nách lá. Quả nang hình tròn, to có một hột [8],[9]. 8). Zanthoxylum nitidum (Roxb.) DC, - Xuyên tiêu, Sưng, Hoàng lực, Trưng. Cây nhỏ leo với thân hơi đen, có gai, mọc thành bụi cao khoảng l-2m, có nhiều nhánh màu đỏ nhạt, vươn dài có thể tới lOm, có gai ngắn cong về phía dưới. Lá kép lông chim lẻ, mọc so le, dài 18-25cm, có 2-3cm đôi lá chét mọc 8 đối; phía lá chét hình trái xoan, gốc tròn đầu nhọn, mép khía răng mỏng, mặt trìn màu lục sẫm, mặt dưới màu nhạt hơn; hai mặt của gân chính đều có gai. Hoa mọc thành chùm hoặc thành chùm xim co, đơn độc hay tập trung thành bó ở nách lá. Quả có 1-5 ô đính noãn trung trục, có phần ngoài nhăn nheo, phần trong nhăn như giấy da, tách ra được. Mỗi ô chứa một hạt, có vỏ dày, cứng, bao bởi một màng màu đen nhánh [8],[9]. 9). Zanthoxylum planispinum Sieb.et Zucc.- Đắng cay, sẻn gai Cây gỗ nhỡ, cao tới 4m, phân nhánh nhiều, có cành dài và thừng xuống. Cành có gai dẹp, thẳng hay gần thẳng, lá kép lông chim, mọc so le, gồm 3-5 lá chét không cuống, phần giữa của cuống chung có cánh, những lá chét tròn lớn hơn, các lá bên không cân ở gốc; Cụm hoa chùm thưa ở nách lá, hoa màu trắng lục. Quả nang có một hạch, mở, to 5mm, màu đỏ nâu, vỏ quả ngoài dễ tách khỏi vỏ quả trong. Hạt đơn độc hình cầu màu đen [8,9]. 10). Zanthoxylum rhetsa (Roxb.) DC = (Z. budrunga Wall.).- sẻn hồi, Hoàng mộc hồi. Cây gỗ nhỏ có thân và cành phủ đầy gai nhỏ hình nón, ngắn, có gốc rộng và tròn. Lá thành bó ở cuối các nhánh, kép lông chim lẻ, với 6-8 đôi lá chét thon với mép nguyên. Cụm hoa ngù kép ở ngọn,to bằng hạt đậu Hà lan, màu đỏ, có phần ngoài có khía rãnh, phần trong trắng, sớm rụng mang một hạt tròn ở phía đỉnh, màu đen bóng láng, như là có dầu, lúc đầu có vị của chanh về sau thấy rất cay [B],[9]. 11). Zanthoxylum rhetsoides Drake = (Z. myriacanthum Wall. Ex Hook. F.).- sẻn lỏ to, Hoàng mộc nhiều gai Cây gỗ cao tới lOm, có rất nhiều gai đỏ, thẳng và hơi cong về phía tròn. Lá kép lông chim chẵn, dài 30-40cm; có 4-6 đôi lá chét, hình trái xoan thuôn, dài ở 9 đầu, hơi có răng ở mép. Hoa trắng có mùi thơm nhẹ, xếp thành chuỳ ở ngọn; cánh hoa 4-5, nhị 4, vòi nhụy 4, dính nhau [8],[9]. 12). Zanthoxylum scabrum Guill.- Dây khúc khắc Cây leo dài hơn lOm; thân to 7cm; gai nhỏ; cành non có lông. Lá dài đến 30cm, mang 5-9 lá phụ dài đến 14cm, đáy tròn hay hình tim, dài, mỏng, bìa nguyên hay có răng, có tuyến trong; sóng và cuống đầy lông vàng và gai cong nhỏ. Phát hoa ở nách lá, cao 2 cm, dày; hoa trắng, không cọng; lá dài 4, tam giác; cánh hoa 4, xoan, dài l,5mm; nhị 2, noãn sào lép; Quả nang có 1-4 hạch, cao 6mm; hột có màu đen bóng [8],[9]. 2. Những nghiên cứu về hoá học 2.1. Hoá học tinh dầu trên thế giói. Hiện nay trên thế giới, người ta đã và đang từng bứoc đưa ra kết quả các công trình nghiên cứu về chi Zanthoxylum Bằng phương pháp cất kéo hoi nước, các nhà nghiên cứu đã thu được - Trong quả của loài Zanthoxylum acanthopodỉum DC., 1,2% tinh dầu, trong đó thành phần chính là d-linalool (trên 50%), ngoài ra còn có Dipenten, 1a-phenaldren, Alcol (linalol), Ester(methyl cinnamat), aldehyld(citral). - Trong quả Zanthoxylum alatum Roxb., 3,75% tinh dầu, với thành phần chính là 1-a- phenaldren (trên85%) và một phần nhỏ linalool, serquiterpen. - Trong quả Zanthoxylum budrunga Wall., có 1-sabinen, terpinan và một alcol chưa xác định - Trong tinh dầu cây Zanthoxylum Aubertia DC., có 40-60% Methyl eugenol và terpinen. 10 - Trong lá Zanthoxyỉum ailanthoides Sieb. Et Zucc., người ta cất được 0.5% tinh dầu với thành phần chính là Methylnonylketon (84%) và 5% Methylundecylketon, ngoài ra còn một phần nhỏ alcol. - Trong hạt của loài Zanthoxylum Hamiltonianum Wall., 3,8-5% tình dầu có mùi thơm thơm của tinh dầu geraniol, có tỉ trọng 0,840. - Từ hạt cuă Zanthoxylum ovaliỷolium Wight., 0,3% tinh dầu với thành phần chính là Saírol, ngoài ra còn có Mycren, 1-Phellandren, acid palmitic. - Từ quả của Zanthoxylum piperitum DC., 2-6% tinh dầu trong đó có thành phần chính là hỗn hợp Monoterpenic (54-90%), mà có lẽ là hỗn hợp của Dipenten d-Limonen ngoài ra còn chứa các hợp chất có chứa Oxy như Acid béo, Acid palmtic geraniol, cuminaldehyd, Citronellol, Citronellal, citral và tricyclisches sesquiterpen;. - Trong tinh dầu lá của Zanthoxylum setosum Hemsl., có 53,4% Methylnonylketon và Linalool. - Trong vỏ quả của Zanthoxylum senegalense DC., có chứa 0,37-2,4% tinh dầu trong đó có Methylnonylketon, Dipenten, Linalool, serquiterpen [17] * Các thành phần khác Các nhà khoa học trên thế giới đã phát hiện được các hợp chất bishordeninyl terpenalcaloid (hợp chất không hoạt quang) trong các cây Zanthoxylum punctanum, Zanthoxylum procerum, Zanthoxylum chiriquynum, Zanthoxylum corỉacerum, Zanthoxylum cullảntillo [1 ],[3] 2.2. Những nghiên cứu về hoá học của chi Zanthoxylum Ở Việt Nam, việc nghiên cứu thành phần hoá học trong cây của các loài Zanthoxylum chưa có nhiều tài liệu nghiên cứư. Với loài Zanthoxylum acanthopodium DC, quả chứa một tinh dầu và một chất gây cảm giác ngứa. Chất 11 kích đó có thể là íeragamide. Tinh dầu của hạt chứa dipentene và phellandren 47%, linalol 37,5%, citral 6%, methyl cinnamat 0,02% và các vết acid tự do [8]. Hạt của loài Zanthoxylum avicenae(Lam) DC chứa 30% dầu, quả và lá có chứa tinh dầu có mùi thơm citronellal [8] [14]. Ở ViệtNam đã có một luận án tiến sỹ nghiên cứu sâu về thành phần hoá học của loài Zanthoxylum avicenae(Lamk.)DC. Tác giả Trịnh Thị Thuỷ đã chiết tách, phân tích và xác định được cấu trúc hoá học của các hợp chất bishordeninyl terpen alcaloid trong lá cây Hoàng mộc dài - Zanthoxylum avicenae (Lamk.) DC., mọc ở rừng Quốc gia Cúc Phương, Ninh bình [1],[3]. Vỏ rễ của Zanthoxylum nitidum( Roxb.) DC. có chứa alcaloid nitidin, glucosid diosmin. Hạt có 1% tinh dầu với các thành chủ yếu là limonen (44%), geraniol (12,14%), neral (10,95%), linalol (6,84%) [8],[14]. Với loài Zanthoxylum planispinum Sieb. Et Zucc, quả chứa 1,5% tinh dầu, vỏ chứa chất đắng kết tinh tương tự Berberin, một chất dầu bay hơi và nhựa. Ngoài ra cây còn có dictamnine. Lá chứa tinh dầu và các chất carbonyl như Methyl nonylketon. Chưng cất phân đoạn ceton tự do có linalyl-acetat, sesquiterpen hydrocarbon và tricosane. Quả của Zanthoxyỉum rhetsa (Roxb.) DC. có chứa 0,24% alcaloid và tinh dầu. Vỏ quả chứa ô-terpinen, d-a-phellandren, 4-caren, p-pinen, d-ađihydrocarvol, 4-terpineol, di-carvotanaceton và một chất có tác dụng kháng khuẩn khác, vỏ cây có chứa 2 alcaloid có tên là budrungain (0,0025%), budrungainin(0,005%) và lupeol [8]. 2.3. Tác dụng và công dụng. Cây thuộc chi Zanthoxyỉum chủ yếu được sử dụng theo dân gian và Y học cổ truyền. 12 Tính vị, tác dụng: Các cây thuộc chi Zanthoxỵlum thường có vị cay, đắng; tính ấm; có tác dụng ôn trung tán hàn, khu phong trừ thấp, hoạt huyết, giảm đau [8] * Một số loài Zanthoxylum có thể dùng điều trị các chứng bệnh sau - Đau răng: các bộ phận của rễ cây sẻn gai, cây Xyuên tiêu [18],[19]. - Đau bụng non mửa, rối loạn tiêu hoá, ỉa chảy: Quả của Đắng cay, Đắng cay ba lá [18],[19]. - Đau nhức xương khớp: đau lưng nhức mỏi, phong thấp tê bại, đòn ngã tổn thương: rễ Xuyên tiêu, quả Đắng cay, rễ Hoàng mộc dài [18],[19]. Đau dạ dàng: quả Hoàng mộc dài, rễ Xuyên tiêu [18],[19]. - Chữa rắn cắn, trị giun sán: quả Xuyên tiêu, quả sẻn gai [18],[19]. - Ung thũng sang độc, mẫn ngứa ngoài da; lá sẻn gai, lá và rễ Xuyên tiêu [18],[19],[8] - Cảm mao phong hàn, hen xuyễn: sẻn gai, Đắng cay [18],[19]. * Xếp loại công dụng theo bộ phận dùng của cây: Rễ: Nhuận tràng, hoạt huyết, giải độc con trùng (độc của bọ cạp). Vỏ thân: Hoạt huyết thông kinh. Hoa: làm gia vị, trị các bệnh đường tiết niệu, trị đầy chướng bụng. Hạt: Giải biểu, bổ tâm, bổ huyết, nhuận tràng[19]: Toàn cây: Giải độc do rắn cắn, hoạt huyết (kinh nguyệt), giải ung nhọt. Ngoài ra một sô công trình nghiên cứu về tác dụng dược lý của chi này còn để cập tới tác dụng chống viêm, kháng Histamine, hạ huyết áp, điều trị lao trong thỏ. * Theo tài liệu nước ngoài, ở Trung Quốc, đã có báo cáo lâm sàng dùng Xuyên tiêu trong những trường hợp sau đây [1]: _ Thuốc giảm đau: 13 Dung dịch tiêm chế từ xuyên tiêu, tiêm bắp thịt mỗi lần 2ml tương đương với 3g rễ, ngày 1-2 lần. Đã dùng để điều trị cho 500 bệnh nhân đau dây thần kinh, đau đầu, đâu phong thấp, đau dạ dàng. Kết quả sau khi dùng thuốc 5-10 phút, xuất hiện tác dụng giảm đau kéo dài 4-8 giờ. _ Thuốc gây tê bề mặt, tê cục bộ: Dùng xuyên tiêu gây tê để nhổ răng cho 101 trường hợp, đạt kết quả tốt là 98 trường hợp; rạch apxe mủ chân răng 18 trường hợp, đạt kết qủa tốt 14 trường hợp. Cách làm: lấy bông tẩm ít thuốc đặt vào chân răng, sau 1-2 phút xuất hiện tác dụng gây tê. Ngoài ra, còn dùng dung dịch 0,5% xuyên tiêu để gây tê cục bộ trong những trường hợp tiểu phẫu thuật thắt ống dẫn trứng, cắt amidan. Đã sử dụng trong 62 trường hợp, kết quả ổn định, không xuất hiện tác dụng phụ. Tác dụng gây tê xuất hiện 3-6 phút sau khi tiêm thuốc. _ Chữa viêm amidan cấp tính: Lấy tầng vỏ thứ hai của rễ 35g, nghiên thành bột nhỏ, trộn với bột hổ phách 15g đem phun bột và amidan, hoặc dùng dạng viêm ngâm. Ngày 4-5 lần. Đã điều trị cho 28 bệnh nhân viêm amidan cấp tính. Sau 2-6 ngày dùng thuốc, toàn bộ bệnh nhân đều khỏi. Nhìn chung, sau khi dùng thuốc 12-24 giờ, các triệu chứng giảm rõ rệt, hạ sốt, giảm ho xét nghiệm máu trở về bình thường. _ Thuốc gây dị ứng thuốc: Có một trường hợp sau khi tiêm xuyên tiêu 10 phút thì xuất hiện phản ứng dị ứng, mẩn ngứa toàn thân, da đỏ, bứt rứt khó khó chịu, thở nhanh , nôn mửa, huyết áp tăng. Xử lý bằng các uống một cốc nước đường, sau 1 giờ các triệu chứng đều hết. + Cho đến nay , theo thông tin của nước Lào mà tôi đã thu thập được thì chưa có các công trình nghiên cứu sâu về chi Zanthoxylum. Các nghiên cứu về công dụng và tác dụng của chi Zanthoxylum được công bố, chứng minh ở trong 14 nước thì rất khiêm tốn. Đại đa số là sử dụng theo phương thức gia truyền kinh nghiệm dân gian. Tuy nhiên vẫn có một trong các thông tin đã công bố về chi Zanthoxylum ở Lào là trong lĩnh vực Nông Lâm “ Lâm sản phi gỗ (NTFP)” [1] 15 PHẦN 2: THựC NGHIỆM VÀ KÊT QUẢ 2.1. Nguyên liệu và phương pháp nghiên cứu 2.1.1. Nguyên liệu và thu mẫu nghiên cứu. Các mẫu Zanthoxylum được thu thập từ nhiều địa phương của tỉnh Hua Phăn thuộc vùng Đông Bắc nước CHDCND Lào. Mẫu nghiên cứu được thu hái trực tiếp từ rừng thứ sinh và tách riêng từng bộ phận: Cành lá, quả và rễ. Nơi thu mẫu được khoanh vùng, đánh số toạ độ trên bản đồ và xác định độ cao so với mặt nước biển. Mẫu được đánh số (mã hoá), làm khô trong bóng râm, cất giữ trong túi polyethylen và lưu mẫu. 2.1.2 Xử lý và bảo quản mẫu. * Mẫu dược liệu cắt vi phẫu có thể dùng mẫu tươi hoặc mẫu khô được làm mềm, bảo quản trong hỗn hợp cồn- nước- Glycerin( 1:1:1) * Mẫu dược liệu dùng soi bột được thái nhỏ, sấy khô, nghiền thành bột, bảo quản trong lọ kính. * Mẫu dược liệu dùng để chạy sắc ký đựoc thái mhỏ, sấy khô ở nhiệt độ < 60°c bảo quản nơi khô ráo. 2.1.3 Thiết bị nghiên cứu - Xác định độ ẩm trên máy Sartorius AG Gottingen MA30-0003 tại bộ môn Dược liệu - Máy soi tử ngoại UV- Carbinet II - Tủ sấy dược liệu khô - Máy cất quay 2.2. Phương pháp nghiên cứu 2.2.1. Nghiên cứu đặc điểm thực vật: vi phẫu và bột 16 Hình thái cây được đo và mô tả tại thực địa, kết hợp với chụp ảnh. cắt vi phẫu bằng máy cắt cầm tay và nhuộm kép theo phương pháp ghi trong tài liệu Thực tập Dược liệu, Thực tập hình thái và giải phẫu thực vật. Nghiên bột bằng cốt sứ, quan sát dưới kính hiện vi, chụp ảnh dưới kính hiển vi điện tử. 2.2.2. Phương pháp sắc ký lớp mỏng 2.2.3. Phương pháp cất kéo hoi nước 2.3. Kết quả thực nghiệm và nhận xét 2.3.1. Về thực vật 2.3.1.1. Đặc điểm thực vật Qaun sát thực địa chung tôi thấy: Cây xuyên tiêu thuộc loại cây nhỏ, thân gỗ, thân già màu nâu đen có đốm trắng, thân non màu xanh sáng, mọc thành bụi trườn cao khoảng 2-3m, có nhiều nhánh có màu đỏ nhạt, vươn dài có thể tới 45m, co gai ngắn, dẹp, cong về phía dưới. Lá kép lông chim lẻ, mọc so le, dài 2030cm, có 2-3 đôi lá chét mọc đối, có gai. Mặt trên không có gai và hơi lồi. Phiến lá chét hình trái xoan, gốc tròn đầu nhọn, mép khía răng mỏng, mặt trên màu lục sẫm, mặt dưới màu nhạt hơn. Lá phần nhọn màu hồng nhạt. 2.3.1.2. Nghiên cứu đặc điểm vi học A. Bột quả: Bột quả đã sấy khô, nghiền mịn, bột có màu nâu hơi ánh vàng, vị đắng hơi tê ở lưỡi, soi kính hiển vi thấy: Mảnh vỏ quả, Mảnh biểu bì mang lông (cuống quả), lông che chở, Mảnh vỏ quả có túi chứa tinh dầu hay mảnh mô mềm có chứa tinh dầu, Mảnh vỏ hạt, Mảnh mạch, Giọt tinh dầu hình cầu có kích thứoc khác nhau có chiết quang lớn, Hạt tinh bột, Tinh thể calxi oxalat hình khối. . Chế biến: Hầi các chùm quả già đã chín khi các vỏ quả đã mở đem phơi khô (chỉ lấy quả, tuốt bỏ các nhánh mang qủa) 17 Ảnhl: Các đặc điểm bột qủa cây Xuyên tiêu 1 . Lông chê chở , 2. Mảnh vỏ quả có chứa tinh dầu , 3. Mảnh biểu bì mang lông , 4. Tinh thể calcioxalat hình khối, 5. Tinh b ộ t, 6. Mảnh mạch B. Bột rễ: Bột rễ đã thái nhỏ sấy khô, nghiền mịn, bột rễ có màu vàng nhạt, mùi thơm dịu, vị đắng hơi tê lưõi. Quan sát dưới kính hiển vi thấy: Bần, Mảnh mạch điểm, Tế bào cứng, Sợi bó sợi, Mảnh mô mềm 18 1. Mảnh mạch điểm , 2. Mảnh bần , 3. Tế bào cứng , 4. Bó sợi chứa tinh dầu, 5. Sợi, bó sợi c. Vi phẫu lá: . Nghiên cứu đặc điểm vi phẫu của dược liệu [2] [3] Lá Zanthoxylum sp sau khi thu hái về, lựa chọn những lá điển hình. Làm mềm dược liệu bằng cách ngâm trong hỗn hợp cồn: nước: glycerin (1:1:1). Cắt vi phẫu: Dược liệu khô hay tươi đã ngâm mềm cắt ngang bằng lưới dao hoặc dụng cụ cắt vi phẫu cầm tay chọn các lát cắt mỏng. Tẩy: Nhuộm các lát cắt vào dung dịch cloramin qua đêm vi phẫu lá vẫn chưa trong tiếp tục đi đun nóng, vẫn chưa sạch cho thêm cloramin đi đun nóng tiếp -> rửa nước nhiều lần -> tẩy Javen 15’ -> rửa nước nhiều lần -> tẩy tiếp 19 cloram hydrat 15-30' -> rửa nước nhiều lần -> rửa bằng dung dịch acid acetic 10% -> rửa nước cho hết acid acetic. Nhuộm: Theo phương pháp nhuộm kép với đỏ Son phen và xanh Metylen. Nhuộm đỏ son phen 60' -> rửa bằng nước -> nhuộm xanh metylen lh -> rửa bằng nước. Cô định: Vi phẫu sau khi nhuộm được khử nước từ từ bằng cồn với độ cồn tăng dần 60°-> 90° sau cùng là cồn tuyệt đối, lắc vi phẫu 3 lần trong xylen. Đặt vi phẫu vào một giọt bôm canada trên phiến kính, đậy lá kính, để tiêu bản ở chỗ thoáng 2-3 tuần cho ổn định. Tiêu bản vi phẫu cố định được quan sát mô tả đặc điểm và chụp ảnh. Quan sát phần gân lá dưới kính hiển vi: Biểu bì trên và biểu bì dưới gồm một lớp tế bào xếp đều đặn. Đám mô dày xếp sát biểu bì trên và cung mô dày xếp sát biểu bì dưới. Mảnh mô mềm gồm các tế bào thành mỏng, to. Bó libe - gỗ gồm có vòng libe phía ngoài bao quanh vòng gỗ phía trong. Vòng gỗ gồm các mạch gỗ xếp thành hàng bao quanh mô mềm. Phía ngoài libe có các bó sợi libe không liên tục. Phần phiến lá quan sát thấy: biểu bì cấu tạo tương tự biểu bì gân lá. Mô dậu gồm từ 1-2 hàng tế bào hình chữ nhật xếp đứng đều đặn ở sát dưới biểu bì trên. Mô khuyết được cấu tạo bởi những tế bào xếp lộn xộn để hơ những lỗ khuyết nhỏ. Bó libe gỗ gân phụ. Tinh thể calxi Oxalat hình cầu gai nằm ngay sát dưới hàng tế bào mô 20 Ảnh 3: Vi phẫu lá cây Xuyên tiêu 2.3.2. Về thành phân hoá học 2.3.2.I. Xác định hàm lượng tinh dầu trong quả [15] Nguyên tắc : Tách tinh dầu ra khỏi dược liệu bằng phương pháp cất kéo - hơi nước. Từ lượng tinh dầu thu được so với khối lượng dược liệu ta tính được hàm lượng tinh dầu trong dược liệu. Hàm lượng tinh dầu trong dược liệu được tính theo công thức sau: + Áp dụng cho tinh dầu có tỉ trọng lớn hơn 1 X°/o = ^—^ xlO O b Trong đó: X: hàm lượng phần trăm tinh dầu (ml/g) 21 a: thể tích dầu đọc sau khi cất (ml) b: Khối lượng dược liệu đã trừ độ ẩm (g) c: thể tích Toluen (TT) cho vào tinh dầu - Dụng cụ: . Nồi cất tinh dầu . Ong hứng . Bình gạn . Bình đựng - Cách tiến hành và kết quả (Bảng): Cân dược liệu chính xác 1000 g dược liệu, cho vào nồi cất tinh dầu hồi lưu (có cải tiến). Cho nước vào vừa đủ ngập dược liệu, cất kéo hơi nước cho đến khi hàm lượng tinh dầu không tăng lên nữa (khoảng 5-6 giờ), để ngoại, đọc kết quả hàm lượng tinh dầu thu được (tiến hành 7 mẻ). Kết quả ở bảng sau Bảngl: Kết quả xác định hàm lượng tinh dầu trong quả SỐTT Khối lượng Thể tích tinh Độ ẩm % (Thể Hàm dược liệu (g) dầu (ml) tích Toluen) lượng tinh dầu % 1 1000 241.5 11.5 24.431 2 1000 243.5 12.6 24.661 3 1000 243 12.7 24.613 4 1000 241 11.3 24.375 5 1000 242.4 11.2 24.515 6 1000 244.6 11.9 24.755 7 1000 244 12.3 24.704 Giá trị trung bình 1000 242.85 11.92 24.57 22 - Cách xác định độ ẩm trong quả Cho vào bình cầu đã được làm khô 200ml toluen, 2ml nước, Lắp dụng cụ ( đã được sấy khô). Cất khoảng 2giờ. Để nguội trong 30 phút, đọc thể tích nước cất được ở ống hứng, chính xác đến 0.05 ml Thêm vaò bình cầu cân dược liệu lOg . Đun nóng nhẹ trong 15 phút, khi toluen đã bắt đầu xôi thì điều chình nhiệt độ để cất với tốc độ 2 giọt trong 1 giây, khi đã cất được phần lớn nước sang ống hứng thì nâng tốc độ cất lên 4 giọt trong một giây. Tiếp tục cất khi cho đến mực nước cất được trong ống hứng không tăng lên nữa. Dùng 5-10 ml toluen rửa ống sinh hàn, cất thêm 5 phút nữa, tách bộ phận cất ra khỏi nguồn nhiệt. Nếu còn có những giọt nước đọng lại trên thanh ống sinh hàn thì dùng 5 ml toluen để rửa kéo xuống. Khi lớp nước và lóp toluen đã được phân tách hoàn toàn, đọc thể tích nước trong ống hứng, độ ẩm của dựơc liệu được tính theo công thức sau: V —V x%= 2 ' xioo p V1: số ml nước cất đựơc sau lần cất đầu V2: số ml nước cất được sau lần cất thứ 2 p : số g mẫu đã cân đem thử x% =— — xioo 10 = 12% Nhận xét: Hàm lượng tinh dầu trong quả khô tuyệt đối của Xuyên tiêu là 24,57%, và độ ẩm của dược liệu tính đựơc là 11,92% + Phân tích tinh dầu bằng sắc ký lớp mỏng và GC/MS • Phương pháp SKLM 23 * Dung cụ: • Bình triển khai • Đèn tử ngoại, phát các bước xạ có bước sóng 254 nm và bước sóng dài 366 nm. • Tủ sấy điều nhiệt để hoạt hoá và sấy bản mỏng và sắc ký đồ • Tủ hút hoi độc. • Máy ảnh tốt • Tủ lạnh để bảo quản những thuốc thử dễ hỏng • Micropipet nhiều cỡ • Bản mỏng tráng sẵn chất hấp phụ • Dung môi triển khai Toluen : Ethyl acetat (9 : 1) Hình 1: Ảnh sắc ký dịch chiết tinh dầu trong quả Xuyên tiêu 24 ánh sáng thường • Bước sóng 254 nm Phân tích tỉnh dầu Zanthoxylum sp bằng phương pháp GCMS 1. Chuẩn bị dung dịch thử: Hoà 1 ịil tinh dầu vào n-Hexan (Merck), lắc kỹ được dung dịch có nồng độ 0, 1%. 2. Điều kiện chạy máy sắc ký khí khối phổ: máy sắc ký khí khối phổ Shimadzu QP2010. Cột sắc ký khí DB- 5 MS (30 m X 0.25mm ID) Khí mang He Tỉ lệ m/z từ 40 - 200 Nhiệt độ buồng tiêm : 180°c 25 Nhiệt độ Detector : 200°c. Chương trình nhiệt độ: 55 - 200°c ; tốc độ tăng 7°c/phút. Thể tích tiêm mẫu: 1|il Hệ số tách dòng: 40. 3. Đánh giá kết quả: Xác định và tính tỉ lệ % các chất trong tổng số 20 chất bay hơi có trong tinh Hình 2: Sắc ký đồ sắc ký khí khối phổ tinh dầu Zanthoxylum sp (xl0,000,000) Bảng 2 : Kết quả phân tích tinh dầu sơ bộ bằng GCMC STT Tên hợp chất Định cao Hàm lượng pic % tinh dầu Ghi chú 1 .ALPHA.-PINENE 8.181 8.94 2 .beta.-Myrcene 10.536 4.90 3 L- Phellandrene 11.266 31.06 4 •DELTA.3-Carene 11.344 0.57 5 .ALPHA. TERPINENE 11.738 0.43 6 L-Phellandrene 12.094 0.99 7 Bomylene 12.321 19.24 3 8 .beta.-Phellandrene 12.385 20.50 2 9 Cis-Ocimene 12.695 2.56 10 .DELTA.3-Carene 13.233 7.29 11 •DELTA.-CARENE 15.132 0.21 12 Linalool 15.738 0.32 13 NEO-ALLO-OCIMENE 16.640 0.23 14 4-Terpineol 18.022 0.25 15 .BETA.FENCHYL ALCOHOL 18.359 0.33 16 Decanal (CAS) n-Decanal 18.596 0.17 17 n-Octyl acetate 18.673 0.21 18 Nerol 19.447 0.24 19 Linalyl acetate 21.475 0.97 20 Caryophyllene 22.199 0.59 27 1 - Kết quả phân tích thành phần tinh dầu sau khi cất bằng GCMS đã xác định 20 thành phần tinh dầu trong Zanthoxylum sp. Cho Pic phổ và hàm lượng phần trăm cao nhất là L- Phellandrene, .beta.-Phellandrene và Bomylene. 23.2.2. Định tính các nhóm chất chính trong dược liệu A. Các nhóm chất trong quả Khi phân tích hoá học tinh dầu, trong phần định tính xác định các nhóm chất chính chúng tôi tiến hành trên các mẫu của quả Mạckhèn • Đinh tính Flavonoid Lấy 20g dược liệu cho vào bình dung tích 250ml có nút mài, thêm vào đó cồn etylic 90° cho ngập dược liệu, lắc và để yên qua đêm. Lọc qua giấy lọc gấp nếp lọc lấy dịch lọc, cô đặc cách thuỷ cho còn 15ml để tiến hành các phản ứng.[7] # Phản ứng với hơi amoniac NH3 Nhỏ 1-2 giọt dịch chiết trên lên mảnh giấy lọc để khô, quan sát dưới ánh sáng thường có màu vàng nhạt, sau đó hơ lên miệng lọ amoniac đặc thấy màu vàng đậm lên rõ rệt, khi đó soi dưới đèn tử ngoịa thấy co huỳnh quang màu vàng sáng. Kết quả: (++) phản ứng dương tính thời gian hiện màu nhanh hơn, cường độ màu trung bình. # Phản ứng Cyanidin: Lấy 2ml dịch chiết cho vào ống nghiệm, thêm một ít bột Mg, nhỏ vào đó vài giọt HC1 đậm đặc. Đun cách thuỷ vài phút lớp dịch chiết xuất hiện màu hồng nhạt. Kết quả: (++) phản ứng dương tính thời gian hiện màu nhanh, cường độ màu trung bình # Phản ứng với FeCl3 5% Lấy 2ml dịch chiết cho vào ống nghiệm, thêm vào đó 2-3 giọt DD FeCl3 5% thấy dung dịch có màu xanh thẫm chuyển sang màu xanh đen. 28 Kết quả: (++) phản ứng dương tính thời gian hiện màu nhanh, cường độ màu trung bình Nhân xết: từ kết quả định tính trên, sơ bộ nhận định trong dược liệu có chứa Flavonoid. # Đinh tính Courmarin: Lấy 20g nguyên liệu cho vào bình dung tích 250ml có nút mài, thêm vào đó cồn etylic 90° cho ngập dược liệu, lắc và để yên qua đêm. Lọc lấy dịch chiết, cô đặc cách thuỷ cho còn 20ml để tiến hành các phản ứng: [7] # Phản ứng mở, đóng vòng lacton Cho vào 2 ống nghiệm, mỗi ống 1-2ml dịch chiết cồn từ dược liệu, ống thứ 1 cho thêm 0,5ml NaOH 10%, rồi đun cách thuỷ cả 2 ống (ống có Courmarin thường có màu vàng xuất hiện). Để nguội, thêm vào mỗi ống 4ml nước cất, nếu ống thứ 1 trong hơn ống thứ 2 nhưng sau đó acid hoá mà đục hoặc có kết quả như ống thư 2 thì sơ bộ xác định có courmarin. Nhân xét: kết quả định tính , sơ bộ nhận định trong dược liệu có Courmarin # Phản ứng ghép đôi với muối Diazoni Cho vào ống nghiệm l-2ml dịch courmarin trong cồn, thêm 3ml DD Na2C 03 2%. Đun cách thuỷ rồi để nguội thêm vào dung dịch vài giọt thuốc thử Diazo, có thể dùng thuốc thử Diazi của Paranitroanilin hoặc của acid Sulíanilic màu bền và màu thay đổi tuỳ theo cấu trúc từ vàng, cam, đỏ cam, hồng, đỏ. - Vi thăng hoa: Từ dịch chiết trên, cô bay hơi hết dung môi, sau đó cho cắn vào nắp kim loại, đậy nắp kín bằng một phiến kính phía trên có bông ướt, hơ nắp kim loại trên ngọn lửa đèn cồn 20-30 phút, lấy phiến kính ra để nguội, giỏ một giọt dung dịch KI và soi trên kính hiện vi. Thấy tinh thể hình kim. Nhân xết: Từ kết quả định tính trên, sơ bộ nhận định trong dược liệu có Courmarin. 29 • Định tính Anthranoid - Phản ứng Bomtraeger [7] + Định tính dạng tự do: Cho 0,5g bột dược liệu vào ống nghiệm lớn lOml, thêm 5ml nước cất. Đun trực tiếp với nguồn nhiệt cho đến sôi. Lọc dịch chiết còn nóng qua giấy lọc cho dịch chiết vào bịnh gạn dung tích 50ml, làm nguội dịch lọc thêm 5ml Cloroíòrm , lắc nhẹ. Gạn bỏ lớp nước giữ lớp cloroíorm để làm phản ứng: # Lấy lml dịch ơoroíòrm cho vào ống nghiệm nhỏ. Thêm lml dung dịch AmoniaclO% lắc nhẹ, lóp nước sẽ có màu đỏ sim. Nếu lớp cloroírom có màu vàng chứng tỏ trong dược liệu có chứa acid chrysophanic, thêm tiếp tục từng giọt dung dịch NaC)H10%, lắc nhẹ, lớp dung môi hữu cơ sẽ mất màu vàng, còn lớp nước sẽ đỏ thẫm hơn lúc ban đầu # Lấy lml dịch chiết cloroííom cho vào ống nghiệm nhỏ. Thêm lml DD NaC)H10%, lắc nhẹ, Lớp nước sẽ có màu đỏ sim. Nhân xét: kết quả định tính, sơ bộ nhận định trong duợc liệu không có anthranoid • Định tính alcaloid - Cho lOg bột dược liệu vào cốc thuỷ tinh, thấm ẩm dược liệu bằng dung dịch H2S043%. Sau 15 phút chuyển dược liệu đã thấm ẩm qua bình ngấm kiệt cho tiếp DD H2S043% ngâm qua đêm rồi chiết bằng phương pháp ngấm kiệt, thu được dịch chiết acid. Kiềm hoá dịch chiết acid bằng dung dịch NH4OH đậm đặc đến pH= 9-10 (thử bằng chỉ thị màu vàng năng) # DD đã kiềm hoá chiết 3 lần bằng cloroữom, lần đầu 15ml, 2 lần sau mỗi lần 5ml. Gộp các dịch chiết lại, cô cách thuỷ bay hơi cloroírom còn khoảng 6ml rồi chia đều vào 3 ống nghiệm. Cô tiếp đến cắn. 30 # Cho vaò 3 ống nghiệm chứa cắn mỗi ống lml DD H2S043%, lắc cho tan hết cặn rồi cho thêm vào: [7] . ống 1: 2-3 giọt thuốc thử Mayer thấy xuất hiẹn tủa trắng. . Ống2: 2-3 giọt thuốc thử Dragendorff thấy xuất hiện tủa vàng cam. . Ống3: 2-3 giọt thuốc thử Bouchardat thấy xuất hiện tủa nâu. Nhân xét: Từ kết quả định tính trên, sơ bộ nhận định trong dược liệu có chứa alcaloid. • Định tính Saponin Lấy 20g dược liệu đã tán nhỏ cho vào bình có dung tích 250ml, thêm vào đó lOOml cồn etylic 75°, lắc mạnh trong 15', để qua đem lọc lấy dịch chiết làm các phản ứng sau: [7] # Phản ứng Sankowski: Lấy lml dịch chiết cho vào ống nhgiệm, cô các thuỷ đến khô, hoà tan cắn trong cồn etylic 90°, nhỏ từ từ theo thành ống nhgiệm DD acid H2S04 đặc xuất hiện vàng đỏ nâu, màu đỏ chuyển dần lên dịch chiết ở phía trên có màu xanh. # Phản ứng Rozentaler: Lấy lml dịch chiết vào ống nhgiệm, thêm vài giọt thuốc thử Vanilinl% trong HC1 và hâm nóng, quan sát thấy xuất hiện màu hoa cà. # Quan sát hiện tượng tạo bọt: Lấy lml dịch chiết cho vào ống nghiệm và thêm 5ml nước cất, lắc mạnh trong 5 phút, để yên thấy bọt bền vững. # Tạo bọt ở pH khác nhau: Lấy 2 ống nghiệm, 1 ống đựng 5ml HC1 0,1N còn ống kia đựng 5ml DD NaOH 0,1N, cho vào mỗi ống 0,5ml dịch chiết, lắc cả 2 ống trong 5 phút thấy cột bọt 2 ống cao bằng nhau và có độ bền vững như nhau. Nhân xét: Sơ bộ kết luận trong mẫu nghiên cứu không có Saponin triterenoid. Kết quả định tính các nhóm chất trong dược liệu tóm tắt ở bảng 2 31 Bảng 3 : tóm tắt kết quả định tính của quả Zanthoxylum STT Nhóm chất Phản ứng định tính Kết Kết luận sơ bộ quả 1 2 Flavonoid Coumarin Pư Cyanidin +++ Pư với kiềm +++ Pư với FeCl35% +++ Pư mở đóng vòng ++ Có Flavonoid Có Coumarin lacton ++ Pư Diazo hoá 3 Anthranoỉd Pư vi thăng hoa — Pư Bortraeger — Không có Anthranoid 4 5 alcaloỉd Saponỉn T.T Mayer — T.T Bouchardat _ T.T Đragenorff — Pư Sankowski — Pư Rozentaler _ Tạo bọt — Không có alcaloid Không có Saponin Ghi cl (+): phản ứng dương tính, thời gian hiện màu chậm, cường độ màu yếu (++): Phản ứng dưong tính, thời gian hiẹn màu nhanh, cường độ màu trung bình (+++): phản ứng dương tính, thời gian hiện màu ngắn, cường độ màu mạnh. (-): phản ứng âm tính Kết luận: Định tính được trong quả dược liệu có Flavonoid, Coumarin và không có Anthranoid, Alcaloid và Saponin. 32 B. Các nhóm chất trong rễ Các bước tiến hành giống mục A Bảng 4 : tóm tắt kết quả định tính của rễ Zanthoxylum STT Nhóm chất Phản ứng định tính Kết Kết luận sơ bộ quả 1 2 Flavonoid Coumarin Pư Cyanidin — Không có Pư với kiềm _ Flavonoid Pư với FeCl35% — Pư mở đóng vòng ++ Có Coumarin lacton ++ Pư Diazo hoá Pư vi thăng hoa 3 Anthranoid Pư Bortraeger — Không có Anthranoid 4 5 alcaloỉd Saponin T.T Mayer +++ T.T Bouchardat +++ T.T Đragenorff ++,+ Pư Sankowski ++ Pư Rozentaler ++ Tạo bọt ++ Có alcaloid Có Saponin Ghi c (+): phản ứng dương tính, thời gian hiện màu chậm, cường độ màu yếu (++): Phản ứng dưong tính, thời gian hiẹn màu nhanh, cường độ màu trung bình (+++): phản ứng dương tính, thòi gian hiện màu ngắn, cường độ màu mạnh. (-): phản ứng âm tính 33 Qua kết quả trên chung tôi thấy nhóm chất Flavonoid là nhóm chất cho phản ứng rõ nhất trong dược liệu quả và trong rễ là nhóm chất Acaloid là nhóm chất cho phản ứng rõ nhất. Do đó chung tôi đi sau vào nghiên cứu nhóm chất Flavonoid. c. Phân tích sơ bộ một nhóm chất chính trong dược liệu- Nhóm Flavonoid - Chiết xuất Flavonoid toàn phần Lấy dược liệu 2g ngâm bằng ethanol 90° cho ngập dược liệu, đậy kính, ngâm ở nhiệt độ phòng. Sau 14 ngày rút dịch chiết đầu, dược liệu được vắt kiệt dung môi, bã còn lại thêm ethanol chiết tiếp lần 2. Dịch chiết thu được cất thu hồi dung môi dưới áp suất giảm bằng máy cất quay ở 40°c được dịch chiết đậm đặc khoảng 150 ml đi cô đặc cách thuỷ đến cắn, hoà tan cắn với nước cất nóng 20 ml làm 3 lần lọc nóng qua giấy lọc, dịch lọc lắc với Cloroform, phần nước còn lại để chiết tách ílavonoid toàn phần bằng ethylacetat. Từ dịch chiết còn lại sau khi lắc với Ethylacetat, chúng tôi đã thu được chất kết tinh màu vàng nhạt, ký hiệu sơ đồ 1 34 Sơ đồ 1: Sơ đồ chiết xuất ílavonoỉd toàn phần 35 - Tiến hành SKLM Flavonoid toàn phần * Các bước tiến hành: + Chuẩn bị chất chấm SK: Dịch chiết tách Flavonoid toàn phần + Chất hấp phụ: bản mỏng tráng sẵn Silicagen GF 254 chuẩn ở hãng MERCK. Bản mỏng được hoạt hoá ở 110°c trong lgiờ, cắt thành bản 2 xio (cm) + Cô đặc dịch chiết rồi dùng mao quản chấm lên bản mỏng Silicagen + Dung môi triển khai: Toluen: ethylacetat: acid íormic: nước (6:15:2:1) + Thuốc thử hiện màu: hơi amoniac, phun bằng Vanilin trong ethanol và H2S04 đặc Sau khi triển khai SK, bản mỏng được để ngoài không khí hoặc sấy nhẹ cho bay hơi hết dung môi. Hệ dung môi này là hệ cho kết quả tách tốt nhất với 7 vết Flavonoid. # Kết quả phân tích ảnh chụp ở ánh sáng thường Bảng 5: Giá tri Rf và độ đậm các vết Flavonoid Vết Rf(x 100) Màu Độ đậm VI 12,8 Vàng da cam +++ V2 22,8 Vàng da cam +++ V3 27,1 Vàng da cam +++ V4 34,3 Vàng da cam +++ V5 45,7 Vàng da cam + V6 55,7 Vàng da cam ++ V7 65,7 Vàng da cam +++ 36 # Kết quả phân tích chụp ảnh ở ánh sáng tử ngoại, phát các bước xạ có bước sóng ngắn 254nm. Bảng 6: Giá trị Rf và độ đậm các vết Flavonoid ở ánh sáng tử ngoại 254nm Vết Rf(x 100) Màu Độ đậm VI 11.4 Vàng da cam ++ V2 22,8 Vàng da cam ++ V3 27,1 Vàng da cam ++ V4 34,2 Vàng da cam ++ V5 42,8 Vàng da cam +++ V6 50 Vàng da cam +++ V7 55 Vàng da cam +++ V8 58,6 Vàng da cam + V9 64,2 Vàng da cam +++ # Kết quả phân tích chụp ảnh ở ánh sáng tử ngoại,phát các bước xạ có bước sóng dài 366nm Bảng 7: Giá trị Rf và độ đậm các vết Flavonoid ở ánh sáng tử ngoại 366nm Vết Rf(xl00) Màu Độ đậm VI 7,4 Vàng da cam ++ V2 15,7 Vàng da cam ++ V3 30 Vàng da cam ++ V4 40 Vàng da cam ++ V5 50 Vàng da cam ++ V6 58,6 Vàng da cam +++ 37 Hình 2: Ảnh sắc ký dịch chiết quả Xuyên tiêu Bản mỏng: Silicagen Hệ dung môi: Toluen: Ethlyacetat: acid formic: nước (6:15:2:1) Hiện màu: hơ amoniac 38 PHẦN 3: KẾT LUẬN VÀ ĐỂ XƯÂT 1. Kết luận Sau một thời gian làm thực tập tại bộ môn Dược liệu trường Đại Học Dược Hà Nội, chúng tôi đã hoàn thành được một số nội dung sau: 1.1. Phần đặc điểm hình thái. - Đã thu thập được mẫu Zanthoxylum từ nhiều địa phương của Tỉnh Hua Phăn thuộc vùng Đông Bắc nước CHDCND Lào. - Đã nghiên cứu về đặc điểm hình thái gồm những nội dung: mô tả, thực địa, chụp ảnh. - Đã phân tích được đặc điểm vi phẫu của lá Zanthoxylum, đặc điểm bột của rễ và quả có ảnh chụp kèm theo. 1.2. Nghiên cứu về hoá học. + Xác định đựoc các nhóm chất chính trong Zanthoxylum sp. Có : Flavonoid, Coumarin, Alcaloid. + Bằng xác SKLM, với bản mỏng Silicagen GF254 Merck và hệ dung môi Toluen : Ethyl acetat ( 9 : 1). Chúng tôi đã xác định được dịch chiết trong Ethyl acetat cuả quả Zanthoxylum sp. Có chứa ít nhất 7 vết chất. + Xác định hàm lượng tinh dầu trong nguyên liệu nghiên cứu Hàm lượng tinh dầu trong quả khô tuyệt đối của xuyên tiêu là 24.57 % và độ ẩm của dược liệu tính được là 11,92 % + Xác định được các thành phần tinh dầu Bằng GC/MS và xác định được sự có mặt của 20 thành phần trong tinh dầu Zanthoxylum sp. Cho định cao và hàm lượng phần trăm cao nhất là LPhellandrene (31.06%), .beta.-Phellandrene (20.50%) và Bomylene (19.24%). 39 2. Đề xuất Trong quá trình nghiên cứu, chúng tôi thấy cây Xuyên Tiêu là một cây thuốc có tác dụng chữa bênh rất tốt. Do đó chúng tôi đề nghị tiếp tục nghiên cứu những nôi dung sau: • Mô tả được đặc điểm hình thái của quả, rễ • Xác định được tên khoa học của mẫu Xuyên tiêu. • Xác định được hàm lượng tinh dầu và thành phần hoá học trong tinh dầu của mẫu Xuyên tiêu trên • Mô tả đặc điểm hiển vi của rễ, quả Zanthoxylum • Tiếp tục đi sâu phân tích và xác định cấu trúc các Flavonoid trong dược liệu 40 Tài liệu tham khảo 1. Taì liệu tiếng Việt 1. Viện Dược liệu, (2006), Cây thuốc và động vật làm thuốc, nhà xuất bản: khoa học và kỹ thuật, tr. 1143-1144-1145 trong tập II 2. Bộ môn dược liệu, trường ĐH Dược HN (2003), Thực tập dược liệu phần vi học, trung tâm thông tin thư viện ĐH Dược HN 3. Trần công Khánh (1980), Kỹ thuật hiển vi dùng trong nghiên cứu thực vật và dược liệu, nhà xuẩt bản y học 4. Kurth Ran Derath (người dịch nguyễn hữu Bảy, Trần Trung Nam), 1974, sác kỹ lớp mỏng, nhà xuất bản y học, trang 23-24 5. Đỗ Thị Bích Huệ (2006), Nghiên cứu thành lập tiêu chuẩn kiểm nghiệm một số dược liệu chứa Flavonoid, khoá luận tốt nghiệp dược sỹ trang 8-9 6. Bộ y tế (1994), Dược Điển ViêtNam 2, NXB Hà Nội, trang 491-492 7. PGS. Ts Nguyễn Thị Tâm, Ts Nguyến Duy Thuần, (1999), Thực tập dược liệu phần hoá học, trường đại học Dược HN. Trang 9-24 8. Vó Văn Chi (1997), Từ điển cây thuốc VN, NXB y học, trang 450,451, 789, 790, 1042,1043, 1355 9. Pham Hoàng Hộ (2000), Cây cỏ VN,NXB trẻ quyền 2, trang 408-418 10. Đỗ Tất Lợi (1999), Những cây thuốc và vị thuốc VN, NXB y học, trang 141, 369, 370 11. Phạm Hoàng Hộ (1999), Cây cỏ VN, (An Illustrated Flora of VN), Nhà xuất bản trẻ quỳên 2, trang 407-440 12. L.Y Hoàng Duy Tân - L.Y Trân Văn Nhu (2001), Từ điển Phương Thang Đông Y, NXB Đổng Nai, trang 1121, 1860,2196-2197 13. Trình Thị Thuỷ (2001), Nghiên cứu thành phần hoá học cây Hồng Bì dại và cây hoàng mộc dài [ Zanthoxylum Avicennae (Lank) DC. ] of VN. Luận án tiến sỹ hoá học 14. Đỗ Tất lợi (2000), Những cây thuộc và vị thuộc VN, trang 169-170, 360-370 15. Phạm Thanh Kỳ, Trần Văn Thanh, Hồ trung Chiến, Nguyễn Thị Thu Hằng (2006), Thực tập dược liệu (Kiểm nghiệm dược liệu bằng phương pháp hoá học), Trường ĐH Dược Hà Nội, Tr 34, 35,36 2. Tài liệu tiếng Pháp: 16. A. Guillaumin, M. H. Lecomte (1907-1912) Flore General Del’ Indochine. Tome Premier. Page 629-645 3.Tài liệu tiếng Anh: 17. Gildemeister E, Fr. Hoffman(1959),Die aetherischer Oele Brand VAkademic- Verlay Berlin, 391-403 4. Tài liệu Lào: .... ...........Ẵ b n ................................................................. 5. Tài liẹu tiếng Thái: h5 ỵãÁ ựíUitủsÍMI - Ssụỉs 9 * .... - - Ca i , Pao^ 0 >57, r U Q .......................................... Phụ lục Sample Iníormation Analyzed by : PT-TC, VIEN DUOC LIEU Analyzed : 5/14/2007 3:29:33 PM Sample Name : TD ZANTHOXYLUM (QUA) Data file : C:\GCMSsolution\Data\TDZanthoxylum\140507 TD Zanthoxylum Method File : C:\GCMSsolution\Method\TD Zanthoxylum.qgm Tunning File : C:\GCMSsolution\System\Tunel\Tunning 100407.qgt Modified : 5/14/2007 4:15:02 PM Peak Report TIC Peak# R.Time Area% Name 1 8.181 8.94 .ALPHA-PINENE, (-)- 2 10.536 4.90 .beta.-Myrcene 3 11.266 31.06 1-Phellandrene 4 11.344 0.57 .DELTA.3-Carene 5 11.738 0.43 .ALPHA. TERPINENE 6 12.094 0.99 1-Phellandrene 7 12.321 19.24 Bomylene 8 12.385 20.50 .beta.-Phellandrene 9 12.695 2.56 cis-Ocimene 10 13.233 7.29 .DELTA.3-CARENE 11 15.132 0.21 •DELTA.-CARENE 12 15.738 0.32 Linalool 13 16.640 0.23 NEO-ALLO-OCIMENE 14 18.022 0.25 4-Terpineol 15 18.359 0.33 .BETA.FENCHYL ALCOHOL 16 18.596 0.17 Decanal (CAS) n-Decanal 17 18.673 0.21 n-Octyl acetate 18 19.447 0.24 Nerol 19 21.475 0.97 Linalyl acetate 20 22.199 0.59 Caryophyllene 100.00 [...]... kinh nghiệm dân gian Tuy nhiên vẫn có một trong các thông tin đã công bố về chi Zanthoxylum ở Lào là trong lĩnh vực Nông Lâm “ Lâm sản phi gỗ (NTFP)” [1] 15 PHẦN 2: THựC NGHIỆM VÀ KÊT QUẢ 2.1 Nguyên liệu và phương pháp nghiên cứu 2.1.1 Nguyên liệu và thu mẫu nghiên cứu Các mẫu Zanthoxylum được thu thập từ nhiều địa phương của tỉnh Hua Phăn thuộc vùng Đông Bắc nước CHDCND Lào Mẫu nghiên cứu được thu... simulans - Xuyên tiêu, Hoa tiêu dại 51 Zanthoxyỉum spiniỷex - niaragato 52 Zanthoxylum stenophyllum - Hoa tiêu lá hẹp 53 Zanthoxylum thomasianum - Hoa tiêu st Thomas 1.1.2 Một sô loài Zanthoxylum thường gặp Ở Việt Nam có 12 loài, trong đó có cây Xuyên tiêu, ở Việt Nam Xuyên tiêu cũng phân bố rải rác khắp các tỉnh từ vùng núi thấp(dưới 600m) đến trung du và đôi khi cả ở đồng bằng Cây có nhiều ở các tỉnh Phú... 2.2 Những nghiên cứu về hoá học của chi Zanthoxylum Ở Việt Nam, việc nghiên cứu thành phần hoá học trong cây của các loài Zanthoxylum chưa có nhiều tài liệu nghiên cứư Với loài Zanthoxylum acanthopodium DC, quả chứa một tinh dầu và một chất gây cảm giác ngứa Chất 11 kích đó có thể là íeragamide Tinh dầu của hạt chứa dipentene và phellandren 47%, linalol 37,5%, citral 6%, methyl cinnamat 0,02% và các vết... được đo và mô tả tại thực địa, kết hợp với chụp ảnh cắt vi phẫu bằng máy cắt cầm tay và nhuộm kép theo phương pháp ghi trong tài liệu Thực tập Dược liệu, Thực tập hình thái và giải phẫu thực vật Nghiên bột bằng cốt sứ, quan sát dưới kính hiện vi, chụp ảnh dưới kính hiển vi điện tử 2.2.2 Phương pháp sắc ký lớp mỏng 2.2.3 Phương pháp cất kéo hoi nước 2.3 Kết quả thực nghiệm và nhận xét 2.3.1 Về thực vật. .. thân, da đỏ, bứt rứt khó khó chịu, thở nhanh , nôn mửa, huyết áp tăng Xử lý bằng các uống một cốc nước đường, sau 1 giờ các triệu chứng đều hết + Cho đến nay , theo thông tin của nước Lào mà tôi đã thu thập được thì chưa có các công trình nghiên cứu sâu về chi Zanthoxylum Các nghiên cứu về công dụng và tác dụng của chi Zanthoxylum được công bố, chứng minh ở trong 14 nước thì rất khiêm tốn Đại đa số là... methyl cinnamat 0,02% và các vết acid tự do [8] Hạt của loài Zanthoxylum avicenae(Lam) DC chứa 30% dầu, quả và lá có chứa tinh dầu có mùi thơm citronellal [8] [14] Ở ViệtNam đã có một luận án tiến sỹ nghiên cứu sâu về thành phần hoá học của loài Zanthoxylum avicenae(Lamk.)DC Tác giả Trịnh Thị Thuỷ đã chiết tách, phân tích và xác định được cấu trúc hoá học của các hợp chất bishordeninyl terpen alcaloid trong... khô, nghiền thành bột, bảo quản trong lọ kính * Mẫu dược liệu dùng để chạy sắc ký đựoc thái mhỏ, sấy khô ở nhiệt độ < 60°c bảo quản nơi khô ráo 2.1.3 Thiết bị nghiên cứu - Xác định độ ẩm trên máy Sartorius AG Gottingen MA30-0003 tại bộ môn Dược liệu - Máy soi tử ngoại UV- Carbinet II - Tủ sấy dược liệu khô - Máy cất quay 2.2 Phương pháp nghiên cứu 2.2.1 Nghiên cứu đặc điểm thực vật: vi phẫu và bột 16... trong; sóng và cuống đầy lông vàng và gai cong nhỏ Phát hoa ở nách lá, cao 2 cm, dày; hoa trắng, không cọng; lá dài 4, tam giác; cánh hoa 4, xoan, dài l,5mm; nhị 2, noãn sào lép; Quả nang có 1-4 hạch, cao 6mm; hột có màu đen bóng [8],[9] 2 Những nghiên cứu về hoá học 2.1 Hoá học tinh dầu trên thế giói Hiện nay trên thế giới, người ta đã và đang từng bứoc đưa ra kết quả các công trình nghiên cứu về chi Zanthoxylum... -> rửa bằng nước -> nhuộm xanh metylen lh -> rửa bằng nước Cô định: Vi phẫu sau khi nhuộm được khử nước từ từ bằng cồn với độ cồn tăng dần 60°-> 90° sau cùng là cồn tuyệt đối, lắc vi phẫu 3 lần trong xylen Đặt vi phẫu vào một giọt bôm canada trên phiến kính, đậy lá kính, để tiêu bản ở chỗ thoáng 2-3 tuần cho ổn định Tiêu bản vi phẫu cố định được quan sát mô tả đặc điểm và chụp ảnh Quan sát phần gân lá... pháp cất kéo hoi nước, các nhà nghiên cứu đã thu được - Trong quả của loài Zanthoxylum acanthopodỉum DC., 1,2% tinh dầu, trong đó thành phần chính là d-linalool (trên 50%), ngoài ra còn có Dipenten, 1a-phenaldren, Alcol (linalol), Ester(methyl cinnamat), aldehyld(citral) - Trong quả Zanthoxylum alatum Roxb., 3,75% tinh dầu, với thành phần chính là 1-a- phenaldren (trên85%) và một phần nhỏ linalool, ... ịZanthoxylum) Cộng hoà dân chủ nhân dân Lào ” với nội dung sau: • Nghiên cứu đặc điểm hình thái thực vật • Nghiên cứu thành phần hoá học I PHẦN 1:TỎNG QUAN Những nghiên cứu thực vật chi Zanthoxylum... cách khoa học đẩy mạnh khai thác sử dụng thuốc vào việc phòng chữa bệnh cho nhân dân cộng đồng dân tộc Lào, đãtiến hành thực đề tài: “ Nghiên cửư đặc điểm thực vật thành phần hoá học loài Xiiyên... SKLM sắc ký lớp mỏng CHDCND Lào Cộng Hoà Dân Chủ Nhân Dân Lào GC-MS Gas chromatography-mass spectrometry ĐẶT VẤN ĐỂ Nước Cộng Hoà Dân Chủ Nhân Dân Lào (CHDCND Lào) nước nằm khu vực nhiệt đới mùa