Kỹ Thuật Nuôi Cấy Culture _ www.bit.ly/taiho123

KỸ THUẬT NUÔI CẤY Phạm Thái Bình Yêu cầu nuôi cấy xét nghiệm vi sinh lâm sàng Phải chọn môi trường nuôi cấy Mỗi loại bệnh phẩm có diện tác nhân nhiễm trùng khác nên cần phải lựa chọn môi trường nuôi cấy phù hợp với bệnh phẩm. Nhưng không chọn trùng lặp môi trường nuôi cấy Cùng loại vi khuẩn môi trường nuôi cấy khác nhau, tính chất khúm khuẩn khác nhau. Chọn trùng lặp nhiều môi trường nuôi cấy: Làm rối trí người làm xét nghiệm chọn vi khuẩn đích môi trường phân lập. Không tạo đồng hoạt động phòng xét nghiệm. Môi trường nuôi cấy thường quy bệnh phẩm Bệnh phẩm Máu Môi trường tăng sinh, phong phú Chai cấy máu Môi trường phân lập CAXV MC Phân GN broth SS Uri select Nước tiểu Dòch não tủy BHI-XV broth CAXV Môi trường thay CAXV → BA GN broth → Selenite F MC → EMB SS → HE/XLD Uri select → BA & MC CAXV→ BA + S.aureus Môi trường nuôi cấy thường quy bệnh phẩm Bệnh phẩm Đường hô hấp Đường hô hấp Môi trường tăng sinh, phong phú Môi trường phân lập MC → EMB BA CAHI MC BA → BANg MC → EMB BA CAHI MC Mủ tiết dòch BA → BANg MC → EMB BA Đường sinh dục Môi trường phân lập thay MC CAVCN BA → BANg Phải chọn kỹ thuật cấy Máu Nước tiểu Dòch não tiểu Các bệnh phẩm khác Một số môi trường nuôi cấy thường dùng xét nghiệm vi sinh lâm sàng Môi trường tăng sinh, phong phú GN broth: BHI broth: Tăng sinh vi khuẩn. Tăng sinh H. influenzae cần bổ sung XV Selenite F broth: Phong phú chuyên biệt Salmonella. Sodium selenite: ức chế vi khuẩn Gram (+) hầu hết trực khuẩn Gram (-) dễ mọc, ngoại trừ Proteus, Pseudomonas, Salmonella. L-cystine: kích thích Salmonella phát triển. Phong phú Salmonella Shigella. Citrate desoxycholate: ức chế vi khuẩn Gram (+) số coliform. Mannitol cao dextrose: hạn chế phát triển Proteus, Pseudomonas kích thích Salmonella, Shigella phát triển. Peptone kiềm: Phong phú chuyên biệt Vibrio. 0.5% NaCl: kích thích Vibrio phát triển pH kiềm: ức chế hầu hết trực khuẩn đường ruột. Môi trường chai cấy máu hai pha Đặc điểm thành phần: BHI (Merck, BD, Biorad): môi trường bổ dưỡng lý tưởng để cấy máu. Sodium Polyanethol Sulfonate: Kháng đông, nhờ vi khuẩn không bò bẫy cục máu đông. Ức chế thực bào bổ thể. Ức chế tác động kháng sinh aminoglycosides Đặc điểm cấu tạo: Tránh ngoại nhiễm: không cần mở nút chai cấy máu; cấy truyền chai cấy máu kín từ phase lỏng qua phase đặc. Tách rời pha lỏng khỏi pha đặc: Nếu máu có chất ức chế vi khuẩn (kháng sinh), chất ức chế từ máu hòa vào phase lỏng sẽ không thấm qua phase đặc. Nhờ vi khuẩn không mọc phase lỏng mọc phase đặc. Làm kháng sinh đồ trực tiếp từ chai cấy máu (+) nên tiết kiệm thời gian. Môi trường thạch máu Đặc điểm thành phần môi trường: Môi trường bản: CBA (hoặc TSA BHIA). Máu cừu: 5-7%. Nuôi cấy vi khuẩn: Không có kháng sinh (BA): hầu hết vi khuẩn. Nalidixic acid (BANg): Staphylococcus, Streptococcus. Gentamicin (BAGe):Streptococcus. Phân biệt loại tiêu huyết (α, β, γ) Staphylococcus S. pyogenes M. catarrhalis S. pneumoniae E. faecalis Môi trường thạch nâu Đặc điểm thành phần môi trường: Môi trường bản: CBA (hoặc TSA BHIA). Máu ngựa: 5-7% (hoặc máu cừu có bổ sung V). Nuôi cấy vi khuẩn: Không có kháng sinh (CAXV): vi khuẩn. Bacitracin (CAHI): Haemophilus. VCN (CAVCN):Neisseria. M. catarrhalis N. meningitidis N. gonorrhoae S. pneumoniae Môi trường Mac Conkey Agar (MC) Đặc điểm thành phần môi trường: Crystal violet bile salt: ức chế vi khuẩn Gram (+). Neural red: thò phân biệt lên men lactose. Nuôi cấy vi khuẩn: E. coli Trực khuẩn Gram (-), dễ mọc. Đặc điểm khúm khuẩn: Lên men lactose: khúm khuẩn màu hồng. Không lên men lactose: khúm khuẩn màu trắng. S. typhi K. pneumoniae S. marcescens P. aeruginosa Shigella Môi trường Salmonella Shigella Agar (SS) Đặc điểm thành phần môi trường: Brilliant green bile: ức chế vi khuẩn Gram (+). Nồng độ thiosulfate citrate cao: hạn chế coliform. Neural red: thò phát lên men lactose. Thiosulfate Fe3+: thò phát sinh H2S. Salmonella Nuôi cấy phân lập chuyên biệt cho Sal monella Shigella. Đặc điểm khúm khuẩn: Shigella: khúm khuẩn có màu trắng. Salmonella, Proteus: khúm khuẩn có màu trắng, có tâm đen. Coliform: khúm khuẩn có màu hồng. Shigella Môi trường Hektoen Enteric Agar (HE) Đặc điểm thành phần môi trường: Bile fuchsin: ức chế vi khuẩn Gram (+). Salicin, sucrose: phân biệt Salmonella, Shigella với trực khuẩn Gram (-) không lên men lactose (Proteus…) Bromothymol blue fuchsin: thò phát lên men lactose. Thiosulfate ferric amonium citrate: thò phát sinh H2S. Phân lập phân biệt Salmonella, Shigella với trực khuẩn Gram (-) không gây bệnh khác. Đặc điểm khúm khuẩn: Shigella: khúm khuẩn màu xanh lá. Salmonella, Proteus: khúm khuẩn có màu xanh lá, có tâm đen. Coliform: khúm khuẩn có màu vàng. Coliform Shigella Salmonella Môi trường Xylose Lysin Desoxycholate Agar (XLD) Đặc điểm thành phần môi trường: Xylose: phân biệt Shigella Providencia (không lên men xylose chậm) với trực khuẩn Gram (-) khác (lên men xylose). Lysin decarbosylase: phân biệt Salmonella với trực khuẩn Gram (-) khác lên men xylose. Lactose sucrose hàm lượng cao: ngăn ngừa dương tính giả lysin decarboxylase từ coliform. Thiosulfate ferric amonium citrate: thò phát sinh H2S. Sodium desoxycholate: ức chế vi khuẩn Gram (+) mọc lan Proteus. Salmonella Shigella Phân lập chọn lọc Salmonella, Shigella. Đặc điểm khúm khuẩn: Salmonella: khúm khuẩn màu đỏ, có tâm đen. Shigella, Providencia: khúm khuẩn có màu đỏ. Coliform: khúm khuẩn có màu vàng. Proteus: khúm khuẩn có màu vàng, có tâm đen. Coliform Môi trường Thiosulfate Citrate Bile Sucrose Agar (TCBS) Đặc điểm thành phần môi trường: Thiosulfate citrate với nồng độ cao pH kiềm: ức chế Enterobacteriaceae. Ox bile: ức chế Enterococcus. Thymol blue bromothymol blue: thò lên men sucrose điều kiện môi trường kiềm mạnh. Phân lập chọn lọc Vibrio. Đặc điểm khúm khuẩn: V. cholerae V. cholerae, V. fluvialis, V. alginolyticus: khúm khuẩn màu vàng. V. parahaemolyticus: khúm khuẩn màu xanh. Proteus, Staphlococcus: mọc cho khúm khuẩn màu vàng. V. parahaemoliticus Môi trường Uriselect (URI4) Đặc điểm thành phần môi trường: Cơ chất β-glucosidase: thủy giải chất cho sản phẩm có màu xanh (Klebsiella, Enterococcus, Serratia). Cơ chất β-galactosidase: thủy giải chất cho sản phẩm có màu hồng (E. coli). Trytophan: phát sinh indol (E. coli, P. vulgaris) deaminase cho sản phẩm có màu nâu (Proteus). Nuôi cấy nước tiểu. Đặc điểm khúm khuẩn: E. coli: khúm khuẩn 3mm, màu hồng, indol (+). P. mirabilis: khúm khuẩn 2mm, màu nâu cam, indol (-). P. vulgaris, Providencia, Morganella: khúm khuẩn 2mm, màu nâu cam, indol (+). Klebsiella: khúm khuẩn 3mm, xanh biển đậm. Enterococcus: khúm khuẩn 0.5-1.5mm, xanh biển nhạt. Vi khuẩn khác: khúm khuẩn màu trắng. E. coli P. mirabilis E. faecalis K. pneumoniae [...]... 5-7% Nuôi cấy vi khuẩn: Không có kháng sinh (BA): hầu hết vi khuẩn Nalidixic acid (BANg): Staphylococcus, Streptococcus Gentamicin (BAGe):Streptococcus Phân biệt các loại tiêu huyết (α, β, γ) Staphylococcus S pyogenes M catarrhalis S pneumoniae E faecalis Môi trường thạch nâu Đặc điểm thành phần môi trường: Môi trường cơ bản: CBA (hoặc TSA hoặc BHIA) Máu ngựa: 5-7% (hoặc máu cừu có bổ sung V) Nuôi cấy. .. meningitidis N gonorrhoae S pneumoniae Môi trường Mac Conkey Agar (MC) Đặc điểm thành phần môi trường: Crystal violet và bile salt: ức chế vi khuẩn Gram (+) Neural red: chỉ thò phân biệt lên men lactose Nuôi cấy vi khuẩn: E coli Trực khuẩn Gram (-), dễ mọc Đặc điểm khúm khuẩn: Lên men lactose: khúm khuẩn màu hồng Không lên men lactose: khúm khuẩn màu trắng S typhi K pneumoniae S marcescens P aeruginosa... green và bile: ức chế vi khuẩn Gram (+) Nồng độ thiosulfate và citrate cao: hạn chế coliform Neural red: chỉ thò phát hiện lên men lactose Thiosulfate và Fe3+: chỉ thò phát hiện sinh H2S Salmonella Nuôi cấy phân lập chuyên biệt cho Sal monella và Shigella Đặc điểm khúm khuẩn: Shigella: khúm khuẩn có màu trắng Salmonella, Proteus: khúm khuẩn có màu trắng, có thể có tâm đen Coliform: khúm khuẩn có màu... Enterococcus, Serratia) Cơ chất của β-galactosidase: thủy giải cơ chất cho sản phẩm có màu hồng (E coli) Trytophan: phát hiện sinh indol (E coli, P vulgaris) và deaminase cho sản phẩm có màu nâu (Proteus) Nuôi cấy nước tiểu Đặc điểm khúm khuẩn: E coli: khúm khuẩn 3mm, màu hồng, indol (+) P mirabilis: khúm khuẩn 2mm, màu nâu cam, indol (-) P vulgaris, Providencia, Morganella: khúm khuẩn 2mm, màu nâu cam, indol