Kỹ Thuật Nuôi Cấy Culture _ www.bit.ly/taiho123

Nhưng không chọn trùng lặp môi trường nuôi cấyCùng một loại vi khuẩn nhưng trên môi trường nuôi cấy khác nhau, tính chất khúm khuẩn có thể khác nhau.. Chọn trùng lặp nhiều môi trường nuô

KỸ THUẬT NUÔI CẤY

Phạm Thái Bình

Yêu cầu khi nuôi cấy trong xét nghiệm vi sinh lâm sàng

Phải chọn đúng môi trường nuôi cấy

Mỗi loại bệnh phẩm có sự hiện diện của tác nhân nhiễm trùng khác nhau nên cần phải lựa chọn môi trường nuôi cấy phù hợp với từng bệnh phẩm.

Nhưng không chọn trùng lặp môi trường nuôi cấy

Cùng một loại vi khuẩn nhưng trên

môi trường nuôi cấy khác nhau, tính

chất khúm khuẩn có thể khác nhau

Chọn trùng lặp nhiều môi trường nuôi cấy:

ð Làm rối trí người làm xét nghiệm khi chọn vi khuẩn

đích trên môi trường phân lập.

ð Không tạo được sự đồng bộ trong hoạt động của

phòng xét nghiệm.

Môi trường nuôi cấy thường quy trên các bệnh phẩm

CAXV→ BA + S.aureus

Uri select 4 → BA & MC

GN broth → Selenite F

MC → EMB

SS → HE/XLD

CAXV → BA

Môi trường thay thế

Môi trường phân lập

Môi trường tăng sinh, phong phú Bệnh phẩm

máu

Phân

Nước tiểu

Dịch não tủy

BHI-XV broth

GN broth

MC SS CAXV

Uri select 4

CAXV

MC → EMB

BA → BANg

MC → EMB

BA → BANg

MC → EMB

BA → BANg

Môi trường phân lập thay thế

Môi trường phân lập

Môi trường tăng sinh, phong phú Bệnh phẩm

Đường hô hấp trên

Mủ và tiết dịch

Đường hô hấp dưới

Đường sinh dục

BA CAHI MC

BA CAHI MC

BA MC

CAVCN

Môi trường nuôi cấy thường quy trên các bệnh phẩm

Phải chọn đúng kỹ thuật cấy

phẩm khác

Một số môi trường nuôi cấy thường dùng trong xét nghiệm

vi sinh lâm sàng

Môi trường tăng sinh, phong phú

BHI broth:

ð Tăng sinh các vi khuẩn.

ð Tăng sinh H influenzae

cần bổ sung XV

GN broth:

ð Phong phú Salmonella và Shigella.

ð Citrate và desoxycholate: ức chế vi khuẩn Gram (+) và một số coliform.

ð Mannitol cao hơn dextrose: hạn chế sự

phát triển của Proteus, Pseudomonas và kích thích Salmonella, Shigella phát triển.

Selenite F broth:

ð Phong phú chuyên biệt Salmonella.

ð Sodium selenite: ức chế vi khuẩn

Gram (+) và hầu hết trực khuẩn

Gram (-) dễ mọc, ngoại trừ Proteus,

Pseudomonas, Salmonella.

ð L-cystine: kích thích Salmonella

phát triển.

Peptone kiềm:

ð Phong phú chuyên biệt Vibrio.

ð 0.5% NaCl: kích thích Vibrio

phát triển

ð pH kiềm: ức chế hầu hết trực khuẩn đường ruột.

Môi trường chai cấy máu hai pha

Đặc điểm thành phần:

ð BHI (Merck, BD, Biorad): là môi trường bổ dưỡng và lý tưởng để cấy máu.

ð Sodium Polyanethol Sulfonate:

ð Kháng đông, nhờ đó vi khuẩn không bị bẫy trong cục máu đông.

ð Ức chế thực bào và bổ thể.

ð Ức chế tác động của các kháng sinh aminoglycosides

Đặc điểm cấu tạo:

ð Tránh ngoại nhiễm: không cần mở nút chai khi cấy máu; cấy truyền ngay trong chai cấy máu kín từ phase lỏng qua phase đặc.

ð Tách rời pha lỏng khỏi pha đặc:

ð Nếu trong máu có chất ức chế vi khuẩn (kháng sinh), chất ức chế từ máu hòa vào phase lỏng sẽ sẽ không thấm qua phase đặc Nhờ vậy vi khuẩn không mọc trong phase lỏng vẫn có thể mọc trong phase đặc.

ð Làm kháng sinh đồ trực tiếp từ chai cấy máu (+) nên tiết kiệm được thời gian

Môi trường thạch máu

Đặc điểm thành phần môi trường:

ð Môi trường cơ bản: CBA (hoặc TSA hoặc BHIA)

ð Máu cừu: 5-7%

Nuôi cấy vi khuẩn:

ð Không có kháng sinh (BA): hầu hết vi khuẩn

ð Nalidixic acid (BANg): Staphylococcus, Streptococcus.

ð Gentamicin (BAGe):Streptococcus.

Phân biệt các loại tiêu huyết (α, β, γ)

S pyogenes S pneumoniae E faecalis Staphylococcus

M catarrhalis

Môi trường thạch nâu

Đặc điểm thành phần môi trường:

ð Môi trường cơ bản: CBA (hoặc TSA hoặc BHIA)

ð Máu ngựa: 5-7% (hoặc máu cừu có bổ sung V)

Nuôi cấy vi khuẩn:

ð Không có kháng sinh (CAXV): các vi khuẩn

ð Bacitracin (CAHI): Haemophilus.

ð VCN (CAVCN):Neisseria.

M catarrhalis

Môi trường Mac Conkey Agar (MC)

Đặc điểm thành phần môi trường:

ð Crystal violet và bile salt: ức chế vi khuẩn Gram (+)

ð Neural red: chỉ thị phân biệt lên men lactose

Nuôi cấy vi khuẩn:

ð Trực khuẩn Gram (-), dễ mọc

Đặc điểm khúm khuẩn:

ð Lên men lactose: khúm khuẩn màu hồng

ð Không lên men lactose: khúm khuẩn màu trắng

S marcescens

E coli

S typhi

Môi trường Salmonella Shigella Agar (SS)

Đặc điểm thành phần môi trường:

ð Brilliant green và bile: ức chế vi

khuẩn Gram (+)

ð Nồng độ thiosulfate và citrate cao:

hạn chế coliform

ð Neural red: chỉ thị phát hiện lên men

lactose

ð Thiosulfate và Fe3+: chỉ thị phát hiện

sinh H2S

Nuôi cấy phân lập chuyên biệt cho

Sal monella và Shigella.

Đặc điểm khúm khuẩn:

ð Shigella: khúm khuẩn có màu trắng.

ð Salmonella, Proteus: khúm khuẩn có

màu trắng, có thể có tâm đen

ð Coliform: khúm khuẩn có màu hồng

Salmonella

Shigella

Môi trường Hektoen Enteric Agar (HE)

Đặc điểm thành phần môi trường:

ð Bile và fuchsin: ức chế vi khuẩn Gram (+)

ð Salicin, sucrose: phân biệt Salmonella, Shigella với trực

khuẩn Gram (-) không lên men lactose (Proteus…)

ð Bromothymol blue và fuchsin: chỉ thị phát hiện lên

men lactose

ð Thiosulfate và ferric amonium citrate: chỉ thị phát hiện

sinh H2S

Phân lập và phân biệt Salmonella, Shigella với các

trực khuẩn Gram (-) không gây bệnh khác.

Đặc điểm khúm khuẩn:

ð Shigella: khúm khuẩn màu xanh lá.

ð Salmonella, Proteus: khúm khuẩn có màu xanh lá, có

thể có tâm đen

ð Coliform: khúm khuẩn có màu vàng

Coliform

Shigella

Salmonella

Môi trường Xylose Lysin Desoxycholate Agar (XLD)

Đặc điểm thành phần môi trường:

ð Xylose: phân biệt Shigella và Providencia

(không hoặc lên men xylose chậm) với trực

khuẩn Gram (-) khác (lên men xylose).

ð Lysin decarbosylase: phân biệt Salmonella với

các trực khuẩn Gram (-) khác lên men xylose

ð Lactose và sucrose hàm lượng cao: ngăn

ngừa dương tính giả của lysin decarboxylase

từ các coliform.

ð Thiosulfate và ferric amonium citrate: chỉ thị

phát hiện sinh H2S.

ð Sodium desoxycholate: ức chế vi khuẩn Gram

(+) và sự mọc lan của Proteus.

Phân lập chọn lọc Salmonella, Shigella.

Đặc điểm khúm khuẩn:

ð Salmonella: khúm khuẩn màu đỏ, có thể có

tâm đen.

ð Shigella, Providencia: khúm khuẩn có màu đỏ.

ð Coliform: khúm khuẩn có màu vàng

ð Proteus: khúm khuẩn có màu vàng, có thể có

tâm đen.

Salmonella Shigella

Coliform

Môi trường Thiosulfate Citrate Bile Sucrose Agar (TCBS)

Đặc điểm thành phần môi trường:

ð Thiosulfate và citrate với nồng độ cao trong

pH kiềm: ức chế Enterobacteriaceae.

ð Ox bile: ức chế Enterococcus.

ð Thymol blue và bromothymol blue: chỉ thị lên

men sucrose ngay cả khi trong điều kiện môi

trường kiềm mạnh.

Phân lập chọn lọc Vibrio.

Đặc điểm khúm khuẩn:

ð V cholerae, V fluvialis, V alginolyticus: khúm

khuẩn màu vàng.

ð V parahaemolyticus: khúm khuẩn màu xanh.

ð Proteus, Staphlococcus: cũng có thể mọc và

cho khúm khuẩn màu vàng.

V cholerae

V parahaemoliticus

Môi trường Uriselect 4 (URI4)

Đặc điểm thành phần môi trường:

cho sản phẩm có màu xanh (Klebsiella,

Enterococcus, Serratia).

chất cho sản phẩm có màu hồng (E coli).

P vulgaris) và deaminase cho sản phẩm có

màu nâu (Proteus).

Nuôi cấy nước tiểu.

Đặc điểm khúm khuẩn:

indol (-).

khuẩn 2mm, màu nâu cam, indol (+).

biển nhạt.

K pneumoniae

P mirabilis