Nghiên cứu sơ bộ thành phần hóa học của lá cây chè vằng

Vôi mong muôn hoc tâp vê phuong phâp nghiên cüu thành phàn hoâ hoc cây thuôc, cüng nhu dé cô thêm nhüng co sô khoa hoc cho viêc su dung cây chè vang làm thuôc phông và chüa bênh , chüng

BÔ Y TÉ TRlTÔNG DAI HOC DUÜC HÀ NÔI

NGUYÊN THI KIM THOAN

CÛA LÀ CÂY CHÈ VÀNG

<Jasminum subtriplinerve Blume Oleaceae>

(K H O Â L U AN T Ô T N G I I I Ê P DLT0C SŸ K I I O A 1998-2003)

Nguoi huforng dân : PGS.TS B ëT h i Thuân

DS Nguyên Quÿnh Chi

Noi thirc hiên : Bô mon Duac lieu Thoi gian thirc hiên : 3/2003-

J i d 9 ( ë c A n (J q i

Tôi xin bày tô su kmh trong và long biêt on sâu sâc toi:

PGS.TS.Be Th| Thuân

DS Nguyên Quÿnh Chi

Là nhüng nguôi thày dâ tân tînh huông dân và giüp dô tôi trong quâ trinh làm de tài này

Tôi xin trân trong câm on câc thày giâo, cô giâo, câc cô kÿ thuât viên

bô mon Diroc lieu Cac cân bô phong thf nghiêm trung tâm, thu viên trucmg dai hoc Duoc Hà Nôi dâ giüp dô và tao diéu kiên thuân loi de tôi hoàn thành khoâ luân này

Cuôi cùng tôi xin câm on gia dïnh, ban bè nhùng nguôi dâ khuyén khich dông viên và giüp dô tôi trong hoc tâp cüng nhu trong cuôc sông

Hà nôi, ngày 16 thâng 5 nam 2003

Sinh viên : Nguyên Thi Kim Thoan

2 2 2 3 3 4 4 4 5 7 7 7 7 7 8 8 9 9 9 9

10

12 12

12 12

14 14

20 24 30 31

MTJC LUC

DAT VAN VAN D E

PHÀN I :TÔNG QU AN

I M ot so hieu biêt vê chi Jasminum và cây chè v à n g

1 Vài nét vê chi jasm inum

2 Cây chè vàng

2 1.Bac diëm hinh thâi

2.2.Phân b o

2.3.BÔ phân dùng, thu hâi và ché bien

2.4.Thành phàn hoâ h o c

2 5 Tac dung và công dung

II.Tôm tât phirong phâp hoâ hoc cây th u o c

1.Tôm tât phuomg phâp hoâ hoc cây th u o c

1.1.Dinh tfnh

1.2 Dinh luong nhôm châ't chinh

1.3.Chiét xuâ't

1.4.Phân lâ p '

1.5.Nhân d a n g

2 Tôm tât phucmg phâp hoâ hoc flavonoid trong cây thuoc 2.1.Dinh tfnh sa b ô

2.2.Dinh lu a n g

2.3.Chiét xuâ't

2.4.Phân lâp và tinh c h e

PHAN II: THITC NGHIÊM VÀ KET QUÂ

2 1 Nguyên lieu và phircfng phâp thirc nghiêm

2.1.1.Nguyên lieu

2.1.2.Phuang phâp thuc nghiêm

2.2.Ket quâ thirc nghiêm

2.2.1.Dinh tfnh câc nhôm chat trong lâ chè vâng bâng phân ung hoâ hoc

2 2 2 Chiê't xuâ't, dinh tfnh flavonoid trong lâ chè vâng bâng sâc kÿ g iâ y

2 2 3.Phân lâp, phân tfch và nhân dang flavonoid

2.3.Bàn luân

PHAN III KÊT LUÂN VÀ DE XUAT

TÀI LIEU THAM KHÀO

BÂT VAN DE■

Trong quâ trînh sinh ton và phât triën, con nguôi dâ biét sir dung nhiêu loai cây cô de phông và chüa bênh Tuy nhiên cô rat nhiêu cây thuôc môi chï duoc su dung theo kinh nghiêm dân gian mà chua cô co sô khoa hoc nhàt dinh Viêc két hop giüa kinh nghiêm chüa bênh cüa nhân dân vôi nhùng nghiên cüu khoa hoc sê tùng buôc giüp cho viêc su dung cây cô dùng làm thuôc mot câch hop lÿ, an toàn và hiêu quâ hon

Là mot cây thuôc thuôc chi Jasminum, chè vâng dâ duoc su dung tù lâu

trong dân gian vôi công dung chu yéu là chông nhiëm trùng Thuông dùng cho phu nü sau khi sinh, chüa kinh nguyêt không déu, thâ'y kinh dau bung, dâp tri

sung vü và tâm tri mun nhot, mân ngüa.O mot sô dia phuong cây chè vâng duoc dùng thay chè uông hàng ngày Dâ cô mot sô công trînh nghiên cün vê tac dung duoc lÿ cüa cây chè vâng, song vê thành phàn hoâ hoc và moi tuong quan giüa thành phàn hoâ hoc vôi tac dung duçfc lÿ cho dên nay vân côn ft tài lieu trong nuôc và nuôc ngoài dê câp dén

Vôi mong muôn hoc tâp vê phuong phâp nghiên cüu thành phàn hoâ hoc cây thuôc, cüng nhu dé cô thêm nhüng co sô khoa hoc cho viêc su dung cây chè vang làm thuôc phông và chüa bênh , chüng tôi tiên hành dê tài:

“Nghiên cüru so bô thành phàn hôa hoc cüa la chè vâng” vôi câc mue tiêu:

> Dinh trnh so bô mot sô hop chat tu nhiên trong lâ

> Chiê't xuât, phân lâp và du doân câu trüc châ't phân lâp duoc

PHÀN I TÔNG QUAN TÀI LIEU

I MOT SÔ HIEU BIÊT VE CHIJASMINUM VÀ CÂY CHÈ VÀNG:

1 Vài nét vê chi Jasminum:

Théo Dirac diën Viêt Nam in lan thür nhât tâp II [3] chè vàng là la phcfi hay sây

khô cüa cây chè vàng (Jasminum subtriplinerve Blume), ho Nhài(Oleaceae).

♦ Dac diëm thirc vât: chi Jasminum là mot trong 25 chi thuôc ho

Oleaceae, bô Oleales, Phân lôp Asteridae, ngành hat km Angrospermae Vôi khoâng hün 200 loài [13].Ô Viêt Nam, ho Nhài (Oleaeceae) cô 9 chi vôi 60 loài [5],

Chi Jasminum gôm nhûng cây nhô hoàc nhô, leo La moc dôi không cô la

kèm Hoa luông tmh cô la bâc và la bâc con xép thành xim ô nâch la hayngon Bao hoa mâu 5-6 khai van Bô nhi giâm côn 2 drnh ô tràng Bâu trên 2

A /

ô Quâ mong Chi Jasminum dirçfc phân bô nhiéu à câc nirôc nhiêt dôi nhiï An

dô, Trung Quôc, Mien diên, Xrilanca, Malaixia [9]

♦ Thành phân hoa hoc:Tùr la cüa cây Jasminum primulinum ngirôi ta xâc dinh diroc mot glycosid là jasmin(C26H380 12)[9,13] Trong Jasminum officinale cô tinh dàu:benzyl acetat (C9H1 0O2), linalul (C1 0H lgO), jasmon (CuH lôO) và metyl atranilat (CgHgOjN) Ngoài ra côn cô jasmin.Trong la

Jasminum grandiflorum cô chat nhira, acid salisilic và jasminin Trong cây Jasminum sp cô glycosid dâng [9].

♦ Mot sô loài thuôc chi Jasminum duoc dùng làm thuôc theo kinh nghiêm

dân gian (Bâng 1):

2

Bâng 1 :Nhùng cây thuoc thuôc chi Jasminum duac su dung

theo kinh nghiêm dân gian

dùng

Tài lieu tham khâoTên latin Tên Viêt Nam

1 J subtriplinerve Chè vâng

Dùng cho phu nü s au khi sinh

Lâ [4;6;10;11]

2 J multiflorum

Nhài nhiêu hoa

Gây non, giâi dôc

tâng tiê't sùa

HoaRê

Hoa

[4]

[9;10]

3 JJanceaolairum Nhài thon Chûa phong

4 J.scandens Nhài leo Tri nam toc Rê [4]

5 J.sambac Nhài Ha sot, tri

mun nhot Hoa, Lâ [4]

2 Cây chè vàng

2.1 Dac diêm hinh thâi

Chè vàng con goi là chè man cuôc, dây câm vân, cây dâm tràng

Tên khoa hoc : Jasminum subtriplinerve Blume, ho Nhài ( Oleaceae) Chè vàng là loai cây nhô, moc thành bui à bà rào hay bui tre hoâc bâm

vào câc cây 1cm Thân cây cûng, chia thành tùng dot, ducmg kmh 5-6mm, chia thành nhiêu cành, cô thê’ vuan cao tôi 1-1,5m và vuan dài tôi 15-20m, thân và cành dêu nhân Lâ moc doi hinh mûi mâc, phia cuông tù hay hai trôn, dàu lâ nhon, dài 4-7,5cm, rông 2-4,5cm Nhüng lâ phia trên nhô hcfn lâ phia duôi, mép nguyên trên cô 3 gân rô rêt Cuông lâ nhân, dài 3-12mm Hoa moc thành xim nhiêu hoa (chùng7-9 hoa ) cânh hoa màu tràng Quâ hinh càu, duông kmh

7-8mm Khi chrn thî co màu vàng, trong quâ cô mot hat rân chàc Mùa quâ chm tù thâng 7 dén thânglO trong nâm [11] (ânh 1).

Anh 1 : Cây chè vàng Jasminum subtriplinerve Blume,

ho Nhài (Oleaeceae)

2.2 Phân bo:

Ô nuôc ta chè vàng là cây moc hoang và duoc trong à mot so noi nhu

Lào Cai, Hoà Bînh, Vînh Phü, Quâng Ninh, Hà Nôi, Ninh Bînh, Thanh Hoâ, Nghê An qua Thùfa Thiên Hué, Quâng Nam, Dà Nâng tôi Khânh Hoà [4]

2.3 Bô phân dùng, thu hâi và chê bien:

Théo câc tài lieu [3;4;10;11] bô phân dùng cüa chè vàng là lâ nhung cüng cô tài lieu ghi sir dung câ thân và lâ[6;9] Côn trong dân gian nguôi ta vân dùng câ thân và lâ cüa cây chè vàng phoi khô de dun nuôc uông thay chè

Duoc lieu cô thé thu hâi quanh nâm dùng tuoi hoâc khô

2.4 Thành phàn hoâ hoc:

Cho dén nay mot sô tài lieu cô dê câp dén su cô mât cüa alcaloid, flavonoid và chat nhua trong lâ chè vàng [4;9] Trong công trînh nghiên ciru cüa mînh, Nguyên Thi Ninh Hâi [9] dâ tién hành tâch phân doan câc hop chat bàng câc dung môi cô dô phân eue khâc nhau tir cao côn 90° cüa thân và lâ

4

cây chè vàng Dira vào két quâ cüa phuong phâp sâc kÿ dôi vôi timg phân doan thu duoc, tac giâ dâ scf bô xâc dinh trong cao côn 90u cüa chè vàng cô câc dân xuâ't terpen, nhira, lignin glycosid dâng, flavonoid và alcaloid Tuy nhiên két quâ này duoc dua ra hoân toàn chî dua trên màu sâc câc cüa vêt chat sau khi phun thuôc thü hiên màu, két hop vôi câc két quâ nghiên ctfu trên thé giôi vê mât hoa hoc cüa mot sô loài khâc thuôc chi Jasminum Nhu vây cô nghïa là nhûng két quâ nghiên cüru vê thành phân hoa hoc cüa Jasminum subtriplinerve Blume ghi trong tài liêu[9] môi chî de câp rat so bô và mang trnh chat du doân vê câc nhôm chat cô trong thân và la cüa cây mà thôi.

2.5 Tâc dung và công dung:

2.5.1 Mot s o k é t quâ nghiên cüu vê tâc dung sinh hoc cüa chè vàng:

♦ Tâc dung khâng khuan:

Bênh viên Thâi Bînh dâ làm khâng sinh dô cüa dich chiét chè vàng so sânh vôi câc thuôc khâng sinh penicillin, streptomycin, clorocid và sulfamid, thây chê' pham chè vàng cô tâc dung khâng khuan manh hon câc thuôc trên dôi vôi tu càu và liên càu khuan tan huyét [1 1]

Bàng phuong phâp khuyéch tan dùng khoanh giây trên môi truông thach, chè vâng cô tâc dung manh dôi vôi: Staphylococcus aureus, Streptococcus haemolyticus, Shigella shigap, Shigella dysenteriae, Samonella typhi, tâc dung yêu vôi Pseudomonas aeruginosa, Escherichia coli, Shigella sonnai Trong dô thây tâc dung khâng khuan cüa cao nuôc manh hon cao côn, dich chiét la cô tâc dung manh hon dich chiét thân và rê[9] Ngoài ra chè vâng côn

cô tâc dung khâng vi khuan Entamoeba moshkoskii[12]

♦ Chè vâng làm giâm co bôp tü cung cô lâp trên chuôt công trâng tuong tu papaverin[9]

♦ Chè vàng cô tâc dung thüc dây quâ trînh hàn gân vêt thuüng trên da dông vât thi nghiêm Dang cao côn 90° cüa chè vàng cô tâc dung bâo vê niêm

mac da dày chông lai câc yéu to gây loét do û trê dich vi, do thành mach bi

hu hai, thiéu mâu[9]

♦ Mot s o tac dung khâc cüa chè vàng: Chè vàng cô tac dung chô'ng viêm câp trên câc mô hinh gây viêm câp bàng kaolin, carragenin và serotonin Doi

vôi viêm man, chè vàng cô tac dung à mire dô vira Ngoài ra chè vàng côn

làm tâng dich mât[9]

Câc nghiên ciru vé dôc tfnh câp và màn cho thây chè vàng ft dôc[9] Nhung không dùng cho phu nü cô thai[6 ]

2.5.2 Công dung theo kinh nghiêm dân gian và mot so b à i thuoc:

Théo Y hoc co truyén, lâ chè vàng cô vi dàng hai chat, tmh âm, qui vào hai kinh tâm và tÿ, vôi công nàng khu phong, hoat huyêt, dieu kinh, tiêu viêm, trù mü và bd dàng[3;4].Chè vàng duac dùng cho phu nü sau khi sinh de phong và chûa nhiëm trùng, sot cao, chûa kinh nguyêt không dêu, thây kinh dau bung, viêm hach bach huyêt, viêm tu cung và viêm tuyén süa, chûa phong thâp, dau nhirc câc chi và khop xuang, chûa ghè la, choc dâu, câc bênh ngoài da[3;4;6;8; 10; 11] Liêu dùng 40-100g tuai hoâc 20-30g khô/ngày, sàc uong hoâc dùng ngoài

Mot so bài thuoc:

> Bài thuoc chûa kinh nguyêt không dêu, bê kinh dau bung [6 ]

> Phu nù sau khi sinh câm sot, sung hong hay luôi viêm la, nông khât, tâc tia süa hay ft süa, dùng lâ cây ba chac, chè vàng môi thu* 30g sàc uông[8 ]

6

> Dùng lâ chè vàng chùa âp xe vu [11]:

Lâ chè vàng giâ nât, dâp hoàc giâ lâ vôi côn 50° roi dâp vâo chô sung dau, ngày 3 làn, dêm 2 làn.Thôi gian dieu tri là 1 ngày hoàc 1 tuàn, tuÿ theo bênh nâng, nhe và chùa sôm hay muôn

II TÔM TÂT PHÜONG PHÂP NGHIÊN CÜU HOA HOC CÂY THUOC [1;7;14]

1 Tôm tât phuong phâp nghiên curu hôa hoc cây thuôc

1.2 Dinh litçrng nhôm chat chinh:

Dây là van dé quan trong, nô giüp xâc dinh bô phân nào cüa cây cô hàm luong chat dô cao nhât và hàm luong dô cao nhât vào thôi diëm nào trong nâm

dé tù dô cô ké hoach thu hâi phù hop

1.3 Chiét xuât:

Phuong phâp chiét xuât bao gôm câ viêc xü lÿ nguyên lieu, chon dung môi, dung eu chiét và phuong phâp chiét xuât Câc hop châ't tu nhiên cô tmh chat dàc trung khâc nhau và tmh chât càn quan tâm nhât trong chiét xuât là tmh phân eue Tuÿ theo dô phân eue cüa nhôm chât dé chon dung môi thfch hop Phuong phâp chiét xuât co diê’n mot duoc lieu de nghiên cûu thâm dô là dùng môt dây dung môi bât dau tù không phân eue dén phân eue manh, vf du: ether dàu, ether, cloroform, côn và cuôi cùng là nuôc

Câch chiét thông dung là chiét nông bàng mây chiét liên tuc(soxhlet) hoàc chiét hôi luu Câch chiét don giân nhât là ngâm phân doan hay côn goi

là chiét nguôi Ngoài ra côn chiét bàng dung eu ngâm kiêt, chiét nguoc dông

Dira vào tmh phân eue cüa dung môi và cüa câc nhôm hçfp châ't de cô thé du doân su cô mât cüa câc chat trong môi phân doan chiét Vf du: Trong dich chiét cloroform sê cô mât coumarin, quinon, câc aglycon, mot sô alcaloid base yéu hoâc trong dich chiét côn së cô mât glycosid, alcaloid, câc hop châ't phénol khâc, acid hùu cO, tanin

Khi cân chiét lâ'y toàn bô thành phân trong duoc lieu thï dùng dung môi thich hop nhât là côn 80% (MeOH, EtOH) Côn, nhât là MeOH duoc xem là dung môi van nâng, nô hoà tan duoc câc chat không phân circ, dông thôi cüng

cô khâ nâng tao dây nôi hydro vôi câc nhôm phân eue khâc Djch chiét côn dem bôc hoi dung môi sè duoc cao toàn phân chûa hâu hét câc hop chat cô trong duoc lieu Khi cân tâch phân doan câc hçfp chat trong cao thï su dung dày dung môi không hoà lân vôi nuôc và cô dô phân circ tir yéu dén manh

1.4 Phân lâp:

Phuong phâp pho bién nhât de phân lâp câc chat là dùng sâc kÿ côt Sâc

kÿ là mot phuong phâp vât lÿ dùng dé tâch riêng câc thành phân ra khôi hôn hçfp bâng câch phân bô chüng ra thành hai pha: mot pha cô bé rông goi là pha

cô dinh và pha kia là mot châ't long hoâc khi goi là pha di dông di chuyën di qua pha cô' dinh

1.5 Nhân dang:

Dâu tiên phâi dinh tmh bâng câc phân ûng hoa hoc, sâc kÿ giâ'y hoâc sâc kÿ lôp mông vôi 3 hê dung môi khai triën khâc nhau de xem chat dô dâ thuc su tinh khiê't chua Sau dô so sânh vôi châ't chuan du kiên

Do dô chây cô thë do riêng chât thü hoâc do hôn hop (châ't thü và châ't

du kiê'n trong cùng dieu kiên) dira trên nguyên tâc: hai châ't rân nê'u là cùng mot loai hop chât thï diëm chây cüa hôn hçfp vân không thay doi so vôi diëm chây cüa tùng hçfp chât riêng rê Su hiêu chînh nhiêt dô trong khoâng ±2°C

Phân tfch câ'u truc bàng quang ph6 : De phân tfch eau truc câc hçfp chât, ting dung và phô'i hop câc phuong phâp phân tfch quang pho dë tim công thirc

Thuông dùng ph6 tù ngoai (UV), phd hông ngoai (IR), khôi ph6 (MS), công huông tù hat nhân (NMS) và pho nhiêu xa tia X (X-ray).

2 Tôm tâ t phuong phâp nghiên curu thành phàn flavonoid trong cây thuoc

2.1 Dinh tinh sa bô flavonoid trong cây thuoc:

- Dinh tfnh bâng câc phân üng hoâ hoc

- Dinh tfnh bâng sàc kÿ giây hoâc sàc kÿ lôp mông

2.2 Dinh luçmg:

- Phuong phâp cân: chî umg dung khi nguyên lieu giàu flavonoid và dich chiét ft tap chat

- Phuong phâp pho tu ngoai: dùng phé tu ngoai, dua vào dô hâp phu

phân tû s hoâc dô hâp thu E1% lcmô mot X và dung môi qui dinh cho tùng loai

flavonoid de dinh lnong

- Phuong phâp do quang: Su dung nhûng phân üng tao màu nhu phân üng cyanidin, phân umg két hop vôi muôi diazoni, tao phüc vôi dung dich A1C13, muôi titan, chrom

2.3 Chiét xuât :

Dô tan cüa flavonoid tuÿ thuôc vào sô nhôm hydroxy và câc nhôm thé khâc cüa chüng So nhôm này cüng nhu vi tri cüa chüng rat khâc nhau giüa câc chat, vî vây không cô mot phucmg phâp chung nào de chiê't xuât câc flavonoid

Nôi chung câc glycosid cô dô phân eue manh hem câc aglycon Vôi aglycon thî isoflavon, flavanon, dihydroflavonol và câc flavon cô nhiêu nhôm methoxy, ft nhôm hydroxy dêu là nhüng chat phân eue yêu De chiêt chüng dùng câc dung môi phân eue yêu nhu : benzen, cloroform, ethyl acetat

Câc flavon và flavonol cô nhiêu nhôm OH, câc biflavon, aurol và chalcon và glycosid dêu là chat phân eue manh Cô thë chiêt bang côn, nuôc riêng hoâc hôn hçfp côn nuôc Dung môi cô thë âp dung cho hàu hêt flavonoid

là dung dich ethanol hoàc methanol 60% hay 80%

Chiét bàng nuôc nông âp dung dôi vôi câc polyglycosid và antocyanin Flavonoid do cô nhôm OH phénol, tan duoc trong kiêm nên cô thë chiét chüng bàng dung dich kiêm loâng, nuôc vôi Sau dô acid hoâ dich chiét de két tüa flavonoid hoàc tâch ra bàng dung môi hùu co ô môi truông acid.

2.4 Phân lâp và tinh ché:

Sau khi chiét xuât duoc flavonoid tién hành phân lâp tùng chat flavonoid:

2.4.1 Tâch so bô: Dùng câc dung môi cô dô phân eue khâc nhau và không

hoà lân vôi nhau de tâch phân doan Vf du : tâch aglycon vôi glycosid bàng nuôc vôi cloroform, nuôc vôi ethyl acetat, buthanol vôi ether dâu

2.4.2 Dùng phuong phâp sac kÿ côt: Chat hâp phu thông dung là bôt

polyamid Cô thë dùng câc chat khâc nhu bôt cellulose, sillicagen, cephadex Tuÿ theo hê dung môi su dung mà côt polyamid cô thë tâch flavonoid theo 2

co ché hâp phu và phân bô Vôi dung môi ua nuôc nhu hôn hop côn-nuôc, butanol-acid acetic thî co ché hâp phu së Uu thé Côn vôi câc hê dung môi ua dâu nhu cloroform-methanol-aceton thî co ché phân bô së xây ra uu tiên

- Châ't hâp phu là sillicagen: Su tâch trong côt xây ra theo co ché hâp phu cüa sillicagen và phân hâp phu cüa dung môi Sillicagen âp dung tôt dôi vôi câc aglycon ft phân eue nhu flavanon, isoflavon và flavon, flavonol cô nhiêu nhôm methoxy

- Côt cephadex (loc gel): dua trên su khâc nhau vê kfch thuôc phân tu giùa câc chat dë tâch riêng chüng ra bàng câch su dung câc chât cô kfch thuôc lô xôp xâc dinh làm pha cô dinh Câc chât cô phân tü luong lôn tan trong nuôc së di nhanh qua côt trong khi câc chât cô phân tü luong nhô hon thî

di chuyën châm hon

2.4.3 Tinh ché:

Muôn cô don chât tinh khiét thî càn phâi tâch sâc kÿ côt vài lan hoàc sâc

kÿ ché hoâ

10

2.4.4 Nhân dang chât phân lâp duoc:

- Dinh tmh chât phân lâp duoc bàng câc phân rïng hoa hoc :

+ Phân üfag cyanidin : cho màu hông + Phân ring vôi hoi amoniac : cho màu vàng + Phân ung vôi dung dich FeCl3 : cho tua xanh den

- Kiëm tra dô tinh khiet bâng sâc kÿ giây hoâc sâc kÿ lôp mông mot chiéu vôi 3 hê dung môi khai triën khâc nhau, xem chât dô dâ thât su tinh khiét chua, hoâc sâc kÿ hai chiéu vôi 2 hê dung môi Néu trên sâc dô chî cô 1 vét chât thï châm so sânh cùng vôi chât chuan du kién

- Tiên hành do diê’m chây cüa chât dô, cô thé do diê’m chây so sânh vôi chât chuan du kiên

- Phân tfch câu truc flavonoid bâng quang pho de phân tfch câc hop chât flavonoid hiên nay nguôi ta thuông üng dung và phôi hôp câc phuong phâp quang pho, thuông dùng pho tu ngoai (UV), phô hông ngoai (IR), pho công huông tù hat nhân (NMS), khôi pho (MS) và pho nhiêu xa tia X (X-ray)

PHÀN II THUC NGHIÊM VÀ KET QUÂ■ ■

2.1 Nguyên lieu và phitong phâp thitc nghiêm

2.1.1 Nguyên lieu

Duoc lieu là lâ cüa cây chè vâng duç/c thu hai vào thâng 6-2002 tai xâ Dông Son, thi xâ Tam Diêp, tînh Ninh Bînh, rua sach, phoi khô, tân nhô

2.1.2 Phuong phâp thuc nghiêm

2.1.2.1 Dinh tfnh mot so nhôm chat tu nhiên trong duoc lieu bàng câc phàn üng hoâ hoc ghi theo tài lieu: Bài giâng duoc liêu[ 1 ]; Thuc tâp duçfc liêu[2]; Phuong phâp nghiên cüu hoâ hoc cây thuôc[7],

2.1.2.2 Dinh tfnh flavonoid bâng sàc kÿ giâ'y 1 chiêu tù duôi lên và sâc kÿ giây 2 chiêu vôi giây sâc kÿ Whatman sô 1

Su dung câc hê dung môi:

- Acid acetic-nuôc(15:85)

- n- Butanol- Acid acetic-nuôc(4:l:5) pha trên

- Acid acetic-nuôc(60:40)

- Acid acetic-acid hydroclorid-nuôc(30:3:10)

Sau khi khai triên, câc bân sâc kÿ duoc de ngoài không khi cho bay hoi hêt dung môi Quan sât câc vêt chat duôi ânh sâng tu ngoai ô buôc sông A,=366nm vôi hoi amoniac và phun thuoc thu hiên màu bàng A1C133% trong côn tuyêt doi

2.1.2.3 Phân lâp flavonoid bàng sàc kÿ côt vôi chat nhôi côt là Cephadex LH20

Dung môi rua giâi là methanol 80%

12

2.1.2.4.Nhân dang flavonoid

- Bàng câc phân umg hoâ hoc

- Phuong phâp quang ph6 :

Phô tir ngoai duoc do trên mây UV-VIS Spetrophotometer Cary IE-Varian (Australia) tai phông thi nghiêm trung tâm truông Dai hoc Duoc Hà Nôi

Phô hông ngoai duoc do trên mây FT-IR Spetrophotometer 1650-Perkin Elmer (USA) tai phông thi nghiêm trung tâm truông Dai hoc Duoc Hà Nôi

2.2 KET QUÂ THUC NGHIÊM:

2.2.1 Dinh tmh câc nhôm châ't trong lâ chè vang bàng câc phân iùig hoa hoc.

2 2 1.1.Dinh tmh glycosid tim:

Lây 10g bot duoc lieu vào bînh non dung tfch 250ml, thêm 80ml côn 25°, ngâm ô nhiêt dô phông 24 giô Gan dich chiét vào côc cô mô, loai tap bâng dung dich chî acetat 30%, loc bô tua Dich loc bay hoi hét côn cho vào blnh gan 100ml, lâc vôi cloroform 3 làn, môi lân 15 ml Gan lây lôp cloroform vào côc cô mô Bay hoi dung môi, hoà tan cân bàng 10ml côn 90° dé làm câc phân trng dinh tmh:

- Phân umg Liebermann-Burchardt: Cho vào ong nghiêm 2ml dich chiét,

cô câch thuÿ dén khô roi thêm 1ml anhydrid acetic, lâc cho tan hét cân, sau

dô thêm dông lirong acid sulfuric dâc theo thành ong nghiêm Không thây xuât hiên vông dô tim giûa 2 lôp chât long

- Phân trng Légal: Cho vào ong nghiêm 1 ml dich chiét, thêm vài giot dung dich Natri nitroprusiat 0,5%, lâc déu, roi thêm vài giot dung dich NaOH

1 0% không thây xuât hiên màu dô

- Phân utng Baljet: Cho vào ong nghiêm 1 ml dich chiê't, thêm vài giot thuôc thü Baljet môi pha (1 phân acid picric l%-9phàn NaOH 10%), không thây xuât hiên màu vàng da cam

- Phân trng Keller-Kiliani: Cho vào ong nghiêm 1ml dich chiét, thêm

lm l Feclj 5% trong acid acetic, lâc dêu, nghiêng ong nghiêm, cho tir tir acid sulfuric dâc theo thành ong nghiêm, không thây xuât hiên vông màu dô giûa

2 lôp phân câch

So bô két luân trong dich chiét không cô glycosid tim

2.2.1.2 Dinh tmh flavonoid, coumarin, saponin:

Lây 10 g bot duoc lieu cho vào bînh non dung tfch 50ml, thêm 20ml ethanol 90° Dun soi câch thuÿ trong vài phüt, loc nông, dich loc duoc tién hành làm câc phân üng sau:

14

* Dinh tfnh flavonoid:

- Phân üng Cyanidin: Cho vào ong nghiêm nhô 1 ml dich chiêt Thêm mot ft bôt magiê kim loai, nhô vài giot acid clohydric dâm dâc Dë yên mot vài phüt, xuât hiên màu hông dô

- Phân üng vôi kiêm:

+ Phân üng vôi hoi amoniac: Nhô 2 giot dich chiét lên giây loc, dë khô, trên giây cô vét màu vàng nhat, ho trên miêng lo amoniac dâ duoc mô nüt, thây màu vàng cüa vét tàng lên rô r ê t

+ Phân üng vôi dung dich NaOH 10%: Lây 1ml dich chiét vào ong nghiêm thêm vài giot dung dich NaOH 10% thây xuât hiên tua duc và màu cüa dich chiét vàng dâm hon nhiêu so vôi dich chiêt ban dau

- Phân üng vôi dung dich FeCl3 5% : Cho 1ml dich chiét vào ong nghiêm, thêm 2-3 giot Fecl3 5% thây xuât hiên tüa xanh den

- Phân üng vôi A1C13 3% : Cho 1ml dich chiét vào ong nghiêm, thêm 2-

3 giot A1C13 3% trong côn thây màu vàng cüa dich chiét tâng lên rô rêt

Sô bô két luân trong dich chiét cô flavonoid

* Dinh trnh coumarin:

- Phân üng Diazo hoâ : Cho vào ong nghiêm 1 ml dich chiét, thêm vài giot dung dich NaOH 10% Dun soi roi dë nguôi, thêm vài giot TT Diazoni môi pha, thây xuât hiên màu dô gach

- Phân üng mô và dông vông lacton:

Cho vào 2 ông nghiêm môi ông 1ml dich chiét Ong 1 thêm vài giot ddNaOH 10% roi dun câ 2 ông nghiêm trên nôi câch thuÿ, dë nguôi, quan sât thây:

A /

Ong 1 xuât hiên nhiêu tüa duc vàng, ông 2 trong, thêm vào môi ông 2

ml nuôc cât Lâc dêu quan sât: ông 1 trong suot; ông 2 cô tüa duc Acid hoâ ông 1 bâng vài giot HC1 dâc, ông 1 duc nhu ông 2

- Soi huÿnh quang duôi ânh sang tü ngoai: