Nghiên cứu đặc điểm thực vật, thành phần hóa học và tác dụng sinh học của lá bạch đồng nữ

Gần đây, một số công trình nghiên cứu của các nhà khoa học đã chứng minh được chế phẩm bạch đồng nữ có khả năng ức chế dòng tế bào ung thư Sarcoma-180 và làm tăng hoạt tính của enzym cat

w ^ m

BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI

- c g O s o

-NGUYỄN THỊ KIM THOA

NGHIÊN CỨU ĐẶC ĐIỂM THỰC v ậ t, t h à n h PHẦN HOÁ HỌC VÀ TÁC DỤNG SINH HỌC CỦA LÁ BẠCH ĐỚNG NỮ

(Clerodendrum chinense var simplex (Moldenke) s L Chen Verbenaceae)

(Khoá luận tốt nghiệp Dược s ĩ Đại học khoấ 2001-2006)

Người hưótig dẫn : TS Nguyễn Thái An

ThS Hoàng Quỳnh Hoa

Nơi thực hiện : Bộ môn Dược cổ truyền

Bộ môn Thực vật

Bộ môn Dược lực Trường ĐH Dược Hà Nội

Thời gian thực hiện : 7/2005-5/2006

HÀ NỘI - THÁNG 5, 2006

Với lòng kính trọng và biết Cfn sâu sắc, tôi xin chân thành cảm ơn:

- TS Nguyễn Thái An

- ThS Hoàng Quỳnh Hoa

- ThS Đào Thị Vui

Những người đã trực tiếp hướng dẫn, chỉ bảo tận tình cho tôi trong suốt quá trình thực hiện đề tài

Đồng thời tôi cũng xin bày tỏ lời cảm om tới:

- Tập thể cán bộ bộ môn Dược cổ truyền — Trường ĐH Dược Hà Nội

- Tập thể cán bộ bộ môn Thực vật — Trường ĐH Dược Hà Nội

- Tập thể cán bộ bộ môn Dược lực — Trường ĐH Dược Hà Nội

Đã luôn tạo điều kiện thuận lợi, giúp đỡ tôi hoàn thành luận văn này

Hà Nội, ngày 18 tháng 5 năm 2006

s v Nguyễn Thị Kim Thoa

MỤC LỤC

ĐẶT VẤN ĐỂ 1

PHẦN 1 :TỔNG QUAN 3

1.1 Đặc điểm thực vật và phân b ô 3

1.1.1 Vị trí phân loại của chi Clerodendrum L 3

1.1.2 Đặc điểm chung của họ cỏ roi ngựa (Verbenaceae) 3

1.1.3 Đặc điểm thực vật chi Clerodendrum L 4

1.1.4 Đặc điểm một số loài thuộc chi Clerodendrum L 4

1.2 Đặc điểm vi học 6

1.2.1 Cấu tạo giải phẫu 6

1.2.2 Đặc điểm bột dược liệ u 7

1.3 Thành phần hoá học 8

1.4 Tính vị và tác dụng dược lý 8

1.5 Công dụng 9

1.6 Một số đơn thuốc 10

PHẦN 2: THỰC NGHIỆM VÀ KẾT QUẢ 12

2.1 Nguyên liệu và phương pháp nghiên cứu 12

2.1.1 Nguyên liệu nghiên cứu 12

2.1.2 Phương tiện nghiên cứ u 12

2.1.3 Phương pháp nghiên cứu 13

2.2 Thực nghiệm và kết quả 14

2.2.1 Nghiên cứu về thực vật 14

2.2.1.1 Mô tả hình thái cây và kiểm định tên khoa học 14

2.2.1.2 Đặc điểm vi phẫu l á 18

2.2.1.3 Đặc điểm vi phẫu thân 18

2.2.1.4 Đặc điểm bột lá 18

2.2.2 Nghiên cứu về hoá học 20

2.2.2.1 Định túứi các nhóm chất bằng phản ứng hóa học 20

2 2 2 2 Xác định độ ẩm của dược liệu 28

2.2.2.3 Định tính dịch chiết toàn phần bằng SKLM 28

2.2.3 Nghiên cứu về Aavonoid 30

2.2.3.1 Chiết xuất Aavonoid 30

2.2.3.2 Định tính Aavonoid bằng SKLM 32

2.2.3.3 Định lượng Aavonoid trong lá bạch đồng nữ 33

2.2.4 Nghiên cứu về coumarin 34

2.2.4.1 Chiết xuất coumarin 34

2.2.4.2 Định tính coumarin bằng SKLM 36

2.2A 3 Định lượng coumarin 37

2.2.5 Nghiên cứu về saponin 38

2.2.5.1 Chiết xuất saponin 38

2.2.5.2 Định tính saponin bằng SKLM 40

2.2.5.3 Định lượng saponin 41

2.2.6 Thử độc tính cấp 42

2.2.6.1 Chế phẩm th ử 42

2.2.Ó.2 Tiến hành 42

2.2.6.3.Kếtqu ả 42

PHẦN 3: KẾT LUẬN VÀ ĐỂ XUẤT 44

3.1 Kết luận 44

3.2 Đề xuất 45

TÀI LIỆU THAM KHẢO

PHỤ LỤC

DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT

dd: Dung dịch

SK: Sắc ký

SKLM: Sắc ký lớp mỏng.SKĐ: Sắc ký đồ

ri': Thuốc thử

UV: Ultra Viólete

ĐẶT VẤN ĐỂ •

Ngày nay, khoa học công nghệ hiện đại đã và đang được áp dụng rất hiệu quả vào việc tổng hợp, bào chế thuốc để phòng và chữa bệnh nhưng vẫn không thể thay thế hoàn toàn các chế phẩm thuốc có nguồn gốc thiên nhiên, thảo mộc Quả thực, các chế phẩm thuốc có nguồn gốc thảo mộc không những đảm bảo hiệu quả điều trị mà còn có tính an toàn cao, do đó ngày càng được con người ưa chuộng Bên cạnh đó, cũng như nhiều nước Á Đông khác, Việt Nam có truyền thống phòng và chữa bệnh theo Y học cổ truyền nên đòi hỏi cung cấp một số lượng dược liệu rất lớn Mặt khác, Việt Nam nằm trong vùng khí hậu nhiệt đới nên có thảm thực vật cũng như nguồn dược liệu hết sức phong phú và đa dạng Tuy nhiên, cho tới nay, nguồn dược liệu quý đó vẫn còn nhiều cây thuốc chưa được chú ý, nghiên cứu hoặc nghiên cứu chưa đầy

đủ và chuyên sâu

Trong số đó phải kể đến cây bạch đồng nữ Cây bạch đồng nữ mọc hoang khắp nơi ở nước ta và từ lâu đã được nhân dân ta sử dụng làm thuốc chữa các bệnh ngoài da, nhiễm khuẩn, bạch đới, vàng da, cao huyết áp, lỵ trực trùng, viêm gan Gần đây, một số công trình nghiên cứu của các nhà khoa học đã chứng minh được chế phẩm bạch đồng nữ có khả năng ức chế dòng tế bào ung thư Sarcoma-180 và làm tăng hoạt tính của enzym cathepsin trong máu người Tuy vậy những nghiên cứu về loài cây này còn chưa đầy đủ, đặc biệt là những nghiên cứu về thành phần hoá học hầu như chưa tìm thấy trong

các tài liệu kinh điển

Để góp phần nâng cao giá trị sử dụng của dược liệu, chúng tôi tiến hành

thực hiện đề tài “Nghiên cứu đặc điểm thực vật, thành phần hoá học và tác dụng sinh học của lá bạch đồng nữ” với những nội dung như sau:

1.về thực vật:

- Mô tả hình thái thực vật và kiểm định tên khoa học

- Xác định đặc điểm vi phẫu lá, vi phẫu thân và đặc điểm bột lá

2 Về hoá học:

- Định tính các nhóm chất chính trong dược liệu

- Định lượng các nhóm chất chính trong dược liệu

3 Về sinh học:

- Thử độc tính cấp

P H Ầ N l

TỔNG QUAN

1.1 ĐẶC ĐIỂM THỰC VẬT VÀ PHÂN B ố

1.1.1 Vị trí phân loại của chi Clerodendrum L.

Theo hệ thống phân loại thực vật Taktajan [5], cây bạch đồng nữ thuộc

chi Clerodendrum L., họ c ỏ roi ngựa (Verbenaceae), bộ Hoa môi {Lamíales), liên bộ Hoa môi (Lamianae), phân lớp Hoa môi (Lamiidae), lớp Ngọc lan (Magnoỉiopsida), ngành Ngọc lan (Magnoliophyta).

Ngành Ngọc lan (Magnoliophyta).

Lớp Ngọc lan (Magnoliopsida).

Phân lớp Hoa môi {Lamiidae).

Liên bộ Hoa môi (Lamianae).

Bộ Hoa môi {Lamíales).

Họ cỏ roi ngựa (Verbenaceae).

Chi Clerodendrum L.

1.1.2 Đặc điểm chung của họ c ỏ roi ngựa (Verbenaceae)

Cây bụi hay gỗ lớn, đôi khi mọc bò dài, thân non vuông

Lá mọc đối, đều đặn, ít khi mọc vòng, đơn hay kép, phiến đơn nguyên hay kép chân vịt 3-5 lá chét, không có lá kèm

Cụm hoa chùm hay xim ở tận cùng (ít khi ở nách lá), gốc hoa có lá bắc nhỏ Hoa lưỡng tính không đều, rất ít khi đều [16], mẫu 5 Đài hợp, hình ống, hay chén có 4-5 thuỳ, rất ít khi là 6, còn lại trên quả Tràng hợp, hình phễu, thường chia 2 môi, có 4-5 thuỳ, tiền khai hoa lợp Bộ nhị thường có 4 nhị đính trên tràng, 2 trội, có khi chỉ có 2 chiếc với bao phấn đính lưng, gốc có tuyến mật [16] Bộ nhụy thường có 2 lá noãn, bầu trên với 2 hoặc 4-5 ô, mỗi ô một noãn, vòi nhụy đính trên đỉnh bầu [5], hoặc bầu trên có 2-8 ô, mỗi ô mang 1-2 noãn, vòi nhụy có đầu nguyên hay xẻ đôi [16]

Quả nang hay hạch, có 2-8 hạt Đôi khi đài phát triển lớn, ôm lấy quả, hạt không có nội nhũ [16]

Họ Cỏ roi ngựa có 100 chi, 2000-2500 loài, phân bố chủ yếu ở vùng nhiệt đới và cận nhiệt đới, đặc biệt có nhiều ở vùng Địa trung hải Việt Nam

có 26 chi, trên 130 loài [5], ngoài một số cây gỗ lớn còn đa số là cây cỏ, bụi phân bố rộng rãi chủ yếu ở ven rừng, nơi đất trống, bãi hoang [16].

1.1.3 Đặc điểm thực vật chi Clerodendrum L.

Cây gỗ hoặc cây nhỡ mọc đứng hay leo Thân non vuông Lá mọc đối hay mọc vòng, đơn, nguyên hoặc có răng, có khi chia thuỳ và thường có mùi hôi khi ta vò lá [8]

Cụm hoa chuỳ ở ngọn hoặc ờ nách có lá bắc Đài lợp hình chuông, tồn

tại, có 5 răng.Tràng hình ống, không đều, ống mảnh thường rất dài, phiến chia thành 5 thuỳ không đều Nhị 4 đính trên ống tràng và thường thò ra ngoài Bầu

có 4 ô, 4 noãn Quả hạch hình cầu, bao bởi phần gốc của đài tồn tại trở nên nạc, 4 hạch, có khi ít hơn do thui biến [8]

Chi Clerodendrum L có 32 loài là chi lớn nhất trong họ cỏ roi ngựa [5] Trên thế giới, chi Clerodendrum L có khoảng 400 loài và dưới loài phân

bố chủ yếu ở vùng nhiệt đới và cận nhiệt đới ở Việt Nam có khoảng 30 loài, trong đó có hơn 10 loài được sử dụng làm thuốc [8]

Theo thực vật chí Đông Dương [26], chi Clerodendrum L có 41 loài, ở

Việt Nam, Võ Văn Chi nêu 13 loài [7], Phạm Hoàng Hộ nêu 35 loài [15], Viện Dược liệu nêu 7 loài [22]

1.1.4 Đặc điểm một sô loài thuộc chi Clerodendrum L.

I.I.4.I Đặc điểm một số loài được gọi là bạch đồng nữ

- Clerodendrum petasỉtes (Lour) Moore: còn gọi là mò hoa trắng, ngọc

nữ hoa vàng [8] Cây bụi nhỏ cao khoảng Im; thường rụng lá, nhánh vuông,

có lông vàng Lá mọc đối, hình tim, có lông cứng và tuyến nhỏ, mép có răng nhọn hay nguyên Chuỳ hoa to, hình tháp, có lông màu vàng hung Hoa trắng vàng vàng, đài có tuyến hình khiên; tràng có lông nhiều; nhị thò ra Quả hạch đen, mang đài màu đỏ tồn tại ở trên Phân bố ở Nam Trung Quốc và Ấn Độ cho tới Nam Thái Bình Dương, ở nước ta có gặp rải rác từ Bắc vào Nam Cây mọc ven đường, ven rừng vùng trung du [8], [2 2]

- Clerodendrum squamatum L.: còn gọi là mò trắng Hình dáng rất giống cây bạch đồng nữ (Cỉerodendrum petasites (Lour) Moore) trên nhưng lá

màu nhạt hơn, mỏng hơn, răng cưa nhỏ thanh hofn; hoa mọc thưa không thành hình mâm xôi, màu hoa hơi giống màu mỡ gà [19].

- Clerodendrum fragrans Vent [8], [19], [20], [24], [27]: còn gọi là mò mâm xôi [7], [8], [2 0], bấn trắng, vậy trắng, mấn trắng, mò trắng [19], ngọc

nữ thơm [8] Cây nhỏ cao chừng Im đến l,5m Thân non vuông, thân già tròn

Lá rộng hình trứng, dài 10-20cm, rộng 8-18 cm, đầu nhọn, phía cuống hình tim hay hơi phẳng, mép có răng cưa to, thô, mặt trên màu sẫm hơn, có lông ngắn, mặt dưới có màu nhạt hơn, gần như bóng, trên những đường gân hơi có lông mềm, vỏ có mùi hơi hôi đặc biệt của cây mò, cuống lá dài khoảng 8cm Hoa màu hồng nhạt hay trắng, có mùi thơm mọc thành hình mâm xôi gồm rất nhiều tán, toàn cụm hoa có đường kính khoảng lOcm Đài hoa hình phễu, phía trên xẻ 5 thuỳ hình mũi mác thẳng và nhọn, có lông mịn, có tuyến mật Tràng hoa đường kính 1,5 cm, phía dưới thành hình ống nhỏ, dài 2,5 cm hay hơn, 4 nhị đính trên miệng ống tràng cùng với nhị thòi ra quá tràng Vòi nhụy thường ngắn hơn chỉ nhị Bầu thượng hình trứng Quả hạch gần hình cầu, còn đài tồn tại bao ở ngoài Cây mọc hoang khắp nơi ở nước ta, thưòíng ở các bãi hoang, ven đường làng, các chỗ ẩm ven bờ ao Cây có thể được trồng làm cảnh và làm thuốc [8] Hoa thường nở vào tháng 1-3, hoặc 7-8, quả chín vào tháng 9-10 Cây có mọc ở nhiều tỉnh miền nam Trung Quốc, Philipin, Indonexia, Lào, Campuchia

- Clerodendrum chínense (Osb.) Mabb Multiplex : còn gọi là ngọc nữ

thơm, mò trắng Bụi cao 1- 1,5 m, có lông mịn; cành có cạnh Lá có phiến xoan tam giác, đáy tà hay hình tim, bìa có răng cưa, nhám nhám Tản phòng ở ngọn dày như hoa đầu; hoa trắng, đôi, đẹp, dạng và thơm như lài; lá hoa như

lá, đài đo đỏ, cao 2,5 cm; tiểu nhụy đứng cao Quả nhân cứng to 1 cm, 2n= 46,

52 [15]

- Clerodendrum philippinum var symplex Wu et Fang: còn gọi là mò

hoa trắng, bấn trắng, lẹo trắng, mò mâm xôi Đoạn thân non vuông, đoạn thân già tròn, dài 20- 40 cm, đường kính 0,3- 0,8 cm, có lông vàng nhạt.Thân chia thành nhiều gióng dài 4- 7 cm, quanh mấu có một vòng lông tơ mịn Lá mọc đối, gốc tròn hoặc hình tim, đầu nhọn, dài 10- 20 cm, rộng 8- 15 cm, mép nguyên hoặc có răng cưa rất nhỏ, có ít lông cứng và ở mặt dưới thường có

tuyến nhỏ tròn, màu vàng, gân lá nổi rõ, gân phụ có hình mạng lưới, cuống lá phủ nhiều lông Lá vò có mùi hăng đặc biệt Cụm hoa do các xim nhỏ tập hợp thành chuỳ ở đỉnh thân, phủ đầy lông màu hung, dài 11- 15 cm Lá bắc hình trái xoan hoặc hình mũi mác, hoa màu trắng hoặc vàng ngà Nhị và vòi nhụy thò dài Quả hạch hình cầu, đen bóng, có tồn tại lá đài màu đỏ [6] Cây được trồng hoặc mọc hoang ở các vùng nhiệt đới Á châu [28].

Những cây cùng được gọi là bạch đồng nữ kể trên có công dụng và cách dùng gần giống nhau, nhưng cây có kiểu hoa mâm xôi phổ biến và dễ tìm hơn [19]

1.1.4.2 Đặc điểm một số loài có công dụng và cách dùng tương tự bạch

đồng nữ

- Xích đồng nam {Clerodendrum kaempferi (Jacq) Sieb): còn gọi là mò

đỏ, xích đồng Rất giống cây bạch đồng nữ {Clerodendrum petasites (Lour)

Moore), chỉ khác là hoa màu đỏ, quả màu lam đen Phân bố ở Ân Độ, TrungQuốc, Nhật Bản, Việt Nam, Lào cho tới Malaixia ở nước ta cây mọc từ Sơn

La, Hà Giang, Tuyên Quang, Hoà Bình vào tới Quảng Nam Cây mọc phổ biến ở các bãi hoang vùng đồi núi và đồng bằng [8], [2 2]

- Ngọc nữ đỏ {Clerodendrum panỉculatum L.): còn gọi là mò đỏ, vậy

đỏ Rất giống cây xích đồng nam, khác là lá chia 3-7 thuỳ, thường là 5 Phân

bố ở Ẩ i Độ, Thái Lan, Lào, Campuchia, Việt Nam đến Indonexia ở nước ta

có gặp từ Quảng Trị, Thừa Thiên Huế, Quảng Nam, Đà Nẵng vào các tỉnh Tây nguyên và các tỉnh Nam Bộ Cây mọc hoang ở ven đường cái, trong lùm bụi, ở các chỗ ẩm mát [8], [2 2]

1.2 ĐẶC ĐIỂM VI HỌC

1.2.1 Cấu tạo giải phẫu

Theo Nguyễn Viết Thân [20], bạch đồng nữ {Clerodendrum fragrans vent hoặc Clerodendrum philippinum var symplex Wu et Fang) có các đặc

điểm vi phẫu sau:

+ Vi phẫu lá:

Phần gân chính' Gân lá lồi nhiều cả hai phía Biểu bì trên và dưới là

một hàng tế bào tròn, nhỏ, xếp đều đặn, mang lông che chở và lông tiết Lông

che chở đa bào có 4-5 tế bào Lông tiết chân ngắn đơn bào, đầu to tròn gồm 6-

8 tế bào xếp xoè ra Dưới biểu bì trên là nhiều hàng tế bào mô dầy góc, sát biểu bì dưới chỉ có 2-3 hàng tế bào mô dầy Mô mềm là những tế bào hình đa giác, hình tròn không đều nhau, thành mỏng, rải rác có tế bào chứa đầy tinh thể canxi oxalat hình khối Có 5-7 bó libe gỗ xếp thành cung lớn, phía đỉnh có 1-2 bó phụ Mỗi bó bên ngoài có cung libe ôm lấy mô gỗ, các bó không đều nhau Sát mép ngoài cung libe có một dãy tế bào tiết, bao quanh mỗi tế bào tiết có 5-7 tế bào nhỏ, hình đa giác

Phần phiến lá: Biểu bì giống phần gân lá, có nhiều lông che chở và

lông tiết Biểu bì dưới mang lỗ khí Mô giậu là một hàng tế bào hình chữ nhật xếp vuông góc với biểu bì, chiếm khoảng 1/4 bề dầy phiến lá Mô khuyết gồm các tế bào thành mỏng, nhiều hình dạng khác nhau Rải rác có bó libe gỗ của gân phụ

có những tế bào bên trong chứa nhiều tinh thể canxi oxalat hình khối

Vi phẫu thân già có lớp bần gồm 6-7 hàng tế bào hình chữ nhật xếp đều đặn Mô mềm vỏ là những tế bào thành mỏng, hình thoi, gồm 3-4 lófp tế bào Libe xếp thành từng bó phía trên gỗ Phần gỗ phát triển hơn ở thân non

1.2.2 Đặc điểm bột dược liệu

Bột màu lục xám, mùi thơm đặc biệt, vị nhạt Quan sát dưới kính hiển

vi thấy: Mảnh bần, mảnh biểu bì mang lỗ khí; lông che chở; lông tiết Lông

che chở đa bào, tế bào gốc to hơn, tế bào ở đầu thuôn nhỏ Lông tiết đầu đa

bào gồm 6 -8 tế bào xếp thành hình hoa thị, chân đơn bào ngắn Mảnh mô mềm tế bào thành mỏng Sợi dài đứng riêng lẻ hoặc tập trung thành bó Có nhiều mảnh mạch điểm, mạch vòng Tinh thể canxi oxalat hình khối đứng

riêng lẻ hoặc nằm trong tế bào Tinh bột tròn, có rốn hạt rõ, đường kính

0,01-0 ,0,01-0 2 mm [2 0]

1.3 THÀNH PHẦN HOÁ HỌC

Theo “Cây thuốc và động vật làm thuốc ở Việt Nam” [22], bạch đồng

nữ (Clerodendrum petasites (Lour) Moore) có flavonoid, tanin, cumarin, acid

nhân thơm, aldehyd nhân thơm, dẫn chất amin có nhóm carbonyl; xích đồng

nam iCỉerodendrum kaempferi (Jacq) Sieb) có chứa một chất đắng là clerodin,

2 flavonoid glucosid, và hispidalin 7-0- glucoronid, scutellarein 7-0- glucoronid, l-furantriterpenoid C24H34O7; ngọc nữ đỏ chứa ethylcholestan-5- 22-25, trien-3ß-ol, vết anthocyan

Năm 2000, Hoàng Thanh Hưcmg- Hà Việt Hải và cộng sự đã chiết tách

và phân lập thành phần flavonid từ lá bạch đồng nữ (Clerodendrum ĩragrans),

từ đó xác định được cấu trúc thành phần flavonoid là 5,7,8-trihydroxy, 4’- methoxy flavon, công thức phân tử là: CigHjjOö [1 2]

Theo Đỗ Tất Lợi [19], trong nước sắc của lá bạch đồng nữ

(Cỉerodendrum philippinum) và xú ngô đồng (Clerodendrum trichotomum) có

nhiều muối canxi Ngoài ra, trong xú ngô đồng còn có các alcaloid: orixin (CigH230ộN), orixidin (C15H13O4N), isoorixin, kokusagin (CJ3H9N4O) và tinh dầu

(Clerodendrum fragrans Vent.) có tác dụng hạ huyết áp do giãn mạch ngoại

vi; ngoài ra có tác dụng lợi tiểu, có khả năng ngăn chặn phản ứng viêm do phenol gây ra trên tai thỏ [19]

Hoàng Thanh Hưcmg- Hà Việt Hải và cộng sự nghiên cứu thấy bạch

đồng nữ {Clerodendrum fragrans Vent.) có thành phần flavonoid có khả năng

chống oxy hoá đối với nhóm máu B là mạnh nhất và với nhóm máu A là yếu nhất Ngoài ra, ở nồng độ 0,lmg%, flavonoid này còn làm tăng hoạt tính của cathepsin trong huyết tương máu người ở lứa tuổi trung niên (45,4%) cao hơn

ở lứa tuổi thanh niên (35,7%) Điều này cho phép liên hệ tới khả năng phòng

chống một số bệnh phát sinh ở người có tuổi gây nên do sự suy giảm hoạt động của hệ enzym cathepsin bạch cầu [1 2]

Chế phẩm flavonoid chiết xuất từ lá bạch đồng nữ có hoạt tính gây độc với dòng tế bào S-180 nhưng không mạnh Chế phẩm phối hợp flavonoid của

bạch đồng nữ {Clerodendrum fragrans Vent.) và xích đồng nam theo tỉ lệ

1,77/1 có khả năng gây độc tế bào và duy trì tác dụng gây độc vượt trội Chế phẩm này có độc tính thấp, có tác dụng ức chế sự phát triển của ung thư báng nước và ung thư cơ đùi gây trên chuột bỏd dòng tế bào Sarcoma -180 Đặc biệt chế phẩm này còn có khả năng hạn chế di căn của tế bào Sarcoma -180 khá tốt (đạt 43,3% đối với gan và 41,3% đối vói phổi ở nồng độ chế phẩm lOOmg/kg) [13]

Ngoài ra, ílavonoid toàn phần của bạch đồng nữ {Clerodendrum fragrans Vent.) có khả năng kháng khuẩn đối với các chủng vi khuẩn gram

âm và gram dương là khá tốt {Bacillus cereus, Bacillus subtỉlis, Bacillus pumilus, Staphylococcus aureus, Sarcina lutea, Pseudomonas aeruginosa, Esherichia coli, Shigella flexneri, Proteus mirabilis, Salmonella typhy, Candida albicans) Tác dụng này đối với nhóm vi khuẩn gram dương tỏ ra mạnh hơn đối với nhóm gram âm Tác dụng kháng nấm yếu Tính đặc hiệu cũng như khả năng kháng khuẩn của các phân đoạn riêng biệt tỏ ra kém hơn

so với flavonoid toàn phần Sự phối hợp flavonoid toàn phần của bạch đồng nữ

và xích đồng nam theo tỉ lệ 1:1 làm tăng khả năng kháng khuẩn đối với nhóm

vi khuẩn gram âm Sự phối hợp flavonoid toàn phần của bạch đồng nữ, xích

đồng nam và bọ mẩy (Cỉerodendrum cyrtophyllum) theo tỉ lệ 1:1:1 làm tăng

khả năng kháng khuẩn đối với nhóm vi khuẩn gram dương [14]

1.5 CÔNG DỤNG

Rễ dùng trị thấp khófp, lưng gối đau, tê bại, cước khí thuỷ thũng, khí hư, bạch đới, kinh nguyệt không đều, vàng da, vàng mắt hoặc dùng ngoài ngâm rửa Lá dùng trị khí hư, bạch đới, cao huyết áp hoặc dùng ngoài giã nát tắm

rửa ghẻ, mụn nhọt, chốc đầu Ngày dùng 20-30g rễ khô, hoặc 15-20g lá khô[7].

Ngọn và lá non của bạch đồng nữ (Cỉerodendrum fragrans Vent.) vò kĩ,

rửa sạch, luộc kĩ, bỏ nước chấm muối vừng hoặc mắm, ăn như rau đỗ Rễ và lá được dùng làm thuốc, có nơi dùng toàn cây để trị phong thấp, cước khí thuỷ thũng, tứ chi tê mỏi, cao huyết áp, khí hư, bạch đới, sưng độc, lở trĩ, viêm tuyến sữa, bệnh sởi, nấu nước tắm trị lở ngứa [8] Lá hoa dùng chữa di mộng tinh, kiết lỵ ở Trung Quốc lấy hoa hấp với trứng gà ăn chữa váng đầu ở Ấq

Độ, lá dùng phối hợp với hồ tiêu chữa đau bụng [7], [8]

Bệnh viện Lạng Sơn đã dùng rễ cây bạch đồng nữ (Cỉerodendrum fragrans Vent.) và xích đồng nam chữa bệnh vàng da và niêm mạc, nhất là

niêm mạc mắt bị vàng thẫm, kiểm nghiệm nước tiểu có sắc tố mật Dùng dưới dạng thuốc sắc hay thuốc viên [19]

Nước sắc hoa, lá và thân cây bạch đồng nữ (Cỉerodendrum fragrans

Vent.) đã đựơc nghiên cứu trên 71 bệnh nhân có vết thương ở chân tay do hoả khí (do bom đạn) được điều trị bằng phương pháp nhỏ giọt thấy vết thương giảm phù nề rõ rệt, tổ chức hạt và da phát triển nhanh, miệng vết thương thu nhỏ lại tự liền sẹo sau 15-20 ngày Đối với các vết thương lộ xương, thuốc có tác dụng bảo vệ và dung nạp xương [23]

1.6 MỘT SỐ ĐƠN THUỐC

- Điều trị khí hư, bạch đới, kinh nguyệt không đều: Dùng 15-20g lá

hoặc rễ bạch đồng nữ {Clerodendrum fragrans Vent.) đun sôi lấy nước uống

Có thể đun sôi với ích mẫu, hưoỉng phụ, ngải cứu, hoặc phối hợp với rễ xích đồng nam, lá huyết dụ, lá mía đỏ [7]

- Điều trị vàng da, niêm mạc mắt vàng thẫm: Dùng 20g rễ bạch đồng

nữ (Clerodendrum fragrans Vent.) sắc với 400ml nước, còn 200ml chia lần

uống trong ngày [7] Có thể dùng thân cây nấu cao nóng hoặc dùng cả thân và

rễ thái nhỏ 600g sắc với 5 lít nước và cô đặc còn 90g, thêm tá dược vào làm thành viên ( 1 2 0 viên ), mỗi viên nặng Ig; ngày uống 8 viên chia làm 2 lần [19]

- Điều trị huyết áp cao: Dùng 20-30g lá khô sắc nóng [7]

- Điều trị xích bạch đới ra chất trắng như mũi hay đỏ nhạt như máu cá,

âm đạo ngứa ngáy, đái ra nước vàng đục hoặc đỏ nhạt:

Mò mâm xôi 15g

Bồ công anh 12gRau dừa nước 15gPhơi héo, sắc uống [11]

- Điều trị kiết lỵ mới phát bụng đau quặn mót rặn, ra máu: Lá mò mâm xôi non một nắm, thái nhỏ, rau sam một nắm, luộc ăn, uống cả nước, hay sắc uống [1 1]

- Điều trị phụ nữ ra nhiều khí hư, hay nam giới thận hư di tinh, lưng đau gấp khó cúi ngẩng:

Rễ cây bạch đồng nữ sao vàng 30g Hột muồng phân sao 20gSắc uống [11]

- Điều trị lậu đái buốt, đái nhắt, đái ra máu, ra sỏi, đái ra chất nhầy:

Xích đồng nam Bạch đồng nữ

Cỏ chỉ thiên

Rễ cỏ tranh

Cỏ bấc Thịt ốc nhồi Mỗi thứ một nắm, sắc uống [11]

PHẦN 2

THỰC NGHIỆM VÀ KÊT QUẢ

2.1 NGUYÊN LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN c ứ u

2.1.1 Nguyên liệu nghiên cứu

Mẫu nghiên cứu được thu hái tại Bát Tràng- Gia Lâm- Hà Nội, baogồm:

- Mẫu cành cây tươi mang hoa để giám định tên khoa học

- Mẫu cành cây tươi mang hoa để làm tiêu bản mẫu khô

- Mẫu cành cây tươi mang hoa, lá để làm tiêu bản vi học cấu tạo giải phẫu

- Lấy riêng lá phơi khô rồi làm nhỏ, bỏ trong túi nilon kín, để nơi khô ráo, thoáng mát làm nguyên liệu nghiên cứu hoá học và tác dụng dược lý

2.1.2 Phương tiện nghiên cứu

2.1.2.1 Các trang thiết bị dùng trong nghiên cứu

- Tủ sấy SHELLAB

- Cân phân tích Precisa

- Cân kỹ thuật Sartorius

- Máy cất quay BuChi ROTAVAPOR R-200

- Máy xác định độ ẩm SATORIUS tại bộ môn Dược liệu - Trường đại học Dược Hà Nội

- Bản mỏng tráng sẵn Silicagel GF254 của M ER C K (Đức).

- Kính hiển vi Leica Wetzlar GmbH, kính soi nổi Krussoptroni, máy ảnh kĩ thuật số Canon Power shot S40 tại bộ môn Thực vật -Trường Đại học Dược Hà Nội

2.1.3 Phương pháp nghiên cứu

2.1.3.1 Nghiên cứu về thực vật

• Phân tích hình thái thực vật

- Mô tả đặc điểm hình thái theo phưoỉng pháp ghi trong tài liệu “Thực tập thực vật và nhận biết cây thuốc” [4]

- Phân tích hoa trên kính lúp soi nổi và chụp ảnh bằng máy ảnh kĩ thuật số

• Nghiên cứu đặc điểm vi học theo tài liệu:

- Thực tập thực vật và nhận biết cây thuốc [4]

- Thực tập dược liệu- Phần vi học [3]

- Kiểm nghiệm dược liệu bằng phương pháp hiển vi [20]

- Quan sát cấu tạo vi phẫu lá và bột dược liệu bằng kính hiển vi

- Chụp ảnh các đặc điểm vi học bằng máy ảnh kĩ thuật số

• Giám định tên khoa học của mẫu nghiên cứu

- Sử dụng khoá phân loại tới họ, chi và loài trong tài liệu “Thực vật chí Đông Dương” [26] và “Thực vật chí Trung Quốc” [25]

- Đối chiếu với mô tả trong các tài liệu chuyên sâu về thực vật như:

+ Từ điển thực vật thông dụng [8]

+ Từ điển cây thuốc [7]

+ Cây cỏ Việt Nam [15]

+ Cây thuốc và động vật làm thuốc [22]

- So sánh đối chiếu với mẫu tiêu bản phòng tiêu bản mẫu khô ở Đại Học Dược Hà Nội

2.1.3.2 Nghiên cứu về hoá học.

• Định tính các nhóm chất hữu cơ chính trong dược liệu theo tài liệu:

- Bài giảng dược liệu, Tập I và II [1],

- Thực tập dược liệu- Phần hoá học [2]

- Phương pháp nghiên cứu hoá học cây thuốc [10]

• Định tính flavonoid, cumaiin, saponin trong dược liệu bằng sắc ký lófp

m ỏng, dùng bản m ỏng tráng sẵn Silicagel GF254 ( M erck).

• Định lượng flavonoid, cumarin, saponin trong dược liệu bằng phương pháp

c ân

2.I.3.3 Nghiên cứu về sinh học

Thử độc tính cấp của dịch nước sắc lá khô bạch đồng nữ theo phương pháp của Behrens - Karber Chuột nhắt trắng có trọng lưcmg 20 ± 2 gam, khoẻ mạnh, không phân biệt giống do Viện Vệ sinh Dịch tễ cung cấp được chia ngẫu nhiên thành lô, mỗi lô 6 con Trước khi thí nghiệm, để chuột nhịn đói 16 giờ Cho chuột uống chế phẩm thử bằng kim cong đầu tù đủ mức liều quy định cho từng lô, thể tích 0 ,2 ml/lOg chuột, với các mức liều tăng dần (có thể làm đậm đặc thuốc để giảm thể tích thuốc nếu cần) Sau khi cho uống thuốc, chuột được nhốt riêng từng lô, theo dõi, quan sát các biểu hiện của chuột và ghi số chuột chết trong 72 giờ Chuột chết được mổ để kiểm tra đại thể [9]

2.2 THỰC NGHIỆM VÀ KÊT QUẢ

2.2.1 Nghiên cứu về thực vật

2.2.1.1 Mô tả hình thái cây và kiểm định tên khoa học

Cây bụi nhỏ, cao 1-1,5 m Thân non có thiết diện hình vuông, có lông màu vàng trắng và nhiều đốm trắng, thân già có thiết diện hình tròn, màu xanh nâu (hình 2.1)

Lá mọc đối, cuống dài 8-10 cm, có nhiều lông nhỏ mịn, phiến lá hình tim hoặc hình tam giác, gốc lá tròn hơi lõm hình tim, đầu nhọn, mép có răng cưa to đều, dài 10-20 cm, rộng 10-15 cm (hình 2.2) Gân lá nổi rõ, có nhiều lông mịn, mặt trên màu xanh lục, thẫm màu hơn, mặt dưới mang nhiều tuyến nhỏ tròn (hình 2.3.1)

Cụm hoa dạng ngù xim hai ngả, trông như đầu ờ đầu cành hoặc ngọn

thân Hoa màu trắng hồng (hình 2.3.3 và 2.3.5) Cuống hoa dài 0,8-1 cm, đỏ tía, có nhiều đốm trắng và phủ nhiều lông trắng Lá bắc hình mũi mác, dài khoảng 1 - 2 cm, mầu xanh nhạt, giữa có gân màu tía, phủ nhiều lông trắng, rải rác có tuyến hình khiên, có lông tiết (hình 2.3.2)

Đài 5 hàn liền (hình 2.3.14), ống dài 0,5 cm, thuỳ hình mũi mác, đỏ tía,0,5- Icm, mặt ngoài có lông mịn, có tuyến hình khiên, mặt trong nhẵn (hình 2.3.4)

Tràng hình ống, màu trắng hồng, xẻ 5 thuỳ phía trên, ống dài 2- 2,4 cm, bên trong có lông (hình 2.3.6), phiến hình elip, 0,9-1,2 cm Tiền khai hoa lợp (hình 2.3.5)

Bộ nhị 4, 2 nhị hoi dài hơn, chỉ nhị dài 6- 6,5 cm, mảnh, một phần dính vào ống tràng, thò ra ngoài bao hoa; bao phấn đính lưng, nứt dọc, 0,1- 0 ,2 cm (hình 23.8 va 2.3.9).

Vòi nhụy thấp hơn chỉ nhị, dài 4- 5,5 cm, màu xanh, núm nhụy thuôn, chẻ đôi ở đầu, màu nâu nhạt (hình 2.3.10) Bầu trên, 4 ô (hình 2.3.11 và 2.3.12) Qủa hạch, đài còn tồn tại (hình 2.3.13)

Trên toàn cây và đặc biệt trên lá có nhiều mò sống kí sinh (hình 2.3.15).Qua mô tả đặc điểm hình thái và phân tích hình thái cơ quan sinh sản, đối chiếu các tài liệu tham khảo [6], [7], [8],[15], [19], [22], [25], [26], cây bạch đồng nữ nghiên cứu đã được giám định tên khoa học là:

Clerodendrum chínense var simplex (Moldenke)S.L.Qien

Hình 2.1 Ảnh cây bạch đồng nữ lúc ra hoa

Hình 2.2 Ảnh cành mang hoa của bạch đồng nữ

Hình 2.3 Ảnh một số đặc điểm của hoa và lá bạch đồng nữ.

1 Lá mang lông và tuyến nhỏ 2 Lá bắc mang lông 3 Hoa

2.2.1.2 Đặc điểm vi phẫu lá

Quan sát tiêu bản vi phẫu lá (hình 2.4.a), nhận thấy:

-Phần gân lá: Phía trên lồi ít, phía dưới lồi nhiều Biểu bì trên và dưới gồm một lớp tế bào hình tròn, nhỏ, xếp đều đặn (6) Phía ngoài biểu bì mang nhiều lông che chở và lông tiết Lông che chở đa bào gồm 4-5 tế bào Lông tiết chân ngắn, đầu to tròn, gồm 6 -8 tế bào xếp xoè ra (4) Mô dày cấu tạo bởi các tế bào hình trứng thành dày (7) Mô mềm (3) cấu tạo bởi các tế bào thành mỏng, hình tròn hoặc đa giác, các tế bào ở giữa chứa nhiều tinh thể canxi oxalat hình khối Có 5-7 bó libe - gỗ xếp thành cung lớn, 1-2 bó phụ, mỗi bó gồm cung libe ôm lấy mô gỗ (5)

-Phần phiến lá: Biểu bì trên và biểu bì dưới mang nhiều lông che chở

và lông tiết (2) Mô giậu gồm một lớp tế bào hình chữ nhật, xếp xít nhau và thẳng góc với biểu bì trên (1) Mô khuyết là những tế bào to nhỏ không đều, thành mỏng Trong phiến lá có rải rác bó libe- gỗ của gân phụ

2.2.1.3 Đặc điểm vi phẫu thân.

Quan sát tiêu bản vi phẫu thân dưới kính hiển vi (hình 2.4.b), nhận thấy:Lát cắt thân non hình vuông Ngoài cùng là lớp biểu bì (2) mang nhiều lông che chở và lông tiết (1) Sát lớp biểu bì là nhiều hàng tế bào mô dầy (3).Tế bào mô mềm vỏ hình tròn, thành mỏng (4) Libe xếp thành vòng liên tục(6) Xen giữa mô mềm vỏ và cung libe là nhiều đám tế bào mô cứng, thành

dày Mô gỗ thành dày, xếp thành dãy, mạch gỗ nằm rải rác (7).Trong cùng là

lớp mô mềm ruột, hình đa giác, thành mỏng, chứa nhiều tinh thể canxi oxalat hình khối (5)

Hình 2.5 Ảnh một số đặc đỉểm bột lá bạch đồng nữ

1 Hạt phấh 5 Tinh thể canxi oxalat hình khối

2 Lỗ khí 6 Mảnh biểu bì mang hạt tinh bột

3 Đám tế bào lỗ khí 7 Mảnh mạch

4 Lông che chở đa bào 8 Mảnh mạch điểm

2.2.2 Nghiên cứu về hoá học

2.2.2.I Định tính các nhóm chất bằng phản ứng hóa học

• Định tính glycosỉd tim:

Cho vào bình nón dung tích 50ml khoảng 5g bột dược liệu, thêm 25ml

nước Ngâm trong 24h, gạn lấy dịch chiết vào một cốc có mỏ Thêm khoảng

3ml chì acetat 30%, khuấy đều Lọc qua giấy lọc gấp nếp, thử dịch lọc vẫn

còn tủa vód chì acetat, cho thêm 1 ml chì acetat nữa vào dịch chiết, khuấy và

lọc lại Tiếp tục thử đến khi dịch chiết không còn tủa với chì acetat Cho toàn

bộ dịch lọc vào bình gạn, lắc kỹ 2 lần với chloroform, mỗi lần 5m l Gạn lấy

dịch chloroform vào cốc có mỏ khô sạch Chia dịch chiết vào các ống nghiệm

nhỏ khô Đặt các ống nghiệm lên giá và bốc hci trên nồi cách thủy đến khô

Cắn còn lại được đem tiến hành các phản ứng:

- Phản útng Liberman- Bouchardat: Cho vào 1 ống nghiệm có chứa cắn 0,5ml anhydiid acetat, lắc cho tan hết cắn Để nghiêng ống nghiệm 45®,

thêm từ từ đồng lượng H2SO4 đặc (0,5 ml) theo thành ống nghiệm để dịch lỏng chia thành 2 lófp chất lỏng thấy xuất hiện vòng tím đỏ (Phản ứng dương tính).

- Phản ứng Legal: Cho vào ống nghiệm chứa cắn 0,5 ml cồn 90°, lắc đều cho cắn được hòa tan hết, thêm 1 giọt Natri Nitroprussiat 1% và 2 giọt dung dịch NaOH 10%, không thấy xuất hiện màu hồng (Phản ứng âm tính)

- Phản ứng Baljet: Cho vào ống nghiệm chứa cắn 0,5 ml ethanol 90°

Thêm thuốc thử Baljet mới pha vào (một phần dung dịch acid picric 1% và 9 phần dung dịch NaOH 10%) Không thấy xuất hiện màu vàng cam (Phản ứng

âm tính)

Sơ bộ kết luận: Dược liệu không có glycosid tim.

• Định tính saponin:

- Quan sát hiện tượng tạo bọt: Cho vào ống nghiệm to khoảng Ig

dược liệu, thêm 5 ml nước, lắc mạnh ống nghiệm theo chiều dọc trong 5 phút

Để yên, quan sát hiện tượng tạo bọt Sau 15 phút, cột bọt vẫn bền vững

- Phản ứng phân biệt hai loại saponin:

Cho vào ống nghiệm lớn 0,5g bột dược liệu, thêm 5ml cồn 90 Đun cách thuỷ đến sôi, lọc nóng, lấy dịch lọc làm các thí nghiệm:

+ Ống 1: Cho 5 ml d d NaOH 0,1N+ 5 giọt dịch lọc trên

+ Ống 2: Cho 5 ml d d HCl 0,1N+ 5 giọt dịch lọc trên

Lắc đều 2 ống nghiệm trong 1 phút Để yên, thấy cột bọt ở ống 1 cao hơn ở ống 2

- Phản ứng Salkowski: Cho vào ống nghiệm 2g bột dược liệu, thêm

lOml cồn, đun cách thuỷ đến sôi, lọc nóng Lấy Iml dịch chiết cho vào một ống nghiệm nhỏ, thêm vài giọt H2SO4 theo thành ống, mặt phân cách xuất hiện màu tím đỏ, lắc đồng nhất (Phản ứng dương tính)

Sơ bộ kết luận: Dược liệu có saponin steroid.

• Định tính Aavonoid:

Cân khoảng 5g dược liệu cho vào bình nón dung tích lOOml, thêm 50 ml cồn 90° Đun cách thủy 10 phút, lọc nóng, dùng dịch lọc làm các phản ứng sau:

- Phản ứng Cyanidin: Cho 1 ml dịch chiết vào ống nghiệm, thêm một ít

bột Magie kim loại và 5 giọt HCl đặc, lắc đều thấy xuất hiện màu đỏ hồng (Phản ứng dương tính)

- Phản ứng vói kiềm:

+ Phản ứng với NH3: Nhỏ 1 giọt dịch chiết lên tờ giấy lọc, sấy khô, rồi

hơ trên miệng lọ có chứa amoniac đặc đã mở nút, thấy màu vàng của vết đậm lên (phản ứng dương tính)

+ Phản ứng với NaOH: Cho vào ống nghiệm Iml dịch chiết, thêm vài giọt dd NaOH 10%, thấy xuất hiện tủa và màu vàng của dịch chiết tăng lên rõ rệt (phản ứng dưofng tính)

- Phản ứng vói FeCl3: Cho 1 ml dịch chiết vào ống nghiệm, thêm 3 giọt PeQg 5% thấy màu dịch chiết chuyển từ xanh nhạt sang xanh đen (Phản ứng dương tính)

Sơ bộ kết luận : Dược liệu có Aavonoid.

• Định tính coumarin:

- Vi thăng hoa:

Cho 1 g dược liệu vào một nắp chai bằng nhôm Hơ trên đèn cồn đến khi bay hết hơi nước trong dược liệu Đặt lên trên miệng nắp nhôm một lam kính, trên đó có để một miếng bông ướt Đặt nắp nhôm trực tiếp trên nguồn nhiệt Sau 5 phút lấy lam kính ra để nguội, soi dưới kính hiển vi Thấy có tinh thể hình kim (Phản ứng dương tính)

- Chiết xuất coumarin;

Lấy khoảng 10 g dược liệu cho vào bình nón 100 ml, thêm 50 ml cồn 90°, đun cách thủy 5 phút, lọc nóng qua giấy lọc Dịch lọc thu được dùng làm các phản ứng:

+ Phản ứng mở - đóng vòng lacton;

Cho vào 2 ống nghiệm mỗi ống 1 ml dịch chiết

Ống 1: thêm 0,5 ml dung dịch NaOH 10%

Ống 2: để nguyên

Đun cả hai ống nghiệm trên nồi cách thủy đến sôi Quan sát thấy:

Ống 1: có tủa đục trắng