khảo sát độc lực và tính gây bệnh của chủng virus viêm gan vịt type i (kg6) trên phôi vịt và trên vịt con

TRƢỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ KHOA NÔNG NGHIỆP & SINH HỌC ỨNG DỤNG PHẠM DIỆU ANH KHẢO SÁT ĐỘC LỰC VÀ TÍNH GÂY BỆNH CỦA CHỦNG VIRUS VIÊM GAN VỊT TYPE I (KG6) TRÊN PHÔI VỊT VÀ TRÊN VỊT CON LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP NGÀNH THÚ Y Cần Thơ, 2014 TRƢỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ KHOA NÔNG NGHIỆP VÀ SINH HỌC ỨNG DỤNG BỘ MÔN THÚ Y    LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP KHẢO SÁT ĐỘC LỰC VÀ TÍNH GÂY BỆNH CỦA CHỦNG VIRUS VIÊM GAN VỊT TYPE I (KG6) TRÊN PHÔI VỊT VÀ TRÊN VỊT CON Giáo viên hướng dẫn: Sinh viên thực hiện: PGS.TS HỒ THỊ VIỆT THU PHẠM DIỆU ANH MSSV: 3102930 LỚP: THÚ Y – K36 i TRƢỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ KHOA NÔNG NGHIỆP VÀ SINH HỌC ỨNG DỤNG BỘ MÔN THÚ Y    Đề tài: “Khảo sát độc lực tính gây bệnh chủng virus viêm gan vịt type I (KG6) phôi vịt vịt con” Do sinh viên Phạm Diệu Anh thực Cần Thơ từ tháng 08/2014 đến tháng 12/2014 Cần Thơ, ngày…tháng…năm 2014 Cần Thơ, ngày…tháng…năm 2014 Duyệt Giáo viên hƣớng dẫn Duyệt Bộ môn PGS.TS HỒ THỊ VIỆT THU Cần Thơ, ngày…tháng…năm 2014 Duyệt khoa Nông Nghiệp Sinh Học Ứng Dụng ii LỜI CAM ĐOAN Tơi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu thân Các số liệu, kết trình bày luận văn trung thực chưa công bố luận văn trước Cần thơ, ngày … tháng … năm 2014 Tác giả luận văn Phạm Diệu Anh iii LỜI CẢM TẠ Trong suốt trình học tập giảng đường Đại học tháng làm đề tài luận văn tốt nghiệp, nhận động viên, giúp đỡ hướng dẫn từ gia đình, thầy cô bạn bè Nay, xin gửi lời cảm ơn chân thành đến: Cha mẹ, người cố gắng tạo điều kiện để tơi thực hồi bão Cơ Hồ Thị Việt Thu tận tâm hướng dẫn, giúp đỡ tạo điều kiện cho tơi hồn thành tốt luận văn tốt nghiệp Thầy Lê Hoàng Sĩ – Cố vấn học tập tận tình dạy giúp đỡ tơi suốt năm học vừa qua Ths Bs Nguyễn Văn Luân PGS.TS Nguyễn Văn Khanh nhiệt tình giúp đỡ tơi suốt trình thực đề tài Quý thầy, cô Trường Đại Học Cần Thơ, đặc biệt thầy, cô thuộc Bộ Môn Chăn Nuôi Bộ Môn Thú Y khoa Nông Nghiệp Sinh Học Ứng Dụng tận tình truyền đạt kiến thức cho tơi suốt thời gian học trường Chị Nguyễn Thị Minh Thùy, anh Lê Trần Hoài Khanh, chị Vũ Ngọc Minh Thư hướng dẫn giúp đỡ trình thực đề tài Các bạn ngồi lớp Thú Y K36 giúp đỡ động viên tơi q trình học tập sống Xin kính gửi tới q thầy, cơ, người thân lời chúc sức khỏe, thành công xin nhận nơi tơi lịng biết ơn sâu sắc Xin gửi đến bạn bè lời chúc sức khỏe lời chúc thành công đường nghiệp tương lai Phạm Diệu Anh iv TÓM LƢỢC Đề tài “Khảo sát độc lực tính gây bệnh chủng virus viêm gan vịt type I (KG6) phôi vịt vịt con” tiến hành từ tháng 08/2014 đến tháng 12/2014, trại nghiên cứu thực nghiệm trường Đại học Cần Thơ Đề tài thực nhằm khảo sát bệnh lý bệnh viêm gan vịt gây phôi vịt vịt virus viêm gan vịt type I (KG6) phân lập từ gan vịt bệnh Kiên Giang nuôi cấy tế bào xơ phôi vịt Qua thời gian nghiên cứu ghi nhận kết sau: Sau tiêm huyễn dịch virus viêm gan vịt type I trữ phòng thí nghiệm virus học, mơn Thú Y vào xoang niệu mô phôi vịt 12 ngày tuổi với liều 0,1 ml xác định liều gây chết 50% phôi (ELD50- Embryo lethal dose) 107,625 Phôi bắt đầu chết sau 24 gây nhiễm, thời gian chết phôi trung bình cao lúc 42 Các bệnh tích phôi ghi nhận da phôi xuất huyết (100%); gan sưng, xuất huyết (94,44%); phơi cịi cọc (86,11%); phơi phù (47,22%); gan nhạt màu (30,56%) Bên cạnh đó, cịn có biểu bệnh tích khác tim nhạt màu (11,11%) dịch niệu màu xanh (5,56%) Kết gây nhiễm thực nghiệm vịt với liều 0,2 ml xác định liều gây chết 50% vịt (LD50-Lethal dose) vịt ngày tuổi 5x102,68/1ml huyễn dịch virus gốc Triệu chứng ghi nhận là: không lại, bỏ ăn ủ rũ, tiêu chảy phân trắng, co giật, chân duỗi thẳng, đầu ngoẹo, chết nhanh Trong đó, tần suất xuất triệu chứng cao vận động, ủ rũ (100%) thấp chảy nước mũi (11,43%) Tỷ lệ vịt chết cao (50%) tập trung vào ngày thứ ba sau gây nhiễm Qua mổ khám ghi nhận bệnh tích đại thể : gan sưng xuất huyết (100%), gan nhạt màu (81,25%) mật sưng (68,75%) Ngồi bệnh tích cịn xuất quan khác thận sung huyết (43,75%), lách sưng đốm đỏ (18,25%) tim nhạt màu có tần suất xuất 12,5% Quan sát kính hiển vi điện tử tiêu vi thể cho thấy bề mặt gan bị xuất huyết, tế bào bị hoại tử, có tượng viêm, ống dẫn mật tăng sinh, thâm nhiễm tế bào viêm thận v MỤC LỤC Trang tựa i Trang duyệt ii LỜI CAM ĐOAN iii LỜI CẢM TẠ iv TÓM LƢỢC v MỤC LỤC vi DANH MỤC BẢNG viii DANH MỤC HÌNH ix DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT x CHƢƠNG ĐẶT VẤN ĐỀ CHƢƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 Bệnh viêm gan virus vịt (Duck Hepatitis) 2.1.1 Lịch sử phân bố 2.1.1.1Tình hình bệnh viêm gan vịt giới 2.1.1.2 Tình hình bệnh viêm gan vịt nước 2.2 Virus viêm gan vịt 2.2.1 Virus viêm gan vịt type I 2.2.1.1 Đặc điểm hình thái 2.2.1.2 Đặc tính sinh học virus 2.2.1.3 Sức đề kháng 2.2.1.4 Đặc tính ni cấy 2.2.1.5 Biến dị virus 2.2.2 Virus viêm gan vịt type II 2.2.3 Virus viêm gan vịt type III 2.3 Truyền nhiễm học 2.3.1 Sự lan truyền bệnh 2.3.2 Cơ chế sinh bệnh 10 2.3.3 Triệu chứng lâm sàng 10 2.3.4 Bệnh tích 11 2.3.4.1 Bệnh tích đại thể 11 2.3.4.2 Bệnh tích vi thể 12 2.3.5 Chẩn đoán 13 2.3.5.1 Chẩn đoán lâm sàng 13 2.3.5.2 Chẩn đoán phương pháp huyết học 13 2.3.5.3 Chẩn đoán virus học 14 2.3.6 Phòng bệnh 15 2.3.6.1 Phòng bệnh vệ sinh thú y 15 vi 2.3.6.2 Phòng bệnh vaccine 15 2.3.7 Điều trị bệnh 16 2.4 Miễn dịch chống virus viêm gan vịt 16 2.4.1 Miễn dịch thụ động 17 2.4.2 Miễn dịch chủ động 18 2.4.3 Phương pháp đánh giá đáp ứng miễn dịch 18 CHƢƠNG NỘI DUNG, PHƢƠNG TIỆN VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 19 3.1 Nội dung nghiên cứu 19 3.2 Phương tiện nghiên cứu 19 3.2.1 Thời gian 19 3.2.2 Địa điểm thực đề tài 19 3.2.3 Đối tượng thí nghiệm 19 3.2.4 Vật liệu thí nghiệm 19 3.2.4.1 Vật liệu dụng cụ 19 3.2.4.2 Hóa chất sinh phẩm 20 3.2.5 Chuẩn bị ni vịt thí nghiệm 20 3.3 Phương pháp nghiên cứu 20 3.3.1 Xác định nồng độ liều gây chết 50% phôi (ELD50) bệnh lý phôi DHV type I (KG6) 20 3.3.2 Xác định nồng độ liều gây chết 50% vịt (LD50) bệnh lý DHV type I (KG6) vịt 22 3.3.3 Thống kê xử lý số liệu 24 CHƢƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 25 4.1 Kết khảo sát liều gây chết 50% phơi vịt thí nghiệm 25 4.2 Kết theo dõi thời gian chết phôi trung bình theo nồng độ 27 4.3 Kết khảo sát bệnh tích gây phơi vịt thí nghiệm 29 4.4 Kết khảo sát liều gây chết 50% virus vịt 32 4.5 Kết khảo sát triệu chứng lâm sàng vịt thí nghiệm 34 4.6 Kết khảo sát tỷ lệ chết theo thời gian vịt thí nghiệm 36 4.7 Kết khảo sát bệnh tích đại thể vịt thí nghiệm 37 4.8 Kết khảo sát bệnh tích vi thể vịt thí nghiệm 40 CHƢƠNG KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 44 5.1 Kết Luận 44 5.2 Đề nghị 44 TÀI LIỆU THAM KHẢO 45 PHỤ LỤC 49 vii DANH SÁCH BẢNG Bảng 3.1 Bố trí thí nghiệm gây nhiễm phôi vịt 20 Bảng 3.2 Bố trí thí nghiệm gây nhiễm vịt .23 Bảng 4.1 Kết xác định liều gây chết 50 % phôi vịt 25 Bảng 4.2 Kết theo dõi thời gian chết phơi trung bình theo nồng độ .27 Bảng 4.3 Tần suất xuất bệnh tích phơi vịt thí nghiệm 29 Bảng 4.4 Kết xác định liều gây chết 50 % vịt 32 Bảng 4.5 Tần suất xuất triệu chứng vịt bệnh thí nghiệm 34 Bảng 4.6 Kết tỷ lệ vịt chết theo thời gian .36 Bảng 4.7 Tần suất xuất bệnh tích đại thể vịt thí nghiệm 37 viii DANH MỤC HÌNH Hình 2.1 Virus viêm gan vịt Hình 2.2 Cấu trúc khơng gian Picornaviridae Hình 4.1 Gan nhạt màu 30 Hình 4.2 Phơi phù, tích nước 30 Hình 4.3 Da phơi xuất huyết 31 Hình 4.4 Phơi cịi cọc, xuất huyết 31 Hình 4.5 Gan phơi xuất huyết 31 Hình 4.6 Vịt bỏ ăn, ủ rũ 35 Hình 4.7 Vịt co giật, ngoẹo đầu .35 Hình 4.8 Vịt tiêu chảy phân trắng 35 Hình 4.9 Vịt chết ngoẹo đầu 35 Hình 4.10 Gan sưng, xuất huyết 38 Hình 4.11 Gan nhạt màu 38 Hình 4.12 Mật sưng .38 Hình 4.13 Lách sưng, đốm đỏ .39 Hình 4.14 Thận sung huyết 39 Hình 4.15 Gan xuất huyết, nhiều tế bào bạch cầu, thối hóa mỡ 41 Hình 4.16 Mạch máu sung huyết, gan viêm, nhiều bạch cầu mơ gan 41 Hình 4.17 Mơ liên kết quanh ống dẫn mật dày lên, tế bào biểu mơ tăng sinh, bong tróc, nhiều tế bào bạch cầu 42 Hình 4.18 Tiểu thể Malpighi bị teo nhỏ, giọt mỡ nhỏ ống lượn, viêm thận, bạch cầu kẽ thận 42 Hình 4.19 Tế bào ống lượn gần bị hoại tử 43 ix Hình 4.13 Lách sưng, đốm đỏ Hình 4.14 Thận sung huyết 39 4.8 Kết khảo sát bệnh tích vi thể vịt thí nghiệm Kết cho thấy mẫu gan có biểu xuất huyết bề mặt mô, tế bào gan bị hư hại, tế bào bạch cầu nhiều nhu mô gan, gan bị viêm, thối hóa mỡ nặng Ở ống dẫn mật, mơ liên kết quanh ống dẫn mật dày lên, tế bào biểu mơ tăng sinh, bong tróc Tế bào mỡ gan thối hóa rối loạn chức chuyển hóa mỡ gan, quan sát tiêu thấy có hạt mỡ tế bào gan Do rối loạn chức gan, phản ứng viêm xảy nhiều mức độ khác nên dẫn đến thâm nhiễm nhiều tế bào viêm hoại tử tế bào gan Ở mẫu thận, tiểu thể Malpighi bị teo nhỏ, bạch cầu kẽ thận Những tế bào ống lượn gần bị hoại tử Ngoài ra, mẫu thận ghi nhận ống lượn màu vàng bị thối hóa Theo Nguyễn Khánh Ly (2004), nghiên cứu biến đổi bệnh tích vi thể gan vịt mắc bệnh Viêm Gan vịt virus tự nhiên tác giả cho biết quan sát tiêu thấy: gan xuất huyết, hồng cầu ngồi mạch quản tràn lan khắp nhu mơ gan, thối hóa mỡ (72,08%), có tượng thâm nhiễm tế bào viêm, tăng sinh ống dẫn mật Hồng cầu tràn lan kẽ thận, tế bào ống thận thối hóa, thâm nhiễm nhiều tế bào dạng lâm ba cầu kẽ thận Năm 2008, Woolcock Fabriant gây nhiễm thực nghiệm chủng virus viêm gan vịt cho vịt Hai tác giả cho trường hợp vịt mắc bệnh cấp tính, bệnh tích vi thể gan ghi nhận bao gồm xuất huyết hoại tử tế bào gan, ống mật tăng sinh, phản ứng viêm xuất huyết xảy mức độ khác 40 Hình 4.15 Gan xuất huyết, nhiều tế bào bạch cầu, thối hóa mỡ (HE x 200) Hình 4.16 Mạch máu sung huyết, gan viêm, nhiều bạch cầu mô gan (HE x 200) 41 Hình 4.17 Mơ liên kết quanh ống dẫn mật dày lên (1), tế bào biểu mô tăng sinh, bong tróc (2) Tế bào bạch cầu nhiều (HE x 200) Hình 4.18 Tiểu thể Malpighi bị teo nhỏ (1), giọt mỡ nhỏ ống lượn, viêm thận, bạch cầu tế bào kẽ (HE x 200) 42 Hình 4.19 Tế bào ống lượn gần bị hoại tử (HE x 400) 43 CHƢƠNG KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 5.1 Kết luận Chủng virus viêm gan vịt type I (KG6) sử dụng nghiên cứu chủng virus có độc lực cao có số ELD50/0,1ml 107,625, LD50/1ml 5x102,68 Chủng virus viêm gan vịt type I (KG6) gây chết phơi vịng 24 sau tiêm vào xoang niệu mô phôi vịt 12 ngày tuổi Thời gian chết phơi trung bình cao lúc 36 48 19,44% Phôi chết với bệnh tích đặc trưng như: da phơi xuất huyết, cịi cọc, phù phơi, gan phơi sưng, xuất huyết, nhạt màu, dịch niệu màu xanh Nồng độ virus cao virus gây chết phôi nhanh mức độ thương tổn cao Chủng virus viêm gan vịt type I (KG6) gây chết vịt vòng 48 sau gây nhiễm kéo dài đến ngày thứ 5, tỷ lệ vịt chết cao vào ngày thứ Vịt mắc bệnh có triệu chứng đặc trưng như: vận động, bỏ ăn ủ rũ, co giật, chảy nước mũi, chết ngoẹo đầu Bệnh tích đại thể tập trung gan chủ yếu với tỷ lệ gan sưng xuất huyết lên đến 100%, gan nhạt màu (81,25%) mật sưng (68,75%) Ngoài bệnh tích cịn xuất quan khác thận sung huyết chiếm tỷ lệ cao 43,75%, lách sưng đốm đỏ (18,25%) tim nhạt màu có tần suất xuất 12,5% Mật độ virus nhiều virus gây chết vịt nhanh bệnh tích xuất rõ nhiều quan Quan sát tiêu vi thể cho thấy nhu mô gan bị xuất huyết, tế bào bị hoại tử có tượng viêm, ống dẫn mật tăng sinh, thâm nhiễm tế bào viêm thận, tiểu thể Malpighi bị teo, thối hóa ống lượn 5.2 Đề nghị Tiến hành khảo sát bệnh lý bệnh viêm gan số chủng virus type I khác vịt theo lứa tuổi, theo giống địa phương từ tìm phương pháp để giữ đàn vật nuôi điều chế vaccine Tiến hành khảo sát virus viêm gan vịt type I (KG6) gây nhiều lứa tuổi, nhiều đối tượng gia cầm khác 44 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu nƣớc Asplin, F.D (1958), An attenuated strain of Vet Rec virus, Vet Rec 70, pp.1226-1230 Asplin, F.D (1961), Notes on epidemiology and vaccination for hepatitis virus of ducks Epizoot Bull 56, pp.793-800 Asplin, F.D (1970), Examination of sera from wildfowl for antibodies against the viruses of duck plasgue duck hepatitis and duck influenza Vet Rec 87, pp.182-183 Davis, D., and D Hannant (1987), Factionation of neutralizing antibodies in serum of ducklings vaccinated with live duck hepatitis virus vaccine Res Vet Sci 34, pp 276-277 Fabricant, J., C G Rickard, and P.P Levine (1957), The pathology of duck virus hepatitis, Avian Diseases, pp 256-275 Gough, R.E., M.S Collins, E.D Borland, and L.F Keymer (1984), Atrovirus-like particles associated with hepatitis in duckling Vet Rec 14, pp.279 Hwang, J (1966), Duck hepatitis virus in duck embryo liver cell culture Avian dis, pp 500-512 Kim MC, Kim MJ, Kwon YK, Lindberg AM, Joh SJ, Kwon HM, Lee YJ and Kwon JH, 2009 Development of duck hepatitis A virus type vaccine and its use to protect ducklings against infection Vaccine, 27:6688 – 6694 Kim MC, Kwon YK, Joh ST, Kim ST, Tolf C, Kim JH, Sung HW, Lindberg AM and Kwon JH, 2007 Recent Korean isolates of duck hepatitis virus reveal the presence of a new genome and serotype when compared to duck hepatitis virus type type train Arch virol, 152 (11): 2059 – 2072 10 Levine, P.P and J Fabricant (1950), Virus disease of ducks in Nopth America Cornell Vet 40, pp.71-7 11 Manson, R.A N.M Tauraso and R.K Ginn (1972), Growth of duck hepatitis virus in chicken embryos and in cell cultures derived from infected embryos Avian Dis 16, pp 973-979 12 Maiboroda, A.D (1972) Formation of ducks hepatitis virus in culture cells Veterinarya 8, pp 50-52 13 Malinovskaya, G.V (1982), Formation of 19S and 7S antibodies during immunogenesis and pathogenesis of duck viral hepatitis Vet Nauk Proiz, pp 68-70 45 14 OIE (2000), Manual of Standards for diagnostic test and vaccines 15 Shalaby, M.A M.N.K Ayoub and I.M Reda (1978), A study on o new isolate of ducks hepatitis virus and its relationship to other duck hepatitis virus strains Vet Med, pp 215-221 16 Toth, T.E (1969), Studies of an agent causing mortaliry among ducklings immune to duck virus hepatitis Avian Dis 13, pp 535-539 Richter, W.R., E.J Razok and S.M Moize (1964) Electron microscopy of virus like particle associated with duck viral hepatitis Virology, pp.114 -116 17 Rispens, B.H (1969), Some aspects of control of infectious hepatitis in ducklings, Avian dis 13, pp 417-426 18 Woolcock P.R., W.S.K Chalmers and D Davis (1982), A plaque assay for duck hepatitis virus Avian Pathol, pp 907-610 19 Woolcock P.R (1998), Duck hepatitis, In: A laboratory Manual for the Isolation and Identification of Avian Pathogens, pp 200-204 Tài liệu nƣớc Bùi Thị Cúc (2002), Nghiên cứu biến đổi bệnh lý đại thể, vi thể siêu vi thể bệnh viêm gan siêu vi trùng vịt Luận văn thạc sỹ nông nghiệp Viện khoa học kỹ thuật Việt Nam Cục Thú y (2002), Thơng báo tình hình dịch bệnh gia súc, gia cầm năm 2001, Hà Nội Đoàn Thị Thanh Hương, Nguyễn Bá Hiền, Trần Xuân Hạnh, Lê Thanh Hòa, 2010 Phát genotype (DHAV – 3) virus gây bệnh viêm gan vịt Việt Nam phương pháp giám định phân tử Tạp chí Công nghệ sinh học, (2): 145 – 153 Hồ Thị Việt Thu, (2012), Giáo trình bệnh truyền nhiễm gia súc gia cầm NXB Đại học Cần Thơ, 87 – 90 Hồ Thị Việt Thu Nguyễn Đức Hiền, (2012), Bệnh gia cầm NXB Đại học Cần Thơ,283 – 288 Lê Thanh Hoà, Nguyễn Như Thanh, Nguyễn Bá Hiên (1984), Đặc tính sinh học giống virus vacxin viêm gan vit chủng truyền nhiễm Asplin vacxin phòng bệnh Việt Nam Khoa học Kỹ thuật Thú y 2(1),21 - 25 Lê Văn Biên (2011), Khảo sát đặc tính sinh học phân tử số chủng virus viêm gan vịt cường độc phân lập đàn vịt số địa phương so sánh với chủng virus vacxin DH – EG – 2000 Luận văn thạc sỹ nông nghiệp Trường đại học Nông Nghiệp Hà Nội 46 Nguyễn Đức Hiền, (2011), Giáo trình bệnh truyền nhiễm NXB Đại học Cần Thơ,112 – 118 Nguyễn Đường, Nguyễn Như Thanh, Nguyễn Khắc Tuấn, Nguyễn Thị Bích Lộc, Nguyễn Bá Hiên, (1990), Vi sinh vật đại cương NXB Nông nghiệp Hà Nội 10 Nguyễn Hữu Vũ, Nguyễn Đức Lưu, Trần Thu Hiền, Nguyễn Khánh Ly (2001), Kết sử dụng kháng thể viêm gan virus vịt phòng trị bệnh cho vịt, ngan Khoa học Kỹ thuật Thú y, 8(4),52 - 58 11 Nguyễn Khánh Ly (2004), Phân lập virus gây bệnh viêm gan vịt nghiên cứu biến đổi bệnh lý bệnh vịt gây bệnh thực nghiệm Luận văn thạc sỹ nông nghiệp Trường Đại học Nông nghiệp I, Hà Nội 12 Nguyễn Như Thanh, 1996 Miễn Dịch Học Thú Y NXB Nông Nghiệp Hà Nội 13 Nguyễn Văn Cảm, Nguyễn Thị Thu Hà, Nguyễn Khánh Ly (2001), Nghiên cứu biến đổi bệnh lý viêm gan vịt virus Khoa học Kỹ thuật Thú y, (4),48 – 51 14 Nguyễn Phục Hưng (2004), Phân lập xác định số đặc tính sinh học virus viêm gan vịt cường độc lưu hành đàn vịt số tỉnh thuộc Đồng Bằng Sông Cửu Long Luận văn thạc sỹ nông nghiệp Trường Đại học nông nghiệp I Hà Nội 15 Nguyễn Thị Hằng (2011), Tình hình mắc bệnh viêm gan vịt virus số tỉnh đồng Bắc Bộ Phân lập virus gây bệnh, nghiên cứu đặc tính sinh học chủng virus nhược độc viêm gan vịt DH - EG 2000 quy trình sản xuất vacxin Luận văn thạc sỹ nông nghiệp Trường Đại học nơng nghiệp Hà Nội 16 Nguyễn Xn Bình (1995), 109 bệnh gia cầm NXB Long An, tr 179 - 185 17 Nguyễn Xuân Bình (2002), Bệnh vịt biện pháp phịng trị NXB Nơng nghiệp, Hà Nội,56 - 59 18 Phạm Thị Hường (2008), Tình hình bệnh viêm gan vịt virus số huyện ngoại thành Hà Nội Phân lập, khảo sát số đặc tính sinh học virus gây bệnh phương pháp phịng bệnh Luận văn thạc sỹ nơng nghiệp Trường Đại học nông nghiệp Hà Nội 19 Trần Minh Châu, Lê Thu Hồng (1985), Thăm dò tạo chủng vacxin nhược độc viêm gan vịt chủng phân lập địa phương Khoa học Kỹ thuật Thú y, 6(4),3 – 20 Vũ Như Quán (2002), Bệnh viêm gan virus vịt Khoa học Kỹ thuật Thú y, 9(1),87 - 90 21 Vũ Triệu An (1997), Miễn dịch học NXB Y học Hà Nội 47 Tài liệu Internet OIE (2008) Chapter 2.3.8 Duck virus hepatitis Terrestrial Manual 2008 (http://www.oie.int/eng/normes/mmanual/2008/pdf/2.03.08_DVH.pdf) OIE (2010) Chapter 2.3.8 Duck virus hepatitis Terrestrial Manual 2010 (http://www.oie.int/fileadmin/Home/eng/Health_standards/tahm/2.03.0 8_DVH.pdf) 48 PHỤ LỤC THỨC ĂN SỬ DỤNG TRONG NI VỊT THÍ NGHIỆM Thức ăn sử dụng cho vịt thí nghiệm thức ăn hỗn hợp dùng cho vịt công ty Cargill Thành phần dinh dƣỡng: Đạm tối thiểu: 20 % Xơ tối đa: % Ca: 0.95 – 1,35 % P tối thiểu: .0.85 % Muối: .0.25 – 0.5 % Ẩm độ tối đa: 14 % Salinomycine: 60 mg/kg Thành phần chính: bột cá, gạo, cám gạo, bắp, cám mì, khơ dầu đậu nành, acid amin, chất bổ sung khoáng vitamin 49 PHỤ LỤC PHIẾU GHI NHẬN TRIỆU CHỨNG VÀ BỆNH TÍCH Lần thí nghiệm Ngày tiến hành thí nghiệm Nghiệm thức 1.Triệu chứng Triệu chứng -1 10 Thời gian bắt đầu gây nhiễm lúc xuất triệu chứng Tình trạng lại Ít, khơng lại Đi té ngã Tình trạng ăn uống Bỏ ăn ủ rũ Ăn khơng tiêu Ít uống nước Khơng uống nước Tình trạng phân Phân lỗng trắng Phân loãng trắng xanh Phân loãng Biểu khác Niêm mạc miệng Tím tái Biểu khác Tình trạng mắt Chảy nước mắt Mắt nhắm liên tục Biểu khác Dịch tiết từ mũi Chảy nước mũi Biểu thần kinh Co giật Đầu ngữa lên lưng Biểu khác Biểu chân Khô chân Thời gian từ gây nhiễm chết Số vịt bệnh Số vịt chết Biểu chết Ngoẹo đầu, chân duỗi thẵng Biểu khác 50 Độ pha loãng 10 10-3 10-4 -2 10-5 2.Bệnh tích Bệnh tích 10-1 Niêm mạc mắt Da Túi khí Phổi Tim Gan Lách Mật Thận Dạ dày tuyến Dạ dày Ruột non Ruột già Ổ nhớp Đỏ Biểu khác Xuất huyết Biểu khác Đục Dính sườn Tích nước Xuất huyết Khơ dính sườn Biểu khác Xuất huyết Biểu khác Sưng Xuất huyết Hoại tử Màu vàng nhạt Sưng Căng phồng Sưng Xuất huyết Biểu khác Xuất huyết Biểu khác Xuất huyết Biểu khác Xuất huyết Biểu khác Xuất huyết Biểu khác 51 Độ pha loãng 10-2 10-3 10-4 10-5 PHỤ LỤC QUI TRÌNH KỸ THUẬT GIẢI PHẪU BỆNH THƢỜNG QUI I Chuẩn bị bệnh phẩm thƣờng qui Cố định bệnh phẩm thông thường formol trung tín 10% Decal bệnh phẩm xương II Cắt lọc bệnh phẫm Cắt lọc bệnh phẩm tươi Cắt lọc bệnh phẩm mãnh nhỏ III Xử lý mô Loại nước (bằng cồn) Làm mô (bằng xylen) Ngấm mô vùi mô IV.Cắt mỏng mẫu mô sau xử lý Chuẩn bị dao Điều chỉnh dao Điều chỉnh mặt cắt (hướng block) Bể ấm (dàn mỏng mẫu mô) Bàn sấy lam Tủ sấy (làm nóng chảy parafin) V Nhuộm thƣờng qui Hematoxylin eosin 52 QUI TRÌNH KỸ THUẬT GIẢI PHẪU BỆNH THƢỜNG QUI Bệnh phẩm sinh thiết Xử lý mô tự động Đúc mẫu (lock parafin) Cắt mỏng (máy cắt vi thể) Sấy tiêu Nhuộm tiêu (H.E) Đọc lƣu kết 53 ... Hepatitis virus Virus viêm gan vịt DEK Duck embryo kidney Tế bào thận ph? ?i vịt DHV-1 Duck hepatitis virus type I Virus viêm gan vịt type I DHV-2 Duck hepatitis virus type II Virus viêm gan vịt type. .. viêm gan vịt nhược độc an toàn cho vịt ngày tu? ?i có hiểu bảo hộ tốt Hiện nay, virus viêm gan vịt type I gây bệnh khắp n? ?i gi? ?i virus viêm gan vịt type II xảy Anh, virus viêm gan vịt type III xảy... type III hai lần vào th? ?i ? ?i? ??m 12 tuần trước đẻ tạo miễn dịch thụ động cho vịt v? ?i virus viêm gan vịt type I, III (OIE, 2000) V? ?i vaccine viêm gan vịt type II, chưa t? ?i liệu n? ?i sử dụng vaccine