khảo sát ảnh hưởng của chất điều hõa sinh trưởng và nước dừa lên sự sinh trưởng và phát triển của mô sẹo măng tây xanh (asparagus officinalis l )

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƢỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ VIỆN NGHIÊN CỨU VÀ PHÁT TRIỂN CÔNG NGHỆ SINH HỌC LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC NGÀNH CÔNG NGHỆ SINH HỌC KHẢO SÁT ẢNH HƢỞNG CỦA CHẤT ĐIỀU HÕA SINH TRƢỞNG VÀ NƢỚC DỪA LÊN SỰ SINH TRƢỞNG VÀ PHÁT TRIỂN CỦA MÔ SẸO MĂNG TÂY XANH (Asparagus officinalis L.) CÁN BỘ HƯỚNG DẪN NGUYỄN THỊ LIÊN SINH VIÊN THỰC HIỆN NGUYỄN HOÀNG KHUYÊN MSSV: 3102822 LỚP: CNSH K36 Cần Thơ, tháng 05/2014 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƢỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ VIỆN NGHIÊN CỨU VÀ PHÁT TRIỂN CÔNG NGHỆ SINH HỌC LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC NGÀNH CÔNG NGHỆ SINH HỌC KHẢO SÁT ẢNH HƢỞNG CỦA CHẤT ĐIỀU HÕA SINH TRƢỞNG VÀ NƢỚC DỪA LÊN SỰ SINH TRƢỞNG VÀ PHÁT TRIỂN CỦA MĂNG TÂY XANH (Asparagus officinalis L.) CÁN BỘ HƯỚNG DẪN NGUYỄN THỊ LIÊN SINH VIÊN THỰC HIỆN NGUYỄN HOÀNG KHUYÊN MSSV: 3102822 LỚP: CNSH K36 Cần Thơ, tháng 05/2014 PHẦN KÝ DUYỆT CÁN BỘ HƢỚNG DẪN SINH VIÊN THỰC HIỆN Nguyễn Thị Liên Nguyễn Hoàng Khuyên DUYỆT CỦA HỘI ĐỒNG BẢO VỆ LUẬN VĂN . . . . . . . Cần Thơ, ngày tháng năm 2014 CHỦ TỊCH HỘI ĐỒNG LỜI CẢM TẠ Để hoàn thành luận văn tốt nghiệp Đại học, cố gắng thân, nhận hướng dẫn, ủng hộ giúp đỡ nhiều người. Tôi xin chân thành cảm ơn Ban Giám Hiệu trường Đại học Cần Thơ, Ban lãnh đạo Viện Nghiên cứu Phát triển Công nghệ Sinh học-Trường Đại học Cần Thơ tạo điều kiện thuận lợi cho học tập, nghiên cứu thực đề tài. Xin chân thành cảm ơn thầy cô trường Đại học Cần Thơ nhiệt tình giảng dạy truyền đạt kiến thức chuyên môn cho suốt trình học tập trường. Xin gửi lời cám ơn đến thầy cô, cán Viện, đặc biệt cô Nguyễn Thị Liên hướng dẫn, quan tâm tạo điều kiện cho suốt trình thực đề tài. Xin cảm ơn cha mẹ, anh chị bạn khuyến khích giúp đỡ suốt trình học tập. Tôi xin kính chúc quý thầy cô, anh chị bạn sinh viên dồi sức khỏe công tác tốt. Cần Thơ, ngày tháng năm 2014 Nguyễn Hoàng Khuyên Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 36 Trường ĐHCT TÓM LƢỢC Đề tài “Khảo sát ảnh hưởng chất điều hòa sinh trưởng nước dừa lên sinh trường phát triển mô sẹo măng tây xanh (Asparagus officinalis L.)” tiến hành nhằm xác định môi trường thích hợp cho sinh trưởng phát triển mô sẹo măng xanh góp phần làm sở cho công tác nhân giống cải thiện giống. Các mô sẹo cấy vào môi trường MS có bổ sung chất điều hòa sinh trưởng (BA 0-2 mg/l kết hợp NAA 0-1 mg/l), môi trường có bổ sung nước dừa (0-200 ml/l) môi trường MS có bổ sung chất điều hòa sinh trưởng (BA 0,5 mg/l kết hợp IBA 0-0,3 mg/l). Kết thí nghiệm cho thấy thời điểm 30 ngày sau cấy môi trường MS có bổ sung BA 0,5mg/l NAA 0,5 mg/l chọn để nhân cụm mô sẹo măng tây xanh với đường kính gia tăng tương đối mô sẹo 200,67%. Mô sẹo phát triển tốt môi trường MS có bổ sung nước dừa 200ml/l. Tuy nhiên, nghiệm thức cho hiệu kinh tế nghiệm thức có bổ sung nước dừa 150 ml/l cho đường kính gia tăng tương đối mô sẹo 162%. Ở thời điểm 60 ngày sau cấy, môi trường MS có bổ sung BA 0,5 mg/l IBA 0,1 mg/l cho số chồi nhiều đạt 33,67 chồi/cụm với chiều dài 13,52 mm/chồi. Từ khóa: Chất điều hòa sinh trưởng, mô sẹo măng tây xanh , nước dừa, phát triển, tái sinh chồi. Chuyên ngành Công nghệ Sinh học Viện NC & PT Công nghệ Sinh học i Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 36 Trường ĐHCT MỤC LỤC Trang PHẦN KÝ DUYỆT LỜI CẢM TẠ . TÓM LƢỢC i MỤC LỤC ii DANH SÁCH BẢNG .v DANH SÁCH HÌNH .vi TỪ VIẾT TẮT vii CHƢƠNG 1. GIỚI THIỆU 1.1. Đặt vấn đề 1.2. Mục tiêu đề tài .1 CHƢƠNG 2. LƢỢC KHẢO TÀI LIỆU 2. 1. Nguồn gốc đặc tính thực vật măng tây 2.1. 1. Nguồn gốc măng tây xanh 2.1. 2. Đặc tính thực vật măng tây xanh 2. 2. Phân loại 2. 3. Giá trị dinh dƣỡng giá trị dƣợc liệu 2.3.1. Giá trị dinh dưỡng . 2.3.2. Giá trị dược liệu 2. 4. Phƣơng pháp nhân giống măng tây truyền thống 2. 5. Phƣơng pháp nuôi cấy mô 2.5.1. Đôi nét nuôi cấy mô .6 2.5.2. Thành phần môi trường nuôi cấy 2. 6. Sơ lƣợc mô sẹo . 13 Chuyên ngành Công nghệ Sinh học Viện NC & PT Công nghệ Sinh học ii Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 36 Trường ĐHCT 2. 7. Các nghiên cứu liên quan 14 CHƢƠNG 3. PHƢƠNG TIỆN VÀ PHƢƠNG PHÁP 16 3. 1. Phƣơng tiện 16 3.1. 1. Thời gian địa điểm .16 3.1. 2. Dụng cụ, thiết bị 16 3.1. 3. Nguyên vật liệu thí nghiệm .16 3.1. 4. Hóa chất 16 3.1. 5. Điều kiện thí nghiệm . 17 3. 2. Phƣơng pháp 17 3.3. Bố trí thí nghiệm 17 3.3.1. Thí nghiệm 1: Hiệu kết hợp BA-NAA lên sinh trưởng mô sẹo măng tây xanh 17 3.3.2. Thí nghiệm 2: Hiệu kết hợp BA-IBA lên tái sinh chồi từ mô sẹo măng tây .18 3.3.3. Thí nghiệm 3: Hiệu nước dừa lên sinh trưởng mô sẹo măng tây xanh 19 3.4. Xử lý số liệu .20 CHƢƠNG 4. KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 21 4.1. Thí nghiệm 1: Hiệu kết hợp BA-NAA lên sinh trƣởng mô sẹo măng tây xanh . 21 4.2. Thí nghiệm 2: Hiệu kết hợp BA-IBA lên tái sinh chồi từ mô sẹo măng tây .24 4.3. Thí nghiệm 3: Hiệu nƣớc dừa lên sinh trƣởng mô sẹo măng tây xanh . 27 CHƢƠNG 5. KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ . 30 TÀI LIỆU THAM KHẢO . 31 Chuyên ngành Công nghệ Sinh học Viện NC & PT Công nghệ Sinh học iii Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 36 Trường ĐHCT PHỤ LỤC . Phụ lục 1: Thành phần môi trƣờng nghiên cứu Phụ lục 2: Kết thí nghiệm Phụ lục 3: Kết thống kê Chuyên ngành Công nghệ Sinh học Viện NC & PT Công nghệ Sinh học iv Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 36 Trường ĐHCT DANH SÁCH BẢNG Trang Bảng 1: Giá trị dinh dưỡng chồi măng tây tươi (100 g) .4 Bảng 2: Nhu cầu chất điều hòa sinh trưởng nuôi cấy 11 Bảng 3: Một số chất dinh dưỡng có nước dừa (100 g) 13 Bảng 4: Tỉ lệ nồng độ BA-NAA bổ sung môi trường .18 Bảng 5: Tỉ lệ nồng độ BA-IBA môi trường . 19 Bảng 6: Hàm lượng nước dừa bổ sung vào môi trường 20 Bảng 7: Hiệu kết hợp tỉ lệ BA-NAA lên đường kính gia tăng tương .22 đối mô sẹo măng tây xanh 22 Bảng 8: Kết khảo sát hiệu kết hợp BA- IBA lên tái sinh chồi thời điểm 60 ngày sau cấy . 25 Bảng 9: Hiệu nước dừa lên đường kính gia tăng tương đối (%) mô sẹo măng tây xanh 28 Chuyên ngành Công nghệ Sinh học Viện NC & PT Công nghệ Sinh học v Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 36 Trường ĐHCT DANH SÁCH HÌNH Trang Hình 1. Măng tây xanh Hình 2. Mô sẹo măng tây 16 Hình 3. Màu sắc mô sẹo sau 30 ngày nuôi cấy . 24 Hình 4. Chồi măng tây môi trường có BA-IBA . 26 Chuyên ngành Công nghệ Sinh học Viện NC & PT Công nghệ Sinh học vi Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 36 Trường ĐHCT cấy lâu nên chất dinh dưỡng không đảm bảo đủ cho tất chồi phát triển. Do thấy chọn hai yếu tố số chồi chiều dài. Nếu quan tâm đến chiều dài chồi nghiệm thức B1 (MS+0,5 mg/l BA) ý. Chiều dài chồi nghiệm thức hẳn nghiệm thức khác nên thời gian để kéo dài thân, tạo hoàn chỉnh rút ngắn. Nếu quan tâm đến số lượng chồi nghiệm thức B2 MS+0,5 mg/l BA+0,1mg/l IBA) ưu tiên. Tuy chiều dài chồi nghiệm thức thấp nhất, tốn nhiều thời gian kéo dài thân tạo hoàn chỉnh số thu cao nghiệm thức lại. Nghiệm thức B2 chọn để tái sinh chồi từ mô sẹo măng tây xanh. 4.3. Thí nghiệm 3: Hiệu nƣớc dừa lên sinh trƣởng mô sẹo măng tây xanh Nước dừa sử dụng nuôi cấy mô Van Overbeek vào năm 1941. Trong nước dừa có chứa nhiều amino acid, acid hữu cơ, vitamin, đường. Ngoài nước dừa có chứa hormone thực vật auxin, gibberellin, cytokinin (Dis and Van, 1981). Do đó, việc bổ sung nước dừa vào môi trường nuôi cấy giúp cho tế bào thực vật phân chia phát triển nhanh. Mặc dù vậy, việc bổ sung thay cho thành phần có môi trường nuôi cấy (Zoltan et al., 2011). Kết ghi nhận được, sau 10 ngày nuôi cấy môi trường MS có bổ sung nước dừa 0-200ml/l, mô sẹo bắt đầu có gia tăng kích thước nghiệm thức. Các tiêu theo dõi đến 30 ngày sau cấy. Kết trình bày Bảng cho thấy sau cấy 10 ngày mô sẹo có tăng trưởng môi trường có bổ sung nước dừa. Ở nghiệm thức MSD3 (MS+200 ml/l nước dừa) cho đường kính gia tăng tương đối mô sẹo măng tây xanh lớn nhất, đạt 47,33%. Nghiệm thức đối ĐC (MS) cho đường kính gia tăng tương đối mô sẹo măng tây xanh nhỏ nhất, đạt 42%. Tuy nhiên, nghiệm thức có khác biệt ý nghĩa mặt thống kê mức 5%. Trong khoảng thời gian này, cụm mô sẹo chuyển sang môi trường cần thời gian thích nghi nên phát triển chậm Ở thời điểm sau cấy 20 ngày, đường kính gia tăng tương đối mô sẹo măng tây xanh nghiệm thức bắt đầu có khác biệt so với nghiệm thức đối chứng. Nghiệm thức MSD3 (MS+ 200 ml/l nước dừa) cho kết đường kính gia tăng tương Chuyên ngành Công nghệ Sinh học Viện NC & PT Công nghệ Sinh học 27 Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 36 Trường ĐHCT đối lớn nghiệm thức lại, đạt 113,33%. Tuy nhiên, nghiệm thức MSD1 (MS+100 ml/l nước dừa), MSD2 (MS+150 ml/l nước dừa) MSD3 (MS+200 ml/l nước dừa) có khác biệt ý nghĩa thống kê mức 5%. Bảng 9: Hiệu nƣớc dừa lên đƣờng kính gia tăng tƣơng đối (%) mô sẹo măng tây xanh Đƣờng kính gia tăng tƣơng đối (%) Màu sắc Sự phát Cấu trúc sinh chồi Nghiệm thức 10 NSKC 20 NSKC 30 NSKC Xanh nhạt ĐC 42 a c 68 110 c Không có Mô sẹo xốp MSD1 44,67 a 94,67 b 134b 45,33 a 107,33 a 162a MSD3 47,33 a 113,33 a 162,8a P- value 0,426 0,000 0,000 CV (%) 8,57 5,7 4,54 MSD2 Xanh đậm Mô sẹo xốp Xanh đậm Mô sẹo xốp Xanh đậm Mô sẹo xốp Không có Không có Không có Trên cột, giá trị có kí tự khác biệt ý nghĩa mặt thống kê mức 5% Ghi chú: ĐC= nghiệm thức đối chứng; MSD1=môi trường MS bổ sung nước dừa 100 ml/l; MSD2=môi trường MS bổ sung nước dừa 150 ml/l; MSD3=môi trường MS bổ sung nước dừa 200 ml/l. Theo Jean (2009), nước dừa có chứa chất điều hòa sinh trưởng (auxin, cytokinin, gibberellin,…), đường, khoáng, vitamnin, acid amin. Theo Nguyễn Đức Lượng Lâm Thị Thủy Tiên (2002) chất có hoạt tính nước dừa myoinositol acid amin. Theo Vũ Văn Vụ et al. (2006) myo-inositol tham gia vào trình phân chia tế bào, tham gia vào dinh dưỡng khoáng, vận chuyển đường trao đổi cacbonhydrat. Ngoài ra, nước dừa có diện loại cytokinin DPU (Nguyễn Bảo Toàn, 2010). Do đó, bổ sung nước dừa vào Chuyên ngành Công nghệ Sinh học Viện NC & PT Công nghệ Sinh học 28 Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 36 Trường ĐHCT môi trường nuôi cấy có tác dụng bổ sung thêm nguồn dinh dưỡng chất điều hòa sinh trưởng vào môi trường bản. Sự bổ sung làm cho mô sẹo phát triển tốt hơn. Ở thời điểm sau cấy 30 ngày, đường kính gia tăng tương đối mô sẹo măng tây xanh nghiệm thức có khác biệt. Nghiệm thức MSD3 (MS+200 ml/l nước dừa) cho đường kính gia tăng tương đối mô sẹo lớn 162,8%, nghiệm thức MSD2 (MS+100 ml/l nước dừa) với giá trị trung bình 162% . Kết hai nghiệm thức MSD2 (MS+150 ml/l nước dừa) MSD3 (MS+200 ml/l nước dừa) khác biệt ý nghĩa mức 5%. Nghiệm thức MSD2 (MS+150 ml/l nước dừa) chọn để nhân cụm mô sẹo măng tây xanh vừa tốn chi phí vừa cho hiệu cao. Kết thí nghiệm cho thấy hàm lượng nước dừa thêm vào môi trường cho hiệu tốt từ 15-20% phù hợp với giá trị khuyến cáo Vũ Văn Vụ (1999). Qua quan sát thời điểm 30 NSKC màu sắc mô sẹo đậm so với ban đầu (trừ nghiệm thức đối chứng) mô sẹo có cấu trúc xốp. Ở nghiệm thức mô sẹo chưa có phát sinh chồi. Chuyên ngành Công nghệ Sinh học Viện NC & PT Công nghệ Sinh học 29 Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 36 Trường ĐHCT CHƢƠNG KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 5.1. Kết luận Trong môi trường MS có bổ sung chất điều hòa sinh trưởng BA 0-2 mg/l NAA 0-1mg/l môi trường có bổ sung BA 0,5mg/l NAA 0,5 mg/l chọn để nhân cụm mô sẹo măng tây xanh với đường kính gia tăng tương đối sau 30 ngày cấy 200,67%. Trong môi trường MS có bổ sung nước dừa môi trường MS có bổ sung 150ml/l nước dừa chọn để nhân cụm mô sẹo măng tây xanh với đường kính gia tăng tương đối sau 30 ngày cấy 162%. Môi trường MS có bổ sung BA 0,5 mg/l IBA 0,1 mg/l thích hợp để tái sinh chồi từ mô sẹo măng tây xanh với số chồi trung bình 33,67 chồi/cụm chiều dài chồi 13,52 mm/chồi. 5.2. Kiến nghị Từ kết đạt đề tài, cần đẩy mạnh phát huy hiệu nhân chồi mô sẹo măng tây xanh cách:  Khảo sát hiệu số thành phần hữu không xác định khác lên phát triển mô sẹo măng tây xanh: dịch chiết khoai tây, dịch chuối ép, dịch chiết nấm men,…  Khảo sát hiệu số môi trường tạo măng tây xanh hoàn chỉnh Chuyên ngành Công nghệ Sinh học Viện NC & PT Công nghệ Sinh học 30 Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 36 Trường ĐHCT TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu tiếng Việt Bùi Trang Việt. 2002. Sinh lý thực vật đại cương, phần 1- Dinh dưỡng. Nxb. Đại học Quốc gia TPHCM, trang 114. Cao Phi Bằng Nguyễn Như Khanh. 2008. Sinh lý học thực vật. Nxb. Giáo dục. Đặng Minh Quân. 2009. Giáo trình phân loại thực vật, tập 2- Thực vật bậc cao. Nxb. Đại học Cần Thơ. Hoàng Đức Cự. 2006. Sinh học thực vật. Nxb. Đại học Quốc gia Hà Nội. Hoàng Thị Thu. 2007. Khảo sát khả ứng dụng kỹ thuật nuôi cấy mô sẹo tạo dịch huyền phù Droseara burmanni thu nhận hợp chất anthraquinone, luận văn tốt nghiệp Đại học, Trường Đại học Nông lâm Thành Phố Hồ Chí Minh. Lâm Ngọc Phương. 2010. Giáo trình nhân giống vô tính. Tủ sách Đại học Cần Thơ. Lâm Ngọc Phương Lê Minh Lý. 2012. Giáo trình nhân giống vô tính thực vật. Nxb. Đại học Cần Thơ, trang 97-112. Lâm Ngọc Tú. 2010. Đánh giá hiệu số môi trường lên nhân cụm mô sẹo dừa sáp, luận văn tốt nghiệp Đại học, Trường Đại học Cần Thơ. Lê Trần Bình. 1997. Công nghệ sinh học thực vật cải tiến giống trồng. Nxb. Nông Nghiệp Hà Nội. Nguyễn Bảo Toàn. 2010. Giáo trình nuôi cấy mô tế bào thực vật. Nxb. Đại học Cần Thơ. Nguyễn Đức Lượng. 2001. Công nghệ sinh học. Nxb. Đại học Quốc gia thành phố Hồ Chí Minh. Nguyễn Đức Lượng Lâm Thị Thủy Tiên. 2002. Công nghệ tế bào. Nxb. Đại học Quốc gia thành phố Hồ Chí Minh Nguyễn Đức Thành. 2000. Nuôi cấy mô tế bào thực vật-nghiên cứu ứng dụng. Nxb. Nông Nghiệp. Chuyên ngành Công nghệ Sinh học Viện NC & PT Công nghệ Sinh học 31 Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 36 Trường ĐHCT Nguyễn Minh Chơn. 2005. Giáo trình chất điều hòa sinh trưởng thực vật. Tủ sách Đại học Cần Thơ. Nguyễn Văn Đính Nguyễn Như Khanh. 2011. Giáo trình chất điều hòa sinh trưởng thực vật. Nxb. Giáo dục Hà Nội. Phạm Hoàng Hộ. 2006. Cây cỏ Việt Nam. Nxb. Trẻ. Phạm Hoàng Nam. 2012. Khảo sát ảnh hưởng số chất điều hòa sinh trưởng lên nhân chồi măng tây xanh (Asparagus officinalis), luận văn tốt nghiệp đại học ngành Công nghệ Sinh học, trường Đại học Cần Thơ. Võ Văn Chi. 2003. Từ điển thực vật thông dụng. Nxb. Khoa học Kỹ thuật. Vũ Văn Vụ. 1999. Sinh lý thực vật ứng dụng. Nxb. Giáo Dục, trang 7-20. Vũ Văn Vụ, Nguyễn Mộng Hùng Lê Hồng Điệp. 2006. Công nghệ sinh học tế bào, tập 2. Nxb. Giáo dục. Tài liệu tiếng Anh Caborali, Caboni, Galli, Rosi, Spada Marziani Longo, 1993. Development of male and female flower of Asparagus officinalis. Search for point of transition from hermaphrodite to unisexual developmental pathway. Sex plant Reprod: 239-249. Dipak and Sumitra. 1985. Propagation of Asparagus racemous through tissue culture. Plant cell culture organ cultrue (1985) 89-95. Dis and Van Staden. 1981. Auxin and gibberellin-like substances in coconut milk and malt extract. Plant Cell, Tissue and Organ Culture Volume 1, Issue 1, pp 239246. Hidayat Ullah, Iltaf Ullah, Sultan Akbar Jadoon and Hamid Rashid. 2007. Tissue culture techniques for callus induction in rice. Sarhad J. Agric. Vol. 23, No. 1, 80-86. Krishna Kumar Pant and Sanu Devi Joshi. 2009. In vitro Multiplication of Wild Nepalese Asparagus racemosus Through Shoots and Shoot Induced Callus Cultures, Botany Research International (2): 88-93. Chuyên ngành Công nghệ Sinh học Viện NC & PT Công nghệ Sinh học 32 Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 36 Trường ĐHCT Negi, Singh and Bish .2010. Chemical constituents of Asparagus. Pharmacogn Rev 4(8)215-220. Rhitu Rai. 2007. Genetics and plant breeding and seed science and technology. National Research Centre on Plant Biotechnology Lal Bhadur Shastri Building Pusa Campus, New Delhi-110012. Rafail Toma Khitam Rsheed. 2012. In vitro Propagation throught Seed Culture and Regeneration of Asparagus DensiforusL. Throught Callus Cultures Derived from Hypocotyls. Int.J. Pure Appl. Sci. Technol., (2), pp. 94- 102. Fazelzadeh Dezfuli, Habibi Khanyani, Karimaneh. 2008. Optimization of Callus Induction and Seedling Regeneration in Asparagus (Asparagus officinalis ). Bull. Env. Pharmacol. Life Sci. Volume 2. pp 05- 08. Tarek Abd Elaziz Wahba Shalaby. 2004. Genetical and nutritional influences on the spear quality of white asparagus (Asparagus officinalis L.). Walker and Sato. 1981. Morphogenesis in callus tissue of Medicago sativa: The role of ammonium ion in somatic embryogenesis. Plant Cell, Tissue and Organ Culture, Volume 1, Issue 1, pp 109-121. Zoltán Molnár, Emese Virág, Vince Ördög. 2011. Natural substances in tissue culture media of higher plants. Acta Biologica Szegediensis, volume 55(1):123-127. Trang web http://www.asparagus.com.au/index.php/about_asparagus/historyofasparag/ (4/8/2013) http://clip.vn/watch/Lam-quen-voi-rau-mang-tay,2_sM (4/8/2013) http://www.rauhoaquavn.vn/default.aspx?ID=45&LangID=1&tabID=5&NewsID=927 (4/8/2013). http://www.botanyvn.com/cnt.asp?param=edir&q=Asparagus officinalis&t=sciname (4/8/2013) Chuyên ngành Công nghệ Sinh học Viện NC & PT Công nghệ Sinh học 33 Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 36 Trường ĐHCT http://www.tvvn.org/forum/showthread.php/11845-Gi%C3%A1-tr%E1%BB%8Bdinh-d%C6%B0%E1%BB%A1ng-v%C3%A0-tr%E1%BB%8Bli%E1%BB%87u-c%E1%BB%A7a-M%C4%82NG-T%C3%82Y (4/8/2013) http://rausach.com.vn/forum_posts.asp?TID=3120&PID=13725&title=cch-m-ging-cymng-ty#13725 (4/8/2013) http://www.wattpad.com/809284-nuoi-cay-mo?p=4 (4/8/2013) http://www.nutrition-and-you.com/coconut-water.html (4/8/2013) Chuyên ngành Công nghệ Sinh học Viện NC & PT Công nghệ Sinh học 34 PHỤ LỤC Phụ lục 1: Thành phần môi trƣờng nghiên cứu Bảng 10: Thành phần khoáng môi trƣờng MS (Murashige & Skoog, 1962) Thành phần Đa lƣợng Vi lƣợng Hóa chất Hàm lƣợng (mg/l) NH4NO3 1650 KNO3 1900 KH2PO4 170 MgSO4.7H2O 370 CaCl2.2H2O 440 MnSO4.4 H2O 23,3 H3BO3 6,2 ZnSO4.7H2O 8,6 KI 0,83 Na2MoO4.2H2O 0,25 CuSO4.5H2O 0,025 CoCl2.6H2O 0,025 Na2EDTA 37,3 FeSO4.7H2O 27,8 Bảng 11: Thành phần hàm lƣợng vitamin sử dụng nuôi cấy Hóa chất Pyridoxin HCl (B6) Thiamine Nicotinic acid Myo-inositol Hàm lƣợng (mg/l) 0,5 0,5 0,5 100 Phụ lục 2: Kết thí nghiệm Bảng 12 : Đƣờng kính gia tăng tƣơng đối mô sẹo măng tây xanh sau cấy 30 ngày (%) NT ĐC M1 M2 M3 M4 M5 M6 M7 M8 Lần lặp lại 3 3 3 3 10 NSKC 42 46 48 100 96 104 42 50 48 58.33 60 55 100 112 104 58 58 60 44 46 48 70 76 68 62 72 42 Thời gian 20 NSKC 60 70 66 126 158 136 108 130 116 98.33 78.33 86.67 178 150 152 110 100 80 78 88 90 115 150.4 124 90 94 76 30 NSKC 100 120 110 204 194 204 162 162 152 131.67 95 138.33 192 216 196 144 140 138 124 132 114 196 175.4 228.2 154 178 162 Ghi chú: ĐC=nghiệm thức đối chứng; M1=môi trường MS bổ sung NAA 0,5 mg/l BA 0,5 mg/l; M2=môi trường MS bổ sung NAA mg/l BA 0,5 mg/l; M3=môi trường MS bổ sung NAA 0,5 mg/l BA mg/l; M4=môi trường MS bổ sung NAA mg/l BA mg/l; M5=môi trường MS bổ sung NAA 0,5 mg/l BA 1,5 mg/l; M6=môi trường MS bổ sung NAA mg/l BA 1,5 mg/l; M7=môi trường MS bổ sung NAA 0,5 mg/l BA mg/l; M8=môi trường MS bổ sung NAA mg/l BA mg/l. Bảng 13: Đƣờng kính gia tăng tƣơng đối mô sẹo măng tây xanh sau cấy 30 ngày môi trƣờng bổ sung nƣớc dừa tƣơi (%) NT Lần lặp lại 3 3 ĐC MSD1 MSD2 MSD3 10 NSKC 40 44 40 46 48 40 44 40 42 50 46 44 Thời gian 20 NSKC 60 70 74 90 100 94 114 102 106 114 116 120 30 NSKC 100 120 110 140 130 132 162 160 164 168 164 156.4 Ghi chú: ĐC= nghiệm thức đối chứng; MSD1=môi trường MS bổ sung nước dừa 100 ml/l; MSD2=môi trường MS bổ sung nước dừa 150 ml/l; MSD3=môi trường MS bổ sung nước dừa 200 ml/l. Bảng 14: Chiều dài chồi số chồi sau 60 ngày cấy NT ĐC B1 B2 B3 B4 Lần lặp lại Số chồi Chiều dài chồi (mm) 3 3 0 19 23 25 32 36 33 17 20 19 29 32 27 0 21.87 19 18.3 14.3 13 13.25 12.57 15.6 13.9 17.3 15.93 14.8 Ghi chú: ĐC=nghiệm thức đối chứng; B1=môi trường MS bổ sung BA 0,5mg/l ; B2=môi trường MS bổ sung BA 0,5mg/l IBA 0,1mg/l; B3=môi trường MS bổ sung BA 0,5mg/l IBA 0,2mg/l; B4=môi trường MS bổ sung BA 0,5mg/l IBA 0,3mg/l. Phụ lục 3: Kết thống kê 1. Kết thống kê thí nghiệm a) Kết phân tích thống kê đƣờng kính gia tăng tƣơng đối mô sẹo sau 10 ngày cấy One-way ANOVA: 10 NSKC versus NT Source NT Error Total DF 18 26 S = 6.169 SS 12316.9 685.0 13001.8 MS 1539.6 38.1 R-Sq = 94.73% F 40.46 P 0.000 R-Sq(adj) = 92.39% Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev Level N Mean StDev -+---------+---------+---------+-------ĐC 45.33 3.06 (---*--) M1 100.00 4.00 (---*---) M2 46.67 4.16 (--*---) M3 57.78 2.55 (---*---) M4 105.33 6.11 (---*--) M5 58.67 1.15 (--*---) M6 46.00 2.00 (---*---) M7 71.33 4.16 (---*--) M8 58.67 15.28 (--*---) -+---------+---------+---------+-------40 60 80 100 Pooled StDev = 6.17 Grouping Information Using Fisher Method NT M4 M1 M7 M8 M5 M3 M2 M6 ĐC N 3 3 3 3 Mean 105.333 100.000 71.333 58.667 58.667 57.778 46.667 46.000 45.333 Grouping A A B C C C D D D Means that not share a letter are significantly different. b) Kết phân tích thống kê đƣờng kính gia tăng tƣơng đối mô sẹo sau 20 ngày cấy One-way ANOVA: 20 NSKC versus NT Source NT Error Total DF 18 26 S = 12.76 SS 22888 2930 25817 MS 2861 163 R-Sq = 88.65% F 17.58 P 0.000 R-Sq(adj) = 83.61% Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev Level N Mean StDev ------+---------+---------+---------+--ĐC 65.33 5.03 (----*---) M1 140.00 16.37 (---*---) M2 118.00 11.14 (----*---) M3 M4 M5 M6 M7 M8 3 3 3 87.78 160.00 96.67 85.33 129.80 86.67 10.05 15.62 15.28 6.43 18.40 9.45 (---*----) (----*---) (----*---) (---*----) (---*----) (----*---) ------+---------+---------+---------+--70 105 140 175 Pooled StDev = 12.76 Grouping Information Using Fisher Method NT N Mean Grouping M4 160.00 A M1 140.00 A B M7 129.80 B C M2 118.00 C D M5 96.67 D E M3 87.78 E M8 86.67 E F M6 85.33 E F ĐC 65.33 F Means that not share a letter are significantly different. c) Kết phân tích thống kê đƣờng kính gia tăng tƣơng đối mô sẹo sau 30 ngày cấy One-way ANOVA: 30 NSKC versus NT Source NT Error Total DF 18 26 SS 31866 3649 35516 MS 3983 203 F 19.65 P 0.000 S = 14.24 R-Sq = 89.72% R-Sq(adj) = 85.16% Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev Level N Mean StDev ----+---------+---------+---------+----ĐC 110.00 10.00 (----*----) M1 200.67 5.77 (----*----) M2 158.67 5.77 (----*----) M3 121.67 23.33 (----*----) M4 201.33 12.86 (----*---) M5 140.67 3.06 (----*----) M6 123.33 9.02 (----*----) M7 199.87 26.61 (----*----) M8 164.67 12.22 (----*----) ----+---------+---------+---------+----105 140 175 210 Pooled StDev = 14.24 Grouping Information Using Fisher Method NT N Mean Grouping M4 201.33 A M1 200.67 A M7 199.87 A M8 164.67 B M2 158.67 B M5 140.67 B C M6 123.33 C D M3 121.67 C D ĐC 110.00 D Means that not share a letter are significantly different. 2. Kết thống kê thí nghiệm a) Kết phân tích thống kê đƣờng kính gia tăng tƣơng đối mô sẹo sau 10 ngày cấy One-way ANOVA: 10 NSKC versus NT Source NT Error Total DF 11 S = 3.742 SS 43.7 112.0 155.7 MS 14.6 14.0 R-Sq = 28.05% F 1.04 P 0.426 R-Sq(adj) = 1.07% Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev Level N Mean StDev -------+---------+---------+---------+-ĐC 42.000 2.000 (-----------*-----------) MSD1 44.667 4.163 (------------*-----------) MSD2 45.333 4.163 (-----------*------------) MSD3 47.333 4.163 (-----------*------------) -------+---------+---------+---------+-40.0 44.0 48.0 52.0 Pooled StDev = 3.742 Grouping Information Using Fisher Method NT N Mean Grouping MSD3 47.333 A MSD2 45.333 A MSD1 44.667 A ĐC 42.000 A Means that not share a letter are significantly different. b) Kết phân tích thống kê đƣờng kính gia tăng tƣơng đối mô sẹo sau 20 ngày cấy One-way ANOVA: 20 NSKC versus Nghiem thuc Source Nghiem thuc Error Total S = 5.568 DF 11 SS 4018.7 248.0 4266.7 R-Sq = 94.19% MS 1339.6 31.0 F 43.21 P 0.000 R-Sq(adj) = 92.01% Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev Level N Mean StDev --+---------+---------+---------+------ĐC 68.00 7.21 (----*---) MSD1 94.67 5.03 (---*----) MSD2 107.33 6.11 (----*----) MSD3 116.67 3.06 (----*----) --+---------+---------+---------+------64 96 112 Pooled StDev = 5.57 Grouping Information Using Fisher Method Nghiem thuc N Mean Grouping MSD3 116.667 A MSD2 107.333 A MSD1 94.667 B ĐC 68.000 C Means that not share a letter are significantly different. c) Kết phân tích thống kê đƣờng kính gia tăng tƣơng đối mô sẹo sau 30 ngày cấy One-way ANOVA: 30 NSKC versus Nghiem thuc Source NT Error Total DF 11 S = 6.456 SS 5761.4 333.4 6094.9 MS 1920.5 41.7 R-Sq = 94.53% F 46.08 P 0.000 R-Sq(adj) = 92.48% Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev Level N Mean StDev ---------+---------+---------+---------+ ĐC 110.00 10.00 (---*---) MSD1 134.00 5.29 (---*---) MSD2 162.00 2.00 (---*---) MSD3 162.80 5.89 (---*----) ---------+---------+---------+---------+ 120 140 160 180 Pooled StDev = 6.46 Grouping Information Using Fisher Method NT MSD3 MSD2 MSD1 ĐC Means N Mean 162.800 162.000 134.000 110.000 that not Grouping A A B C share a letter are significantly different. 3. Kết thống kê thí nghiệm a) Kết thống kê số chồi sau 60 ngày cấy One-way ANOVA: So choi versus NT Source NT Error Total DF 10 14 S = 2.113 SS 2033.73 44.67 2078.40 MS 508.43 4.47 R-Sq = 97.85% F 113.83 P 0.000 R-Sq(adj) = 96.99% Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev Level N Mean StDev ---+---------+---------+---------+-----B1 22.333 3.055 (-*--) B2 33.667 2.082 (--*-) B3 18.667 1.528 (--*-) B4 29.333 2.517 (-*--) ĐC 0.000 0.000 (--*--) ---+---------+---------+---------+-----0 10 20 30 Pooled StDev = 2.113 Grouping Information Using Fisher Method NT B2 B4 B1 B3 ĐC N 3 3 Mean 33.667 29.333 22.333 18.667 0.000 Grouping A B C C D Means that not share a letter are significantly different. b) Kết thống kê chiều dài chồi sau 60 ngày cấy One-way ANOVA: Chieu dai choi (mm) versus NT Source NT Error Total DF 10 14 S = 1.259 SS 671.94 15.86 687.80 MS 167.99 1.59 R-Sq = 97.69% F 105.94 P 0.000 R-Sq(adj) = 96.77% Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev Level N Mean StDev ---+---------+---------+---------+-----B1 19.723 1.892 (--*--) B2 13.517 0.690 (--*-) B3 14.023 1.519 (-*--) B4 16.010 1.252 (--*-) ĐC 0.000 0.000 (--*--) ---+---------+---------+---------+-----0.0 6.0 12.0 18.0 Pooled StDev = 1.259 Grouping Information Using Fisher Method NT B1 B4 B3 B2 ĐC N 3 3 Mean 19.723 16.010 14.023 13.517 0.000 Grouping A B B C C D Means that not share a letter are significantly different. [...]... số l ợng l n cây con sạch bệnh trong thời gian ngắn 1.2 Mục tiêu đề tài Đề tài Khảo sát hiệu quả của chất điều hòa sinh trưởng và nước dừa l n sự sinh trưởng và phát triển của mô sẹo măng tây xanh (Asparagus officinalis L. ) nhằm tìm ra môi trường thích hợp để nhân mô sẹo măng tây xanh Từ đó l m nguyên liệu cho công tác tạo giống măng tây xanh Chuyên ngành Công nghệ Sinh học Viện NC & PT Công nghệ Sinh. .. tăng tương đối trung bình Dựa vào kết quả trên ta thấy sự phát triển của mô sẹo măng tây xanh chịu ảnh hưởng bởi tỉ l và hàm l ợng giữa auxin và cytokinin nhưng sự phát triển này không tỉ l thuận với tỉ l và hàm l ợng hai loại chất điều hòa sinh trưởng Như vậy, môi trường MS1 (MS+0,5 mg /l BA+0,5 mg /l NAA) được chọn để nhân cụm mô sẹo măng tây xanh vì vừa tiết kiệm hóa chất, giảm chi phí vừa cho hiệu... nƣớc dừa tƣơi bổ sung vào môi trƣờng Môi trƣờng Nghiệm thức ĐC MS MSD1 MS + 100 ml /l nước dừa MSD2 MS + 150 ml /l nước dừa MSD3 MS + 200 ml /l nước dừa Các chỉ tiêu theo dõi:  Kích thước của mô sẹo: Đường kính gia tăng tương đối ( %)  Màu sắc và cấu trúc mô sẹo (quan sát)  Sự phát sinh chồi (nếu c )  Thời gian l y chỉ tiêu 10, 20 và 30 ngày sau khi cấy (NSKC) 3.4 Xử l số liệu Số liệu được xử l bằng... petri (35 ml/đĩa) và chai thủy tinh (70 ml/chai) 3.3 Bố trí thí nghiệm 3.3.1 Thí nghiệm 1: Hiệu quả của sự kết hợp BA-NAA l n sự sinh trƣởng của mô sẹo măng tây xanh Mục tiêu thí nghiệm Tìm ra môi trường có tỉ l nồng độ BA-NAA thích hợp cho sự sinh trưởng của mô sẹo măng tây xanh Phƣơng pháp tiến hành Mô sẹo được tách với kích thước khoảng 0,5×0,5 cm, cấy vào môi trường MS có bổ sung tỉ l nồng độ... đối ( %)  Màu sắc và cấu trúc mô sẹo (quan sát)  Sự phát sinh chồi (nếu c )  Thời gian l y chỉ tiêu 10, 20 và 30 ngày sau khi cấy (NSKC) 3.3.2 Thí nghiệm 2: Hiệu quả của sự kết hợp BA-IBA l n sự tái sinh chồi từ mô sẹo măng tây Mục tiêu thí nghiệm Tìm ra môi trường có tỉ l nồng độ BA-IBA thích hợp cho sự tái sinh chồi từ mô sẹo măng tây Chuyên ngành Công nghệ Sinh học Viện NC & PT Công nghệ Sinh. .. hạn chế sự ức chế của các chất này l n mẫu cấy, kích thích sự hình thành và sinh trưởng của rễ và chống oxy hóa Nồng độ than hoạt tính sử dụng khoảng 0,2%-0,3% (Vũ Văn Vụ et al., 200 6) Tuy nhiên, than hoạt tính l i l m giảm hiệu quả của chất điều hòa sinh trưởng (Nguyễn Bảo Toàn, 201 0) pH Theo Nguyễn Bảo Toàn (201 0) pH ảnh hưởng đến sự hòa tan khoáng trong môi trường và ảnh hưởng đến sự tạo gel của agar... M1=môi trường MS bổ sung NAA 0,5 mg /l và BA 0,5 mg /l; M2=môi trường MS bổ sung NAA 1 mg /l và BA 0,5 mg /l; M3=môi trường MS bổ sung NAA 0,5 mg /l và BA 1 mg /l; M4=môi trường MS bổ sung NAA 1 mg /l và BA 1 mg /l; M5=môi trường MS bổ sung NAA 0,5 mg /l và BA 1,5 mg /l; M6=môi trường MS bổ sung NAA 1 mg /l và BA 1,5 mg /l; M7=môi trường MS bổ sung NAA 0,5 mg /l và BA 2 mg /l; M8=môi trường MS bổ sung NAA 1 mg /l và. .. Sơ l ợc về mô sẹo Mô sẹo l tế bào vô tổ chức có hình dạng không xác định, được hình thành từ vết thương hay xử l chất điều hoà sinh trưởng như auxin và cytokinin Mô của nhiều loài thực vật có khả năng tạo mô sẹo Một số mô có khả năng phân chia nhanh hơn những mô khác (Nguyễn Đức L ợng, 2000; Rhitu, 200 7) Theo cấu trúc, mô sẹo được chia l m hai loại: mô sẹo xốp và mô sẹo cứng Mô sẹo xốp có các tế... 45,33 %) Các nghiệm thức M2 (MS+1 mg /l BA+0,5 mg /l NAA) và M6 (MS+1,5 mg /l BA+1mg /l NAA) cho đường kính gia tăng tương đối l n l ợt l 46,67% và 46%, khác biệt không có ý nghĩa ở mức 5% so với nghiệm thức đối chứng Các nghiệm thức cho đường kính gia tăng tương đối của mô sẹo l n nhất l M1 (MS+0,5 mg /l BA+0,5 mg /l NAA) và M4 (MS+1 mg /l BA+1 mg /l NAA) với các giá trị trung bình l n l ợt l 100% và 105,33%... (mg /l) (mg /l) ĐC 0 0 B1 0,5 0 B2 0,5 0,1 B3 0,5 0,2 B4 0,5 0,3 Chỉ tiêu theo dõi:  Số chồi và chiều dài chồi  Thời gian theo dõi: 60 ngày sau khi cấy 3.3.3 Thí nghiệm 3: Hiệu quả của nƣớc dừa tƣơi l n sự sinh trƣởng của mô sẹo măng tây xanh Mục tiêu thí nghiệm Xác định hàm l ợng nước dừa bổ sung vào môi trường nuôi cấy thích hợp cho sự sinh trưởng mô sẹo Phƣơng pháp tiến hành Chuyên ngành Công nghệ Sinh . trưởng và nước dừa l n sự sinh trường và phát triển mô sẹo măng tây xanh (Asparagus officinalis L. ) được tiến hành nhằm xác định các môi trường thích hợp cho sự sinh trưởng và phát triển của mô. CÔNG NGHỆ SINH HỌC KHẢO SÁT ẢNH HƢỞNG CỦA CHẤT ĐIỀU HÕA SINH TRƢỞNG VÀ NƢỚC DỪA L N SỰ SINH TRƢỞNG VÀ PHÁT TRIỂN CỦA MĂNG TÂY XANH (Asparagus officinalis L. ) CÁN BỘ HƯỚNG DẪN SINH VIÊN. Hiệu quả của sự kết hợp BA-IBA l n sự tái sinh chồi từ mô sẹo măng tây 18 3.3.3. Thí nghiệm 3: Hiệu quả của nước dừa l n sự sinh trưởng của mô sẹo măng tây xanh 19 3.4. Xử l số liệu 20 CHƢƠNG