Kỹ thuật xét nghiệm vi sinh lâm sàng bệnh phẩm khác CÁC MẪU MỦ VÀ CHẤT DỊCH Mục tiêu • Hướng dẫn lâm sàng hay thực lấy bệnh phẩm cho mẫu mủ chất dòch biết loại bệnh phẩm cách lấy bệnh phẩm thích hợp trường hợp làm xét nghiệm vi sinh mẫu mủ chất dòch. • Thực qui trình cách xác làm xét nghiệm mẫu mủ chất dòch biết qui trình thực vi sinh lâm sàng bao gồm khảo sát trực tiếp, nuôi cấy phân lập vi khuẩn gây bệnh diện mẫu mủ chất dòch. • Lựa chọn phương tiện thích hợp cho cấy mủ chất dòch bệnh viện nhờ biết phương tiện thích hợp để thực xét nghiệm vi sinh lâm sàng mẫu mủ chất dòch; nhờ . Chỉ đònh Tất trường hợp có mủ, chất dòch như: Mủ áp xe. Vết thương nhiễm trùng, bao gồm vết loét, cắt, lở, mổ hậu phẩu, loét nằm lâu. Các mạch lươn. Các mạch dẫn từ xoang hay hạch bạch huyết. Các dòch tiết dòch màng phổi, khớp, màng bụng. Các mẫu nạo mủ xương giải phẩu. Các loại bệnh phẩm cách lấy Mủ áp xe, dòch màng phổi, màng bụng, khớp: lấy phương pháp vô trùng làm tiểu phẩu, sau sát trùng vùng da bên chờ khô, chọc kim hút lấy mủ hay chất dòch. Cho mủ hay chất dòch vào lọ lấy bệnh phẩm vô trùng (nắp vặn chật) hay tube Eppendorf biopure (tinh sinh học), hay để nguyên ống kim hút mủ, gửi đến phòng thí nghiệm để yêu cầu cấy ngay. Có thể tẩm mủ vào tăm cho vào môi 25 Kỹ thuật xét nghiệm vi sinh lâm sàng bệnh phẩm khác trường chuyên chở Stuart-Amies (dùng cặp tube đũa tăm vô trùng/tube đũa StuartAmies), hay cấy giường bệnh với chai mặt thạch cấy dòch không tạp nhiễm (xem giới thiệu chai mặt thạch cấy DNT dòch không tạp nhiễm) chuyển phòng thí nghiệm. Các vết thương nhiễm trùng: lau vùng da lành chung quanh với cồn 70%. Lau mủ vết thương gạc vô trùng thấm nước muối sinh lý vô trùng. Dùng tăm vô trùng lấy mẫu để quệt lấy mủ, chất dập nát, hay mô (ngay lớp mủ chùi sạch); hay lấy mẫu cho vào lọ lấy bệnh phẩm vô trùng, hay tube Eppendorf biopure gửi đến phòng thí nghiệm để yêu cầu cấy ngay. Nếu chưa gửi ngay, cho tăm quệt mủ vào môi trường chuyên chở Stuart-Amies (dùng cặp tube đũa tăm vô trùng/tube đũa Stuart-Amies). Các nạo mủ hay mô giải phẩu: lấy quệt tăm hay trực tiếp cho mẫu vào lọ lấy bệnh phẩm vô trùng, hay tube Eppendorf biopure gửi đến phòng thí nghiệm. Nếu chưa gửi ngay, cho vào môi trường chuyên chở Stuart-Amies (dùng cặp tube đũa tăm vô trùng/tube đũa Stuart-Amies). Các mạch lươn hay mạch dẫn: dùng tăm mãnh vô trùng luồn vào mạch lươn; hay pipette Pasteur nhựa hút lấy mủ cho vào lọ lấy bệnh phẩm vô trùng, hay tube Eppendorf biopure gửi đến phòng thí nghiệm. Nếu chưa gửi ngay, cho vào môi trường chuyên chở Stuart-Amies (dùng cặp tube đũa tăm vô trùng/tube đũa Stuart-Amies). Khảo sát đại thể Màu: đỏ, vàng, xanh… Mùi: thối, tanh, hăng… Tính chất: đặc, lỏng, nhầy, có máu… Khảo sát vi thể Nhộm Gram. Nếu kết nhuộm Gram thấy có vi khuẩn khiết, làm kháng sinh đồ trực tiếp mẫu bệnh phẩm. Nhuộm kháng acid (nếu có yêu cầu). Nuôi cấy Cấy vào hộp thạch phân lập: 26 Kỹ thuật xét nghiệm vi sinh lâm sàng bệnh phẩm khác - Tối thiểu BA hay BA có Nalidixic acid (BANg) MC hay EMB. - Nếu có điều kiện, cấy thêm MSA hay DNA agar, BA có Gentamicin. - Nếu nghi nấm, cấy thêm thạch Sabouraud. Các hộp BA phải ủ 35-37oC tủ ấm CO2 hay bình nến. Các trường hợp khác, ủ khí trường bình thường. Quan sát hộp thạch liên tục ngày, có khúm vi khuẩn mọc, tiến hành đònh danh làm kháng sinh đồ ngay. Cấy dự phòng vào ống Thioglycollate hay BHI, ủ đồng thời với hộp thạch phân lập. Nếu hộp thạch phân lập vi khuẩn mọc mà ống BHI hay Thioglycollate đục cấy phân lập từ ống môi trường nầy. Các vi khuẩn gây bệnh phân lập Thường gặp √ Streptococcus pyogenes, √ Staphylococcus aureus, Ít gặp √ Các trực khuẩn Enterobacteriaceae, √ Pseudomonas trực khuẩn Gram (-) không lên men, √ Streptococci (các loài khác), √ Clostridium perfringens, √ Bacteroides vi khuẩn kỵ khí khác. Rất gặp √ Bacillus anthracis, √ M. tuberculosis, √ M. ulcerans, √ Pasteurella multocida. 27 Kỹ thuật xét nghiệm vi sinh lâm sàng bệnh phẩm khác Câu hỏi ôn tập 1. Cho biết đònh lâm sàng để cấy mủ chất dòch. 2. Hãy cho biết loại bệnh phẩm mủ chất dòch, cách lấy loại bệnh phẩm này. 3. Hãy cho biết phương tiện lấy chuyên chở bệnh phẩm mủ chất dòch thích hợp cho bệnh viện nay, phân tích ưu khuyết điểm phương tiện này. 4. Hãy cho biết qui trình xét nghiệm vi sinh lâm sàng thực phòng thí nghiệm bệnh phẩm mủ chất dòch. 5. Hãy cho biết vi khuẩn gặp cấy mủ chất dòch. 28 Kỹ thuật xét nghiệm vi sinh lâm sàng bệnh phẩm khác CẤY MỦ, CHẤT DỊCH – Các câu hỏi thường gặp Tại có nhiều trường hợp cấy mủ nhiễm trùng vết thương hở cho kết không phù hợp với hiệu điều trò kháng sinh lâm sàng? Thực tế vậy, lý lấy mủ làm xét nghiệm thường hay lấy mủ bề mặt vết thương nhiễm trùng, có vi khuẩn phân lập vi khuẩn gây bệnh mà vi khuẩn tạm trú mủ, mủ môi trường tốt cho nhiều loại vi khuẩn tăng trưởng. Chính vậy, lấy mủ để tìm vi khuẩn gây bệnh trường hợp vết thương hở, phải lau mủ quệt lấy chất dòch bề mặt lớp mô vết thương sau chùi mủ, bệnh phẩm có nhiều khả chứa vi khuẩn gây nhiễm trùng vết thương. Tại có trường hợp cấy mủ hay chất dòch kết âm tính, chí có khảo sát trực tiếp qua phết nhuộm Gram thấy có diện vi khuẩn? Cấy mủ kết âm tính do: (1) Kháng sinh làm vi khuẩn mủ chứa xác vi khuẩn xác bạch cầu; (2) Mủ gửi đến phòng thí nghiệm không cấy ngay, đặc biệt trường hợp mủ lấy trực tiếp mà không cho vào môi trường chuyên chở; (3) Vi khuẩn có mẫu mủ (như mủ kết mạc hay giác mạc mắt), trường hợp làm tăng sinh mủ BHI khoảng 2-3giờ cấy. Ngoài ra, cấy mủ âm tính trường hợp nhiễm trùng kỵ khí mà cấy mủ theo qui trình hiếu khí. Các mẫu mủ nghi ngờ có nhiễm trùng kỵ khí mẫu có mùi thối, có gas (có bọt khí), mủ áp xe .(xem thêm phần qui trình cấy kỵ khí) Khi làm kháng sinh đồ trực tiếp mẫu mủ? Đa số mẫu mủ làm kháng sinh đồ trực tiếp, tốt mẫu mủ không bò tạp nhiễm (như mủ áp xe). Có thể quan sát qua phết nhuộm Gram để biết mẫu không bò tạp nhiễm nhờ thấy hình thái vi khuẩn khiết. Tuy làm kháng sinh đồ trực tiếp bỏ qua khâu đònh danh kháng sinh đồ qui trình thường qui qui trình cho kết xác đầy đủ. 29 Kỹ thuật xét nghiệm vi sinh lâm sàng bệnh phẩm khác Hãy cho biết phương tiện thích hợp để lấy chuyên chở quệt mủ, chất dòch, mủ abcess? Không nên dùng phương tiện tự chế bệnh viện như: que tăm tự quấn cho vào ống nghiệm nhét gòn hấp hay sấy khử trùng; hay lọ kiểu chai peni hay tube thuỷ tinh nhét gòn hấp sấy vô trùng để lấy bệnh phẩm mủ chất dòch. Lý phương tiện khó thao tác lấy bệnh phẩm bệnh nhân, hay lấy bệnh phẩm để làm xét nghiệm phòng thí nghiệm. Ngoài phương tiện không an toàn thao tác hay chuyên chở nguy rỉ bệnh phẩm lên miệng tube hay chai. Nguy ngoại nhiễm bệnh phẩm cao dùng phương tiện này. Sau phương tiện thích hợp để lấy chuyên chở bệnh phẩm mủ chất dòch: (1) Tăm vô trùng lấy mẫu thiết kế với phần nắp tube gắn sẵn tăm rút nắp tube khỏi ống, tăm rút theo tay người thao tác không chạm vào miệng tube, sau lấy quệt mủ xong tăm cho vào lại tube hay cho vào tube đũa chứa môi trường chuyên chở Stuart-Amies kèm. (2) Cặp tube đũa tăm vô trùng/tube đũa môi trường chuyên chở Stuart-Amies thiết kế để tăm tube đũa tăm vô trùng sau lấy mẫu xong cho vừa vặn vào tube đũa môi trường chuyên chở Stuart-Amies với thao tác dễ dàng thuận tiện. (3) Lọ vô trùng lấy mẫu thích hợp để lấy chất dòch hay mủ abcess nhờ nắp vặn mở tay người thao tác không chạm miệng lọ (tay chạm miệng lọ dễ có nguy ngoại nhiễm), sau lấy bệnh phẩm xong vặn chặt nắp, lọ kín không bò rò rỉ chuyên chở mẫu. (4) Tăm mãnh vô trùng lấy mẫu thích hợp để lấy quệt mủ từ ống hẹp mạch lươn, ống catheter…và tương thích vào tube đũa môi trường chuyên chở Stuart-Amies. 30 Kỹ thuật xét nghiệm vi sinh lâm sàng bệnh phẩm khác Hình 4: Tube đũa tăm vô trùng thiết kế thuận lợi để lấy quệt bệnh phẩm Hình 5: (A) Cặp tube đũa tăm vô trùng/môi trường chuyên chở Stuart- Amies; (B) Cặp tube đũa tăm mãnh vô trùng/môi trường chuyên chở StuartAmies 31 Kỹ thuật xét nghiệm vi sinh lâm sàng bệnh phẩm khác Sơ đồ 2: QUI TRÌNH VI SINH LÂM SÀNG CÁC MẪU MỦ VÀ CHẤT DỊCH D0 Quệt mủ, chọc hút mủ abces (không MT chuyên chở) Cấy giừơng vào chai mặt thạch với bp không tạp nhiễm (xem qui trình phần chai mặt thạch cấy DNT dòch không tạp nhiễm) Làm xét nghiệm Chờ KQ phân lập Nếu VK, hay đa nhiễm Quệt mủ, chọc hút mủ abces (MT chuyên chở Stuart-Amies) Có thể chờ đến cuối ngày Cấy phân lập BA hay BANg, MC/EMB KSTT: nhuộm GRAM KSĐ trực tiếp Nếu có VK khiết KQ sơ KSTT Ủ 37oC/CO2 (BA hay BANg) Chọn khúm tách rời D1 Cấy tăng sinh lên BA KQ sơ bộ: KSĐ trực tiếp Ủ 37oC/từ sáng đến chiều Đònh danh D2 Kháng sinh đồ KQ chung 32 . thuật xét nghiệm vi sinh lâm sàng các bệnh phẩm khác nhau 25 CÁC MẪU MỦ VÀ CHẤT DỊCH Mục tiêu • Hướng dẫn được lâm sàng hay có thể thực hiện lấy đúng các bệnh phẩm cho các mẫu mủ và chất. và các cách lấy bệnh phẩm thích hợp trong các trường hợp làm xét nghiệm vi sinh các mẫu mủ và chất dòch. • Thực hiện được các qui trình này một cách chính xác trong khi làm xét nghiệm các mẫu. thích hợp nhất cho cấy mủ và các chất dòch trong các bệnh viện hiện nay nhờ biết được phương tiện thích hợp nhất để thực hiện được xét nghiệm vi sinh lâm sàng các mẫu mủ và chất dòch; nhờ vậy có