Kỹ thuật xét nghiệm vi sinh lâm sàng bệnh phẩm khác KIỂM TRA VI SINH KHÔNG KHÍ Mục tiêu • Đưa việc kiểm tra vi sinh không khí vào thánh qui trình giám sát nhiễm trùng bệnh viện biết rõ mục đích đònh việc kiểm tra không khí. • Lựa chọn phương pháp kiểm tra vi sinh không khí bệnh viện cho phù hợp với điều kiện tài chánh củng phương tiện phòng thí nghiệm nhờ biết nhiều phương pháp kiểm tra vi sinh không khí khác nhau. • Áp dụng phương pháp lắng bụi Koch dùng kiểm tra vi sinh không khí bệnh viện phương pháp phù hợp nay. • Dựa kết kiểm tra vi sinh không khí, đánh giá chất lượng không khí phòng mổ đánh giá chất lượng không khí nói chung, tuỳ thuôc vào đònh thực kiểm tra không khí khoa phòng nào. Mục đích Dùng kiểm tra chất lượng không khí phòng mổ bệnh viện. Cũng dùng kiểm tra chất lượng không khí bệnh phòng chương trình kiểm soát nhiễm trùng bệnh viện Các phương pháp kiểm tra vi sinh không khí Có nhiều phương pháp: 1. Phương pháp hút bụi qua màng lọc gelatine (dùng màng lọc hãng Sartorius), sau đặt màng lọc lên mặt môi trường, ủ điều kiện thích hợp (37oC/khí trường thường hay khí trường CO2 thạch máu/24 giờ). Sau đọc kết đếm số lượng khúm vi khuẩn mọc để tính số lượng vi sinh thể thích không khí hút qua màng lọc. 2. Phương pháp hút bụi trực tiếp lên mặt hộp thạch môi trường dinh dưỡng đặt máy hút (dùng máy MAS100 Merck), hộp thạch sau lấy khỏi máy ủ điều kiện thích hợp (37oC/khí trường thường hay khí trường CO2 thạch máu/24 giờ). Đọc 143 Kỹ thuật xét nghiệm vi sinh lâm sàng bệnh phẩm khác kết đếm số lượng khúm vi khuẩn mọc để tính số lượng vi sinh thể thích không khí hút qua máy. 3. Phương pháp lắng bụi Koch dựa nguyên tắc để bụi lắng mặt hộp thạch dinh dưỡng thời gian đònh sau ủ hộp thạch điều kiện thích hợp (37oC/khí trường thường hay khí trường CO2 thạch máu/24 giờ). Đọc kết đếm số lượng khúm vi khuẩn mọc để tính số lượng vi sinh thể thích không khí qua công thức cho sẵn. Phương pháp lắng bụi Koch để kiểm tra vi sinh không khí 1. Phương pháp thực Đây phương pháp nhiều bệnh viện sử dụng để kiểm tra vi sinh không khí phòng mổ. Thường phòng mổ kiễm tra năm cụm, cụm bốn cụm bốn góc. Mỗi cụm đặt hộp thạch dinh dưỡng loại đường kính 90mm. Ba loại hộp thạch dinh dưỡng là: Một hộp thạch máu (BA) cho toàn vi khuẩn hiếu khí, hộp thạch MacConkey (MC) cho trực khuẩn Gram [-] dễ mọc, hộp thạch Sabouraud (SA) cho vi nấm. Tất hộp thạch mở nắp sau đặt đầy đủ vò trí phòng mổ để yên phòng 10 phút; sau đậy nắp lại lần lượt, hộp mở nắp trước đậy nắp trước. Tất đem phòng thí nghiệm ủ điều kiện thích hợp (37oC/khí trường thường cho hộp thạch MC khí trường CO2 cho hộp thạch BA, riêng hộp thạch SA ủ nhiệt độ phòng thí nghiệm). Thời gian ủ 24 giờ, riêng hộp thạch SA ủ 48 đọc kết quả. Lưu ý thực đặt hộp thạch kiểm tra vi sinh không khí phòng mổ nhân viên thực việc phải rửa tay mặc đồ giống hệt phẩu thuật viên để tránh đưa vi trùng tạp nhiễm vào phòng mổ. Thời điểm thực kiểm tra tốt vào buổi sáng sau vận hành hệ thống đèn cực tím máy lọc không khí khử trùng phòng mổ trước thực trường hợp mổ đầu tiên. 2. Phương pháp tính toán kết Đếm số khúm vi khuẩn mọc hộp thạch. Tổng số vi khuẩn/m3 không khí cụm xác đònh theo công thức sau: 144 Kỹ thuật xét nghiệm vi sinh lâm sàng bệnh phẩm khác X= A × 100 × 100 S×k Với: X tổng số vi khuẩn/m3 không khí cụm khảo sát (CFU/m3); A tổng số khúm vi khuẩn mọc ba loại môi trường; S diện tích hộp petri chứa môi trường, xác đònh công thức S = πR2 (R tính cm) = 3.1416 x 92; k hệ số phụ thuộc vào thời gian đặt hộp thạch (là đặt phút, đặt 10 phút, đặt 15 phút). Ví dụ BA đếm có 32 khúm, MC đếm có khúm, SA đếm có 10 khúm; A 32 + + 12 = 46. Nếu thời gian đặt hộp thạch 10, hộp thạch có đường kính 90mm (9cm) X là: X = 46 × 100 × 100 63.62 × = 3615CFU/m3 Số lượng vi sinh có 1m3 không khí phòng tính số trung bình cộng số lượng vi sinh có 1m3 cụm khảo sát. Căn vào kết số vi sinh có 1m3 không khí phòng, đánh giá chất lượng không khí dựa theo tiêu chuẩn V. Omelanskii (Nga) sau đây: Bảng 10: Tiêu chuẩn đánh giá chất lượng không khí phòng mổ theo V. Omelanski (Nga) Số lượng vi sinh/m3 không khí Chất lượng không khí 1562 Kém (> 25khuẩn lạc/3 đóa thạch) 145 Kỹ thuật xét nghiệm vi sinh lâm sàng bệnh phẩm khác Tiêu chuẩn vi sinh không khí Cho đến chưa có tiêu chuẩn qui đònh chất lượng không khí dựa theo lượng vi sinh vật 1m3 không khí. Sau vài tiêu chuẩn dùng để tham khảo: Theo Preobrane (Pháp), không khí có số lượng vi khuẩn ≤1000CFU/m3 Theo Ginokova (Nga), không khí có – 10 khúm mọc mặt thạch để 10 phút; vừa có 20 – 25 khúm; xấu có >25 khúm. Theo Romanovic, sở sản xuất thực phẩm, không khí tốt có 70 khúm vi khuẩn >5 khúm nấm mốc. Câu hỏi ôn tập 1. Cho biết phương pháp dùng để kiểm tra không khí. 2. Trình bày phương pháp lắng bụi để kiểm tra không khí phòng mổ tiêu chuẩn để đánh giá chất lượng không khí phòng mổ. 3. Cho biết tiêu chuẩn dùng để đánh giá chất lượng không khí. 146 . Kỹ thuật xét nghiệm vi sinh lâm sàng các bệnh phẩm khác nhau 143 KIỂM TRA VI SINH KHÔNG KHÍ Mục tiêu • Đưa được vi c kiểm tra vi sinh không khí vào thánh một trong các qui. trên kết quả kiểm tra vi sinh không khí, đánh giá chất lượng không khí phòng mổ và đánh giá chất lượng không khí nói chung, tuỳ thuôc vào các chỉ đònh thực hiện kiểm tra không khí tại khoa. Koch để kiểm tra vi sinh không khí 1. Phương pháp thực hiện Đây là phương pháp được nhiều bệnh vi n sử dụng để kiểm tra vi sinh không khí phòng mổ. Thường thì mỗi phòng mổ sẽ được kiễm tra năm