Giáo trình thực tập sinh lý 2015

Trình bày được các nguyên tắc xét nghiệm xác định nhóm máu hệ ABOvà Rhesus.. Trình bày được các ứng dụng xét nghiệm xác định nhóm máu ABO vàRhesus.. Th nh ph n c a h

TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y DƯỢC CẦN THƠ

Mở đầu

Buổi 1 - Sinh lý hồng cầu và nhóm máu

- Số lượng hồng cầu

- Nhóm máu hệ ABO và Rhesus

- Sức bền màng hồng cầu

- Thể tích hồng cầu lắng đọng

- Tốc độ máu lắng

Buổi 2 - Sinh lý bạch cầu, tiểu cầu và cầm máu

- Số lượng bạch cầu

- Công thức bạch cầu phổ thông

- Số lượng tiểu cầu

- Thời gian máu chảy

- Thời gian máu đông

Buổi 3 - Sinh lý tim mạch

- Huyết áp trực tiếp

- Tâm động ký

Buổi 4 - Sinh lý tim mạch và hô hấp

- Kỹ thuật ghi điện tâm đồ

- Kỹ thuật ghi hô hấp ký

- Vai trò của cơ hoành và áp suất âm trong hô hấp

Buổi 5 - Sinh lý tiêu hóa, tiết niệu và sinh dục-sinh sản

- Nhu động ruột

- Bài tiết nước tiểu

- Ảnh hưởng của một số hormon lên tử cung và buồng trứng

- Áp lực vật thể hang

Buổi 6 - Sinh lý thần kinh-cơ và kiểm tra

- Mô hình thần kinh – cơ

- Điều hòa trương lực cơ

- Kiểm tra thực tập

MỞ ĐẦU

Thực tập sinh lý học có hai phần chính với yêu cầu thực tập khác nhau,sinh viên cần nắm được để có thể học tốt Sinh viên cũng cần đọc trước bài thựctập, ôn tập để nắm vững các kiến thức lý thuyết có liên quan trước khi thực tậpvà tuân thủ đúng nội qui thực tập khi đi thực tập.

Khi thực tập phần này sinh viên cần đảm bảo 3 yêu cầu:

- Nắm được chỉ định và chống chỉ định: biết cách cho y lệnh đúng

- Làm được thuần thục các thao tác kỹ thuật: chuẩn bị phương tiện, dụng

cụ, chuẩn bị bệnh nhân, tiến hành các thao tác theo đúng trình tự và chính xác

- Đọc, nhận định và biện luận được kết quả: xác định đúng kết quả xétnghiệm, đánh giá bình thường hay bất thường bằng cách so sánh với hằng số,biện luận các sai số có thể xảy ra và bước đầu suy luận các cơ chế hoặc nguyênnhân gây ra các bất thường

2 Phần thực nghiệm

Đây là các thí nghiệm được tiến hành để chứng minh cơ chế hoạt độngchức năng của một bộ máy cơ quan trong cơ thể góp phần làm sáng tỏ hơn cácbài học lý thuyết

Những thực nghiệm này được làm trên động vật thí nghiệm nên sinh viêncũng cần chú ý đến đặc điểm sinh học của từng động vật Ví dụ như thựcnghiệm gây duỗi cứng mất não trên thỏ, thực nghiệm ghi huyết áp trực tiếp trênchó, thực nghiệm tâm động ký, nút buộc stanius trên ếch, thực nghiệm hủy mộtbên tiểu não trên ếch…

Khi thực tập phần này sinh viên cần đảm bảo 3 yêu cầu:

- Quan sát và mô tả các hiện tượng đã xảy ra trên động vật thực nghiệm:cần quan sát kỹ và ghi nhận đầy đủ các dấu hiệu theo các chỉ tiêu được nêu ra

- Rút ra nhận xét về các hiện tượng đã xảy ra trên động vật thực nghiệm:nhận xét cần ngắn gọn, chính xác và đây cũng chính là yêu cầu hay câu hỏi “tạisao?” đặt ra mà sinh viên cần giải quyết.

- Giải thích các hiện tượng đã xảy ra trên động vật thực nghiệm: suy luậnvà vận dụng các kiến thức đã được học để trả lời câu hỏi “tại sao?” đã đặt ra ởtrên

* Sinh viên lưu ý:

- Hai buổi học đầu về máu, các thao tác kỹ thuật và kết quả thực hành củasinh viên sẽ được cán bộ kỹ thuật chấm điểm Trong hai buổi học này sinh viênchia thành các tổ nhỏ, mỗi tổ khoảng 3 sinh viên, cùng thực tập và cuối buổiphải hoàn thành bài phúc trình nêu rõ nguyên tắc, các bước thực hành thực tế,kết quả và biện luận kết quả thu được

- Kiểm tra thực tập được thực hiện theo hình thức chạy trạm vào buổi cuốicùng đợt thực tập Điểm kiểm tra thực tập được tính là một phần của cột điểmkiểm tra thường xuyên khi đánh giá điểm học phần

SỐ LƯỢNG HỒNG CẦU

Mục tiêu:

1 Xác định được số lượng hồng cầu bình thường và các yếu tố ảnh hưởngsố lượng hồng cầu

2 Trình bày được nguyên tắc xét nghiệm đếm số lượng hồng cầu

3 Thực hiện được kỹ thuật đếm số lượng hồng cầu

4 Nhận định và biện luận được kết quả xét nghiệm đếm số lượng hồngcầu

1 ĐẠI CƯƠNG

Hồng cầu là một tế bào máu chủ yếu làm nhiệm vụ vận chuyển khí (O2,

CO2)

- Số lượng hồng cầu bình thường ở người Việt Nam là:

+ Người lớn: Nữ : 4.600.000  250.000/mm3 máu

Nam : 5.110.000  300.000/mm3 máu

+ Trẻ sơ sinh: 5.000.000 - 7.000.000/mm3 máu

- Số lượng hồng cầu phụ thuộc vào:

+ Lượng oxy

+ Mức độ hoạt động

+ Lứa tuổi, giới

+ Lượng erythropoietin

- Thay đổi bệnh lý về số lượng hồng cầu:

+ Giảm hồng cầu gây thiếu máu do nhiều nguyên nhân như: xuất huyết,tán huyết, thiếu sắt, suy tủy

+ Tăng hồng cầu gặp trong trường hợp mất nước, thiếu oxy, bệnh Vaquez,

ung thư hồng cầu

2 NGUYÊN TẮC

Lấy máu và pha loãng theo một tỉ lệ nhất định bằng dung dịch phù hợp rồicho vào buồng đếm đã biết trước kích thước Đếm số lượng hồng cầu dưới kínhhiển vi từ đó tính ra số lượng hồng cầu trong 1mm3 máu

3 PHƯƠNG TIỆN DỤNG CỤ VÀ HÓA CHẤT

3.1 Phương tiện dụng cụ

- Ống Potain pha loãng máu đếm hồng cầu: bầu trộn lớn, mao quản nhỏ,hạt thủy tinh để trộn máu màu xanh hoặc đỏ, trên ống có khắc các vạch số 0,5; 1và 101

- Huyết cầu kế: có nhiều loại huyết cầu kế (Goriaev, Agasse-Lafont,Fiessinger, Thomas, Levy, Neubauer, Malasser ) Trong bày này, sử dụng

buồng đếm của huyết cầu kế Neubauer cải tiến: trên huyết cầu kế có 2 buồngđếm giống nhau ở 2 bên Mỗi buồng đếm có chiều cao là 1/10mm, được chiathành 9 ô vuông lớn, mỗi ô vuông có diện tích 1mm2 Như vậy, thể tích của 1 ôvuông lớn: 1mm2 x 1/10mm = 1/10mm3.

+ 4 ô vuông lớn ở 4 góc là khu vực dùng để đếm bạch cầu, mỗi ô vuôngnày được chia thành 16 ô vuông trung bình Thể tích của 4 ô vuông lớn này là4/10mm3 Khi đếm bạch cầu sẽ đếm trong tất cả 64 ô vuông trung bình của 4 ôvuông lớn này

+ Ô vuông lớn ở giữa là khu vực dùng để đếm hồng cầu và tiểu cầu Ônày được chia thành 25 ô vuông trung bình, mỗi ô vuông trung bình lại chiathành 16 ô vuông nhỏ Vậy thể tích của một ô vuông nhỏ là 1/4.000mm3

Khi đếm hồng cầu sẽ đếm trong 5 ô vuông trung bình (gồm 80 ô vuôngnhỏ) ở 5 vị trí: A (ô vuông trung bình góc trái trên), B (ô vuông trung bình gócphải trên), C (ô vuông trung bình góc phải dưới), D (ô vuông trung bình góc tráidưới), E (ô vuông trung bình ở trung tâm)

Hình 1 Buồng đếm Neubauer cải tiến

- Lamen

- Dụng cụ lấy máu mao mạch: kim chích máu, bông, cồn sát trùng

- Găng tay, khay hạt đậu, hộp hủy kim

- Kính hiển vi

- Máy đếm tay

3.2 Dung dịch và hóa chất

- Nước cất, HCl 0,1N, cồn 900, ether, dung dịch sinh lý

- Dung dịch pha loãng máu đếm hồng cầu: có thể dùng một trong các dungdịch sau:

E

BCBC

+ Dung dịch nước muối sinh lý: NaCl 0,9%.

+ Dung dịch Hayem: Na2SO4(5g), NaCl(1g), HgCl2 (0,5g), nước cất vừađủ 100mL

+ Dung dịch Marcano gồm: Na2SO4 (5g), formol (1mL), nước cất vừa đủ100Ml (sử dụng trong thực tập này)

+ Dung dịch Gowers gồm: Na2SO4, acid acetic, nước cất

- Chuẩn bị bệnh nhân: thường lấy vào buổi sáng lúc đói, tuy nhiên có thểlấy máu bất cứ lúc nào trong trường hợp khẩn cấp Bệnh nhân đúng chỉ định, taysạch, giải thích để bệnh nhân yên tâm hợp tác với người làm xét nghiệm

4.2 Lấy máu

- Lấy máu mao mạch (có thể lấy máu tĩnh mạch): vị trí thường lấy máu ởcạnh bên đầu ngón 4 bàn tay không thuận (đối với trẻ nhỏ có thể lấy máu ở ngón

chân cái hoặc gót chân) Sát khuẩn vị trí lấy máu

- Lấy kim chích máu: xé bao kim đúng vị trí để cầm vào đuôi kim

- Tạo vết thương: dùng kim chích máu đâm nhanh, dứt khoát vào vị tríngón tay đã chọn, để máu chảy ra tự nhiên không nặn

- Lau bỏ giọt máu đầu bằng bông khô

4.3 Pha loãng máu

- Khi máu đọng thành giọt trên đầu ngón tay, người làm thí nghiệm cầmống Potain , đặt đầu ống chạm vào giọt máu nhưng không tỳ lên da và để máu tựmao dẫn (hoặc hút nhẹ) đến vạch 0.5 (chú ý không để có bọt khí lẫn vào)

- Lau máu dính quanh đầu ống, giữ cho cột máu không bị tụt xuống

- Hút dung dịch pha loãng lên đến vạch 101 Như vậy, tỷ lệ pha loãng sẽlà 1/200

- Bịt đầu ống bằng đầu ngón tay trỏ trái và tháo ống cao su

- Bịt hai đầu ống bằng ngón 1 và 2, lắc trộn đều trong 3 phút

4.4 Cho hỗn dịch vào buồng đếm

- Nhỏ bỏ 3-4 giọt đầu

- Nghiêng ống Potain 450, đặt đầu ống vào sát cạnh lamen ngay khe giữalamen và huyết cầu kế để cho hỗn dịch mao dẫn lan tỏa vào buồng đếm bên dướilamen

- Để yên 5 phút

Hình 2 Cách cho hỗn dịch máu vào buồng đếm

4.5 Đếm hồng cầu

- Chỉnh vi trường với vật kính 10, sau đó chuyển sang vật kính 40

- Đếm số lượng hồng cầu (N) có trong 5 ô quy định: A, B, C, D, E

dần ngược lại về bên trái cho hết các ô hàng ngang rồi lại xuống 1 ô Tiếp tục như thế cho đến ô cuối cùng là ô phải dưới.

- Đếm 2 cạnh liên tiếp: đếm tất cả các tế bào nằm trong lòng ô, đối với các tế bào nằm trên cạnh của ô thì chỉ đếm những tế bào nằm trên 2 cạnh liên tiếp (tuỳ chọn, thường là cạnh trên và cạnh trái) và bỏ những tế bào nằm trên 2 cạnh còn lại.

4.6 Tính kết quả và biện luận

- Tính số lượng hồng cầu trong 1mm3máu theo công thức: N x 10.000

- Ghi nhận, biện luận kết quả và kết luận

4.7 Rửa, dọn dụng cụ

- Rửa ống Potain bằng nước cất rồi tráng lại bằng HCl 0,1N, cồn 900,ether (2 lần)

- Rửa huyết cầu kế bằng nước cất, tốt nhất rửa dưới vòi nước chảy rồi launhẹ bằng gạc mềm

- Sấy ống Potain và huyết cầu kế

- Chuyển kính hiển vi về trạng thái nghỉ và bảo quản

5 ỨNG DỤNG

Đếm số lượng hồng cầu là một xét nghiệm máu thường quy được sử dụngrộng rãi trên lâm sàng

NHÓM MÁU HỆ ABO VÀ RHESUS

Mục tiêu:

1 Trình bày được các thành phần của nhóm máu hệ ABO và hệ Rhesus

2 Trình bày được các nguyên tắc xét nghiệm xác định nhóm máu hệ ABOvà Rhesus

3 Thực hiện được kỹ thuật xét nghiệm xác định nhóm máu hệ ABO vàRhesus

4 Nhận định và biện luận được kết quả xét nghiệm xác định nhóm máuhệ ABO và Rhesus

5 Trình bày được các ứng dụng xét nghiệm xác định nhóm máu ABO vàRhesus

1 ĐẠI CƯƠNG

Nhóm máu là sự hiện diện của kháng nguyên trên màng hồng cầu Bảnchất của các kháng nguyên là những glycoprotein Trên màng hồng cầu có rấtnhiều loại glycoprotein nên có nhiều loại kháng nguyên tạo thành những hệnhóm máu khác nhau, trong đó có hai hệ nhóm máu quan trọng là hệ nhóm máuABO và Rhesus

Mỗi kháng nguyên sẽ có kháng thể tương ứng, khi kháng nguyên vàkháng thể tương ứng gặp nhau sẽ xảy ra hiện tượng ngưng kết Kháng thể tồn tạitrong huyết thanh và được chia thành 2 loại: kháng thể tự nhiên (ví dụ kháng thểcủa hệ nhóm máu ABO) và kháng thể miễn dịch (ví dụ kháng thể của hệ nhómmáu Rhesus)

Bảng 1 Th nh ph n c a h nhóm máu ABO ành phần của hệ nhóm máu ABO ần của hệ nhóm máu ABO ủa hệ nhóm máu ABO ệ nhóm máu ABO

Thứ

tự

trên màng hồng cầu

Bảng 2 Th nh ph n c a h nhóm máu Rhesus ành phần của hệ nhóm máu ABO ần của hệ nhóm máu ABO ủa hệ nhóm máu ABO ệ nhóm máu ABO

Thứ

tự

trên màng hồng cầu

Kháng thể

trong huyết thanh

-Ghi chú: kháng thể anti D của hệ Rhesus là kháng thể miễn dịch chỉ xuấthiện khi người có Rhesus (-) tiếp xúc với kháng nguyên D.

2 NGUYÊN TẮC

Có hai phương pháp được dùng để xác định nhóm máu, phương pháp trựctiếp (xuôi) dùng huyết thanh mẫu để tìm kháng nguyên trên màng hồng cầu vàphương pháp gián tiếp (ngược) dùng hồng cầu mẫu để tìm kháng thể trong huyếtthanh Nhóm máu Rhesus không xác định được bằng phương pháp gián tiếp.Trong bài thực tập này sẽ dùng phương pháp xuôi

2.1 Nguyên tắc xác định nhóm máu bằng phương pháp trực tiếp

Lấy máu của người thử trộn với từng giọt huyết thanh mẫu khác nhau,dựa vào hiện tượng ngưng kết chứng tỏ có phản ứng kháng nguyên – kháng thểtương ứng suy ra nhóm máu của người cần thử

2.2 Nguyên tắc xác định nhóm máu bằng phương pháp gián tiếp

Lấy máu của người thử tách huyết thanh sau đó trộn với từng giọt hồngcầu mẫu khác nhau, dựa vào hiện tượng ngưng kết chứng tỏ có phản ứng khángnguyên – kháng thể tương ứng tìm được kháng thể có trong huyết thanh, từ đósuy ra nhóm máu của người cần thử

3 PHƯƠNG TIỆN DỤNG CỤ VÀ HÓA CHẤT

- Miếng gạch men trắng

- Que thủy tinh đầu tròn để trộn máu

- Bút chì sáp (hay bút lông)

- Huyết thanh mẫu Anti A, Anti B, Anti AB và Anti D

- Dụng cụ lấy máu mao mạch: kim chích máu, bông, cồn sát trùng

- Găng tay, khay hạt đậu, hộp hủy kim

4 KỸ THUẬT

4.1 Chuẩn bị

- Chuẩn bị đầy đủ phương tiện dụng cụ, hóa chất

- Chuẩn bị bệnh nhân: bệnh nhân tay sạch, giải thích để bệnh nhân yêntâm hợp tác với người làm xét nghiệm

4.2 Nhỏ huyết thanh mẫu lên lam

- Dùng bút chì sáp viết tên bệnh nhân và tên các loại huyết thanh mẫu lênmiếng gạch men

- Nhỏ dưới tên mỗi loại huyết thanh 1 giọt huyết thanh mẫu tương tứng

4.3 Lấy máu và nhỏ lên lam kính

- Lấy máu mao mạch (có thể lấy máu tĩnh mạch): vị trí thường lấy máu ởcạnh bên đầu ngón 4 bàn tay không thuận (đối với trẻ nhỏ có thể lấy máu ở ngón

chân cái hoặc gót chân) Sát khuẩn vị trí lấy máu

- Lấy kim chích máu: xé bao kim đúng vị trí để cầm vào đuôi kim

- Tạo vết thương: vuốt dọc ngón tay từ trong ra ngoài 2-3 lần, rồi ấn chặtphía ngoài cho máu dồn căng ở đầu ngón Dùng kim chích máu đâm nhanh, dứtkhoát vào vị trí lấy máu đã chọn

- Nặn 4 giọt máu đường kính khoảng 3mm nhỏ lên bên cạnh các giọt anti

- Dùng bông sạch lau phần máu còn lại trên ngón tay BN

Hình 1 Nhỏ huyết thanh mẫu và máu lên lam

4.4 Trộn máu với từng giọt huyết thanh mẫu và xác định hiện tượng ngưng kết

- Dùng que thủy tinh để kéo từng giọt máu vào giọt huyết thanh tươngứng và trộn chúng với nhau Chú ý trước khi chuyển từ giọt này sang giọt khácphải rửa và lau sạch đầu que thủy tinh

- Quan sát để xác định có biểu hiện ngưng kết hay không Nếu có ngưngkết ta thấy hồng cầu bị dính thành từng đám trên nền huyết thanh Xác địnhchính xác mẫu huyết thanh nào có hiện tượng ngưng kết

Chú ý: Khi trộn Anti D với máu, phản ứng ngưng kết xảy ra chậm hơn so

với máu hệ ABO, vì vậy sau khi trộn máu xong, ta cầm miếng gạch men lắc nhẹnếu có ngưng kết hồng cầu sẽ từ từ vón lại

4.5 Biện luận kết quả và kết luận

Dựa trên kiến thức về thành phần nhóm máu để giải thích và kết luậnnhóm máu A, B, AB hay O và Rh (+) hay Rh (-)

3 giọt huyết thanh khác nhau

Giọt máu