Triển khai phương pháp HPLC để định lượng thuốc tiêm artesunat đang lưa hành ở việt nam

Triển khai phương pháp HPLC để định lượng thuốc tiêm artesunat đang lưa hành ở việt nam Triển khai phương pháp HPLC để định lượng thuốc tiêm artesunat đang lưa hành ở việt nam Triển khai phương pháp HPLC để định lượng thuốc tiêm artesunat đang lưa hành ở việt nam Triển khai phương pháp HPLC để định lượng thuốc tiêm artesunat đang lưa hành ở việt nam Triển khai phương pháp HPLC để định lượng thuốc tiêm artesunat đang lưa hành ở việt nam Triển khai phương pháp HPLC để định lượng thuốc tiêm artesunat đang lưa hành ở việt nam Triển khai phương pháp HPLC để định lượng thuốc tiêm artesunat đang lưa hành ở việt nam Triển khai phương pháp HPLC để định lượng thuốc tiêm artesunat đang lưa hành ở việt nam Triển khai phương pháp HPLC để định lượng thuốc tiêm artesunat đang lưa hành ở việt nam Triển khai phương pháp HPLC để định lượng thuốc tiêm artesunat đang lưa hành ở việt nam Triển khai phương pháp HPLC để định lượng thuốc tiêm artesunat đang lưa hành ở việt nam Triển khai phương pháp HPLC để định lượng thuốc tiêm artesunat đang lưa hành ở việt nam Triển khai phương pháp HPLC để định lượng thuốc tiêm artesunat đang lưa hành ở việt nam Triển khai phương pháp HPLC để định lượng thuốc tiêm artesunat đang lưa hành ở việt nam Triển khai phương pháp HPLC để định lượng thuốc tiêm artesunat đang lưa hành ở việt nam Triển khai phương pháp HPLC để định lượng thuốc tiêm artesunat đang lưa hành ở việt nam Triển khai phương pháp HPLC để định lượng thuốc tiêm artesunat đang lưa hành ở việt nam Triển khai phương pháp HPLC để định lượng thuốc tiêm artesunat đang lưa hành ở việt nam Triển khai phương pháp HPLC để định lượng thuốc tiêm artesunat đang lưa hành ở việt nam Triển khai phương pháp HPLC để định lượng thuốc tiêm artesunat đang lưa hành ở việt nam Triển khai phương pháp HPLC để định lượng thuốc tiêm artesunat đang lưa hành ở việt nam Triển khai phương pháp HPLC để định lượng thuốc tiêm artesunat đang lưa hành ở việt nam Triển khai phương pháp HPLC để định lượng thuốc tiêm artesunat đang lưa hành ở việt nam Triển khai phương pháp HPLC để định lượng thuốc tiêm artesunat đang lưa hành ở việt nam Triển khai phương pháp HPLC để định lượng thuốc tiêm artesunat đang lưa hành ở việt nam Triển khai phương pháp HPLC để định lượng thuốc tiêm artesunat đang lưa hành ở việt nam

B ộ Y TẾ TRUỜNG ĐẠI HỌC Dược HÀ NỘI • • • • ĩỊí #|c #Ịc ĩỊc ĩỊc ĩỊc NGUYỄN ANH TUĂl TRIỂN KHAI PHƯƠNG PHÁP HPLC ĐỂ ĐỊNH LƯỢNG THUỐC TIÊM ARTESUNAT ĐANG LƯU HÀNH ở VIỆT NAM KHOÁ LUẬN TỐT NGHIỆP Dược sĩ ĐẠI HỌC KHOÁ200Ó-2005 ■ \ ■»ỉ ■ :/ U t4o / Người hướng dẫn : PGS - TS. TRẦN ĐỨC HẬU DS. ĐÀO THỊ KIM OANH Nơi thực hiện : Phòng thí nghiệm bộ môn Hoá dược Trường đại học dược Hà Nội Thòi gian thực hiện: 11/2004 - 5/2005 HÀ NỘI, THÁNG 5-2005 ;UUD LỜI CẢM ƠN Trước hết tôi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc nhất tới PGS - TS Trần Đức Hậu, Ds Đào Thị Kim Oanh, hai người thầy trực tiếp hướng dẫn, đã dành nhiều công sức giúp đỡ vổ truyền đạt những kinh nghiệm quý báu trong suốt quá trình nghiên cứu và hoàn thành khoá luận tốt nghiệp. Tôi cũng xin cảm ơn các thầy cô giáo, cán bộ kỹ thuật viên của bộ môn Hoá Dược - Trường Đại Học Dược Hà Nội đã nhiệt tình giúp đỡ tạo mọi điều kiện để tôi hoàn thành khoá luận. Trong quá trình thực hiện khoá luận này tôi đã nhận được sự hướng dẫn, giúp đỡ tận tình của các thầy cô ở các bộ môn Công Nghiệp Dược. Tôi xỉn chân thành cảm ơn. Cuối cùng, tôi vô cùng cảm ơn gia đình, bạn bè và người thân đã động viên và hết lòng giúp đỡ để tôi hoàn thành khoá luận này. Hà Nội, tháng 5 năm 2005 Nguyễn Anh Tuấn CHÚ GIẢI CHỮ VIẾT TẮT SR: Sốt rét p.falciparum: Plasmodium falciparum p.malaria: Plasmodium malaria p.vivax: Plasmodium vivax WHO: TỔ chức y tế thế giới C1F1': Công thức phân tử DHA: Dihydro artemisinin HPLC: Sắc ký lỏng hiệu năng cao TW1 : Trung ương 1 MỤC LỤC ĐẶT VẤN ĐỀ 1 Phần 1; TỔNG QUAN 3 1.1 Đại cương về aitesunat 3 1.1.1 Công thức 3 1.1.2 Phương pháp điều chế 3 1.1.3 Tính chất của artesunat 5 1.1.4 Tác dụng 5 1.1.5 Dược động học 5 1.1.6 Tác dụng không mong muốn 5 1.1.7 ơ iế phẩm 5 1.1.8 Chỉ định 6 1.1.9 Các phương pháp định lượng artesunat 6 1.2 Phương pháp HPLC 7 1.2.1 Nguyên tắc 7 1.2.2 Nguyên tắc cấu tạo của hệ thống sắc ký HPLC 7 1.2.3 Các thông số đặc trưng của quá trình sắc ký 9 1.2.4 Pha tĩnh trong HPLC 11 1.2.5 Pha động trong HPLC 12 1.2.6 Nguyên tắc lựa chọn pha tũih pha động 13 1.2.7 Detector 14 1 .2.8 Phương pháp định lượng, cách đánh giá pic và tính kết quả trong HPLC 15 1.2.9 Quy trình kỹ thuật định lượng aitesunat bằng HPLC 16 P hần 2 ĐÔÌ Tư;JNG - HOÁ CHẤT, THIẾT BỊ - NỘI DUNG VÀ PHUÍNG PHÁP NGHIÊN cú u 18 2.1 Đối tượng nghiên cứu 18 2.2 Phưoíng tiện, dụng cụ hoá chất 18 2.3 Nội dung và phương pháp nghiên cứu 19 2.4 Xử lý và đánh giá kết quả 19 P h ần 3 THỰC NGHIỆM VÀ KẾT QUẢ 20 3.1 Cải tiến phương pháp HPLC 20 3.2 Khảo sát, đánh giá phương pháp vừa cải tiến 20 3.2.1 Đánh giá tính thích hợp của hệ thống 20 3.2.2 Đánh giá tính tuyến tính của phương pháp 21 3.2.3 Đánh giá tính đúng của phương pháp 23 3.2.4 Đánh giá tính chính xác của phương pháp 24 3.2.5 Đánh giá tính đặc hiệu của phương pháp 25 3.3 Đánh giá chất lượng thuốc tiêm artesunat đang lưu hành ở Việt Nam 27 3.3.1 Đánh giá về độ đồng đều khối lượng 28 3.3.2 Đánh giá về hàm lượng 33 3.4 Kết quả và bàn luận 37 Phần 4 Kết luận và đề xuất 39 Tài liệu tham khảo 40 ĐẶT VẤN ĐỂ Sốt rét là một bệnh xã hội, dễ bị lây nhiễm, gây ra bởi sinh trùng sốt rét, ký sinh trùng này thuộc chi Plasmodium. Những loài gây bệnh cho người chủ yếu gồm: - Plasmodium falciparum - Plasmodium malariae - Plasmodium vivax Trong đó, tỷ lệ mắc bệnh do Plasmodium falciparum là 70%, do Plasmodium vivax là 20-30%, còn Plasmodium malariae chiếm tỷ lệ rất nhỏ, chỉ khoảng 1-2 %. Hiện nay ký sinh trùng sốt rét đã kháng lại hầu hết các loại thuốc quen thuộc: Quinin, Qoroquin, Quinacrin, Mefloquin, Làm cho việc điều tri sốt rét ngày càng trở nên khó khăn hơn [18]. Trong thòd gian mười năm trở lại đây artemisinin (hoạt chất chiết từ cây thanh hao hoa vàng) và các dẫn chất của nó được đưa vào điều trị cho kết quả rất tốt, đặc biệt là artesunat. Đây là thuốc cắt cơn sốt nhanh, ít bị tái phát hofn artemisinin, có tác dụng cả với chủng p.falciparum đã kháng cloroquin. Thuốc qua được hàng rào máu não, nên có tác dụng tốt trong điều trị sốt rét thể não. Nước ta hiện nay cũng đã tổng hợp được artesunat, và đang đưa vào sản xuất với qui mô lớn. Việc kiểm tra chất lượng chế phẩm artesunat là rất quan trọng, tuy nhiên trong thực tế việc định lượng aitesunat ở các cơ sở cho thấy còn nhiều điều bất cập, thường cho kết quả rất cao phụ thuộc người định lượng. Để xây dựng một phương pháp định lượng artesunat có tính đặc hiệu cao đồng thòd góp phần làm cơ sở xây dựng tiêu chuẩn Dược điển Việt Nam, trong khoá luận này, để rút ngắn thời gian phân tích, chúng tôi cải tiến phương pháp định lượng đã xây dựng trong khoá luận dược sỹ đại học của Nguyễn Thanh Tùng và tiến hành triển khai phưofng pháp HPLC để định lượng thuốc tiêm artesunat đang lưu hành ở Việt Nam với những mục tiêu sau: - Cải tiến quy trình định lượng artesunat bằng phương pháp HPLC ¡21J - Tiến hành khảo sát đánh giá quy trình định lượng artesunat bằng HPLC đã cải tiến. - Áp dụng quỵ trình định lượng đã cải tiến, để định lượng artesunat trong một số lô thuốc tiêm sản xuất ở Việt Nam, qua đó đánh giá chất lượng thuốc tiêm artesunat đang lưu hành ở Việt Nam trên hai mặt hàm lượng và độ đồng đêu khối lượng. Phần 1: TỔNG QUAN /. Tổng quan về artesunat 1.1 Đại cương về artesunat 1.1.1 Công thức. C H 3 CTPT: C19H28O8 ; 384,4222 TKH: (3R, 5aS, 6 R, 8 aS, 9R, lOS, 12S)-Decahydro-3,6,9-trimehtyl-3,12- epoxy-12H-pyrano[4,3-j] 1,2 -benzodioxepin- lO-ol, hydrogen succinat. 1.1.2 Phương pháp điều chế, Artesunat được bán tổng hợp từ nguyên liệu là artemisinin qua giai đoạn trung gian là dihydro artemisinin (DHA), Trên cơ sở phương pháp của các nhà khoa học Trung Quốc, D.L. Klayman, P.Brosi và cộng sự, trường Đại học dược Hà Nội đã bán tổng hợp được artesunat qua hai giai đoạn vói hiệu suất cao [16]. Aitemisinin được khử hóa nhóm lacton thành dihydro artemisinin bỏi natri borohydrid (NaBH 4 ) trong môi trường methanol và ở nhiệt độ 0-5°C. Sơ đồ phản ứng như sau: • Giai đoan 1: Kết quả thu được DHA ở hai dạng đồng phân là a và p. Giai đoạn 2: DHA được este hóa thành aitesunat khi tác dụng vói anhydrit succinic hoặc acid succinic với xúc tác là dimethylamino pyridin (DMAP) hoặc hỗn hợp của DMAP và dicyclohexyl carbodiimid (DCC) Sơ đồ phản ứng: DMAP COOH DMAP DDC C H 3 0 - C 0 -CH 2- -COOH Ngày nay, từ DHA ngưòd ta còn có thể bán tổng hợp ra nhiều chất khác có hoạt lực tác dụng tương tự như artesunat, đó là arteether (AE) và artemether (AM), bằng cách cho DHA tác dụng vơi ethanol hoặc methanol, xúc tác là acid Lewis, AE và AM tan tốt trong dầu và có hoạt tính chống sốt rét ngang với artesunat. Ngày nay ngưòi ta còn điều chế ra một dẫn chất mới, có hoạt lực cao trên ký sinh trùng sốt rét đó là: acid aitelinic. Chất này vừa có hiệu lực cao hơn artemisinin, AM, hơn nữa muối naphten của nó lại tan được trong nước nên có thể chế được cả thuốc tiêm, thuốc viên [5]. 1.1.3 Tính chất [4] Tinh thể không màu hay bột kết tinh màu trắng, không mùi, không vị, dễ tan trong ethanol, aceton, cloroíom, benzen, khó tan trong nước, kém bền vững trong môi trường acid hay kiềm. Dạng muối Na của nó dễ tan trong nước, do vậy có thể dùng để pha thuốc tiêm. Năng suất quay cực của artesunat: [a]o = (+10®) -(+14°). 1.1 A Tác dụng Diệt thể phân liệt trong máu của tất cả các chủng ký sinh trùng sốt rét, đặc biệt tốt với sốt rét thể não do p.íalcparum, không diệt thể giao bào, và không tác dụng trên giai đoạn ngoài hồng cầu, cắt cơn sốt nhanh[8 ]. 1.1.5 Dược đông học Aitesunat dùng theo đường uống được hấp thu từ 24-64%, thời gian bán thải ti/2=41 phút. Thuốc bị giảm hoạt tính do bị chuyển hóa qua gan, thuốc qua được rau thai nên tránh dùng thuốc cho phụ nữ có thai. Aitesunat thải trừ qua đường nước tiểu dưói dạng chuyển hoá là: Deoxy aitemisinin, dihydro deoxy artemisinin. 1.1.6 Tác dụng không mong muốn Nhẹ và thoảng qua như: rối loạn tiêu hoá, đau đầu, hoa mắt, chóng mặt. 1.1.7 Chế phẩm Hiện nay trên thị trưcmg Việt Nam có 12 loại chế phẩm artesunat, và ở ba dạng bào chế là: - Dạng viên nén. - Dạng bột để pha tiêm. - Dạng thuốc đạn. 1.1.8 Chỉ định Điều trị sốt rét do p.falciparum, p.malaria, p.vivax, kể cả p.íalciparum đã kháng thuốc khác. [...]... cho HPLC + Acetonitril: Dùng cho HPLC + Acid Phosphoric đặc RA + Nước cất tinh khiết + Một vài hoá chất khác 2.5 Nội dung và phương pháp nghiên cứu 2.3.1 Cải tiến quy trình kỹ thuật định lượng artesunat bằng phương pháp HPLC 2.3.2 Đánh giá phương pháp HPLC vừa cải tiến 2.3.3 Đánh giá chất lượng thuốc tiêm artesunat sản xuất ở Việt Nam về hai m ặt + Đánh giá độ đồng đều về khối lượng + Định lượng xác định. .. có mặt của acid succinic ảnh hưởng rất lớn đến đối vói kết quả định lượng theo phương pháp chuẩn độ bằng kiềm Các phưcfng pháp khác tính đặc hiệu cũng không cao, chính DHA cũng ảnh hưởng tới kết quả định lượng) Do vậy chúng tôi triển khai áp dụng phương pháp HPLC để định lượng artesunat 1.2 Phương pháp HPLC 1.2.1 Nguyên tắc HPLC là phương pháp phân tích sử dụng kỹ thuật tách các chất trong hỗn hợp dựa... Nhân xét:Các phương pháp định lượng Artesunat đang sử dụng ở nước ta, hoặc khó thực hiện (Phương pháp HPLC với detector điện hoá, phương pháp HPLC vói detector khúc xạ kế, phương pháp cực phổ, phương pháp phân tích phóng xạ miễn dịch), hoặc không đặc hiệu [4] (Sự có mặt của DHA ảnh hưởng rất lớn đến kết quả định lượng theo phương pháp đo quang phổ tử ngoại Sự có mặt của acid succinic ảnh hưởng rất lớn... Các phương pháp định lượng artesunat -Phương pháp đo quang phổ hấp thu vùng tử ngoại [1] Artesunat chỉ hấp thụ ánh sáng ở vùng tử ngoại có bước sóng ngắn Sau khi đun nóng trong môi trường kiềm, artesunat chuyển thành Q289 là sản phẩm cổ độ hấp thụ cực đại ở bước sóng 289 nm Do đó có thể định lượng artesunat trong phế phẩm và nguyên liệu bằng phương pháp đo độ hấp thụ ở bước sóng 289nm -Phương pháp HPLC. .. sản xuất sản phẩm này, nên để định lượng và đánh giá chất lượng thuốc tiêm aitesunat đang lưu hành ở Việt Nam, chúng tôi tiến hành nghiên cứu trên các lô thuốc tiêm artesunat mà chúng tôi đã thu thập được như sau: Lô thuốc sô' :1 Lô thuốc số :3 Sô l ô : 01.08.03 Sốlô: 01.12.02 Ngày sản xuất:12/09/03 Ngày sản xuất:10/12/02 Hạn dùng :_08/2006 Hạn dùng :_12/2005 Lô thuốc số :2 Lô thuốc số :4 Sốlô; 04.11.02... trên cơ sở này cho phép loại bỏ ảnh hưỏng của DHA và acid succinic trong quá trình định lượng artesunat với chương trình sắc ký vừa xây dựng, 3.3 Đánh giá chất lượng thuốc tiêm artesunat sản xuất ở Việt Nam trên hai mặt: Độ đồng đều về khối lượng và độ đồng đều về hàm lượng Thuốc tiêm aitesunat là thuốc xã hội không được bán, trong thời điểm hiện năy ở nước ta, chỉ còn xí nghiệp dược phẩm TW 1 là đang. .. trình bày ở bảng 5 cho thấy giá trị trung bình của tỷ lệ thu hồi lại là 100,02% nghĩa là nằm trong khoảng từ 98% -102% Như vậy phương pháp có độ đúng rất cao 3.2.5 Khảo sát tính đặc hiệu của phương pháp Đây là môt chỉ tiêu rất quan trọng trong các phương pháp định lượng artesunat, vì hầu hết các phương pháp định lượng aitesunat hiện đang áp dụng đều có tính đặc hiệu không cao, hàm lượng artesunat thu... 2% Kết quả độ chính xác của phương pháp ghi ở bảng 4 cho thấy vói các điều kiện sắc ký đã chọn, phương pháp đề xuất để định lượng artesunat có độ chính xác cao, khả năng lặp lại tốt, sai số tương đối của phương pháp rất nhỏ Như vậy phưcmg pháp là chính xác 3.2.4 Đánh giá tính đúng của phương pháp Pha dung dịch chuẩn; trong bình định mức 25ml cân chính xác khoảng 0 ,lg artesunat chuẩn hoà tan và thêm... k ế [32] - Phương pháp HPLC với detector điện hóa [28], [29] - Phương pháp đo kiềm Artesunat là ester của acid succinic, và dihydro artemisinin, nên trong phân tử còn một nhóm chức acid tự do, do đó người ta có thể định lượng trực tiếp nhóm chức này bằng NaOH 0,05% với chỉ thị phenolphtalein, hoặc định lượng trong môi trường khan [32], hay là cũng có thể định lượng artesunat bằng phương pháp chuẩn... lượng artesunat thu được từ các phương pháp đều cao Điều này có thể giải thích là trong quá trình tổng hợp artesunat có lẫn các tạp chất, trong đó chủ yếu là DHA và acid succinic, hai tạp này ảnh hưởng rất lớn đến kết quả định lượng Để khảo sát tính đặc hiệu của phương pháp chung tôi đã tiến hành định lượng artesunat khi có mặt đồng thời DHA và acid succinic: + Trong bình định mức 25 ml, cân chính xác