Định lượng cloramphenicol và palmatin trong thuốc tra mắt

B ộ Y TÊ TRƯỜNG ĐẠI HỌC D ược HÀ NỘI m TRẦN THỊ THU cú c ĐỊNH LƯỢNG CLORAMPHENICOL VÀ PALMATIN TRONG THUỐC TRA MẮT (KHOÁ LUẬN TỐT NGHỆP Dược sĩ KHOÁ 2000-2005) Người hướng dẫn Nơi thực hiện Thời gian thực hiện : DS. Nguyễn Đình Hiển : Bộ môn Hoá dược : 02/2005 - 05/2005 Hà Nội, 05 - 2005 Với lòng kính trọng và biết ơn sâu sắc, em xin bày tỏ lời cảm ơn tới: DS. Nguyễn Đình Hiển là người thầy đã tận tình hướng dẫn và chỉ bảo em trong suốt quá trình làm khoá luận. Em cũng xin chân thành cảm ơn các thầy cô giáo Bộ môn Hoá dược và tập thể cán bộ Thư viện đã tạo điều kiện thuận lọi, giúp đỡ em trong suốt quá trình học tập và hoàn thành khoá luận tốt nghiệp này. Xin cảm ơn các bạn đã giúp đỡ và động viên, khuyến khích tôi vê mặt tinh thần trong thời gian làm khoá luận. Hà Nội, ngày 25 tháng 05 năm 2005 Sinh viên Trần Thị Thu Cúc MỤC LỤC ĐẶT VẤN Đ Ể 1 PHẦN I: TỔNG QUAN 2 1.1. CLORAMPHENICOL ; 2 1.1.1. Nguồn gốc 2 1.1.2. Công thức cấu tạo 2 1.1.3. Tính chất 2 1.1.4. Các đặc điểm tác dụng 3 1.1.5. Chỉ định 4 1.1.6. Tác dụng không mong muốn 4 1.1.7. Dạng thuốc- Hàm ỉượng 4 1.1.8. Các phương pháp định lượng 5 1.2. PALMATIN ; 5 1.2.1. Nguồn gốc 5 1.2.2. Công thức cấu tạo 5 1.2.3. Tính chất 6 1.2.4. Tác dụng dược lý 7 1.2.5. Tác dụng trên lâm sàng 8 1.2.6. Các dạng thuốc- Hàm lượng 8 1.3. DUNG DỊCH CLORAMPHENICOL VÀ PALMATIN CLORID . 9 1.4. CÁC PHƯƠNG PHÁP ĐỊNH LƯỢNG 9 1.4.1. Phương pháp đo quang phổ hấp thụ tử ngoại- khả kiến 9 1.4.2. Phương pháp đo nitrit 12 PHẦN II: THỰC NGHIỆM VÀ KẾT QUẢ 13 2.1. NGUYÊN LIỆU - PHƯƠNG PHÁP 13 2.1.1. Hoá chất, thuốc thử, dụng cụ 13 2.1.2. Phương pháp nghiên cứu 13 2.2. KẾT QUẢ THỰC NGHIỆM VÀ NHẬN XÉT 14 2.2.1. Thực nghiệm thăm dò 14 2.2.2. Đánh giá kết quả thăm dò và lựa chọn phương pháp định lư ọtig ; 17 2.2.3. Định lượng cloramphenicol và palmatin clorid theo phương pháp đo phổ hấp thụ ở hai bước sóng 273nm và 278nm 18 2.2.4. Định lượng palmatin clorid trong dung dịch nghiên cứu bằng phương pháp đo u v ở bước sóng độc lập = 336 nm 30 PHẦN III: KẾT LUẬN VÀ ĐỂ XUẤT 33 3.1. KẾT LUẬN 33 3.2. ĐỂ XUẤT 33 TÀI LIỆU THAM KHẢO ĐẶT VẤN ĐỂ Nhiễm khuẩn mắt hiện vẫn là bệnh phổ biến ở nước ta do khí hậu nóng ẩm và môi trường thuận lợi cho vi khuẩn phát triển.Cloramphenicol là một kháng sinh hoạt phổ rộng được sử dụng để điều trị các bệnh này có hiệu quả. Đã có nhiều chế phẩm thuốc nhỏ mắt từ cloramphenicol trên thị trường cả ở dạng đơn hoạt chất và dạng phối hợp (với Dexamethason, Polymycin B,vv ) Palmatin clorid, một alcaloid được chiết xuất từ cây Hoàng đằng (Fibraurea tinctoria Menispermaceae) đã được dùng phổ biến ở những thập kỷ trước để chữa các bệnh về mắt. Nhưng hiện nay ít dùng do đã có các kháng sinh có hiệu lực cao hơn. Theo kinh nghiệm dân gian và thực nghiệm, palmatin có cả tác dụng diệt khuẩn và chống nấm, nên có thể kết hợp palmatin vào thuốc nhỏ mắt cloramphenicol nhằm tăng hiệu lực diệt vi khuẩn, và kìm hãm sự phát triển của nấm ở'vết thương, đồng thời kháng nấm bảo quản dung dịch. Dựa trên kết quả theo dõi về sự phát triển của nấm trong thuốc nhỏ mắt cloramphenicol không có palmatin clorid và có palmatin clorid ở các nồng độ khác nhau trong nhiều tháng, chúng tôi nhận thấy công thức phối hợp hai thành phần: Cloramphenicol: 0,4 g. Palmatin clorid : 0,3 g. Dung dịch đệm boric-borat vừa đủ lOOml. có ưu điểm dung dịch không bị nấm phát triển. Như vậy vai trò của palmatin clorid chống nấm bảo quản dung dịch có sự chú ý đặc biệt. Chúng tôi muốn đi sâu vào nghiên cứu khả năng này. Nhưng trước hết cần giải quyết vấn đề định lượng hai hoạt chất này cùng có trong một dung dịch. Đó là mục tiêu của đề tài này. PHẦN I: TỔNG QUAN 1.1. CLORAMPHENICOL 1.1.1. Nguồn gốc[3][ll] Là một kháng sinh hoạt phổ rộng được phát hiện đồng thời bởi hai nhóm nghiên cứu người Mỹ vào năm 1947, tìm thấy trong môi trường nuôi cấy chủng xạ khuẩn Streptomyces venezuelae. Vào năm 1949 cấu trúc hoá học của cloramphenicol được phân tích và tổng hợp toàn phần. Hiện nay kháng sinh này được sản xuất bằng tổng hợp hoá học thay bằng nuôi cấy vi sinh. 1.1.2. Công thức cấu tạo[ll][16] O H C1 N H - c - C H 1 ^ C1 H' ' 0 C H 2 O H O o N KLPT: 323,14CTPT: CiiHijCljNjOg Tên khoa học: 2,2- dicloro- N- [(lR,2R)-2- hydroxy-1-( hydroxymethyl)-2- (4- nitrophenyl)- ethyl ] acetamid. Hoặc: D(-)-threo-2-dicloroacetamido-1 -p-nitrophenyl-1,3-propadiol. 1.1.3. Tính chất[2][ll] > Lý tính: - Tinh thể hình kim hay bột kết tinh. Màu trắng hoặc hơi vàng. ít tan trong nước, dễ tan trong ethanol 96% và propylen glycol, khó tan trong ether. - Nhiệt độ nóng chảy 149- 153°c, pKa =5,5. - Năng suất quay cực thay đổi tuỳ theo dung môi: [a]20D=+19,5° (C=5%/ethanol). [a]^%= -25° (C=5%/ethylacetat). - Hấp thụ ƯV: Cho một cực đại hấp thụ ở khoảng 276 - 278nm. > Hoátính: - Nhóm nitrophenyl sau khi khử hoá bằng hỗn hợp Zn/H"^ tạo nhóm amin bậc 1 , cho tác dụng với HNO2 tạo muối diazoni sau đó ngưng tụ với p naphtol được phẩm màu nitơ có màu đỏ. - Các nguyên tử clo hữu cơ: Các nguyên tử clo hữu cơ trong nhóm dicloroacetyl không tạo tủa trực tiếp với AgN0 3 mà sau khi đun nóng với dung dịch KOH/ethanol sẽ giải phóng dạng ion C1‘ , dịch thu được sau khi acid hoá bằng HNO3 sẽ cho tủa trắng với dung dịch AgN0 3 . - Nhóm alcol bậc 1 (-CH2 OH): tạo este với acid hữu cơ. Một số este của Cloramphenicol với các acid béo đã được áp dụng điều trị: este palmitat và este stearat. 1.1.4. Các đặc điểm tác dụng[3][ll][12][15] > Phổ kháng khuẩn: - Rất rộng, bao gồm cả vi khuẩn Gr(+), Gr(-), hiếu khí và kị khí. - Các Gr(+): Steptococcus pneumoniae, Staphylococcus aureus, Corynebacterium, - Các Gr(-): Haemophylus influenza, Neisseria menigetidis, Salmonella, Proteus, Pseudomonas, Vibrio cholera, Yesinia pestis, Brucella, Shighella. - Các vi khuẩn kị khí: Bacteroides fragilis, Clostridium, Fusobacterium và có tác dụng cả với các vi khuẩn khác: Rickettsia, Chlamydia, Mycoplasma. - Cloramphenicol không có tác dụng chống nấm. > Cơ chế tác dụng: Cloramphenicol có tác dụng kìm khuẩn khi gắn vào tiểu phần 50s của ribosom, ức chế quá trình sinh tổng hợp protein của vi khuẩn. > Dược động học: - Hấp thu: Hấp thu tốt qua đường uống và tiêm, qua trực tràng kém. Nếu dùng tại chỗ ở mắt, clóramphenicol hấp thu vào thuỷ dịch, nồng độ cao hơn khi dùng thuốc mỡ tra nhiều lần trong ngày. - Phân bố: Rộng khắp các mô và dịch cơ thể. Liên kết với protein huyết tương khoảng 60%, qua được hàng rào nhau thai và sữa mẹ. - Chuyển hoá: ơ iủ yếu ở gan do quá trình khử hoá rồi glucurono - hợp. -Thải trừ : ơ iủ yếu qua nước tiểu ở dạng glucuronid không còn hoạt tính. Thời gian bán thải từ 1,5- 3giờ. 1.1.5. Chỉ định[3][15] - Chỉ dụng cloramphenicol để điều trị những bệnh nhiễm khuẩn nặng do các vi khuẩn nhạy cảm, do Rickettsia hay Chlamydia, khi các thuốc ít độc hơn không hiệu quả hoặc chống chỉ định. Ví dụ: bệnh thương hàn do Salmonella typhi, sốt đốm do Rickettsia, viêm màng não gây ra bởi các chủng N.menigetidis, H. influenza hoặc viêm phổi do Steptococcus pneumoniae, Tuy nhiên do cloramphenicol có độc tính cao nên không phải là sự lựa chọn hàng đầu để điều trị các bệnh này. - Cloramphenicol được dùng dạng dung dịch, mỡ, kem để điều trị nhiễm khuẩn tại chỗ ở mắt, da, điều trị nhiễm khuẩn âm đạo ở dạng viên đặt. 1.1.6. Tác dụng không mong muốn[3][15] - Khi sử dụng theo đường toàn thân liều cao và kéo dài có thể gây suy tuỷ, hội chứng xám ở trẻ sơ sinh hay các tác dụng không mong muốn khác: rối loạn tiêu hoá, dị ứng, viêm mạch, viêm dây thần kinh ngoại biên, - Khi sử dụng tại chỗ có thể gây dị ứng thuốc nhưng cũng ít xảy ra. 1.1.7. Dạng thuốc- Hàm lượng[3] - Viên nén và viên nang 0,25g cloramphenicol. - Lọ 1,0g cloramphenicol (succinat natri) pha tiêm. - Dung dịch thuốc nhỏ mắt (5ml, lOml) : 0,16%; 0,25%; 0,4% cloramphenicol. - Ống thuốc mỡ tra mắt 1 % cloramphenicol. - Viên đặt âm đạo 0,25g cloramphenicol. - Thuốc nhỏ tai 0,4% cloramphenicol. 1.1.8. Các phương pháp định lượng[2][ll][17] * Phương pháp đo phổ hấp thụ tử ngoại: ở bước sóng ^ a x = 278nm. * Phương pháp đo nitrit: Dựa trên nguyên tắc khử hoá nhóm nitrophenyl thành amin bậc 1 , sau đó định lưcmg bằng dung dịch NaNƠ2 0 ,1 M. * Các phương pháp khác: - Phưoỉng pháp xác định clo toàn phần. - Phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao. - Phưofng pháp ELISA. 1.2. PALMATIN 1.2.1. Nguồn gốc[l] Là một alcaloid chiết xuất từ thân hoặc rễ của cây Hoàng đằng (Pibraurea resica Pieưe hoặc Pibraurea tinctoria Lour) và nhiều cây khác. Chế phẩm dược dụng là palmatin clorid. 1.2.2. Công thức cấu tạo[16] H3CQ OCH, CTPT: C2 1 H2 2 O4 NCI KLPT: 387,89. Tên khoa học: 5,6 dihydro - 2,3,9,10 tetramethoxydibenzo [a,g] quinolizinium. 1.2.3. Tính chất[l][6][9] > Lý tính: - Chế phẩm palmatin clorid ở dạng muối kết tinh ngậm 3 phân tử H2 O: C2 1 H2 2 O4 NCI.3 H2 O - Dạng tinh thể hình kim, mềm nhẹ, màu vàng tươi, vị đắng. - Nhiệt độ nóng chảy 202-203OC. - Độ hoà tan: Tan trong khoảng lOOp nước, trong khoảng 20 p nước sôi, khó tan trong cồn, rất khó tan trong cloroform, không tan trong ether. Dung dịch 1 % 0 có phản ứng trung tính với quỳ. > Hoátính: - Hoá tính của nitơ: Nguyên tố N trong phân tử palmatin có bậc 4 nên dễ dàng có sự chuyển hoá giữa dạng muối và dạng base tuỳ theo pH môi trường: H3C0, HCk 'OH- (môi trường HCl)(môi trường kiềm) - Hoá tính của oxy: Trong môi trường kiềm, dưới ảnh hưởng của nhóm (OH‘) của N bậc 4 làm cho N trở lại bậc 3, palmatiiỊ hỗ biến thành chất mở vòng là palmatinal có màu đỏ. H3C0 H3C0' Palmatin (vàng) Hoá tính của mạch kép: Palmatinal (đỏ) [...]... xét: Kết quả định lượng mẫu 1: Hàm lượng cloramphenicol ổn định và sát với hàm lượng thực Kết quả định lượng mẫu 2: Hàm lượng cloramphenicol không ổn định và tăng trên 1 0 %, do ảnh hưởng của tetrahydropalmatin tạo thành sau khi khử hóa cloramphenicol bằng Zn/HCl Như vậy không áp dụng phép đo nitrit vào định lượng cloramphenicol trong mẫu có palmatin clorid b) Thăm dò khả năng định lượng palmatin clorỉd... ngoài da, mắt đỏ có màng, viêm tai có mủ 1.2.6 Các dạng thuốc- Hàm lượng[ 4] - Viên nén 5mg và 20mg - Viên trứng đặt âm đạo có thể kết hợp thêm MgS0 4 - Thuốc nhỏ mắt dung dịch’0,3-0,5% hoặc mỡ tra mắt 0,3-3% - Dung dịch palmatin clorid 10%, 13,6% trong glycerin rửa phụ khoa - Thuốc bột palmatin kết hợp với sa phi, phèn phi hoặc MgS04 sử dụng trong phụ khoa 1.3 DUNG DỊCH CLORAMPHENICOL VÀ PALMATIN. .. CLORID Thành phần: Cloramphenicol 0,4g Palmatin clorid 0,3g- Acidboric l,lg Natri borat 0,2g Natri clorid 0,2g Nước cất vừa đủ lOOml Palmatin clorid được thêm vào dung dịch cloramphenicol trong hệ đệm để tăng hoạt lực diệt vi khuẩn và palmatin có tác dụng chống nấm thông thường phát triển trong các dung dịch thuốc Dự kiến các phương pháp định lượng: Từ các tính chất của cloramphenicol và palmatin clorid... cloramphenicol trong dung dịch có palmatin clorid do cản trở của tetrahydropalmatin - Phương pháp quang phổ tử ngoại: Hình 3: Phổ hấp thụ tử ngoại của cloramphenicol và palmatin c]orid V \ 'V , ■ ' ở bước sóng cực đại 336nm của palmatin, cloramphenicol hấp thụ ánh sáng không đáng kể, nên có thể định lượng palmatin clorid ở bước sóng này Với cloramphenicol trong vùng cực đại hấp thụ của chất này thì palmatin. .. phương pháp định lượng nitrit phải được tiến hành ở nhiệt độ thấp (lO^^C-lS^C) Thường dùng dung dịch NaNƠ 2 để định lượng, và thêm KBr làm chất xúc tác Chuẩn lại dung dịch NaNƠ 2 bằng chất chuẩn gốc acid sulíanilic PHẦN II: THỰC NGHIỆM VÀ KÊT QUẢ 2.1 NGUYÊN LIỆU - PHƯƠNG PHÁP 2.1.1 Hoá chất, thuốc thử, dụng cụ > Hoá chất, thuốc thử: - Cloramphenicol hàm lượng 98-102% và palmatin clorid chuẩn hàm lượng 99-101%... Với palmatin clorid: Thăm dò phương pháp quang phổ tử ngoại - Bước 2: Lựa chọn phương pháp định lượng phù hợp Dựa trên kết quả thăm dò, đánh giá khả năng áp dụng phương pháp thích hợp vào định lượng không chiết tách 2 hoạt chất - Bước 3: Tiến hành định lượng cloramphenicol và palmatin clorid theo phương pháp đã chọn 2.2 KẾT QUẢ THỰC NGHIỆM VÀ NHẬN XÉT 2.2.1 Thực nghiệm thăm dò a) Thăm dò xác định. .. tròn là 641 và 620 Như vậy bằng thực nghiệm đã xác định được độ hấp thụ riêng của cloramphenicol ở 273nm là 291, ở 278nm là 297 và của palmatin clorid ở 273nm là641, ở 278nm là 620 > Khảo sát tính chính xác của phương pháp: Tiến hành khảo sát tính chính xác của phương pháp bằng cách định lượng mẫu dung dịch có nồng độ xác định cloramphenicol và palmatin clorid theo công thức bào chế thuốc nhỏ mắt như ở... hưcmg tới độ hấp thụ của dung dịch định lượng > Khảo sát tính đúng của phương pháp: Tính đúng của phương pháp được xác định bằng phương pháp thêm chuẩn: Thêm một lượng chính xác cloramphenicol và palmatin clorid vào mẫu thử đã xác định hàm lượng sao cho nồng độ dung dịch mới thu được vẫn nằm trong khoảng tuyến tính đã khảo sát của cả hai chất Sau đó tiến hành định lượng theo phương pháp đã nêu ở trên...H3C0 [H] H 3C 0 [0 ] (Palmatin) ( dl.Tetrahydropalmatin) - Hoá tính của nhóm methoxy (-OCH3): Do hoá tính của nhóm methoxy trong công thức nên palmatin có thể kết hợp với aceton hay cloroform tạo phức chất > Các phương pháp định lượng: - Phương pháp đo acid trong môi trường khan: Trong môi trường acid acetic khan, định lượng palmatin clorid bằng dung dịch acid pecloric 0,1M,... clorid ở bước sóng 336 nm là 610 * Định lưcmg palmatin clorid trong dung dịch: Tiến hành như ở mục khảo sát tính chính xác của phương pháp định lượng ờ hai bước 2 sóng Đo độ hấp thụ E của dung dịch thu được ở bước sóng 336 nm Hàm lượng palmatin clorid được tính theo công thức: %Pal = 400.^ 610.w Paì xlOO% Trong đó: %Pal Hàm lượng palmatin clorid lĩipai Khối lượng cân palmatin clorid E Độ hấp thụ của . quả định lượng mẫu 1: Hàm lượng cloramphenicol ổn định và sát với hàm lượng thực. Kết quả định lượng mẫu 2: Hàm lượng cloramphenicol không ổn định và tăng trên 1 0 %, do ảnh hưởng của tetrahydropalmatin. thăm dò và lựa chọn phương pháp định lư ọtig ; 17 2.2.3. Định lượng cloramphenicol và palmatin clorid theo phương pháp đo phổ hấp thụ ở hai bước sóng 273nm và 278nm 18 2.2.4. Định lượng palmatin. 0,25%; 0,4% cloramphenicol. - Ống thuốc mỡ tra mắt 1 % cloramphenicol. - Viên đặt âm đạo 0,25g cloramphenicol. - Thuốc nhỏ tai 0,4% cloramphenicol. 1.1.8. Các phương pháp định lượng[ 2][ll][17] *