Định lượng cloramphenicol và palmatin trong thuốc tra mắt

Định lượng cloramphenicol và palmatin clorid theo phương pháp đo phổ hấp thụ ở hai bước sóng 273nm và 278nm .... Định lượng palmatin clorid trong dung dịch nghiên cứu bằng phương pháp đo

B ộ Y TÊ TRƯỜNG ĐẠI HỌC D ư ợ c HÀ NỘI

m

TRẦN THỊ THU c ú c

ĐỊNH LƯỢNG CLORAMPHENICOL VÀ PALMATIN

TRONG THUỐC TRA MẮT

(KHOÁ LUẬN TỐT NGHỆP Dược sĩ KHOÁ 2000-2005)

Người hướng dẫn Nơi thực hiện Thời gian thực hiện

: DS Nguyễn Đình Hiển : Bộ môn Hoá dược : 02/2005 - 05/2005

Hà Nội, 05 - 2005

Với lòng kính trọng và biết ơn sâu sắc, em xin bày tỏ lời cảm ơn tới:

DS Nguyễn Đình Hiển

là người thầy đã tận tình hướng dẫn và chỉ bảo em trong suốt quá trình làm khoá luận.

Em cũng xin chân thành cảm ơn các thầy cô giáo Bộ môn Hoá dược

và tập th ể cán bộ Thư viện đã tạo điều kiện thuận lọi, giúp đỡ em trong suốt quá trình học tập và hoàn thành khoá luận tốt nghiệp này.

Xin cảm ơn các bạn đã giúp đỡ và động viên, khuyến khích tôi vê mặt tinh thần trong thời gian làm khoá luận.

Hà Nội, ngày 25 tháng 05 năm 2005

Sinh viên

Trần Thị Thu Cúc

MỤC LỤC

ĐẶT VẤN Đ Ể 1

PHẦN I: TỔNG QUAN 2

1.1 CLORAMPHENICOL ; 2

1.1.1 Nguồn gốc 2

1.1.2 Công thức cấu tạo 2

1.1.3 Tính chất 2

1.1.4 Các đặc điểm tác dụng 3

1.1.5 Chỉ định 4

1.1.6 Tác dụng không mong m uốn 4

1.1.7 Dạng thuốc- Hàm ỉượng 4

1.1.8 Các phương pháp định lượng 5

1.2 PALMATIN ; 5

1.2.1 Nguồn gốc 5

1.2.2 Công thức cấu tạo 5

1.2.3 Tính chất 6

1.2.4 Tác dụng dược lý 7

1.2.5 Tác dụng trên lâm sàng 8

1.2.6 Các dạng thuốc- Hàm lượng 8

1.3 DUNG DỊCH CLORAMPHENICOL VÀ PALMATIN CLORID 9

1.4 CÁC PHƯƠNG PHÁP ĐỊNH LƯỢNG 9

1.4.1 Phương pháp đo quang phổ hấp thụ tử ngoại- khả kiến 9

1.4.2 Phương pháp đo nitrit 12

PHẦN II: THỰC NGHIỆM VÀ KẾT QUẢ 13

2.1 NGUYÊN LIỆU - PHƯƠNG PHÁP 13

2.1.1 Hoá chất, thuốc thử, dụng c ụ 13

2.1.2 Phương pháp nghiên cứu 13

2.2 KẾT QUẢ THỰC NGHIỆM VÀ NHẬN XÉT 14

2.2.1 Thực nghiệm thăm d ò 14

2.2.2 Đánh giá kết quả thăm dò và lựa chọn phương pháp định lư ọ tig ; 17

2.2.3 Định lượng cloramphenicol và palmatin clorid theo phương pháp đo phổ hấp thụ ở hai bước sóng 273nm và 278nm 18

2.2.4 Định lượng palmatin clorid trong dung dịch nghiên cứu bằng phương pháp đo u v ở bước sóng độc lập = 336 nm 30

PHẦN III: KẾT LUẬN VÀ ĐỂ XUẤT 33

3.1 KẾT LUẬN 33

3.2 ĐỂ XUẤT 33 TÀI LIỆU THAM KHẢO

ĐẶT VẤN ĐỂNhiễm khuẩn mắt hiện vẫn là bệnh phổ biến ở nước ta do khí hậu nóng

ẩm và môi trường thuận lợi cho vi khuẩn phát triển.Cloramphenicol là một kháng sinh hoạt phổ rộng được sử dụng để điều trị các bệnh này có hiệu quả

Đã có nhiều chế phẩm thuốc nhỏ mắt từ cloramphenicol trên thị trường cả ở dạng đơn hoạt chất và dạng phối hợp (với Dexamethason, Polymycin B,vv )

Palmatin clorid, một alcaloid được chiết xuất từ cây Hoàng đằng (Fibraurea tinctoria Menispermaceae) đã được dùng phổ biến ở những thập kỷ trước để chữa các bệnh về mắt Nhưng hiện nay ít dùng do đã có các kháng sinh có hiệu lực cao hơn Theo kinh nghiệm dân gian và thực nghiệm, palmatin có cả tác dụng diệt khuẩn và chống nấm, nên có thể kết hợp palmatin vào thuốc nhỏ mắt cloramphenicol nhằm tăng hiệu lực diệt vi khuẩn, và kìm hãm sự phát triển của nấm ở'vết thương, đồng thời kháng nấm bảo quản dung dịch

Dựa trên kết quả theo dõi về sự phát triển của nấm trong thuốc nhỏ mắt cloramphenicol không có palmatin clorid và có palmatin clorid ở các nồng độ khác nhau trong nhiều tháng, chúng tôi nhận thấy công thức phối hợp hai thành phần:

Cloramphenicol: 0,4 g

Palmatin clorid : 0,3 g

Dung dịch đệm boric-borat vừa đủ lOOml

có ưu điểm dung dịch không bị nấm phát triển Như vậy vai trò của palmatin clorid chống nấm bảo quản dung dịch có sự chú ý đặc biệt Chúng tôi muốn đi sâu vào nghiên cứu khả năng này Nhưng trước hết cần giải quyết vấn đề định lượng hai hoạt chất này cùng có trong một dung dịch Đó là mục tiêu của đề tài này

Vào năm 1949 cấu trúc hoá học của cloramphenicol được phân tích và tổng hợp toàn phần Hiện nay kháng sinh này được sản xuất bằng tổng hợp hoá học thay bằng nuôi cấy vi sinh.

1.1.2 Công thức cấu tạo[ll][16]

2,2- dicloro- N- [(lR,2R)-2- hydroxy-1-( hydroxymethyl)-2- (4-

nitrophenyl)- ethyl ] acetamid

Hoặc:

D(-)-threo-2-dicloroacetamido-1 -p-nitrophenyl-1,3-propadiol

1.1.3 Tính chất[2][ll]

> Lý tính:

- Tinh thể hình kim hay bột kết tinh Màu trắng hoặc hơi vàng ít tan trong

nước, dễ tan trong ethanol 96% và propylen glycol, khó tan trong ether

- Nhiệt độ nóng chảy 149- 153°c, pKa =5,5

- Năng suất quay cực thay đổi tuỳ theo dung môi:

[a]20D=+19,5° (C=5%/ethanol).

- Hấp thụ ƯV: Cho một cực đại hấp thụ ở khoảng 276 - 278nm.

> Hoátính:

- Nhóm nitrophenyl sau khi khử hoá bằng hỗn hợp Zn/H"^ tạo nhóm

naphtol được phẩm màu nitơ có màu đỏ

- Các nguyên tử clo hữu cơ: Các nguyên tử clo hữu cơ trong nhóm

dung dịch KOH/ethanol sẽ giải phóng dạng ion C1‘ , dịch thu được sau khi

Cloramphenicol với các acid béo đã được áp dụng điều trị: este palmitat và este stearat

- Các Gr(-): Haemophylus influenza, Neisseria menigetidis, Salmonella, Proteus, Pseudomonas, Vibrio cholera, Yesinia pestis, Brucella, Shighella

- Các vi khuẩn kị khí: Bacteroides fragilis, Clostridium, Fusobacterium

và có tác dụng cả với các vi khuẩn khác: Rickettsia, Chlamydia, Mycoplasma

- Cloramphenicol không có tác dụng chống nấm

> Cơ chế tác dụng:

Cloramphenicol có tác dụng kìm khuẩn khi gắn vào tiểu phần 50s của ribosom, ức chế quá trình sinh tổng hợp protein của vi khuẩn.

> Dược động học:

- Hấp thu:

Hấp thu tốt qua đường uống và tiêm, qua trực tràng kém Nếu dùng tại chỗ ở mắt, clóramphenicol hấp thu vào thuỷ dịch, nồng độ cao hơn khi dùng thuốc mỡ tra nhiều lần trong ngày

1.1.5 Chỉ định[3][15]

- Chỉ dụng cloramphenicol để điều trị những bệnh nhiễm khuẩn nặng do các vi khuẩn nhạy cảm, do Rickettsia hay Chlamydia, khi các thuốc ít độc hơn không hiệu quả hoặc chống chỉ định Ví dụ: bệnh thương hàn do Salmonella typhi, sốt đốm do Rickettsia, viêm màng não gây ra bởi các chủng N.menigetidis, H influenza hoặc viêm phổi do Steptococcus pneumoniae,

Tuy nhiên do cloramphenicol có độc tính cao nên không phải là sự lựa chọn hàng đầu để điều trị các bệnh này

- Cloramphenicol được dùng dạng dung dịch, mỡ, kem để điều trị

nhiễm khuẩn tại chỗ ở mắt, da, điều trị nhiễm khuẩn âm đạo ở dạng viên đặt.

1.1.6 Tác dụng không mong muốn[3][15]

- Khi sử dụng theo đường toàn thân liều cao và kéo dài có thể gây suy tuỷ, hội chứng xám ở trẻ sơ sinh hay các tác dụng không mong muốn khác: rối loạn tiêu hoá, dị ứng, viêm mạch, viêm dây thần kinh ngoại biên,

- Khi sử dụng tại chỗ có thể gây dị ứng thuốc nhưng cũng ít xảy ra

1.1.7 Dạng thuốc- Hàm lượng[3]

- Viên nén và viên nang 0,25g cloramphenicol.

- Lọ 1,0g cloramphenicol (succinat natri) pha tiêm

- Dung dịch thuốc nhỏ mắt (5ml, lOml) : 0,16%; 0,25%; 0,4% cloramphenicol

- Viên đặt âm đạo 0,25g cloramphenicol

- Thuốc nhỏ tai 0,4% cloramphenicol

1.1.8 Các phương pháp định lượng[2][ll][17]

* Phương pháp đo phổ hấp thụ tử ngoại: ở bước sóng ^ a x = 278nm

* Phương pháp đo nitrit: Dựa trên nguyên tắc khử hoá nhóm nitrophenyl

* Các phương pháp khác:

- Phưoỉng pháp xác định clo toàn phần

- Phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao

1.2.2 Công thức cấu tạo[16]

1.2.3 Tính chất[l][6][9]

> Lý tính:

C2 1H2 2O4NCI.3H2O

- Dạng tinh thể hình kim, mềm nhẹ, màu vàng tươi, vị đắng

- Nhiệt độ nóng chảy 202-203OC

- Độ hoà tan: Tan trong khoảng lOOp nước, trong khoảng 20 p nước sôi, khó tan trong cồn, rất khó tan trong cloroform, không tan trong ether Dung

> Hoátính:

- Hoá tính của nitơ:

Nguyên tố N trong phân tử palmatin có bậc 4 nên dễ dàng có sự chuyển hoá giữa dạng muối và dạng base tuỳ theo pH môi trường:

H3C0,

HCk 'OH-

(môi trường HCl)(môi trường kiềm)

- Hoá tính của oxy:

Trong môi trường kiềm, dưới ảnh hưởng của nhóm (OH‘) của N bậc 4 làm cho N trở lại bậc 3, palmatiiỊ hỗ biến thành chất mở vòng là palmatinal

có màu đỏ

H3C0

H3C0'

Palmatin (vàng) Hoá tính của mạch kép:

Palmatinal (đỏ)

H3C0 [H]

[ 0 ]

H 3C 0

- Hoá tính của nhóm methoxy (-OCH3):

Do hoá tính của nhóm methoxy trong công thức nên palmatin có thể kết hợp với aceton hay cloroform tạo phức chất

> Các phương pháp định lượng:

- Phương pháp đo acid trong môi trường khan:

Trong môi trường acid acetic khan, định lượng palmatin clorid bằng dung dịch acid pecloric 0,1M, chỉ thị tím tinh thể hoặc đo điện thế cặp điện cực Ag/AgCl - thuỷ tinh

- Phưoỉng pháp đo quang phổ hấp thụ tử ngoại khả kiến: Đo ở các bước sóng hấp thụ cực đại của palmatin clorid

1.2.4 Tác dụng dược lý[4][13]

> Tác dụng kháng khuẩn:

Palmatin có tác dụng ức chế sự phát triển của Streptococcus hemolyticus

và Staphylococcus aureus ở nồng độ 0,05% và 0,1%, còn với các loại vi khuẩn khác (lỵ, thương hàn, ) thì không thấy kết quả rõ rệt Tác dụng ức chế vi khuẩn kém các loại kháng sinh thông thường

> Với nấm:

Palmatin có tác dụng kìm hãm nấm tốt, ở nồng độ 0,3% có khả năng ức chế hoàn toàn các loại nấm âm đạo nhưng lại ít tác dụng với Candida albicans

y Tác dụng trên hệ thần kinh trung ương và hệ tim mạch:

- Thí nghiệm trên chuột tiêm xoang bụng có tác dụng ức chế hoạt động

tự nhiên và có phản xạ của chuột nhưng không làm giảm trương lực cơ

- Thí nghiệm trên thỏ, palmatin tiêm tĩnh mạch có tác dụng hạ huyết áp kéo dài

1.2.5 Tác dụng trên lâm sàng[4]

> Chữa nhiễm khuẩn:

Dung dịch 0,3-0,5% hoặc thuốc mỡ 0,3-3% palmatin clorid dùng để chữa viêm kết mạc, viêm màng tiếp hợp, viêm mí mắt, đau mắt hột Ngoài ra palmatin clorid cũng được dùng để điều trị tiêu chảy, kiết lỵ

> Điều trị viêm cổ tử cung và các bệnh phụ khoa:

Palmatin clorid được bào chế dưới dạng viên đặt âm đạo, thuốc bột hay dung dịch rửa để điều trị nhiễm khuẩn, nhiễm nấm âm đạo hay trùng roi âm đạo hoặc viêm cổ tử cung cho kết quả tốt

Hiện nay palmatin ít được sử dụng ở các dạng bào chế mà chủ yếu dùng

để điều chế d-1 tetrahyhropalmatin dùng làm thuốc an thần, giảm đau Ngoài

ra dược liệu Hoàng đằng còn được sử dụng kết hợp với các vị thuốc dược liệu khác dùng để chữa các chứng viêm đường tiết niệu, viêm âm đạo, viêm gan virus, bạch đới, đái ra máu, kiết lỵ, tiêu chảy, sốt rét, lở ngứa ngoài da, mắt đỏ

có màng, viêm tai có mủ

1.2.6 Các dạng thuốc- Hàm lượng[4]

- Viên nén 5mg và 20mg

- Viên trứng đặt âm đạo có thể kết hợp thêm MgS0 4

- Thuốc nhỏ mắt dung dịch’ 0,3-0,5% hoặc mỡ tra mắt 0,3-3%

- Dung dịch palmatin clorid 10%, 13,6% trong glycerin rửa phụ khoa

- Thuốc bột palmatin kết hợp với sa phi, phèn phi hoặc MgS04 sử dụng trong phụ khoa

1.3 DUNG DỊCH CLORAMPHENICOL VÀ PALMATIN CLORID

Nước cất vừa đủ lOOml

Palmatin clorid được thêm vào dung dịch cloramphenicol trong hệ đệm

để tăng hoạt lực diệt vi khuẩn và palmatin có tác dụng chống nấm thông thường phát triển trong các dung dịch thuốc

Dự kiến các phương pháp định lượng:

Từ các tính chất của cloramphenicol và palmatin clorid chúng tôi dự định tiến hành nghiên cứu định lượng theo hai phương pháp: Đo quang phổ tử ngoại khả kiếii và phưcíng pháp đo nitrit

1.4 CÁC PHƯƠNG PHÁP ĐỊNH LƯỢNG

1.4.1 Phương pháp đo quang phổ hấp thụ tử ngoại- khả kiến[7][9]

> Nguyên tắc:

Chiếu một chùm sáng đơn sắc có bước sóng X và cưòỉng độ lo qua dung

qua dung dịch có cường độ

It-Khi đó đại lượng E = Ig— gọi là độ hấp thụ của dung dịch Mối liênquan giữa độ hấp thụ và nồng độ dung dịch trong khoảng nồng độ nhất định tuân theo định luật Buger- Lambert- Beer :

Phương pháp đo quang phổ hấp thụ tử ngoại - khả kiến được ứng dụng

để định tính, thử tinh khiết và định lượng các hợp chất có hấp thụ tử ngoại- khả kiến như : các hợp chất thơm, hợp chất có liên kết chưa bão hoà, hợp chất

m àu, Định lượng một chất bằng cách đo độ hấp thụ của dung dịch chất đó ở

hấp thụ) Khi đó: C = ^ E

Để xác định hệ số k, đo độ hấp thụ Ec của các dung dịch chất chuẩn có

nồng độ đã biết rồi tính hệ số k theo công thức : k = —

.Ec-/ c

Khi nồng độ được tính bằng % và bế dày lớp dung dịch đo tính

bằng cm thì k được gọi là hệ số hấp thụ riêng , kí hiệu E(l% , Icm) hay E I

> Một số kỹ thuật định lượng:

* Định lượng đơn c h ấ t:

Xác định nồng độ dung dịch đo bằng các phương pháp:

1- Phương pháp đo phổ trực tiếp :

Đo độ hấp thụ E của dung dịch, tính nồng độ c dựa vào E 1 cho trước:

Đo độ hấp thụ Ex của dung dịch cần tìm nồng độ Cỵ, sau đó thêm một

khối lượng chất tan được dung dịch mới có nồng độ Cx+ Cọ Đo độ hấp thụ

E ’x của dung dịch mới Ta có :

4- Phương pháp đường chuẩn :

lập đồ thị E - c Đo độ hấp thụ Ex của dung dịch cần xác định và tìm Cv dựa vào đường chuẩn

* Định lượng hỗn hợp các chất không tương tác hoá học, cố phổ hấp thụ chồng lấn :

Dựa trên tính chất cộng tính của độ hấp thụ ánh sáng của các chất tan có trong một dung dịch :

E ị = E]^ + E2 + + Ejj.

Trong đó:

,Cn-Tiến hành n phép đo độ hấp thụ E của dung dịch ở những bước sóng

Đối với dung dịch cloramphenicol - palmatin clorid thì n = 2

1.4.2 Phương pháp đo nitrit[2]

bị phân hủy theo nhiệt độ nên phương pháp định lượng nitrit phải được tiến

chuẩn gốc acid sulíanilic

PHẦN II: THỰC NGHIỆM VÀ KÊT QUẢ

2.1 NGUYÊN LIỆU - PHƯƠNG PHÁP

2.1.1 Hoá chất, thuốc thử, dụng cụ

> Hoá chất, thuốc thử:

- Cloramphenicol hàm lượng 98-102% và palmatin clorid chuẩn hàm

lượng 99-101% do bộ môn Hoá dược - trường đại học Dược cung cấp

- Acid boric, natri borat, natri clorid, kali bromid dược dụng

- Nước cất

> Thiết bị, dụng cụ:

- Máy quang phổ UV- VIS LAMBDA EZ210

- Máy đo pH và điện cực chuẩn độ đo thế, máy khuấy từ

- Cân phân tích độ chính xác 0,1 mg

- Các dụng cụ thuỷ tinh chính xác: buret, pipet, bình định mức,

2.1.2 Phương pháp nghiên cứu

Chúng tôi dự kiến xây dựng phương pháp nghiên cứu định lượng cloramphenicol và palmatin clorid trong dung dịch theo các bước sau:

- Bước 1: Thăm dò phương pháp định lượng từng hoạt chất

A.VỚi cloramphenicol:

Thăm dò 2 phương pháp: - Quang phổ tử ngoại

- Đo nitrit

Thăm dò phương pháp quang phổ tử ngoại

- Bước 2: Lựa chọn phương pháp định lượng phù hợp.

Dựa trên kết quả thăm dò, đánh giá khả năng áp dụng phương pháp

- Bước 3: Tiến hành định lượng cloramphenicol và palmatin clorid theo

phương pháp đã chọn

2.2 KẾT QUẢ THỰC NGHIỆM VÀ NHẬN XÉT

2.2.1 Thực nghiệm thăm dò

a) Thăm dò xác định phương pháp định lượng cho cloramphenicol

> Phương pháp đo ph ổ tử ngoại:

Tiến hành vẽ phổ hấp thụ tử ngoại của cloramphenicol như sau[2]:

Cân chính xác khoảng lOOmg cloramphenicol Hoà tan bằng nước cất và cho vào bình định mức 500ml, thêm nước cất vừa đủ tới vạch, lắc đều Lấy chính xác 5ml dung dịch vừa thu được cho vào bình định mức lOOml, thêm nước cất vừa đủ tới vạch, lắc đều Vẽ phổ hấp thụ của dung dịch thu được trong khoảng bước sóng từ 200nm đến 400nm với cu vét dày Icm, mẫu trắng

> Phương pháp đo nitrit:

Tiến hành phép đo nitrit định lượng cloramphenicol trong hai mẫu dung dịch có và không có palmatin clorid để khảo sát ảnh hưởng của palmatin clorid tới kết quả định lượng cloramphenicol

Bố trí mẫu như sau:

palmatin clorid

Mẫu 2: lOOml dung dịch thành phần như ở mục 1.3

+ Tiến hành định lượng cloramphenicol với hai mẫu:

Lấy chính xác 75 ml dung dịch cho vào cốc dung tích 200ml Cô cách

đều, để khoảng 2giờ cho kẽm tan hết Thêm 40 ml dung dịch HCl 10% và Ig

0,1M với chỉ thị đo điện thế với cặp điện cực Calomen- Platin Ghi kết quả V

m l

+ Hàm lượng cloramphenicol được tính theo công thức:

%C1= V-0.0323.1,02 ^4 ^

Kết quả thu được ở bảng 1.

Bảns 1: Thăm dò phương pháp đo nitrit.

(ml)

Hàmlượng(%)

Khối lượng cân(g)

Thểtích

(ml)

Hàmlượng(%)cloram Palmatin