Nghiên cứu định lượng riboflavin natri phosphat natrazolin nitrat clorpheniramin maleat pyridoxin hydroclorid và dexphanthenol trong thuốc nhỏ mắt naphacollyre b complex bằng sắc ký lỏng hiệu năng cao

BỘ GIÁ O DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC BỘ Y TÊ Dược HÀ NỘI PHAN T H Ị THÙY CH I NGHIÊN CỨU ĐỊNH LƯỢNG RIBOFLAVIN NATRI PHOSPHAT, NAPHAZOLIN NITRAT, CLORPHENIRAMIN MALEAT, PYRIDOXIN HYDROCLORID VÀ DEXPANTHENOL TRONG THUỐC NHỎ MẮT NAPHACOLLYRE B-COMPLEX Bằ NG SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO LUẬN VĂN THẠC s ĩ Dược HỌC CHUYÊN NGÀNH: KIỂM n g h iệ m THUỐC - ĐỘC CHẤT MÃ SỐ: 60 73 15 Cán hướng dẫn khoa học: PGS TS Thái Phan Quỳnh Như CH HÀ N Ộ I-2 0 LỜ I CẢM Ơ N Tơi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới PGS TS Thái Phan Quỳnh Như đ ã tận tình hướng dẫn, bảo tạo điều kiện thuận lợi cho tơi suốt q trình học tập nghiên cứu Tôi xin chân thành cảm ơn Ban giám đốc Viện Kiểm nghiệm, tập th ể cán phòng H óa lý - Viện Kiểm nghiệm đ ã quan tâm, tạo điều kiện thuận lợi đ ể hoàn thành nhiệm vụ học tập nghiên cứu thời gian qua ]ũn trân trọng cảm ơn Ban Giám hiệu nhà trường, cảm ơn thầy Phòng Đ tạo sau đại học, Bộ mơn Phân tích Bộ môn khác Trường Đ ại học Dược H nội đ ã tạo điều kiện tốt cho thời gian học tập trường Cuối xin cảm ơn gia đình bạn bè đ ã ln động viên, khích lệ giúp đỡ tơi tận tình Phan Thị Thùy Chỉ MỤC LỤC Trang NHỮNG CHỮ V IẾ T TẮT DANH MỤC CÁC BẢNG DANH MỤC CÁC HÌNH ĐẶT VÂN ĐỂ Phần TỔNG QUAN 1.1 Vài nét riboflavin natri phosphat, naphazolin nừrat, clorpheniramin maleat, pyridoxin hydrodorid dexpanthenol 1.2 Một s ố phương pháp áp dụng đ ể định lượng riboflavin natrỉ phosphat, naphazolin nitrat, clorphenỉramin maleat, pyridoxin hydroclorid dexpanthenoỉ Phần ĐỐI TƯỢNG, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP 22 NGHIÊN CỨU 2.1 Đối tượng nghiên cứu 22 2.2 Nội dung phương pháp nghiên cứu 22 2.2.1 Lựa chọn dung môi để pha mẫu 22 2.2.2 Xây dựng phương pháp HPLC để phân tích định tính 23 định lượng B2, NP, CM, B5 B6 thuốc nhỏ mắt Naphacollyre B-complex 2.2.3 Phương pháp xử lý đánh giá kết 25 Phần THỰC N G H IỆM , K ÊT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 27 3.1 Lựa chọn dung mồi đ ể pha mẫu 3.2 Xây dựng phương pháp định tính định lượng B2, NP, CM, B5 B6 thuốc nhỏ mắt Naphacollyre B-complex phương pháp HPLC 3.2.1 Dụng cụ - Hoá chất - Mẫu thử 3.2.2 Khảo sát chọn điều kiện sắc ký 3.2.3 Xây dựng đánh giá phưcfng pháp định tính, định lượng 27 29 33 B2, NP, CM, B5 B6 thuốc nhỏ mắt Naphacollyre B-complex 49 3 Bàn luận 3.4 Áp dụng phương pháp xây dựng đ ể định lượng B2, NP, ị CM, B5 B6 s ố lô thuốc nhỏ mắt Naphacollyre B-complex KẾT LUẬN VÀ ĐỂ XUẤT 53 TÀI LIỆU TH AM KH ẢO 55 PHU LUC NHŨNG CHỮ V IẾT TẮT BP : Dược điển Anh B2 : Riboflavin natri phosphat B5 : Dexpanthenol B6 : Pyridoxin hydroclorid DĐVNIII : Dược điển Việt Nam, lần xuất thứ - 2002 CM : Clorpheniramin maleat HPLC : Sắc ký lỏng hiệu cao JP : Dược điển Nhật NP : Naphazolin nitrat SKS : Số kiểm soát USP : Dược điển Mỹ DANH MỤC CÁC BẢNG STT Ký hiệu Nội dung T rang Bảng 3.1 Hệ số match so sánh phổ chuẩn thử 34 Bảng 3.2 Kết khảo sát tính thích hựp hệ thống 39 Bảng 3.3 Kết khảo sát khoảng tuyến tính B2, NP, CM, B5 B6 40 Bảng 3.4 Kết khảo sát độ lặp lại phương pháp định lượng B2, NP, CM 45 Bảng 3.5 Kết khảo sát độ lặp lại phucfng pháp định lượng B5 B6 46 Bảng 3.6 Kết khảo sát độ phương pháp định lượng B5 B6 47 Bảng 3.7 Kết khảo sát độ phưcmg pháp định lượng B2, NP, CM 48 Bảng 3.8 Một số kết khảo sát áp dụng phương pháp 52 định lượng B2, NP, CM, B5 B6 DANH MỤC CÁC HÌNH STT Ký hiệu Nội dung T rang Hình 1.1 Giản đồ sắc ký hai chất 12 Hình 3.1 Phổ hấp thụ UV-VIS pha động B2 30 Hình 3.2 Phổ hấp thụ UV-VIS pha động NP 30 Hình 3.3 Phổ hấp thụ UV-VIS pha động CM 31 Hình 3.4 Phổ hấp thụ UV-VIS pha động B6 31 Hình 3.5 Phổ hấp thụ UV-VIS pha động B5 31 Hình 3.6 Sắc ký đồ dung dịch chuẩn B2, NP CM 35 Hình 3.7 Sắc ký đồ dung dịch thử B2, NP CM 35 Hình 3.8 Sắc ký đồ dung dịch chuẩn B6 B5 36 10 Hình 3.9 Sắc ký đồ dung dịch thử B6 B5 36 11 Hình 3.10 So sánh phổ UV-VIS B2 mẫu chuẩn thử 37 12 Hình 3.11 So sánh phổ UV-VIS CM mẫu chuẩn thử 37 13 Hình 3.12 So sánh phổ UV-VIS NP mẫu chuẩn th 37 14 Hình 3.13 So sánh phổ UV-VIS B6 mẫu chuẩn thử 38 15 Hình 3.14 So sánh phổ UV-VIS B5 mẫu chuẩn th 38 16 Hình 3.15 Kết khảo sát khoảng tuyến tính vitamin B2 41 17 Hình 3.16 Kết khảo sát khoảng tuyến tính naphazolin nitrat 41 18 Hình 3.17 Kết khảo sát khoảng tuyến tính clorpheniramin maleat 42 19 Hình 3.18 Kết khảo sát khoảng tuyến tính vitamin B5 42 20 Hình 3.19 Kết khảo sát khoảng tuyến tính vitamin B6 43 ĐẶT VÂN ĐỂ Trong năm gần môi trường sống ngày bị ô nhiễm nên bệnh mắt ngày gia tăng Các loại thuốc nhỏ mắt đơn thành phần khơng đáp ứng nhu cầu điều trị chuyên khoa mắt Các nhà bào chế dược phẩm cho đời nhiều chế phẩm thuốc nhỏ mắt kết hợp nhiều dược chất khác để đáp ứng nhu cầu phòng vàchữa bệnh khác mắt Các biệt dược thuốc nhỏ mắt đa thành phần sản xuất, lưu hành sử dụng nhiều nước ta như: Virondo Xí nghiệp dược phẩm trung ưcfng II; Pinkle Hanil Pharmaceutical Corporation; Tobirob Ahn Gook Pharmaceutical Corporation; Kodomo V.Rohto Rohto Pharmaceutical Corporation v.v Tuỳ theo mục đích điều trị mà nhà sản xuất phối hợp thành phần hoạt chất đa dạng công thức bào chế Công ty cổ phần dược phẩm Nam Hà nghiên cứu sản xuất chế phẩm thuốc nhỏ mắt Naphacollyre B-complex với công thức bào chế sau: Naphazolin nitrat (NP) 25mg Clorpheniramin maleat (CM) 20mg Riboflavin (dạng natri phosphat) (B2) lOmg Pyridoxin hydroclorid (B6) 50mg Dexpanthenol (B5) lOOmg Nước cất tá dược vừa đủ lOOml Biệt dược sản phẩm dựa phối hợp tác dụng dược lý chất co mạch, giảm viêm, chống dị ứng, giảm ngứa, lành vết loét, bảo vệ niêm mạc mắt Thuốc định nhức mỏi mắt, mờ mắt, xung huyết kết mạc, ngứa mắt, dùng để dưỡng mắt, phòng bệnh mắt bơi lội bụi, mồ hôi lọt vào mắt Thuốc đa thành phần sản phẩm mới, khơng có Dược điển hành nên chưa có phương pháp để kiểm nghiệm đánh giá chất lượng Để giúp cho sở tiêu chuẩn hố sản phẩm, chúng tơi tiến hành “Nghiên cứu định tính định lượng riboflavin natri phosphat, naphazolin nitrat, clorpheniramin maỉeat, pyridoxin hydroclorid dexpanthenol thuốc nhỏ mắt Naphacollyre B-complex phương pháp HPLC ” nhằm đánh giá chất lượng thuốc sản xuất lưu thông phân phối - Mục tiêu cơng trình là: Xây dựng phương pháp định tính định lượng B2, NP, CM, B6 B5 thuốc nhỏ mắt Naphacollyre B-complex đủ tin cậy, nhanh chóng, thuận tiện nhằm góp phần nâng cao khả kiểm tra chất lượng thuốc trình sản xuất lưu hành - Cơng trình thực nội dung sau: + Xây dựng chương trình sắc ký thích hợp cho phép tách định lượng năm thành phần + Đánh giá phưofng pháp xây dựng +Áp dụng phương pháp xây dựng để định lượng số lô sản phẩm PL 1.1.4.sắc ký đồ dung dịch chuẩn B2 (29,44 |Lig/ml), NP (80,78 |0.g/ml), CM (64,19|ig/ml) SAMPLE ìamole Name: Samole Tvoe: t/ial: INFORMATION iivcauired Bv: 5ate Acauired: a,cq Method Set: nachacolvB ttinh 16 Unknown 97 System naphacolvB 11/29/2005 3:57:58 PM >rocessina Method: B2naphaclor VWIn Ch1 Channel Name: =roc Chnl Descr.: PDA 264.0 nm 20.00 ul Sample Set Name: niection Volume; 60.0 Minutes 1.C0 Mnutes ■■■■ I Peak Resu - Name B2 Naphazolln RT Area Height Amount Units 3.514 241B224 517584 I 6.216 1525241 161455 clorpheniramin 9.522 151629Ũ 111047 ■ ■ PL l.l.s s ắ c ký đồ dung dịch chuẩn B2 (36,80 |Lig/ml), NP (100,98 p-g/ml), CM (80,24^g/ml) - Nam e B2 í Naphazolin RT Area Height Amount Units 2988694 645541 186Ũ9Ũ9 201080 clorpheniramin 1815717 132897 ■ P eak R e s u te ■ ■ PL 1.2.Sắc ký đồ dung dịch thử thuốc nhỏ mắt Naphacollyre B-complex SAMPLE INFORMATION ĩample N a m e ; ! ^ naphacolvB Sample Type: Vial: niection niection Volume: ^un Time: Sample Set Name: f t c a m r s d B.Y> )ate Acquired: ftcq Method Set: )ate Processed: Processing Method Channel Name: ^roc Chnl Descr.: Unknown ul 20.00 6Ũ.Ũ Minutes System 11/4 /2 0 1:14 :3 PM naphacolyB 12^9/20 2:20:39 PM B2NPCM VWIn Chi PDA 264.0 nm Peak R esults Name RT Area Height Amount Units Riboflavin natri phosphat 3.520 1520503 331448 Naphazolin nitrat clorpheniramin maleat 6.250 837289 96677 9.551 892893 68737 PL PHỤ LỤC : Một số sắc ký đồ hệ sắc ký định lượng B6 , B5 Một số sắc ký đồ khảo sát khoảng tuyến tính 2.1.1.Sắc ký đồ lấy bước sóng 290nm cho B6 2.1.1.1 Sắc ký đồ dung dịch chuẩn B6 (40 |ig/ml): SAMPLE Samole Tvoe: v\a\: nÌRction #: niection Volume: ĩun Time: Samole Set Name: INFORMATION rhuan n 4ml Unknown in )ate Acauired: Acq Method Set: 60.0 Minutes >rocessina Method: Channel Name: ^roc Chnl Descr.: 20.00 ul , 2.00 4.00 6.ŨŨ 8.0D 10.DD 1 12.00 System 11/ 15 / 0 12 :3 :3 PM napha B B 5 1 11^ / 0 :0 :13 PM b6 VWIn Ch1 PDA 290.0 nm ■ 14.00 I -r- 16.00 M n u tes Peak R e su lts • Name RT B6 ,072 J I Area Height ■ I Amount Units 1282685 210204 ■ ■ ■ PL 2.1.1.2 Sắc ký đồ dung dịch chuẩn B6 (80 |j,g/ml): P e a k R e s u lts - Name B6 RT Area Height 2609419 412796 Amount Units PL 2.1.1.3 Sắc ký đồ dung dịch chuẩn B6 (120 Ịig/ml): Peak R esults - Name B6 RT Area Height Amount Units 4.034 3812857 585853 PL 10 2.1.1.4 Sắc ký đồ dung dịch chuẩn B6 (160 |0,g/ml): Peak Results • Name B6 Height RT 4.029 51789D8 791945 Anount Units PL 11 2.1.1.5 Sắc ký đồ dung dịch chuẩn B6 (200 |ig/ml): Sample Tvoe: Vial: Acauired R v )ate Acauired: Acq, Method Set: PmrfissRH^rocessina Method: Channel Name: ’ roc, Chnl Descr.: Unknown 14 20.00 ul 60.0 Minutes niection Volume: íun Time: S a m D le Set Name: Svstfim 11fl5 /2 0 1:5 :2 PM napha B B 5 1 Ii/i7/?nn?5 9-n3-i4PM VWIn Ch1 PDA 290.0 nm Auto-Scaled Chromatogram H 00 0.80- Ếì Ũ.6Ũ- 0,40 D.2D- AI—^ 4.0D D.00' 2.ÕŨ 8.ŨD Mnutes 1Ũ.ŨŨ B6 RT Area Height DŨ 12 T I ' 14.00 Amount Units 4.005 64193Ũ8 9722Ũ2 1■ ■ I 16.DO P eak R esu lts - Name ■ 6.DD ■ ■ PL 12 2.1.2.Sắc ký đồ lấy bước sóng 210nm cho B5 2.1.2.1 Sắc ký đồ dung dịch chuẩn B5 (92,8|j,g/ml): SAMPLE Sample Name: Sample Type: Vial: Injection #: niection Volume: ^un Time: Sample Set Name: chuan 0.4ml Unknown m ul 20.00 6Ũ.Ũ Minutes INFORMATION Acquired Bv: )ate Acquired: Acq Method Set: ?ate Prgcesssĩt; Processing Method: :hannel Name: Proc.ChnI.Descr.: System 11/15 /2 0 12 :3 :3 PM napha B6B5 1 11/17/2ŨŨ5 2:43:49 PM VWIn Ch1 PDA 210.Ũ nm PL 13 2.1.2.2 Sắc ký đồ dung dịch chuẩn B5 (185,6 |j.g/ml): SAMPLE INFORMATION Sample Name: Sample Type: ựial: chuan 0.8ml Unknown Acquired By: Date Acquired: Acq Method Set: niection t, 11 Pale Processed; niection Volume: ^un Time: (Sample Set Name: ul Processing Method: Channel Name: ^roc Chnl Descr.: 20.00 6Ũ.Ũ Minutes Peak R e su lts Name B5 RT Area 16.062 989879 Height Amount Units 42143 System 11^ / 0 1:0 :4 PM napha B B 5 1 11^ / 0 2:43:49 PM b5 Wvin Ch1 PDA 21D.Ũ nm PL 14 2.1.2.3 Sắc ký đồ dung dịch chuẩn B5 (278,4 |Lig/ml): SAMPLE Samole Tvoe: Vial: niection Volume: ?un Time: Samole Set Name: INFORMATION Svsiftm Date Acauired: 11/ 15 / 0 1:19 :2 PM Acq Method Set: n a p h a B B 15 11 Date Processed: 11/17/20 ?-43-4q PM ^rocessina Method: b5 Channel Name: Wvin CM Pmc Chnl Descr.: PDA 210,0 nm Unknown 12 20.00 ul 60.0 Minutes Peak R esults Name B5 RT Area 16.037 1458311 Height Amount Units 59893 PL 15 2.1.2.4 Sắc ký đồ dung dịch chuẩn B5 (371,2 |Lig/ml): SAMPLE chuan 1.6 ml Unknown Sample Name: Sample Type: Vial: Acquired By: Date Acquired: Acq Method Set: Date Processed: Processing Method: Channel Name: ^roc Chnl Descr.: nisction fc niection Volume: ^un Time: Sample Set Name: INFORMATION ul 20.00 60.0 Minutes Peak R esu lts Name B5 RT 15.998 Area Height Amount Units 1989962 81331 System 11^ / 0 1:3 :3 PM napha B B 5 1 1in7ffiQQS2;43:4SI b5 VWIn Chi PDA 21Ũ.0 nm PL 16 2.1.2.5 Sắc ký đồ dung dịch chuẩn B5 (464,0 Peak R esults Name B5 RT Area Height Amount Units 15.965 2465053 99364 |L ig /m l): PL 17 2.2.sắc ký đồ dung dịch thử thuốc nhỏ mắt Naphacollyre B-complex 2.2.1 Sắc ký đồ lấy bước sóng 290 nm cho B6 : SAMPLE ìamcle Tvoe: niection Volume; ?un Time: Samole Set Name: in 20.00 ul 60.0 Minutes Peak R esults - Name Svstfim 3ate Acauired: 1 /22C0Ũ5 12:0 5:36 PM Acq, Method Set: B6B5 5ate Prncessfirl19/19/?nns:in:i-iRPM ^rocessino Method: Channel Name: Wvin Ch1 ^roc Chnl Descr.: PDA 290.0 nm Unknown v\a\: i INFORMATION B6 RT Area ■ ■ Height Amount Units 4.22Ũ 3354688 524119 ■ ■ PL 18 2.2.2 Sắc ký đồ lấy bước sóng 210 nm cho B5: SAMPLE Samole Name: Samole Tvoe: Vial: naohacollv Đ Unknown in niection Volume: ?un Time: INFORMATION Acauired Bv: )ale Acauired: ftcq Method Set: 20.00 ul ’ ro cessin a Method: Channel Name: ^roc.Chnl.D escr.: 60.0 Minutes Samole Set Name: Peak R e s u lts N am e B5 RT Area 16.499 1098371 Height Amount Units 47036 System 11/ 2 / 0 12 :0 :3 PM B6B5 ^ ^ 0 :39 :52 PM B5 VWIn Ch3 PDA 10 nm ... định tính, định lượng 27 29 33 B2 , NP, CM, B5 B6 thuốc nhỏ mắt Naphacollyre B- complex 49 3 B n luận 3.4 Áp dụng phương pháp xây dựng đ ể định lượng B2 , NP, ị CM, B5 B6 s ố lô thuốc nhỏ mắt Naphacollyre. .. hành tiến hành Nghiên cứu định tính định lượng riboflavin natri phosphat, naphazolin nitrat, clorpheniramin maleat, pyridoxin hydroclorid dexpanthenol thuốc nhỏ mắt Naphacollyre B- complex phương... Hà nghiên cứu sản xuất chế phẩm thuốc nhỏ mắt Naphacollyre B- complex với công thức b o chế sau: Naphazolin nitrat (NP) 25mg Clorpheniramin maleat (CM) 20mg Riboflavin (dạng natri phosphat) (B2 )