Nghiên cứu định lượng paracetamol và ibuprophene trong thuốc đa thành phần

Các phưoíng pháp đinh lương:- Phương pháp chuẩn độ nitrit [11][12]: thuỷ phân Paracetamol trong môi trường acid dung dịch H Q 1 0% và nhiệt độ tạo thành amin thơm bậc một, rồi chuẩn đ

B Ộ Y T Ế TRƯỜNG ĐẠI HỌC Dược HÀ NỘI

NGUYỄN THÀNH ĐẠT

NGHIÊN CỨU ĐịNH LƯỢNG

PARACETAMOL VÀ IBUPROPHENE TRONG THUỐC ĐA THẰNH PHẦN

( KHOÁ LUẬN TỐT NGHIỆP Dược s ĩ KHOÁ 1997-2002)

Người hướng dẫn: TS THÁI PHAN QUỲNH NHƯ

TS THÁI DUY THÌN

Nơi thực hiện: Phòng Hoá Lý I - Viện Kiểm nghiệm

Bộ môn Hoá Dược

Thời gian thực hiện: 9/2001 đến 5/2002

H à N ộ i 5 - 2 0 0 2 \ 4 , j o ^ : ì 4

,£ Ờ 5 i ũ f x

Khoá luận này được thực hiện và hoàn thành tại phòng Hoá Lý I - Viện Kiểm nghiệm - Bộ Y tế và Bộ môn Hoá Dược - Trường Đại học Dược Hà Nội Trong quá trình thực hiện khoá luận tốt nghiệp, tôi đã nhận được sự hướng dẫn tận tình của các thầy cô hướng dẫn, các giảng viên, cán bộ của bộ môn Hoá Dược và các cán bộ của phòng Hoá Lý I - Viện Kiểm nghiệm - Bộ Y tế.

Trước tiên tôi xin chân thành cảm ơn sự hướng dẫn tận tình của

TS Thái Phan Quỳnh Như - Trưởng phòng Hoá Lý ỉ - Viện Kiểm nghiệm và

TS Thái Duy Thìn - Bộ môn Hoá Dược - Trường Đại học Dược Hà Nội đã giúp tôi cố những tài liệu và kỹ năng cần thiết trong quá trình thực hiện khoá luận Đồng thời tôi cũng xin cảm ơn sự giúp đỡ của các thầy cô, các kỹ thuật viên khác trong bộ môn Hoá Dược và các cán bộ phòng Hoá Lý I - Viện Kiểm nghiệm đã giúp tôi hoàn thành khoá luận của mình trong thời gian ngắn n h ấ t.

Tôi cũng xin chân thành cảm ơn Thư viện trường Đại học Dược Hà Nội

đã cung cấp những tài liệu Hên quan, phòng Thí nghiệm trung tâm trường Đại học Dược đã giúp xử lý một số mẫu mà điều kiện máy móc ở phòng thí nghiệm

Bộ môn Hoá Dược chưa cho phép thực hiện được.

SVNguụển Thành Dọt

MỤC LỤC

Trang

Đặt vấn đề 1.

Phần 1: Tổng quan 2.

1.1 Paracetamol 2

1.2 Ibuproíene 4

1.3 Phương pháp đo quang phổ hấp thụ tử ngoại 5

1.3.1 Khái quát về phương pháp 5

1.3.2 Một số kỹ thuật định lượng 6

1.4 Phương pháp HPLC 7

1.4.1 Khái quát phương pháp HPLC 7

1.4.2 Các đại lượng đặc trưng trong kỹ thuật HPLC 7

1.4.3 Hệ thống HPLC 11

1.4.4 Pha tĩnh trong HPLC 11

1.4.5 Pha động trong HPLC 13

1.4.6 Cách đánh giá pic 15

1.4.7 Cách tính kết quả 16

Phần 2: Nội dung, đối tượng và phương pháp nghiên cứu 17.

2.1 Nội dung nghiên cứu 17

2.2 Đối tượng nghiên cứu 17

2.2.1 Các hoá chất thí nghiệm 17

2.2.2 Viên nén Alaxan 17

2.3 Phương pháp nghiên cứu 17

Phần 3: Thực nghiệm và kết quả 18.

3.1 Thiết bị, hoá chất, dung môi 18

3.2 Định lượng Paracetamol và Ibuproíene trong hỗn hợp thuốc theo tiêu chuẩn cơ sở 18

3.2.1 Định lượng Paracetamol trong hỗn hợp bằng phương pháp đo quang phổ hấp thụ tử ngoại: 18

3.2.2 Định lượng Ibuproíene trong hỗn hợp bằng phương pháp chuẩn độ acid - base: 25

3.3 Định lượng đồng thời hỗn hợp bằng phưoíng pháp HPLC 29

3.3.1 Điều kiện sắc ký: 29

3.3.2 Khảo sát độ tuyến tính: 31

3.3.3 Khảo sát độ lặp lại: 34

3.3.4 Khảo sát độ đúng của phương pháp 36

3.4 So sánh hai phương pháp 37

3.4.1 So sánh về kết quả định lượng của hai phương pháp 37

3.4.2 So sánh về độ chính xác của hai phương pháp 37

3.4.3 So sánh về hai giá trị trung bình 38

3.4.4 Đánh giá ưu nhược điểm của phương pháp: 38

3.4.5 Lựa chọn phương pháp: 40

Phần 4: Kết luận và đê xuất 41.

Tài liêu tham khảo 43.

ĐẶT VẤN ĐỂ

Công tác đảm bảo chất lượng thuốc đang là một trong những vấn đề hàng đầu của ngành Dược Hiện nay, việc nghiên cứu và ứng dụng các phưoỉng pháp khác nhau để định lượng các thành phần trong các công thức thuốc ở dạng phối hợp đã và đang được quan tâm tới nhiều hơn

Vói tác dụng hạ nhiệt nhanh, giảm đau mạnh và đặc biệt là tương đối an toàn cho người bệnh, Paracetamol là một dược chất có mặt rất nhiều trong các biệt dược có tác dụng hạ nhiệt giảm đau ở dạng phối hợp Việc phối hợp các thành phần trong công thức rất đa dạng và phức tạp, thông thường phối hợp từ

2 đến 3 thành phần trong đó có Paracetamol Một trong những dạng thông dụng trên thị trường hiện nay là hỗn hợp Paracetamol và Ibuprofen ( ví dụ: viên nén Alaxan của xí nghiệp United Pharma Việt Nam, viên nén Pi-Antalvic của Công ty Dược vật tư y tế Trà Vinh, viên nén MK protamol của công ty cổ phần Dược phẩm Mê Kông )

Tuy được lưu hành và sử dụng phổ biến nhưng cho đến nay, dược điển Việt Nam chưa có chuyên luận cho các dạng bào chế này Việc định lượng các thành phần trong dạng phối hợp nêu trên chỉ được tiến hành theo các tiêu chuẩn cơ sở, trong đó các phưoỉng pháp được đề cập đến chưa có sự thống nhất Trong dược điển các nước khác cũng chỉ có Dược điển Mỹ [17] có chuyên luận về các dạng thuốc phối hợp, nhưng với hỗn hợp chứa Paracetamol

và Ibuprofen thì Dược điển Mỹ vẫn chưa đề cập tới

Mục tiêu của khoá luận này là nghiên cứu một số phương pháp định lượng Paracetamol và Ibuprofen có trong thành phần một dạng thuốc với mục đích làm phong phú thêm và đánh giá các phương pháp cho các cơ sở lựa chọn

áp dụng Đồng thời mong được góp phần xây dựng các tiêu chuẩn chất lượng của ngành cũng như của Quốc gia cho các dạng thuốc có thành phần tưoỉng tự

P H Ầ N l

TỔNG QUAN

Trong khoá luận này, chúng tôi sử dụng các phương pháp định lượng đo quang phổ hấp thụ tử ngoại, phưoỉng pháp chuẩn độ acid - base, và phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao để định lượng Paracetamol và Ibuprofen trong hỗn hợp thuốc Vì vậy, trong phần này, tôi xin tổng quan một số nét về hai chất nghiến cứu là Paracetamol và Ibuprofen đồng thòi về hai phương pháp định lượng là phương pháp đo quang phổ hấp thụ tử ngoại và phương pháp sắc

ký lỏng hiệu năng cao ( HPLC)

- Cho phản ứng của - OH phenol tự do: vói cho màu lam tím

- Dễ bị thuỷ phân do chức amid không bền

• Cống dung: có tác dụng hạ nhiệt, giảm đau tốt Đây là một thuốc tương đối an toàn do có ít tác dụng không mong muốn

Các phưoíng pháp đinh lương:

- Phương pháp chuẩn độ nitrit [11][12]: thuỷ phân Paracetamol trong môi

trường acid ( dung dịch H Q 1 0% ) và nhiệt độ tạo thành amin thơm bậc một, rồi chuẩn độ bằng dung dịch natri nitrit trong môi trường acid tạo hợp chất diazoni ( phản ứng diazo h o á )

- Phương pháp đo quang [12]: dựa vào khả năng hấp thụ tử ngoại của phân

tử Paracetamol trong methanol có cực đại hấp thụ tại 245nm và trong môi trường kiềm có cực đại hấp thụ tại 257nm

- Phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao (HPLC) [3] [6]: sử dụng chương trình sắc ký pha đảo đẳng dòng với cột Lichrosorb RP18 (250 X 4mm; lOịLim), detector u v phát hiện ở bước sóng 257nm, dung môi pha động là hỗn hợp m ethanol: nước (50 : 50 ), tốc độ dòng Iml/phút

- Định lượng Nitơ bằng phương pháp Kendal [16]; phương pháp này dựa

trê n sự p h â n h u ỷ c á c p h â n tử hữ u cơ c ó ch ứ a n itơ k h i đ u n v ớ i H2SO 4 đ ặ c

vói sự có mặt của kali hay natrisuníat, Khi đó nitơ chuyển thành NH3, kết

hợ p v ớ i H 2SO 4 tạo th à n h (^ 4 )2 8 0 4 T h ê m N a O H v à o h ỗ n h ợ p p h ản ứ ng

r ồ i cấ t k é o N H 3 g iả i p h ó n g ra b ằ n g h ơ i n ư ớ c v à o d u n g d ịc h c h u ẩ n H2SO 4

O.IN, chuẩn độ acid dư bằng dung dịch NaOH 0,1N

- Định lượng theo phương pháp đo Cerỉ [2] [13] [15]: trong dung dịch acid

có mặt một chất khử, Ceri IV chuyển thành Ceri III, phát hiện điểm kết thúc bằng íeroin, phức chất sắt của 0-phenatrolin Phức sắt II có màu đỏ, phức sắt III có màu xanh Đến điểm tương đương, lượng Ceri IV thừa oxy hoá phức sắt II thành sắt III và chỉ thị sẽ chuyển màu

(C,2H8N2)3Fe j - e- - >

- Tan ít trong nước, tan trong hầu hết các dung môi hữu cơ.

• Cổng dung: Ibuprofen có tác dụng giảm đau, hạ sốt, chống viêm

• Các phương pháp đinh lương:

- Phương pháp chuẩn độ acid - base [8][13][15][16]: hoà Ibuprofen vào

trong ethanol 96° đã trung tính hoá trước với chỉ thị phenolphtalein Chuẩn độ bằng dung dịch natri hydroxyd 0,1N với chỉ thị là phenolphtalein đến màu hồng nhạt bền vững

- Phương pháp HPLC [17]: sử dụng chương trình sắc ký pha đảo đẳng

dòng với cột Lichrosorb RP18 ( 250 X 4,6mm; lOịxm ), detector tử ngoại phát hiện ở bước sóng 254nm, với dung môi pha động là hỗn hợp acid cloroacetic trong nước ; acetonitril (4 0 : 60)

1.3 PHƯƠNG PHÁP ĐO QUANG PHỔ HẤP THU TỬ NGOAI [4][17 1.3.1 Khái quát về phương pháp:

• Nguvẽn tác: Chiếu một chùm tia sáng đơn sắc có bước sóng X và cường độ

I q qua dung dịch đồng nhất có nồng độ c , bề dày lớp dung dịch là / Khi đi

qua dung dịch, một phần ánh sáng bị hấp thụ, một phần bị phản xạ, phần còn lại ( / ) đi qua dung dịch Sự liên quan giữa các đại lượng được biểu thị qua phương trình sau:

\ 1

l o g ^ = l o g Y = k C l = E

Trong đó: - k: hệ số hấp thụ - C: nồng độ dung dịch đo

- T = IHg : độ truyền qua - £■: độ hấp thụ.

Độ hấp thụ E có giá trị lớn nhất khi đo ở bước sóng hấp thụ cực đại Định luật Lambert - Beer cho phép xác định nồng độ của các dung dịch hấp thụ bức xạ điện tử bằng cách đo độ hấp thụ:

c = JL E k.lDựa vào định luật Lambert - Beer cho phép chúng ta định lượng được các chất có cấu tạo đặc biệt (ví dụ : hợp chất thơm, hợp chất có liên kết chưa bão hoà, các chất có màu ) bằng cách đo độ hấp thụ của dung dịch ở một

bước sóng xác định thường là ở bước sóng có hấp thụ cực đại ( X max ) Ngoài

ra, phương pháp này còn được dùng để định tính và thử tinh khiết các chất trên

Để tính hệ số hấp thụ k, ta đo độ hấp thụ của các dung dịch có nồng độ

đã biết rồi tính theo công thức:

Nếu nồng độ được tính bằng molA và chiều dày lớp dung dịch đo bằng

cm, thì hệ số đó được gọi là độ hấp thụ phân tử gam và được ký hiệu là 8

Nếu nồng độ được biểu thị bằng số gam trong lOOml ( nồng độ% ) và chiều dày lớp dung dịch bằng 1 cm thì hệ số đó được gọi là độ hấp thụ riêng

và được ký hiệu là E (1%, Icm) hay eỊ

1.3.2 Một sô kỹ thuật định lượng:

• Dưa vào hê số hấp thu riêng: đo độ hấp thụ E của dung dịch thử tại cực đạihấp thụ Nồng độ c của dung dịch thử được tính dựa vào eỊ đã biết trước

E

E = E \.l.C => c = ^ ( v ớ i l = \ c m )

• Phương pháp so sánh: đo độ hấp thụ Ex, Ec của dung dịch thử được pha từ

mẫu thử có nồng độ C x ( chưa b iế t) và dung dịch chuẩn được pha từ chất chuẩn có nồng độ Cc ( đã biết)

Hình 1: Ví dụ một đường chuẩn

1.4.1 Khái quát phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao

Sắc ký lỏng hiệu năng cao ( HPLC ) là phương pháp phân tích hoá lý dùng để phân tách các thành phần của một hỗn hợp dựa vào ái lực khác nhau của các chất khác nhau với hai pha luôn tiếp xúc và không hoà tan nhau Trong quá trình sắc ký luôn xảy ra quá trình cân bằng động về sự phân bố của chất tan vào pha tĩnh và pha động khi pha động luôn luôn chảy qua cột với một tốc độ nhất định

Các chất cần phân tách trong dung dịch của hỗn hợp khi được đưa vào cột sẽ được hấp phụ hoặc liên kết với pha tĩnh tuỳ thuộc vào bản chất của cột

và kiểu sắc ký áp dụng Dung môi pha động được bơm vào cột sắc ký dưói áp suất cao Các chất tan sẽ di chuyển qua cột với tốc độ khác nhau tuỳ thuộc vào cấu trúc và tính chất của mỗi chất Thời gian chất tan bị pha tĩnh lưu giữ được quyết định bởi bản chất sắc ký của pha tĩnh, cấu trúc và tính chất của các chất tan, bản chất và thành phần của pha động dùng để rửa giải chất tan ra khỏi cột Kết quả là các chất được phân tách khỏi nhau Sau khi ra khỏi cột, các chất sẽ được phát hiện bằng detector và được chuyển qua bộ phận xử lý kết quả, Kết quả sau khi được xử lý sẽ được đưa ra máy ghi hoặc hiển thị trên màn hình

Tín hiệu phân tích định tính mỗi thành phần trong hỗn hợp là thời gian lưu của chất đó trên cột hay vị trí của pic tưofng ứng trên sắc ký đồ, còn tín hiệu phân tích định lượng là diện tích pic ( hoặc chiều cao pic ) thu được, phụ thuộc vào nồng độ của chất đó trong dung dịch đem đo HPLC

1.4.2 Các đại lượng đặc trưng trong kỹ thuật HPLC

• Thời gian ĩưu ( tp ì và thể tích lưu:

Thòi gian lưu là thời gian cần thiết để một chất tan di chuyển từ nơi tiêm mẫu qua cột sắc ký, tói detector và cho pic trên sắc đồ ( tính từ lúc tiêm tới khi xuất hiện đỉnh của pic ) Dựa vào thời gian lưu có thể phát hiện định tính chất đó là chất gì Nếu gọi tjỊ là thời gian lưu của chất tan thì ta có:

“ ^0 t RTrong đó: - to¡ thời gian chết hay thời gian không lưu giữ

- t \ : thời gian lưu giữ thực của chất tan.

Thời gian lưu phụ thuộc vào nhiều yếu tố như bản chất sắc ký của pha tĩnh; bản chất, thành phần, tốc độ của pha động; cấu tạo và bản chất của phân

tử chất tan; pH của pha động, nồng độ chất tạo phức

Tương ứng vói thời gian lưu, đại lượng thể tích lưu của một chất là thể tích của pha động chảy qua cột sắc ký trong khoảng thời gian từ lúc bơm mẫu vào cột cho đến khi chất tan được rửa giải ra ở thời điểm có nồng độ cực đại

Trong đó: Cs và Cm lần lượt là nồng độ chất tan trong pha tĩnh và pha động

Khi nồng độ chất tan không cao quá thì K là một hằng số chỉ phụ thuộc vào bản chất các pha và chất tan, vào nhiệt độ

• Thừa số dung lương ( k ’ ):

Đây là một đại lượng quan trọng được dùng để mô tả tốc độ di chuyển của một chất Nó cho ta biết khả năng phân bố của chất tan trong mỗi pha như thế nào Thừa số dung lượng được tính theo công thức:

Qs

Trong đó: Q s và Qj^ là lượng chất tan phân bố trong pha tĩnh và pha động

Quan hệ giữa hệ số phân bố và thừa số dung lượng;

Vc

k ’ = K

v „Trong đó: Vs và là thể tích pha tĩnh và pha động

Ngoài ra có thể định nghĩa k ’ theo một cách khác:

Theo quy ước, chất B là chất bị lưu giữ mạnh hơn chất A, như vậy a >1

a càng lớn thì hai chất tách ra khỏi nhau càng xa, thường dùng a trong

khoảng 1,05 đến 2,0 để thời gian phân tích không quá dài

• Số đĩa lý thuyết ( N ) và chiểu cao của đĩa ( H ):

Hiệu lực của cột thường được đo bằng hai thông số: số đĩa lý thuyết và chiều cao đĩa lý thuyết Cột sắc ký được coi như có n tầng lý thuyết, ở mỗi tầng sự phân bố chất tan vào hai pha lại đạt đến một trạng thái cân bằng mới Mỗi tầng được giả định như là một lớp chất nhồi có chiều cao là H Ta có thể tính số đĩa lý thuyết N theo công thức sau:

N = 1 6

wB

= 5,54/

Rw

1/2yTrong đó:

- Wg là chiều rộng pic ở đáy pic

- Wy2 là chiều rộng pic đo ở nửa chiều cao của đỉnh

Nếu gọi L là chiều cao của cột sắc ký, chiều cao của đĩa lý thuyết được tính bằng công thức:

• Đỏ phân giải ( Rc ì :

Độ phân giải là đại lượng đo mức độ tách hai chất trên một cột sắc ký

Độ phân giải được định nghĩa như sau:

khoả ng cách gi ữ a hai pic

R, A

1/2 độ rộng trung b ì nh gi ữ a hai pic

• Phương trình Van - Deemter:

Phương trình Van - Deemter mô tả ảnh hưởng của tốc độ dòng pha động và các thông số động học khác đến hiệu lực của cột sắc khí:

B

Trong đó:

H = A + :^ + C UH: chiều cao đĩa lý thuyết

U: tốc độ dòng pha động

- A,B,C: các hệ số thay đổi phụ thuộc vào từng cột sắc ký và

do các yếu tố sau quyết định:

+ Sự khuy ếch tán xoáy

+ Sự khuyếch tán phân tử

+ Tốc độ trao đổi chất khác nhau của các chất

1.4.3 Hệ thống HPLC:

Theo thứ tự từ đầu đến cuối hệ thống, có các bộ phận chính như sau:

• Bình chứa dung môi

• Bơm cao áp: đẩy pha động qua cột sắc ký

• Van bơm mẫu: bơm vào cột một thể tích mẫu nhất định

• Phân loai pha tĩnh:

Căn cứ theo bản chất chính của quá trình sắc ký trong cột tách, người ta chia nó thành nhiều loại: hấp phụ, phân bố, trao đổi ion và rây phân tử

- Căn cứ vào trạng thái là rắn hay lỏng thì pha tĩnh được chia làm 2 loại: nếu pha tĩnh là chất rắn, người ta có sắc ký lỏng rắn LSC (Liquid Solid Chromatography), nếu pha tĩnh là chất lỏng thì chúng ta có sắc ký lỏng lỏng LLC ( Liquid Liquid Chromatography)

- Xét về cấu trúc xốp của pha tĩnh là các hạt rắn thì pha tĩnh có 2 kiểu xốp; xốp toàn phần hạt và xốp chỉ lớp vỏ ngoài ( xốp bề m ặ t )

Điều kiên đối với mốt pha tĩnh:

- Phải trơ và bền vững với các điều kiện của môi trường sắc ký

- Có khả năng tách chọn lọc một hỗn hợp chất tan nhất định trong điều kiện sắc ký nhất định

- Tính chất bề mặt phải ổn định

- Cân bằng động học của sự tách phải xẩy ra nhanh và lặp lại tốt

- Cỡ hạt phải tương đối đồng nhất

Chế tao pha tĩnh: pha tĩnh được chế tạo trên các chất nền sau:

- Pha tĩnh trên nền Silicagel

- Pha tĩnh trên nền oxyd nhôm

- Pha tĩnh trên nền cao phân tử hữu cơ

- Pha tĩnh trên nền mạch carbon,

Trong các loại trên thì pha tĩnh trên nền Silicagle ưu việt hơn và được sửdụng nhiều nhất

Pha tĩnh trẽn nén Silicagel: Trên nền Silicagel, có 2 loại Silicagel hấp phụcho sắc ký pha thuận và sắc ký pha đảo

- Silicagel trung tính: sử dụng cho sắc ký hấp phụ pha thuận Loại này

trên bề mặt của nó có chứa các nhóm -OH Đó là các nhóm hoạt động

có tính chất phân cực và ái nước Loại chất nhồi cột này dùng để tách các chất không phân cực và ít phân cực Pha động của loại này là những chất không phân cực hoặc ít phân cực

- Silicagel đã alkyl hoá: được sử dụng cho sắc ký hấp phụ pha đảo Nhóm

-OH của silicael trung tính được alkyl hoá bằng các gốc alkyl của mạchcarbon thẳng hay các gốc carbon vòng như nhân phenyl Qiính vì bị thế mất nhóm -OH nên bề mặt của chất nhồi loại này không phân cực hay ít phân cực Loại chất nhồi cột này dùng để tách các chất không phân cực,

ít phân cực, các chất phân cực và có thể cả cho sắc ký cặp ion Pha động cho loại này là các chất hữu cơ phân cực như methanol, acetonnitril

hay nước hoặc là hỗn hợp của các chất này với nhau theo những tỉ lệ nhất định.

- Silicagel đã được Sunfonic hoá hay nỉtro hoá: được sử dụng cho sắc ký

trao đổi ion ( cation ) Đây là sản phẩm của sự sunfonic hoá hay nitro hoá các silicagel trung tính để thay các nhóm -OH trên bề mặt Silicagel trung tính bằng các nhóm -SO3H hay -NO2H Các nhóm chức này có ion có thể trao đổi được với các cation kim loại khác Đây là các pha tĩnh trao đổi cation mạnh, còn nếu thay thế nhóm -OH bằng nhóm -R-COOH thì ta có loại pha tĩnh trao đổi cation acid yếu Pha tĩnh loại này được dùng để tách các chất có cấu tạo ion như ion các kim loại và hợp chất của chúng, hay các chất khi tan trong pha động thì phân ly thành ion như các acid, base

- Các Silicagel được amin hoá: được sử dụng cho sắc ký trao đổi anion

Các Silicagel này được chế tạo bằng các thay thế nhóm OH bằng các nhóm -NH2, -NH, -NRj, -NR3, -CHjCOH) Pha tĩnh loại này sử dụng để tách các anion trong hợp chất có cấu trúc ion hay các chất khi tan trong pha động thì phân ly thành các ion như các base, acid Pha động của loại này cũng giống như trên

1.4.5 Pha động trong HPLC:

Pha động là dung môi dùng để rửa giải các chất tan ( chất cần phân tích ) ra khỏi cột tách để thực hiện một quá trình sắc ký Đây là một yếu tố hết sức linh động và dễ dàng thay đổi Nó có thể là 1 dung môi hoặc có thể là một hỗn hợp nhiều dung môi trộn lẫn với nhau theo những tỷ lệ nhất định Nó cũng có thể là dung dịch các muối có chứa chất đệm, chất tạo phức Nói chung mỗi loại sắc ký sẽ có các hệ dung môi rửa giải riêng để có được hiệu quả phân tách tốt nhất

Pha động là một trong những yếu tố quyết định hiệu quả và hiệu suất tách sắc ký của một hỗn hợp mẫu Nó quyết định thòi gian lưu giữ các chất mẫu và hiệu quả sự tách sắc ký Pha động có thể ảnh hưởng đến:

• Trong HPLC, pha đống phải thoã mãn mồt số điều kiên sau:

- Trơ đối với pha tĩnh

- Hoà tan được chất cần phân tích

- Bền vững theo thời gian

- Có độ tinh khiết cao

- Phải nhanh đạt các cân bằng trong quá trình sắc ký

- Phù hợp với loại detector được lựa chọn để phát hiện các chất phân tích

- Có tính kinh tế, dễ kiếm

• Trong sắc kv hấp phu pha thuân: pha động phải là các dung môi hữu cơ không phân cực hoặc ít phân cực như n - hexan, n - heptan, cloroform, tetraclorocarbon Trong quá trình chạy sắc ký, để cho quá trình tách được

ổn định, độ lặp lại cao, phải bão hoà pha động trước khi chạy sắc ký bằng nước

• Trong sác kv hấp phu pha đảo: pha động là hệ dung môi của những dung môi đồng tan với nước, có khi nước lại là thành phần chính trong pha động

ví dụ như methanol, acetonitril Trong nhiều trưòfng hợp, thành phần pha động còn có thêm các chất đệm pH để ổn định pH cho quá trình sắc ký, chất tạo phức để tạo ra sự rửa giải chọn lọc, chất tạo cặp ion để sử dụng trong sắc ký cặp ion

• Trong sắc ký trao đổi ion: pha động là dung dịch nước của các acid hay base, hoặc là dung dịch nước của các muối kim loại kiềm, kiềm thổ, có chứa chất đệm pH, chất tạo cặp ion, chất tạo phức Trong loại sắc ký này thì pH pha động và chất tạo phức có ý nghĩa rất lớn.

• Cổ 4 yếu tố quan trong cán chú V trong lưa chon pha đỏng:

- Bản chất của dung môi để pha chế pha động

- Thành phần các chất tạo ra pha động

- Tốc độ của pha động

- pH của pha động ( đặc biệt chú ý ở sắc ký trao đổi ion và cặp ion ).

1.4.6 Cách đánh giá pic:

• Đánh giá diên tích pic:

Diện tích pic của một chất là tương ứng với tổng lượng chất đó

Để tính diện tích pic, hiện nay ngưòi ta thường dùng máy tích phân điện

tử gắn với máy vi tính ( sai số khoảng 0,5% ) hoặc máy tích phân cơ học ( sai

số khoảng 1,3% )• Phương pháp này có thể dùng cho các pic không bị trôi đưòfng nền và cả pic có đường nền bị trôi Phương pháp này chỉ cần điểm đầu

và cuối của pic được nhận ra chính xác và cho kết quả tốt đối với nồng độ trung bình vừa và cao

• Đánh giá chiều cao pic:

Khi pic có dạng không đổi thì chiều cao pic ( khoảng cách giữa đường nền và đỉnh pic ) là một đại lượng tỷ lệ vói diện tích pic và nó cũng có thể được dùng để đánh giá sắc phổ Một điều kiện để áp dụng cho việc đánh giá bằng chiều cao pic là các chỉ số k ’ hằng định

Với pic có đường nền bị nhiễu hoặc pic hẹp, đối xứng thì việc xác định chiều cao pic sẽ dễ dàng hơn và chính xác hơn việc xác định diện tích pic

1.4.7 Cách tính kết quả:

• Phương pháp ngoai chuán: là phưong pháp dựa trên cơ sở so sánh mẫu chuẩn và mẫu thử được phân tích trong cùng điều kiện Kết quả của chất chưa biết được tính toán so với mẫu chuẩn đã biết trước nồng độ hoặc suy

ra từ đường chuẩn

• Phương pháp nối chuán: là phưoíng pháp cho thêm vào mẫu chuẩn và mẫu thử một lượng chất không đổi, mà trong cùng điều kiện sắc ký nó có thời gian lưu gần thời gian lưu của chất cần phân tích trong mẫu thử Nó được phân tách hoàn toàn và có nồng độ gần bằng nồng độ của chất phân tích

và có cấu trúc hoá học tương ứng

• Phương pháp thêm: chủ yếu được sử dụng trong kỹ thuật HPLC khi có vấn

đề ảnh hưỏỉng của các chất phụ ( ví dụ: tá dược ) Dung dịch mẫu thử được thêm một lượng xác định chất chuẩn Các pic thu được của cả hai dung dịch mẫu thử và mẫu thử thêm chất chuẩn phải được đo trong cùng một điều kiện sắc ký

PHẦN 2

NỘI DUNG, ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN c ứ u

2.1 NỐI DUNG NGHIÊN c ứ u

Tiến hành nghiên cứu khảo sát 2 phương pháp định lượng Paracetamol

và Ibuprofen trong hỗn hợp thuốc, so sánh hai phương pháp, rút ra nhận xét

2.2 ĐỔI TƯƠNG NGHIỀN c ứ u

PHẦN 3

THỰC NGHIỆM VÀ KẾT QUẢ

3.1 THIẾT BI HOÁ CHẤT DUNG MỎI

- Máy đo quang phổ UV-VIS Jenway 6045

- Máy sắc ký lỏng hiệu năng cao MERCK - HITACHI 655A - 12 với Detector u v - VIS 655A - 22

- Cột Lichrosorb RP 18 (250 X 4 mm ; 10 ỊLim )

- Bộ lọc dung môi vói màng lọc 0,45 Ịim

- Máy lắc siêu âm, cân kỹ thuật, nồi cách thuỷ

- Viên nén Alaxan của United Pharma, SKS: 003501

- Diethyl ether, ethanol 96°, natri sulfat khan, dung dịch NaOH 0,1N, dung dịch NaOH 0,0 IN

3.2 ĐINH LƯƠNG PARACETAMOL VẢ IBUPROFEN TRONG

HỖN HOP THUỐC THEO TIÊU CHUẨN c ơ s ở [11][12][13] 3.2.1 Định lượng Paracetamol trong hỗn hợp bằng phương pháp đo

quang phổ hấp thụ tử ngoại:

• Khảo sát khả nâng chiết tách Paracetamol ra khỏi hỗn hơp:

Chúng tôi tiến hành khảo sát khả năng chiết Paracetamol ra khỏi hỗnhợp hai chất Paracetamol và Ibuprofen dựa vào độ tan khác nhau của hai chất

trong nước Paracetamol tan trong nước lạnh với tỷ lệ 1/70 còn Ibuprofen hầu như không tan trong nước Để khảo sát hệ số chiết tách, chúng tôi tiến hành trên các hoá chất: Paracetamol ( 97,0% ) và Ibuprofen ( 99,2% ) Các dung dịch thử và dung dịch chuẩn được pha theo quy trình sau:

- Dung dịch thử cân chính xác khoảng 75mg Paracetamol và 45mg

Ibuprofen cho vào một bình định mức dung tích lOOml, thêm vào 50ml nước cất, lắc kỹ trong vòng 5 phút, thêm nước tới vạch, lắc đều Lọc, loại bỏ 20ml dịch lọc đầu Hút chính xác Iml dịch lọc trên cho vào bình định mức lOOml thứ 2 Thêm dung dịch NaOH 0,0IN ( TT ) vừa đủ tới vạch, lắc đều

- Dung dịch chuẩn', cân chính xác khoảng 75mg Paracetamol cho vào

bình định mức lOOml, thêm vào 50ml nước cất, lắc kỹ trong vòng 5 phút, thêm nước tói vạch, lắc đều Lọc, loại bỏ 20ml dịch lọc đầu Hút chính xác Iml dịch lọc trên cho vào bình định mức lOOml thứ 2 Thêm dung dịch NaOH 0,0IN ( T T ) vừa đủ tới vạch, lắc đều

Tiến hành đo mật độ quang của dung dịch thử và dung dịch chuẩn ở bước sóng 257nm, trong cuvet Icm, mẫu trắng là dung dịch NaOH 0,0IN

Tỷ lệ phần trăm Paracetamol chiết được được tính theo công thức:

% = z ^

Trong đó:

- Mc và Mp lần lượt là khối lượng cân Paracetamol trong mẫu chuẩn và mẫu thử ( mg )

- D c và Dc lần lượt là độ hấp thụ đo được của mẫu chuẩn và mẫu thử

Kết quả khảo sát được ghi trong bảng 1: