Toàn văn tìm hiểu thành phần hóa học của một số cây thuộc chi polyscias, họ nhân sâm (araliaceae) ĐHQG TP HCM

 LỜI CAM ĐOAN Luận án Tiến sĩ Khoa học Hóa Học: “Tìm hiểu thành phần hóa học của một số cây thuộc chi Polyscias, họ Nhân sâm Araliaceae” do tôi thực hiện, các số liệu kết quả trung

Trang 1

THUỘC CHI POLYSCIAS,

HỌ NHÂN SÂM (ARALIACEAE)

LUẬN ÁN TIẾN SĨ HÓA HỌC

THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH-2009

Trang 2

TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN



NGUYỄN THỊ ÁNH TUYẾT

TÌM HIỂU THÀNH PHẦN HÓA HỌC CỦA

MỘT SỐ CÂY THUỘC CHI POLYSCIAS,

Chuyên ngành: Hóa Hữu Cơ

Mã số: 1 04 02

LUẬN ÁN TIẾN SĨ HÓA HỌC

NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC:

1 PGS TS NGUYỄN KIM PHI PHỤNG

2 PGS TS NGUYỄN NGỌC SƯƠNG

THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH-2009

Trang 3



LỜI CAM ĐOAN

Luận án Tiến sĩ Khoa học Hóa Học: “Tìm hiểu thành phần hóa học của một số cây

thuộc chi Polyscias, họ Nhân sâm (Araliaceae)” do tôi thực hiện, các số liệu kết quả trung

thực Theo sự hiểu biết của tôi, cũng như các tài liệu tham khảo và phần mềm Scifinder,

các kết quả nghiên cứu trong luận án này là mới, chưa được các tác giả khác công bố ở

Việt Nam và trên thế giới

Nguyễn Thị Ánh Tuyết

Trang 4

Xin chân thành cảm ơn:

- PGS TS Nguyễn Kim Phi Phụng đã tận tình giảng dạy, truyền đạt những

kinh nghiệm quý báu và tạo mọi điều kiện thuận lợi cho tôi học tập và nghiên cứu khoa học trong nhiều năm qua Cô luôn bên cạnh động viên, chia sẻ và khích lệ nhằm hướng cho tôi hoàn tất chương trình học bậc tiến sĩ

- PGS TS Nguyễn Ngọc Sương đã quan tâm, động viên và truyền đạt những

kinh nghiệm quý báu trong quá trình học và hoàn thành luận án

- GS TSKH Nguyễn Công Hào đã quan tâm, động viên và đóng góp những ý

kiến quý báu cho các chuyên đề và luận án tiến sĩ

- PGS TS Trương Thế Kỷ đã quan tâm, động viên và đóng góp những ý kiến

quý báu cho các chuyên đề và luận án tiến sĩ

- PGS TS Nguyễn Ngọc Hạnh đã đóng góp những ý kiến quý báu để tôi

- Tất cả quý thầy cô trong Bộ Môn Hóa Hữu Cơ đã tận tình dạy bảo và giúp

đỡ tôi hoàn thành luận án

- Tất cả quý thầy cô trong Khoa Hóa - ĐHSP TP HCM đã tận tình dạy bảo,

tạo mọi điều kiện thuận lợị và giúp đỡ tôi hoàn thành luận án

- Gia đình, bạn bè và đồng nghiệp luôn động viên và tạo điều kiện thuận lợi

cho tôi trong quá trình học tập và hoàn thành luận án

- Phòng Sau Đại Học trường ĐH KHTN TP HCM

Trang 5

Trang

MỞ ĐẦU 1

CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN 1.1 MÔ TẢ THỰC VẬT 2

1.1.1 Polyscias balfouriana Bail Cây Đinh lăng lá tròn 2

1.1.2 Polyscias guilfoylei Bail Cây Đinh lăng trổ 2

1.1.3 Polyscias serrata Balf Cây Đinh lăng răng 3

1.2 THÀNH PHẦN HÓA HỌC 3

1.2.1 Polyscias amplifolia (Baker) Harms 3

1.2.2 Polyscias dichroostachya Baker 4

1.2.3 Polyscias filicifolia Balf 4

1.2.4 Polyscias fulva (Hiern) Harms 4

1.2.5 Polyscias fruticosa (L.) Harm 5

1.2.6 Poyscias murrayi Harms 7

1.2.7 Polyscias nodosa (Blume) Seem 7

1.2.8 Polyscias scutellaria (Burm f.) Merr 7

1.2.9 Polyscias sp Nov 8

1.3 CÁC NGHIÊN CỨU VỀ DƯỢC TÍNH 13

1.3.1 Polyscias amplifolia (Baker) 13

1.3.2 Polyscias balfouriana Bail 13

1.3.3 Polyscias filicifolia Balf 14

1.3.4 Polyscias fruticosa (L.) Harms 14

1.3.5 Polyscias guilfoylei Bail 16

1.3.6 Polyscias murrayi Harms 16

1.3.7 Polyscias scutellaria Merr 17

CHƯƠNG 2 THỰC NGHIỆM 2.1 HÓA CHẤT VÀ THIẾT BỊ 18

2.1.1 Hóa chất sử dụng 18

2.1.2 Các thiết bị phân tích 18

2.2 KHẢO SÁT NGUYÊN LIỆU 19

2.2.1 Thu hái và xử lý mẫu 19

2.2.2 Xác định độ ẩm 19

Trang 6

2.3.2 Trích ly, cô lập một số hợp chất hữu cơ 20

CHƯƠNG 3 KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 3.1 KHẢO SÁT CẤU TRÚC HÓA HỌC 30

3.1.1 Các hợp chất cô lập từ loài Polyscias balfouriana 30

3.1.2 Các hợp chất cô lập từ loài Polyscias guilfoylei 65

3.1.3 Các hợp chất cô lập từ loài Polyscias serrata 83

3.2 KẾT LUẬN VỀ NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HÓA HỌC 100

3.3 NHẬN XÉT VỀ HÓA-THỰC VẬT CỦA CHI POLYSCIAS 103

3.4 ĐÚC KẾT NHỮNG KẾT QUẢ SỬ DỤNG PHỔ NMR VÀ LC-MS ĐỂ PHÂN GIẢI CẤU TRÚC HÓA HỌC CÁC SAPONIN 107

3.4.1 Về phổ 1H-NMR 107

3.4.2 Về phổ 13C-NMR 107

3.4.3 Về phổ LC-MS 108

KẾT LUẬN 111

CÁC HƯỚNG NGHIÊN CỨU TIẾP THEO 113

Trang 7

Trang

 HÌNH ẢNH

Hình 1.1 Polyscias balfouriana Bail - Cây Đinh lăng lá tròn 2

Hình 1.2 Polyscias guilfoylei Bail - Cây Đinh lăng trổ 2

Hình 1.3 Polyscias serrata Balf - Cây Đinh lăng răng 3

Hình 3.1 Một số tương quan trong phổ HMBC của hợp chất BAL-L.M1 39

Hình 3.2 Một số tương quan trong phổ HMBC của hợp chất BAL-L.M2 44

Hình 3.6 Một số tương quan trong phổ HMBC của hợp chất BAL-R1 55

Hình 3.9 Một số tương quan trong phổ HMBC của hợp chất GUI-B1 70

Hình 3.14 Một số tương quan trong phổ HMBC của hợp chất SER-E3 87

Hình 3.15a Mũi cộng hưởng của proton olefin của nối đôi có cấu hình E 87 Hình 3.15b Mũi cộng hưởng của proton olefin của nối đôi có cấu hình Z 87

Hình 3.16 Sự phân mảnh trong phổ MS/MS của hợp chất SER-M3 95

Hình 3.17 Năng lực triền quang của ceramid và cerebrosid thiên nhiên 96

Hình 3.18 Sự phân mảnh trong phổ MS/MS của hợp chất SER-M2a 98

Hình 3.19 Sự phân mảnh trong phổ MS/MS của hợp chất SER-M2b 98

Bảng 2.2 Khối lượng và thu suất của các loại cao (so với cao etanol ban đầu) 26

Bảng 2.3 Sắc kí cột trên cao cloroform (15,4 g) của lá cây P balfouriana 26

Bảng 2.4 Sắc kí cột trên cao etyl acetat (16,2 g) của lá cây P balfouriana 26

Bảng 2.5 Sắc kí cột trên cao metanol (29,5g) của lá cây P balfouriana 27

Trang 8

Bảng 2.6 Sắc kí cột silica gel pha đảo RP-8 trên cao butanol (5,0 g) của rễ cây

P balfouriana

27

Bảng 2.7 Sắc kí cột silica gel trên cao cloroform (16,8 g)

của lá cây P guilfoylei

27 Bảng 2.8 Sắc kí cột silica gel trên cao etyl acetat (19,3 g)

của lá cây P guilfoylei

28 Bảng 2.9 Sắc kí cột silica gel trên cao butanol (29,5 g) của lá cây P guilfoylei 28

Bảng 2.10 Sắc kí cột silica gel trên cao eter dầu hỏa (11,0 g)

của lá cây P serrata

28

Bảng 2.11 Sắc kí cột silica gel trên cao cloroform (10,3 g) của lá cây P serrata 29 Bảng 2.12 Sắc kí cột silica gel trên cao metanol (35,0 g) của lá cây P serrata 29

Bảng 3.1 Số liệu phổ NMR của hợp chất BAL-L.C1 so sánh với stigmasterol 31

Bảng 3.2 Số liệu phổ NMR của hợp chất BAL-L.C2 so sánh với spinasterol 33

Bảng 3.3 Số liệu phổ NMR của hợp chất BAL-L.EA (hỗn hợp hai chất) 36

Bảng 3.4 Số liệu phổ NMR của hợp chất BAL-L.EA2 và acid oleanolic 38

Bảng 3.5 So sánh số liệu phổ NMR của hợp chất BAL-.LM1 41

Bảng 3.7 Số liệu phổ của hợp chất BAL-L.M3 và hợp chất BAL-L.M2 48

Bảng 3.14 Số liệu phổ NMR của hợp chất GUI-EA và acid oleanolic 68

Bảng 3.20 Số liệu phổ NMR của hợp chất SER-E1 và stigmasterol 84

Bảng 3.27 Tổng kết các giá trị δH của các saponin với aglycon là

acid oleanolic trong chi Polyscias

108

Bảng 3.28 Tổng kết các giá trị δC của các saponin với phần aglycon là

acid oleanolic trong chi Polyscias

Trang 9

CÁC KÍ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT TRONG LUẬN ÁN

s : mũi đơn (singlet)

d : mũi đôi (doublet)

dd : mũi đôi - đôi (doublet-doublet)

brs : mũi đơn rộng (broad singlet)

t : mũi ba (triplet)

dt : mũi đôi ba (doublet of triplet)

br d : mũi đôi rộng (broad doublet)

m : mũi đa (multiplet)

J : hằng số ghép (coupling constant)

RP-18 : Reversed Phase C-18

SKLM : sắc kí lớp mỏng

LC-MS : sắc kí lỏng ghép khối phổ

(Liquid Chromatography – Mass Spectroscopy)

ESI/MS : Electrospray Ionization - Mass Spectroscopy

UV : Ultraviolet Spectroscopy

IR : Infrared Spectroscopy

NMR : phổ cộng hưởng từ hạt nhân

(Nuclear Magnetic Resonance spectroscopy)

DEPT : Distortionless Enhancement by Polarization Transfer

HSQC : tương quan H-C qua 1 nối

(Heteronuclear Single Quantum Coherence)

HMBC : tương quan H-C qua 2, 3 nối

(Heteronuclear Multiple Bond Coherence)

H-H COSY : phổ tương quan giữa proton-proton

M : khối lượng phân tử

MeGlA : metyl glucuronat

Trang 10

MỞ ĐẦU

Từ lâu, trong dân gian và y học cổ truyền đã dùng cây cỏ để chữa bệnh và ngành Hóa-Thực vật đã góp phần không nhỏ vào việc khám phá ra những thuốc mới phục vụ cho nhu cầu chữa bệnh một cách hiệu quả Do đó, việc nghiên cứu thành phần hóa học của các cây thuốc là một trong những chiến lược phát triển sản phẩm

ở nhiều công ty dược, nhằm tìm ra những hợp chất tự nhiên có hoạt tính sinh học Việt Nam là nước nhiệt đới, có nguồn thực vật phong phú và đa dạng Nhiều loại cây cỏ được nhân dân ta sử dụng rất có hiệu quả trong điều trị nhiều loại bệnh như kiết lị, nhuận tràng, sốt rét, viêm nhiễm….Để sử dụng hiệu quả nguồn tài nguyên này, việc nghiên cứu thành phần hóa học các loại cây cỏ là cần thiết

Trong chi Polyscias có cây Polyscias fruticosa (L.) Harms đã được dân gian

dùng lá với công dụng như thuốc bổ, kháng viêm nhiễm, kháng khuẩn; còn rễ được dùng để chữa bệnh tiểu đường, đau thấp khớp,… Các nghiên cứu hóa học từ trước

đến nay cho thấy một số cây thuộc chi Polyscias có chứa các hợp chất thuộc nhóm

steroid, polyacetylen, saponin triterpen và chính những loại hợp chất này có liên quan đến những dược tính đã biết

Chúng tôi đã chọn khảo sát thành phần hóa học của ba loài thuộc chi Polyscias

là Polyscias balfouriana Bail., Polyscias guilfoylei Bail và Polyscias serrata Balf Trong ba cây này, cây Polyscias guilfoylei có một bài báo trên thế giới nghiên cứu

sơ bộ về dược tính, cây Polyscias serrata chưa có bất kỳ nghiên cứu nào Riêng với cây Polyscias balfouriana chỉ có một nghiên cứu ở Việt Nam, tuy nhiên nghiên cứu

này chỉ mới thực hiện về việc xác định hàm lượng saponin triterpen trên cao của cây, chưa nghiên cứu thành phần hóa học cụ thể

Việc khảo sát thành phần hóa học của ba cây này với mong muốn sẽ góp phần làm sáng tỏ thêm thành phần hóa học của ba cây nhằm đóng góp những chứng cứ khoa học vào kho dược liệu quý của Việt Nam, từ đó góp phần vào việc khai thác

và sử dụng hợp lí nguồn tài nguyên thực vật

Trang 11

CHƯƠNG 1 TỔNG QUAN

1.1 MÔ TẢ THỰC VẬT

Đề tài nghiên cứu trên 3 loài cây thuộc chi Polyscias chưa được khảo sát về

thành phần hóa học, gồm: Polyscias balfouriana Bail., Polyscias guilfoylei Bail và

Polyscias serrata Balf

1.1.1 Polyscias balfouriana Bail Cây Đinh lăng lá tròn (Hình 1.1) [3,4,7,11]

Cây Đinh lăng lá tròn có tên khoa học

là Polyscias balfouriana Bail., thuộc họ

Nhân sâm (Araliaceae)

Cây tiểu mộc, cao 1-2m, lá kép thường

mang 3 lá phụ trên một cuống dài, phiến

xoan tròn, đầu tà Lá có màu xanh đậm,

không lông, bìa lá có răng nhọn

Hình 1.1 Polyscias balfouriana Bail

Cây Đinh lăng lá tròn

1.1.2 Polyscias guilfoylei Bail Cây Đinh lăng trổ (Hình 1.2) [3,4,7,11]

Cây Đinh lăng trổ còn có tên khoa học

là Polyscias guilfoylei Bail., họ Nhân sâm

(Araliaceae)

Cây bụi, cao 3-4m, thân cây ít phân

nhánh Lá đa dạng

Lá có màu lục sáng, viền trắng, chia

lông chim đều đặn, cuống lá ngắn và to, có

sọc hay có đốm, lá chét thuôn, có răng không đều

Hình 1.2 Polyscias guilfoylei Bail.

Cây Đinh lăng trổ

Trang 12

1.1.3 Polyscias serrata Balf Cây Đinh lăng răng (Hình 1.3)[3,4,7,11]

Cây bụi, cao 0,5-1,5m Thân cây màu

xám trắng, không lông Cành non xanh Lá

hai lần kép, màu xanh

Hình 1.3 Polyscias serrata Balf

Cây Đinh lăng răng

Vùng phân bố:

Cả ba cây được trồng khắp mọi nơi ở Việt Nam để làm kiểng và làm hàng rào

1.2 THÀNH PHẦN HÓA HỌC

Chi Polyscias là chi lớn thứ hai trong họ Nhân sâm [33],cho đến nay trên thế

giới chỉ có một số loài của chi Polyscias được nghiên cứu thành phần hóa học như:

P filicifolia Bail., P scutellaria (Burm f.) Merr., P amplifolia (Baker) Harms, P dichroostachya Baker, P fulva, P murrayi Harms và Polyscias sp nov Trong số

này, đặc biệt là loài Polyscias fruticosa (L.) Harms được quan tâm và nghiên cứu rất

nhiều về mặt hóa học

Do cả ba loài P balfouriana Bail., P guilfoylei Bail., P serrata Balf đều

chưa được nghiên cứu thành phần hóa học ở Việt Nam và trên thế giới, nên chúng

tôi đã tìm hiểu thành phần hóa học của vài loài khác thuộc chi Polyscias đã được

nghiên cứu ở trong và ngoài nước

1.2.1 Polyscias amplifolia (Baker) Harms

Năm 2003, Prakash Chaturvedula V S và cộng sự [51] đã cô lập từ quả bốn

hợp chất là: acid 3–O––D–galactopyranosyloleanolic (28); acid 3–O––D–

Trang 13

galactopyranosyl-(14)––D–galactopyranosyloleanolic (29); acid 3–O––D–galactopyranosyl-(14)––D–xylopyranosyloleanolic (30) và acid 3–O––D–galactopyranosyl-(14)––L–arabinopyranosyloleanolic (31)

1.2.2 Polyscias dichroostachyaBaker

Năm 1990, Gopalsmy N cùng cộng sự [32] đã cô lập được bốn hợp chất là: 3–

O– –L–arabinopyranosylhederagenin (52); 3–O––L–rhamnopyranosyl-(12)–– L–arabinopyranosylhederagenin (53); 3–O––D–glucopyranosyl-(12)––L– arabinopyranosylhederagenin (54) và 3–O––L–rhamnopyranosyl-(12)––L–

arabinopyranosylhederagenin 28–O––D–glucopyranosid (55)

1.2.3 Polyscias filicifolia Balf

Năm 2007, Nguyễn Thúy Anh Thư và cộng sự [16] đã cô lập được các hợp chất

stigmasterol (7); spinasterol (8); quercetin 3,7,3’,4’-tetrametyl eter (17); acid

oleanolic (26); 3-O--D-glucopyranosylstigmasterol (11); kaempferol L-rhamnosid (18); acid 3-O--D-glucopyranosyl-(14)--D-glucuronopyranosyloleanolic (32) và 1-O-etyl-6-O-(1-hydroxymetyl-2-hydroxy)etylglucose

3,7-O-di--1.2.4 Polyscias fulva (Hiern) Harms

– Năm 2001, Bedir cùng cộng sự [27] đã cô lập từ phần trên mặt đất các hợp chất:

3-O- -L-rhamnopyranosyl-(12)--L-arabinopyranosylhederagenin (53);

3-O--L-rhamnopyranosyl-(12)--L-arabinopyranosylhederagenin rhamnopyranosyl-(14)--D-glucopyranosyl-(16)--D-glucopyranosyl ester

28-O--L-(kalopanax saponin B) (56); quercetin 3-O--D-glucopyranosid (15) và

12-oxo-

3,16-20(S)-trihydroxydammar-24-en-3-O--L-rhamnopyranosyl-(12)--D-glucopyranosid (57)

- Năm 2004, A C Mitaine Offer và cộng sự [41] đã cô lập từ phần vỏ thân cây này

các hợp chất: lichexanthon (19); β-sitosterol (6); glucopyranosylstigmasterol (11); 3-O--D-glucopyranosyl--sitosterol (9); acid

Trang 14

3-O--D-oleanolic (26); hederagenin (27); 3-O-L-arabinopyranosylhederagenin (52); hederin (53); kalopanax-saponin B (56); 3-O--L-arabinopyranosylcollinsogenin (collinsonin) (58); acid 3-O--L-rhamnopyranosyl-(12)--L-

-arabinopyranosyloleanolic (-hederin) (33); acid (12)--L-arabinopyranosylechynocystic (59); (2S,3S,4R,8E)-2-[(2’R)-2’-

3-O--L-rhamnopyranosyl-hydroxypalmitoylamino]-8-octadecen-1,3,4-triol (61) và (2S,3S,4R,8E)-2-[(2’R)-2’-hydroxypalmitoylamino]-8-octadecen-1,3,4-triol (62)

1-O--D-glucopyranosyl-1.2.5 Polyscias fruticosa (L.) Harm

- Năm 1989, Nguyễn Khắc Viện [19] đã nghiên cứu và cho thấy trong rễ có 4% saccarose, một chất kết tinh A chưa xác định cấu trúc hóa học, có điểm sôi trong khoảng 158-161oC, tan nhiều trong cloroform và aceton

- Năm 1990, Nguyễn Thới Nhâm và cộng sự [15] đã công bố trong thành phần của rễ, thân và lá có các glycosid, alcaloid, tanin, vitamin B1 và khoảng 20 loại acid amin như arginin, alanin, asparagin, acid glutamic, leucin, lysin, phenylalanin, prolin, threonin, tyrosin, cystein, tryptophan, metionin…

- Năm 1990, Brophy Joseph J và cộng sự [36] đã dùng phương pháp GC-MS để phân tích thành phần tinh dầu của lá cây mọc ở Fiji và Thái Lan Kết quả cho thấy trong tinh dầu có khoảng 24 cấu tử, trong đó có 4 chất chính là: -elemen; -bergamoten;

germacren-D và E- -bisabolen (12-14)

- Năm 1991, Võ Xuân Minh cùng cộng sự [12] đã khảo sát hàm lượng saponin toàn phần trong các bộ phận của cây Đinh lăng với kết quả: rễ (0,49%), vỏ rễ (1,00%), lõi rễ (0,11%) và lá (0,38%)

- Năm 1992, trong nghiên cứu tiếp theo, Võ Xuân Minh [13] cho biết trong cây Đinh lăng có các alcaloid, glucosid, saponin, các vitamin tan trong nước như B1, B2, B6,

C và các phytosterin Nghiên cứu cũng cho thấy rễ cây Đinh lăng có chứa tới 20 acid amin

- Năm 1992, Lutomski và cộng sự [40] đã cô lập từ rễ 5 hợp chất:

(8E)-heptadeca-1,8-dien-4,6-diyn-3,10-diol (1); (8E)-heptadeca-1,8-dien-4,6-diyn-3-ol-10-on (2);

Trang 15

(8Z)-heptadeca-1,8-dien-4,6-diyn-3-ol-10-on (3); falcarinol (4) và panaxydol (5)

- Cũng vào năm 1992, Nguyễn Thị Nguyệt và cộng sự [14] đã cô lập được acid

oleanolic (26)

- Năm 1995, Chaboud A và cộng sự [20] đã cô lập từ lá một saponin triterpen, đó là

acid 3-O--D-galactopyranosyl-(12)--D-glucopyranosyloleanolic (34)

- Năm 1996, Chaboud A và cộng sự [21] đã cô lập từ lá khô một saponin triterpen là

acid 3-O--L-rhamnopyranosyl-(14)--D-glucopyranosyl

Trang 16

-D-glucopyranosyl-(14)]--D-glucuronopyranosyloleanolic

28-O-[-L-rhamnopyranosyl-(13)--D-glucopyranosyl ester (45)

1.2.6 Poyscias murrayi Harms

Năm 2004, Malcolm S Buchanan và cộng sự [42] đã cô lập từ cây một hợp

chất là 3-(4-hydroxyphenyl)propionyl choline (20), một hỗn hợp với tỉ lệ (2:1) hai

hai hợp chất là acid dihydroxycyclohexancarboxylic và acid 3,5-di-O-3-(4-hydroxyphenyl)propionyl-

3,4-di-O-3-(4-hydroxyphenyl)propionyl-1,5-1,4-dihydroxycyclohexancarboxylic (23, 24) Ngoài ra còn các hợp chất đã biết là acid 3-(4-hydroxyphenyl)propanoic (21); acid 3-(3,4-dihydroxyphenyl)propanoic

(22) và acid 3,5-dicaffeoyl-muco-quinic (25)

1.2.7 Polyscias nodosa (Blume) Seem

Năm 1913, Vander Haar và cộng sự [55] đã cô lập được một hợp chất sapogenin có CTPT C26H44O4, chưa xác định được cấu trúc hóa học

1.2.8 Polyscias scutellaria (Burm f.) Merr

- Năm 1988, S Paphassarang và cộng sự [46] đã cô lập được hợp chất

3-O--D-glucopyranosyloleanan (60)

- Năm 1989, S Paphassarang cùng cộng sự [47,48] đã cô lập các saponin sau: acid

3-O- -D-glucuronopyranosyloleanolic (46); acid D-glucuronopyranosyloleanolic (36); acid 3-O--D-glucopyranosyl-(13)--D- glucuronopyranosyloleanolic (47); 3-O--D-glucopyranosyl-(13)--D-

glucopyranosyl-(12)--glucuronopyranosyloleanolic 28-O--D-glucopyranosyl ester (48) và acid

3-O--D-

glucopyranosyl-(12)--D-glucopyranosyl-(14)--D-glucuronopyranosyloleanolic (49)

- Năm 1990, S Paphassarang cùng cộng sự [49] đã cô lập từ lá thêm hai hợp chất

saponin là acid 3-O--D-glucopyranosyl-(12)--D-glucuronopyranosyloleanolic

(36) và

Trang 17

3-O--D-glucopyranosyl-(14)--D-glucopyranosyl-(12)--D-glucuronopyranosyloleanolic 28-O--D-glucopyranosyl ester (50)

- Đến năm 2008, Nguyễn Thị Thúy Hằng [6] cũng cô lập từ cây này mọc ở Việt Nam

các hợp chất: stigmasterol (7); spinasterol (8); 3-O--D-glucopyranosylstigmasterol (11); acid 3-O--D-glucopyranosyl-(14)--D-glucuronopyranosyloleanolic (32);

Cấu trúc hóa học của các hợp chất được cô lập từ các loài thuộc chi Polyscias

được trình bày theo nhóm hợp chất như sau:

Trang 18

Các sterol và glycosid của sterol

HO

H H

H

H H

Glc

O HO

HO

O

OH OH

Trang 19

 Các triterpenoid và các glycosid của triterpenoid

O O

OH

O O

1 2 4 5

7 8 1'

1'' 3'''

5''' O

OH HO HO

1''' 3'''

5''' O

OH HO HO

OH HO

O

OH

O O

O

OH

OH HO

O

OH

O O

O

HO HO

HO

OH O

HO

OH O

OH

OH HO

O

OH O

Trang 20

+ Các saponin có aglycon là acid oleanolic

Trang 21

+ Các saponin có phần aglycon là hederagenin

(54) Glc-(12)-Ara- H (55) Rha-(12)-Ara- Glc- (56) Rha-(12)-Ara- Rha-(14)-Glc-(16)-Glc- (Kalopanax saponin B)

O HO

HO O

OH OH

O

OH HO

HO

trihydroxydammar-24-en-3-O--L-

12-Oxo-3,16-20(S)-rhamnopyranosyl-(1

2)--D-glucopyranosid (57)

O O HO

HO OH

HO

OH

OH HO

O

COOH O

Trang 22

 Các ceramid và cerebrosid

1.3 CÁC NGHIÊN CỨU VỀ DƯỢC TÍNH

Theo bác sĩ Huỳnh Ngọc Tựng [18], các loài cây Đinh lăng được trồng ở Việt Nam đều dùng làm thuốc được, tuy nhiên, có một số loài cây Đinh lăng vẫn chưa tìm thấy tài liệu nghiên cứu một cách cụ thể về dược tính

Trong số các cây thuộc chi Polyscias nêu trên thì cây Đinh lăng Polyscias

fruticosa (L.) Harms được nghiên cứu nhiều nhất về thành phần hóa học cũng như

dược tính Bên cạnh đó cũng có một số nghiên cứu về dược tính trên các cây P

filicifolia, P guilfoylei, P scutellaria, P amplifolia, P dichroostachya, P fulva và

P murrayi

1.3.1 Polyscias amplifolia (Baker) Harms

Chaturvedula v.s.prakash và cộng sự [51] đã cho biết ba hợp chất từ quả là:

acid 3-O-β-D-galactopyranosyloleanolic; acid D-galactopyranosyloleanolic và acid 3-O-β-D-galactopyranosyl-(14)-α-L-

3-O-β-D-galactopyranosyl-(14)-β-arabinopyranosyloleanolic có hoạt tính ức chế sự phát triển dòng tế bào ung thư buồng trứng A2780 ở người với giá trị IC50 là 6,7-10,8 g/ml

1.3.2 Polyscias balfouriana Bail

Theo Phan Quốc Kinh [59], thực phẩm chức năng với tên thương mại là CERATO, có bán trên thị trường với thành phần chứa là cao Tật lê, cao Dâm dương

N O

OH

HO

OH O

H 1' 3' 5'

6 ' 7

15' 16'

1

3 5 6

7 8 O

HO

OH HO

OH

1'' 3'' 5'' 6''

15 ' 16'

1

3 5 6

7

1 0 8

(2S,3S,4R,8E)-1-O--D-Glucopyranosyl-2-8-octadecen-1,3,4-triol (62).

6 6

Trang 23

hoắc và cao Đinh lăng lá tròn (P balfouriana) có tác dụng giúp nam giới bồi bổ sức

khỏe, nâng cao thể trạng, giảm đau mỏi lưng gối, ù tai, di tinh, mộng tinh Sản phẩm này đã được Công ty cổ phần dược vật tư y tế Thành Vinh nghiên cứu và sản xuất dựa vào công thức của Genix (sản phẩm được sử dụng rộng rãi ở Bắc Mỹ và Tây Âu), nhưng cải biến một thành phần của Genix để CERATO có hoạt tính cao hơn,

mạnh hơn, đó là thay thế cao Đinh Lăng - Polyscias fruticosa bằng cao Đinh Lăng

lá tròn - Polyscias balfouriana

Dịch trích butanol của lá và rễ cây P balfouriana đều có tác dụng chống loét

khi thử nghiệm trên chuột, trong đó, dịch trích butanol từ lá có tác dụng mạnh hơn dịch trích từ rễ [53]

1.3.3 Polyscias filicifolia Balf

- Dịch trích từ sinh khối của tế bào cây Polyscias filicifolia có khả năng kháng rất mạnh chủng vi khuẩn Staphylococcus aureus và kháng yếu với 3 chủng:

Micrococcus flavus, Streptococcus pyogenes và Streptococcus agalatiae [26,30]

-Dịch trích 40% etanol từ sinh khối của những tế bào nuôi cấy của cây

Polyscias filicifolia áp dụng lên giống Salmonella typhimurium TA 98 và TA 100

cho hoạt tính mạnh về kháng đột biến gen [25]

- Rượu thuốc từ cây Polyscias filicifolia có tác dụng bảo vệ và phục hồi quá

trình tổng hợp protein khi tim heo thiếu oxygen [38]

1.3.4 Polyscias fruticosa (L.) Harms

Cây Đinh lăng có tác dụng làm tăng sức chịu đựng của cơ thể đối với một số yếu tố như: kiệt sức, nóng,…[2]

Các thí nghiệm trên chuột cho thấy cây Đinh lăng có khả năng làm tăng tiết niệu gấp trên năm lần so với bình thường, làm tăng sức đề kháng của chuột đối với các bức xạ siêu cao tầng, kéo dài thời gian sống của chuột bị nhiễm ký sinh trùng

sốt rét Plasmodium berghei, làm tăng tác dụng của thuốc chống sốt rét cloroquin

[11,19]

Cây Đinh lăng có tác dụng tăng lực, tăng cân và bổ khi thí nghiệm trên chuột

Trang 24

và người [1,9,10]

Thực nghiệm trên người cho thấy, cây Đinh lăng làm tăng khả năng chịu đựng của bộ đội, vận động viên thể thao [9]

Khác với Nhân sâm, Đinh lăng không làm tăng huyết áp [2,19]

Năm 1985, Ngô Ứng Long và cộng sự [10,11] đã nghiên cứu độc tính của Đinh lăng cho thấy liều gây chết LD50 của Đinh lăng theo đường tiêm phúc mạc là 32,9 g/ 1kg chuột Kết quả cho thấy với liều uống hàng ngày 60 g/1kg, sau 3 ngày có hiện tượng chuột chết, như vậy, Đinh lăng là thuốc ít độc Nếu so sánh với Nhân sâm về giá trị LD50 cùng đường tiêm phúc mạc thì Đinh lăng ít độc kém 3 lần

Đinh lăng giúp cơ thể người bị suy mòn nhanh chóng hồi phục, ăn ngon, ngủ tốt [2] Dùng Đinh lăng nấu nước uống hàng ngày như thuốc bổ Các hợp chất

polyacetylen như (8E)-heptadeca-1,8-dien-4,6-diyn-3,10-diol trích được từ cây

Panax vietnamensis và Polycias fruticosa cho thấy có hoạt tính kháng chủng khuẩn

Gram dương, kháng nấm Candida albican nhưng không kháng được chủng khuẩn

Gram âm [40]

Năm 2001, Nguyễn Thị Thu Hương và cộng sự [8] đã dùng chuột nhắt trắng để thử nghiệm tác dụng chống trầm cảm và stress của Đinh lăng Kết quả cho thấy cao Đinh lăng có tác dụng chống trầm cảm và phục hồi thời gian ngủ bị rút ngắn bởi stress, ở liều 45-180 mg/kg thể trọng, khoảng liều này cũng có tác dụng khác như tăng lực, kích thích hoạt động của não bộ và nội tiết, tăng sức đề kháng của cơ thể, chống viêm và xơ vữa động mạch

Dịch chiết cồn của rễ Đinh lăng được nuôi cấy mô trong 6 tháng đã thể hiện tác dụng tăng lực dài ngày, chống stress nóng và kháng viêm thực nghiệm tương tự như dịch chiết cồn của rễ cây Đinh lăng 5 năm tuổi trồng trong điều kiện tự nhiên

Trang 25

Theo dân gian, Đinh lăng được dùng làm thuốc bổ, chữa cơ thể suy nhược, gầy yếu, mệt mỏi, tiêu hóa kém, ho, ho ra máu, đau tử cung, kiết lỵ, làm thuốc lợi tiểu và chống độc Dưới đây là một số bài thuốc dân gian có Đinh lăng [1,2,4]

Chữa mệt mỏi, biếng hoạt động: Rễ Đinh lăng phơi khô thái mỏng, 0,50 g thêm

100 ml nước, đun sôi trong 15 phút, chia 2-3 lần uống trong ngày

Chữa sốt lâu ngày, nhức đầu, háo khát, ho, đau tức ngực, nước tiểu vàng: Đinh

lăng tươi (rễ, cành) 30 g, lá hoặc vỏ chanh 10 g, vỏ quýt 10 g, lá tre tươi 20 g, cam thảo đất 30 g, rau má tươi 30 g, me chua đất 20 g Các vị cắt nhỏ, đổ ngập nước, sắc đặc lấy 250 ml, chia uống 3 lần trong ngày

Lợi sữa: Lá Đinh lăng tươi 50 – 100 g, bong bóng lợn 1 cái, băm nhỏ, trộn với gạo

nếp, nấu cháo ăn Hoặc rễ Đinh lăng tươi 30 - 40 g, thêm 500 ml nước, sắc còn 250

ml, uống nóng, ngày uống 1-2 lần, uống trong 2 – 3 ngày

Chữa đau tử cung: Cành và lá Đinh lăng sao vàng, sắc uống như chè

Chữa mẫn ngứa do dị ứng: Lá Đinh lăng 80 g, sao vàng, sắc uống, dùng trong 2 -3

tháng

Lá Đinh lăng phơi khô đem lót gối hoặc trải giường cho trẻ em nằm giúp phòng bệnh kinh giật

Ở Ấn Độ, người ta cho là cây có tính làm săn, dùng trong điều trị sốt

Ở Campuchia, người ta dùng lá phối hợp với các cây thuốc khác làm bột hạ nhiệt, thuốc giảm đau Lá dùng xông để ra mồ hôi và chữa chứng chóng mặt, dùng tươi giã nát đắp ngoài trị viêm thần kinh khớp và vết thương Lá nhai nuốt với chút

phèn giúp trị hóc xương cá

1.3.5 Polyscias guilfoylei Bail

Dịch trích nước và dịch trích diclorometan của lá cây đinh lăng trổ có khả năng quyến rũ ruồi trái cây [35]

1.3.6 Polyscias murrayi Harms

Một số dẫn xuất của acid 3-(4-hydroxyphenyl)propanoic được cô lập từ cây

Polyscias murrayi như 3-(4-hydroxyphenyl)propionylcholine; acid 3,4 –di-O-3- (4-

Trang 26

hydroxyphenyl)-1,5-dihydroxypropionylcyclohexancarboxylic; acid

3,5–di-O-3-(4-hydroxyphenyl)-1,4-dihydroxypropionylcyclohexancarboxylic và acid 3- (4-hydroxyphenyl)propanoic có khả năng ức chế hoạt tính xúc tác của men Itk (interleukin-2-inducible T-cell) [42]

1.3.7 Polyscias scutellaria Merr

Cao trích có chứa saponin của cây Polyscias scutellaria áp dụng trên chuột

albino cho thấy có khả năng làm vết thương nhanh lên da non [24]

Trang 27

- Silica gel 60 H loại dùng cho sắc kí lớp mỏng, Merck

- Silica gel 60 (0,040 – 0,063mm), Merck dùng cho sắc kí cột

- Silica gel RP-18, Merck dùng cho sắc kí cột pha đảo

- Sắc kí lớp mỏng loại 25DC – Alufolien 20x20, Kiesel gel 60 F254, Merck

- Máy cô quay thu hồi dung môi: Heilphdol

2.1.2 Các thiết bị phân tích

- Đo điểm nóng chảy trên khối Maquenne, không hiệu chỉnh

- Phổ cộng hưởng từ hạt nhân 1H và 13C-NMR ghi trên máy cộng hưởng từ hạt nhân BRUKER AC 500, tần số 500 MHz cho 1H-NMR và 125 MHz cho 13C-NMR

- Phổ LC–MS được ghi trên máy sắc ký lỏng ghép khối phổ LCQ – FINIGANT, cột nhồi ADSERBPHERE UHF C18

- Phổ ESI-MS: ghi trên máy 5989B-HP-MS-Engine

Các phổ cộng hưởng từ hạt nhân và khối phổ ở trên được đo tại phòng phân tích cấu trúc hóa học- Viện Khoa Học và Công Nghệ Việt Nam, 18 Hoàng Quốc Việt, Cầu Giấy,

Trang 28

2.2 KHẢO SÁT NGUYÊN LIỆU

2.2.1 Thu hái và xử lý mẫu

Các cây Đinh lăng lá tròn Polyscias balfouriana Bail., Đinh lăng trổ Polyscias guilfoylei Bail và Đinh lăng răng Polyscias serrata Balf cùng thuộc họ Nhân sâm

(Araliaceae) được thu hái ở Bình Dương vào tháng 6 năm 2004 Cả ba cây được định danh bởi ThS Liêu Hồ Mỹ Trang, Bộ môn Hóa Thực vật, trường Đại học Y Dược TP HCM Mẫu của ba cây được lưu trong quyển lưu giữ tiêu bản thực vật, ký hiệu mẫu số US-C001

(P balfouriana Bail.), US-C002 (P guilfoylei Bail.) và US-C003 (P serrata Balf.) tại Bộ

môn Hóa Hữu cơ, Khoa Hóa, ĐH KHTN TP HCM

Cây tươi sau khi thu hái, loại bỏ những lá sâu bệnh, vàng úa, rửa sạch, để ráo, sấy khô, nghiền nhuyễn thành bột, được sử dụng cho phần nghiên cứu

2.2.2 Xác định độ ẩm

Độ ẩm của mẫu cây được xác định theo công thức

Mẫu cây tươi sau khi làm sạch được sấy khô ở nhiệt độ 1000C đến khi khối lượng không đổi Thực hiện 3 lần, so sánh lượng mẫu lá cây tươi và khô, suy ra độ ẩm trung bình của mẫu Độ ẩm của các mẫu cây được trình bày trong bảng 2.1

Bảng 2.1 Độ ẩm của các bộ phận của ba loài P balfouriana,

Trang 29

2.3 ĐIỀU CHẾ CÁC LOẠI CAO VÀ CÔ LẬP CÁC HỢP CHẤT TỪ BA LOÀI

POLYSCIAS KHẢO SÁT

2.3.1 Điều chế các loại cao

2.3.1.1 Điều chế cao etanol

Sử dụng phương pháp ngâm dầm ở nhiệt độ phòng để điều chế các cao etanol Bột khô của từng loại cây được ngâm dầm bằng dung môi etanol 950 trong 24 giờ Sau đó lọc, lấy dịch trích, thu hồi dung môi Tiếp tục thực hiện nhiều lần cho đến khi lượng cao thu được không đáng kể, thu được cao etanol của từng cây

2.3.1.2 Điều chế các cao khác

Cao etanol của từng loại cây được tiến hành trích pha rắn silica gel với dung môi giải

ly đầu tiên là eter dầu hỏa, thu hồi dung môi, thu được cao eter dầu hỏa Kế tiếp giải ly với cloroform, thu được cao cloroform Tiếp tục giải ly lần lượt với etyl acetat, metanol, thu được cao etyl acetat và cao metanol Cao metanol được trích lỏng-lỏng với butanol, lấy dịch butanol, thu hồi dung môi, thu được cao butanol

Bột rễ khô được ngâm dầm bằng etanol ở nhiệt độ phòng, dịch trích được thu hồi dung môi ở áp suất kém, thu được cao etanol Cao etanol được trích lỏng-lỏng với butanol, thu hồi dung môi để thu cao butanol

Qui trình điều chế các loại cao được trình bày ở các sơ đồ 2.1-2.4 Khối lượng và thu suất các loại cao (so với cao etanol ban đầu) được trình bày trong bảng 2.2

2.3.2 Trích ly, cô lập một số hợp chất hữu cơ trong ba loài Polyscias

Tiến hành sắc kí cột (sắc kí cột silica gel, sắc kí cột silica gel pha đảo RP-18) trên các loại cao, sau đó sắc kí cột và sắc kí điều chế nhiều lần trên những phân đoạn thu được để

cô lập các hợp chất Toàn bộ quá trình trên được theo dõi bằng sắc kí lớp mỏng với thuốc thử hiện hình là dung dịch acid sulfuric 50%, FeCl3, hơi iod, soi đèn UV

2.3.2.1 Cô lập các hợp chất từ cây Polyscias balfouriana

 Cô lập các hợp chất từ lá của cây Polyscias balfouriana

Từ cao cloroform, cao etyl acetat, cao metanol của lá cây P balfouriana đã cô lập

được các hợp chất có kí hiệu BAL-L.C1, BAL-L.C2, BAL-L.EA1, BAL-L.EA2,

BAL-L.M1, BAL-L.M2, BAL-L.M3, BAL-L.M4 và BAL-L.M5

Thu suất của các hợp chất đã cô lập được so sánh với khối lượng bột lá khô ban đầu Các kết quả được trình bày trong sơ đồ 2.1 và các bảng 2.3-2.5

Trang 30

 Cô lập các hợp chất từ rễ của cây Polyscias balfouriana

Các hợp chất được cô lập từ rễ có kí hiệu BAL-R1, BAL-R2, BAL-R3 Hiệu suất của các hợp chất đã cô lập được so với khối lượng bột rễ khô Kết quả sắc kí cột được trình bày trong sơ đồ 2.2 và bảng 2.6

2.3.2.2 Cô lập các hợp chất từ lá của cây Polyscias guilfoylei

Áp dụng phương pháp tương tự như trên cho các cao của cây P guilfoylei, kết quả cô

lập được 7 hợp chất, được kí hiệu là GUI-C (từ cao cloroform), GUI-EA (từ cao etyl acetat), GUI-B1, GUI-B2, GUI-B3, GUI-B4 và GUI-B5 (từ cao butanol)

2.3.2.3 Cô lập các hợp chất từ lá của cây Polyscias serrata

Từ cây P serrata, cô lập được 7 hợp chất, được kí hiệu là E1, E2,

SER-E3 (từ cao eter dầu hỏa), SER-C (từ cao cloroform), SER-M1, SER-M2, SER-M3 (từ cao metanol)

Trang 31

Sơ đồ 2.1 Sơ đồ điều chế cao và cô lập các hợp chất hữu cơ trong lá cây

Polyscias balfouriana

Ghi chú: C: cloroform; EA: etyl acetat; M: metanol; H : nước

(x)( y): khối lượng thu được (g hoặc mg), thu suất mẫu so sánh với bột lá khô ban đầu (%)

- Trích pha rắn trên silica gel

- Cô quay thu hồi dung môi

Cao cloroform B.2 (15,4 g)

Cao metanol B.4 (24,1 g)

Cao etyl acetat B.3 (16,2 g)

BAL-L.EA2

(79,3 mg) (0,0056%)

- Sắc kí cột silica gel

- Thu được 4 phân đoạn

Phân đoạn B.2.3

(2,2 g)

Sắc kí cột silica gel (C:EA 4:1)

BAL-L.EA1

(13,4 mg) (0,0009%)

Sắc kí cột silica gel (EA:M 95:5)

Sắc kí cột silica gel (EA:M )

Sắc kí cột silica gel (EA:M:H)

BAL-L.M1

(4,3 mg) (0,0003%)

BAL-L.M3

(13,8 mg) (0,0010%)

BAL-L.M4

(11,3 mg) (0,0008%)

BAL-L.M5

(9,8 mg) (0,0007%)

Trang 32

Ghi chú: C: cloroform; M: metanol; H: nước

(x)( y): khối lượng thu được (g hoặc mg), thu suất mẫu so sánh với bột rễ khô ban đầu (%)

Dịch nước BR.2

- Sắc kí cột silica gel pha đảo RP-18 (H:M)

Sơ đồ 2.2 Sơ đồ điều chế cao và cô lập các hợp chất hữu cơ trong rễ cây

Polyscias balfouriana

Trang 33

Ghi chú: B: benzen; C: cloroform; EA: etyl acetat; M: metanol; H: nước

Sơ đồ 2.3 Sơ đồ điều chế cao và cô lập các hợp chất hữu cơ trong lá cây

Polyscias guilfoylei

Bột lá khô (1,1 kg)

Cao etanol G (87 g)

Cao eter dầu

hỏa G.1

(7,9 g)

- Ngâm, tận trích bằng etanol

- Thu hồi dung môi

Cao cloroform G.2 (16,8 g)

Cao etyl acetat G.3 (19,3 g)

Cao metanol G.4 (34,0 g)

Sắc kí cột silica

gel (C:M:H

40:10:1,2)

Phân đoạn G.4.1.5 (2,3 g)

Sắc kí cột silica gel (C:M:H 80:20:2,5)

GUI-B5

(52,0 mg) (0,0047%)

GUI-B3 (55,0 mg) (0,0050%) GUI-B4 (40,0 mg) (0,0036%)

GUI-B1

(32,3 mg)

(0,0029%)

- Sắc kí cột silica gel (C:M:H)

- Sắc kí cột pha đảo RP-18

- Sắc kí cột silica gel (C:M:H)

- Sắc kí cột pha đảo RP-18

- Thêm nước

- Trích lỏng với butanol

lỏng Thu hồi dung môi

Phân đoạn G.2.2 (2,2

g)

Sắc kí cột silica gel (B:C 1:1)

Cao butanol G4.1 (29,5 g)

Trang 34

Ghi chú: C: cloroform; EA: etyl acetat; M: metanol

- Thu hồi dung môi

Cao cloroform S.2 (10,3 g)

Cao etyl acetat S.3 (11,5 g)

Cao metanol S.4 (35,0 g)

Phân đoạn

S.1.3

(1,4 g)

Phân đoạn S.1.4 (1,1 g)

SER-E2

(5,0 mg) (0,0005%)

Phân đoạn S.1.5

(0,9 g)

Phân đoạn S.2.3 (0,6g)

SER-E3

(6,7 mg) (0,0007%)

Sắc kí điều chế (EA:M 4:1)

SER-C

(6,0 mg) (0,0006%)

Sắc kí cột silica gel (C:EA 1:1)

SER-M1

(75,0 mg) (0,0075%)

Sắc kí cột silica gel (C:M 9:1 )

SER-M2

(25,0 mg) (0,0025%)

SER-M3

(29,5 mg) (0,0030%)

Sắc kí cột silica gel (C:M 97:3 )

Sơ đồ 2.4 Sơ đồ cô lập các hợp chất hữu cơ trong lá cây Polyscias serrata

Trang 35

Khối lượng cao (g)

Thu suất (%)

Trọng lượng cao (g)

Kết quả sắc

B2.1 B:C 95:5-9:1 2,2 Nhiều vết Không khảo sát

Khảo sát, thu được BAL-L.C1 (14,5 mg; 0,0010%), BAL-L.C2 (32,4 mg; 0,0023%)

B.2.4 C:EA 7:3; EA 2,1 Nhiều vết Không khảo sát

Phân

giải ly

(13,4 mg; 0,0009%)

(79,3 mg; 0,0056%)

Bảng 2.4 Sắc kí cột trên cao etyl acetat (16,2 g) của lá cây P balfouriana

(Ghi chú : B: benzen, C: cloroform; EA: etyl acetate; thu suất % so sánh với bột lá khô ban đầu)

Bảng 2.3 Sắc kí cột trên cao cloroform (15,4 g) của lá cây P balfouriana

(Ghi chú: C: cloroform; EA: etyl acetat; thu suất % so sánh với bột lá khô ban đầu)

Trang 36

(Ghi chú: EA: etyl acetat; M: metanol, H: nước; thu suất % so sánh với bột lá khô ban đầu)

(Ghi chú: B: benzen, C: cloroform; EA: etyl aceta; thu suất % so sánh với bột lá khô ban đầu)

Bảng 2.5 Sắc kí cột trên cao metanol (24,1g) của lá cây P balfouriana

B.4.2 EA:M 9:1-85:15 3,7 Nhiều vết Không khảo sát

Khảo sát, thu được BAL-L.M1(4,3 mg; 0,0003%), BAL-L.M2 (15,2 mg; 0,0011%), BAL-L.M3 (13,8 mg, 0,0010%)

Khảo sát, thu được BAL-L.M4 (11,3 mg; 0,0008%), BAL-L.M5 (9,8 mg; 0,0007%)

Kết quả sắc kí

BR.1.2 H:M 7:3-13:7 1445 Nhiều vết Không khảo sát

(Ghi chú: M: metanol, H: nước; thu suất % so sánh với bột rễ khô ban đầu)

Phân

giải ly

(8,9 mg; 0,0008%)

G.2.4 C: EA 8:2-1:1 2,4 Nhiều vết Không khảo sát

Bảng 2.7 Sắc kí cột trên cao cloroform (16,8 g) của lá cây P guilfoylei Bảng 2.6 Sắc kí cột trên cao butanol (5,0 g) của rễ cây P balfouriana

Trang 37

(Ghi chú : E: eter dầu hỏa, C: cloroform; EA: etyl acetat; M: metanol; thu suất % so sánh với bột lá khô ban đầu)

Phân

giải ly

(9,3 mg; 0,0008%)

G.3.4 C:M 8:2-7:3 3,1 Nhiều vết Không khảo sát

(Ghi chú: C: cloroform; M: metanol; thu suất % so sánh với bột lá khô ban đầu)

Bảng 2.9 Sắc kí cột trên cao butanol (29,5 g) của lá cây P guilfoylei

Phân

GUI-B5 (52,0 mg; 0,0047%)

G.4.1.6 C:M:H 25:10:1 2,5 Nhiều vết Không khảo sát

(Ghi chú: C: cloroform; M: metanol, H: nước; thu suất % so sánh với bột lá khô ban đầu)

S.1.2 E:C 9:1-1:1 1480 Nhiều vết Không khảo sát

S.1.6 E:EA 7:3; EA 3123 Nhiều vết Không khảo sát

Bảng 2.10 Sắc kí cột trên cao eter dầu hỏa (11,0 g) của lá cây P serrata

Trang 38

(Ghi chú: C: cloroform; EA: etyl acetat; M: metanol; thu suất % so sánh với bột lá khô ban đầu)

Bảng 2.11 Sắc kí cột trên cao cloroform (10,3 g) của lá cây P serrata

S.2.1 C:EA 99:1-3:1 1672 Nhiều vết Không khảo sát

S.2.2 C: EA 1:1; EA 881 Nhiều vết Không khảo sát

SER-C (6,0 mg; 0,0006%)

Bảng 2.12 Sắc kí cột trên cao metanol (35,0 g) của lá cây P serrata

Phân

Kết quả sắc kí

S.4.2 C : M 99:1 - 98:2 4,7 Nhiều vết Không khảo sát

SER-M1 (75,0 mg; 0,0075%)

SER-M2 (25,0 mg; 0,0025%)

SER-M3 (29,5 mg; 0,0030%)

S.4.8 C:M 85:15 - 4:1

(Ghi chú: C: cloroform; M: metanol; thu suất % so sánh với bột lá khô ban đầu)

Trang 39

CHƯƠNG 3 KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN

3.1 KHẢO SÁT CẤU TRÚC HÓA HỌC CÁC HỢP CHẤT CÔ LẬP

3.1.1 Xác định cấu trúc hóa học các hợp chất cô lập từ loài

Polyscias balfouriana

3.1.1.1 Khảo sát cấu trúc hóa học của hợp chất BAL-L.C1

Hợp chất BAL-L.C1 (14,5 mg) thu được từ phân đoạn B.2.3 (sơ đồ 2.1), có

những đặc điểm như sau:

>CH-, -CH2 và –CH3 được trình bày trong bảng 3.1)

Biện luận cấu trúc:

Phổ 13C kết hợp với DEPT-NMR nhận thấy ở vùng từ trường thấp có cặp

mũi ở ppm = 140,8 (=C<); 121,7 (-CH=) và cặp mũi ở ppm = 138,3 (-CH=);

129,3 (-CH=) cho thấy sự hiện diện của hai liên kết đôi >C=CH- và -CH=CH-, là

cặp mũi cộng hưởng đặc trưng của khung stigmasta-5,22-dien Ngoài ra, còn có mũi

cộng hưởng ở ppm = 71,8 ứng với carbon >CH-OH ở vị trí C3

Phổ 1H- NMR cũng giúp xác nhận sự hiện diện của khung

stigmasta-5,22-dien qua các mũi cộng hưởng ở ppm = 5,35 (1H, m, =CH-, H-6); 5,15 (1H, dd, J =

8,5/15 Hz, =CH-, H-22); 5,02 (1H, dd, J = 8,5/15 Hz =CH-, H-23) và 3,52 (1H, m,

>CH-OH, H-3)

Nhận thấy số liệu phổ của hợp chất này gần giống với hợp chất stigmasterol

nên chúng tôi chọn hợp chất stigmasterol [37] để so sánh Sự so sánh được trình bày

trong bảng 3.1 cho thấy có sự tương hợp, do đó đề nghị cấu trúc của hợp chất

Trang 40

H H

Stigmasterol (BAL-L.C1)

Định dạng
Số trang	247
Dung lượng	10,02 MB