CÁC kỹ THUẬT xét NGHIỆM cơ bản tìm nấm gây BỆNH

GVHD: CÔ GIA KHÁNH CÁC KỸ THUẬT XÉT NGHIỆM CƠ BẢN TÌM NẤM GÂY BỆNH DANH SÁCH NHÓM ĐỖ NGỌC HẢI LÊ THỊ THÚY HẰNG NGUYỄN THỊ BÍCH LIÊN PHAN THỊ THÙY LINH NGUYỄN KHÁNH LINH TRẦN THỊ NA 2 I. NGUYÊN TẮC II. DỤNG CỤ, HÓA CHẤT, MÔI TRƯỜNG III. CÁCH LẤY VÀ XỬ LÝ BỆNH PHẨM TÌM NẤM IV. KHẢO SÁT TRỰC TIẾP V. PHƯƠNG PHÁP NHỘM VI. NUÔI CẤY NẤM NỘI DUNG 3 I. NGUYÊN TẮC • Nếu phòng xét nghiệm có đủ điều kiện, nên kết hợp xét nghiệm trực tiếp và nuôi cấy nấm để có thể chẩn đoán xác định nấm gây bệnh. • Nên quan sát mẫu bệnh phẩm cả đại thể lẩn vi thể. • Khi quan sát mẫu bệnh phẩm hoặc mẫu nuôi cấy nấm dưới kính hiển vi, cần phân biệt nấm gây bệnh thật sự và nấm tạp nhiễm. • Khi không tìm thấy nấm trong mẫu bệnh phẩm, không thể loại trừ khả năng nhiểm nấm mà cần phải xét nghiệm bệnh phẩm nhiều ngày liên tiếp và kết hợp với nuôi cấy nấm để có thể có kết luận xác định. 4 II. DỤNG CỤ, HÓA CHẤT, MÔI TRƯỜNG 1. Dụng cụ: - Kính hiển vi , dầu soi kính, Lam kính, Lamen. - Đèn cồn, que cấy kim hoặc que cấy cắt, - Dao cạo, dao mổ, nhíp, kẹp, Kìm, băng dính, bơm, kim tiêm, tăm bông, pince … để lấy mẫu - khăn gạc, kéo, bông, khay pipette, hộp petri. - Găng tay, khẩu trang. - Tủ ấm 5 2. Hóa chất: Tùy kỹ thuật hoặc phương pháp mà có chuẩn bị dung dịch hóa chất phù hợp. - Nước muối sinh lý 8,5% hoặc 0,9% - Dung dịch KOH 10%, 20%, 30% tùy ý - Mực tàu hoặc Parker đen N051 - Dung dịch nhuộm: Gram, xanh Methylen, giêm sa - Phẩm xanh Lactophenol Coton Blue (LPCB) 6 II. DỤNG CỤ, HÓA CHẤT, MÔI TRƯỜNG 3. Môi Trường: 3.1. Thạch Sabouraud (Sabouraud dextrose agar): Dùng để duy trì các lứa cấy và cấy trích biệt sơ khởi các mẫu thử. Khi cần, thêm Chloramphenicol (50mg) hoặc Cycloheximide (Actidione) 500mg hoặc cả hai vào môi trường để ngăn tạp nhiểm. 7 II. DỤNG CỤ, HÓA CHẤT, MÔI TRƯỜNG 3. Môi Trường: 3.2. Thạch tim óc hầm (Brain Heart Infusion = BHI) Môi trường có máu hoặc không có máu dùng để nuôi cấy nấm gây bệnh ở nhiệt độ phòng nhưng thường nhất là dùng để trích biệt và duy trì các lứa cấy nấm men, ủ ở 35- 370C. 8 II. DỤNG CỤ, HÓA CHẤT, MÔI TRƯỜNG 3. Môi Trường: 3.3. Thạch bột bắp (Corn Meal Agar) Dùng để phân biệt và định danh các loại nấm men, đặc biệt là Candida albicans. Ghi chú: để phân biệt Trichophyton rubrum và Trichophyton mentagrophytes dựa vào sự thành lập sắc tố (Trichophyton rubrumsinh sắc tố đỏ), người ta dùng môi trường này nhưng thay thế 1% Tween 80 bằng 1% Glucose. 9 II. DỤNG CỤ, HÓA CHẤT, MÔI TRƯỜNG 3. Môi Trường: 3.4. Môi trường Chromogenic Dùng để phân lập các loại nấm men và nhận dạng trực tiếp candida albicans. Nếu là candida albicans thì khuẩn lạc có màu xanh ngọc. 10 II. DỤNG CỤ, HÓA CHẤT, MÔI TRƯỜNG [...]... danh các loại nấm sợi như Aspergillus, Penicillium… Dichloran 18% Glycerol (DG-18) Agar Potato Dextrose Agar with Chloramphenicol III CÁCH LẤY VÀ XỬ LÝ BỆNH PHẨM TÌM NẤM • Những điều cần chú ý khi lấy bệnh phẩm - Một số loại bệnh phẩm phải được y Bác sĩ chuyên khoa lấy như mẫu sinh thiết, dịch não tuỷ, dịch cổ tử cung… - Một số bệnh phẩm do kỹ thuật viên lấy: Bệnh phẩm ngoài da, tóc, móng, mủ, máu… - Bệnh. .. Bệnh phẩm do bệnh nhân tự lấy: Phân, nước tiểu, khí hư, đờm… - Bệnh nhân phải ngừng điều trị trước khi lấy bệnh phẩm 7- 10 ngày - Phải tuân theo các kỹ thuật vô khuẩn tránh nhiễm nấm từ môi trường Một số loại bệnh phẩm thường chẩn đoán nấm ● Bệnh phẩm ngoài da: Dùng cồn 700 hoặc cồn iod sát khuẩn vùng da nghi nhiễm nấm, dùng lưỡi dao mỏng cạo bờ của tổn thương cho các vẩy da rơi lên tiêu bản hoặc vào... bào bắt màu nhợt nhạt Nấm Cryptococcus neoformans quan sát với mực tàu V Phương pháp nhuộm 2 Nhuộm Gram: - Thường dùng cho các bệnh phẩm lỏng hoặc ướt - Nhộm Gram thường cho kết quả kém khi xét nghiệm nấm Có thể gây nhằm lẫn cho kỹ thuật viên thiếu kinh nghiệm - Thường dùng để chẩn đoán Canidida,Sporothrix, Malessezia (không nên dùng cho các loại nấm lưỡng hình khác) - Phết bệnh phẩm lên lam kính... tiêu bản dưới kính hiển vi ở vật kính dầu - kết quả cho thấy hình ảnh vi nấm bắt màu Gram (+), không thấy rõ cấu trúc bên trong của nấm Nhuộm Gram thường cho thấy sợi của Nocardia và Actinomyces mà các triệu chứng lâm sàng thường thấy giống bệnh cảnh một bệnh nấm Nhuộm Gram của nấm Candida_albicans V Phương pháp nhuộm 3 Nhuộm giêm sa: - Chủ yếu nhuộm bệnh phẩm máu ngoại biên, tủy sương để tìm vi nấm. .. nấm sợi hoặc nấm men trong tiêu bản IV KHẢO SÁT TRỰC TIẾP 3 khảo sát với dung dịch LPCB (Lactophenol Coton Blue) hoặc xanh coton: - Dùng để quan sát vi thể các lứa nuôi cấy nấm - Trong dung dịch LPCB (Lactophenol Coton Blue): Acid lactic giữ nguyên cấu trúc nấm, phenol giết nấm, xanh cotton nhộm màu nấm - Lấy một mảnh nhỏ khuẩn lạc nấm từ môi trường nuôi cấy bằng que cấy cắt - Đặt mảnh khuẩn lạc nấm. .. tiếp mẫu bệnh phẩm bằng mắt thưởng hoặc bằng kính lúp trước khi tiến hành xét nghiệm để phát hiện những chổ có đóng váng vàng , mũ, máu hoặc chất hoại tử (nếu có), nên lấy các chất này đẻ soi trực tiếp và nuôi cấy Trường hợp nghi do mycetoma, cắt nhỏ bệnh phẩm soi dưới kính hiển vi tìm hạt trước khi xử lý bệnh phẩm IV KHẢO SÁT TRỰC TIẾP 1 Khảo Sát với dung dịch nước muối sinh lý: - Dùng các loại bệnh. .. nấm: lấy 5ml máu tĩnh mạch, cho vào chai có 50ml BHI hay Trypticase Soy, ủ ở 370C Một số loại bệnh phẩm thường chẩn đoán nấm ● Mẫu sinh thiết: Được chia làm 2 phần: – Một phần cho vào dung dịch NaCl 0,85% để làm xét nghiệm tìm vi nấm – Một phần cho vào dung dịch cố định (formalin), để làm tiêu bản giải phẫu bệnh lý ● Phân: Lấy mẫu phân vào lọ miệng rộng vô trùng với ít nước muối sinh lý đánh tan ra... trúc vi nấm: nấm men hoặc nấm sợi, bào tử… (có thể định danh vi nấm nếu kết hợp đầy đủ các yếu tố) Aspergillus sp Trichophyton rubrum Microsporum audouinii V Phương pháp nhuộm 1 Nhuộm mực tàu - Mực tàu cung cấp nền màu đen để làm nổi bật hình ảnh tế bào nấm men trong suốt hoặc có nang, đặc biệt dùng để chẩn đoán nấm Cryptococcus neoformans - Nhỏ một giọt mực tàu lên lam kính - Nhỏ một giọt bệnh phẩm... khi bệnh nhân ngủ dậy, xúc miệng sạch rồi khạc đờm vào dụng cụ vô khuẩn có miệng rộng và đậy nắp Một số loại bệnh phẩm thường chẩn đoán nấm ● Bệnh phẩm là các chất dịch, mủ, nước tiểu: Có thể dùng que tăm bông vô khuẩn để lấy mủ, dịch hoặc lấy nước tiểu giữa dòng vào dụng cụ vô khuẩn ● Bệnh phẩm dịch não tuỷ, dịch màng phổi, mụn bọc, máu: Dùng bơm kim tiêm vô khuẩn chọc hút dịch hoặc máu ● Cấy tìm nấm: ... loãng bệnh phẩm trong NaCl 0.85% vô trùng - Nhỏ 1 giọt bệnh phẩm đã pha loãng len lam - Đậy lamen rồi soi ở vật kính 10X, 40X - có thể thấy hình ảnh nấm sợi hoặc nấm men trong tiêu bản IV KHẢO SÁT TRỰC TIẾP 2 Khảo sát với dung dịch NaOH hoặc KOH 10%, 20 %, hay 30% (tùy trường hợp) - KOH làm mềm tổ chức, căng giãn và làm trong tế bào, làm tan các hạt dầu mỡ trong bệnh phẩm - Có thể dùng cho tất cả các . GVHD: CÔ GIA KHÁNH CÁC KỸ THUẬT XÉT NGHIỆM CƠ BẢN TÌM NẤM GÂY BỆNH DANH SÁCH NHÓM ĐỖ NGỌC HẢI LÊ THỊ THÚY HẰNG NGUYỄN THỊ BÍCH LIÊN PHAN. III. CÁCH LẤY VÀ XỬ LÝ BỆNH PHẨM TÌM NẤM IV. KHẢO SÁT TRỰC TIẾP V. PHƯƠNG PHÁP NHỘM VI. NUÔI CẤY NẤM NỘI DUNG 3 I. NGUYÊN TẮC • Nếu phòng xét nghiệm có đủ điều kiện, nên kết hợp xét nghiệm. nấm để có thể chẩn đoán xác định nấm gây bệnh. • Nên quan sát mẫu bệnh phẩm cả đại thể lẩn vi thể. • Khi quan sát mẫu bệnh phẩm hoặc mẫu nuôi cấy nấm dưới kính hiển vi, cần phân biệt nấm gây