Nghiên cứu kháng sinh được sinh tổng hợp nhờ streptomyces 183 220

  LÊ TH MINH HNG NGHIÊN CC SINH TNG HP NH STREPTOMYCES 183.220   2014   LÊ TH MINH HNG NGHIÊN CC SINH TNG HP NH STREPTOMYCES 183.220  ThS.Võ Th Thu Thy  i h  2014 LI C Vi lòng bisâu sc, tôi xin gi li cn cô giáo ThS.Võ Th Thu Thy, ng dn tôi thc hin và hoàn thành khóa lun này. Tôi xin gi li cn các thy cô giáo, các cán b k thut viên trong B môn Vi sinh - Sinh h và tu kin  tôi có th thun li hoàn thành xong khóa lun. Tôi xin gi li cn Ban giám hiu cùng toàn th các thy giáo, cô i hc Hà Ny d  tôi trong sut quá trình hc tp ti ng. M   p trung và c gng h   n thân tôi không th tránh khi nhng sai sót, do vy tôi rt mong nhc nhng ý ki góp t thy cô, b có th c mt khóa lun tt nghip hoàn thin nht.  Hà Ni, ngày 10 tháng 5  Sinh viên Lê Th Minh Hng MC LC T V 1 NG QUAN 2 i c x khun 2 1.1.1. Gii thiu chung v x khun 2 m hình thái 2 1.1.3. X khun chi Streptomyces 3 1.1.4. Phân loi x khun 4 1.1.4.1. Dm hình thái và tính cht nuôi cy 4 m hóa phân loi 4 m sinh lý, sinh hóa 4 1.1.4.1. Phân loi s 5 1.1.4.4. Phân loi da trên trình t gen 16S rADN 5 1.1.4.5. Phân loi x khun chi Streptomyces 5  kháng sinh 5 i kháng sinh 5 1.2.2. Lch s v nghiên cu kháng sinh 6 1.2.3. Các yu t n kh a x khun 7 1.2.3.1. S hình thành cht kháng sinh ca x khun 7 1.2.3.2. ng ca thành phng lên men 7 1.2.3.3. ng cu kin nuôi cy 7 1.3. Ci to và bo qun ging 7 1.3.1. Chn chng có hot tính cao bng phép chn lc ngu nhiên 8 t bin nhân to 8 1.3.3. Bo qun ging VSV 9 1.4. Lên men sinh tng hp kháng sinh 9 1.5. Tách chit và tinh ch kháng sinh 10 1.5.1. Chit xut kháng sinh 10 1.5.2. Tinh ch kháng sinh 11  cu trúc kháng sinh 12  hp th UV  VIS 12 1.6.2. Ph IR 12 1.6.3. Khi ph MS 12 1.7. N lc ci thin sn xut rapamycin t Streptomyces hygroscopicus da trên mô t quá trình chuyn hóa 13 1.8. Phân lp mt cht kháng nm nhóm polyen ph rng t Streptomyces sp. MTCC 5680 13 1.9. Phân lp t t chng Streptomyces n KS có hong chng li vi khun kháng KS 14 U 15  15 2.1.1. Ging x khun 15 2.1.2. Ging VSV kinh 15 ng 15 2.1.4. Dng c hóa cht 18 2.2. Ni dung ngiên cu: 19 2.2.1. Phân loi Streptomyces 183.220 theo ISP 19 2.2.2. Chn lc, ci to ging 19 2.2.3. Lên men, chit tách kháng sinh 20  nh mt s tính cht cc 20 c nghim 20 y và gi ging 20 i x khun theo ISP: 20  21 2.3.4. n ng và vi sinh vt kinh 22  22 ng ánh sáng UV 23  24  24  25 nh các thành php mng 25 2.3.11. Thu kháng sinh thô bt quay 25 2.3.12. Tinh ch kháng sinh thô bng sc ký ct 26  26  26 C NGHIM, KT QU VÀ BÀN LUN 27 nh tên khoa hc ca Streptomyces 183.220 27 3.2. nh ph tác dng ca kháng sinh do Streptomyces 183.220 tng hp 27 3.3. Kt qu la chn môi ng nuôi cy thích hp 28 3.4. Kt qu quá trình sàng lc ngu nhiên 29  30 3.6. Kt qu t bin UV ln 2 31 3.7. Kt qu lên men chìm sinh tng hp kháng sinh 32 3.8. ng ca pH và nhi  bn ca kháng sinh 33 3.9. Kt qu chn dung môi chit xut KS 34 3.10. Kt qu tách KS trong DC bng sc ký lp mng 35 3.11.Kt qu chy sc ký ct 36 3. nh cu trúc, tính cht ca cht KS1 40 KT LUN VÀ KIN NGH 41 DANH MC CÁC CH VIT TT ADN  B. cereus Bacillus cereus ATCC 9946 B. pumilus Bacillus pumilus ATCC 10241 B. subtilis Bacillus subtilis ATCC 6633 D (mm) ng kính trung bình vòng vô khun tính theo milimet DC Dch chit DMHC Dung môi h  t bin E. coli Escherichia coli ATCC 25922 Gr (+) Gram (+) Gr (-) Gram (-) HTKS Hot tính kháng sinh IR Infra Red (hng ngoi) ISP i Streptomyces quc t ( International Streptomyces Project) KTCC Khut KTKS Khun ty khí sinh KS Kháng sinh MIC N c ch ti thiu MRSA Methicillin resistanse Staphylococus aureus ( T cu vàng kháng methicillin) MT ng MTth ng thích hp MTdt ng dch th P. aeruginosa Pseudomonas aeruginosa VM201 P. mirabilis Proteus mirabilis BV 108 PP  s  lch chun S. aureus Staphylococcus aureus ATCC 1128 S. flexneri Shigella flexneri DT 112 S. typhi Samonella typhi DT220 SKLM Sc ký lp mng UV Utra Violet ( t ngoi) V dl : V dm T l th tích dch lc và th tích dung môi VSV Vi sinh vt DANH MC CÁC BNG Bng 2.1 Chng VSV kinh Bng 2.2 ng nuôi cy VSV kinh Bng 2.3 ng nuôi cy x khun Bng 2.4  dng và mt s tính cht vt lý Bng 3.1 m ca Streptomyces 183.220 và Streptomyces vastus Bng 3.2 Kt qu th HTKS trên 9 VSV kim nh Bng 3.3 Kt qu th HTKS ca Streptomyces 183.220 trên MT1 và MT2 Bng 3.4  Streptomyces 183.220 Bng 3.5  Bng 3.6  Bng 3.7  Bng 3.8  Bng 3.9  Bng 3.10  Bng 3.11 nhau Bng 3.12  Bng 3.13  Bng 3.14 -   Bng 3.16  Bng 3.17 - [...]... kháng kháng sinh lên đến mức báo động đòi hỏi chúng ta phải không ngừng tìm kiếm các chủng vi sinh vật có khả năng sinh kháng sinh cũng nhƣ áp dụng các công nghệ hiện đại nhất để cải tạo chúng nhằm thu đƣợc các chủng có hoạt tính kháng sinh cao, tìm kiếm các loại kháng sinh quý Tại ộ môn Vi sinh – Sinh học, Trƣờng Đại học Dƣợc Hà Nội, tôi lựa chọn đề tài: "Nghiên cứu kháng sinh đƣợc sinh tổng hợp nhờ. .. ngoại (UV-VIS) của KS1 do Streptomyces 183. 220 tổng hợp Hình P8 Cực đại hấp thụ của chất KS1 do Streptomyces 183. 220 tổng hợp đ ợc k đo p ổ UV VIS Hình P9 Kết quả đo k ối phổ của chất KS1 do Streptomyces 183. 220 tổng hợp Hình P10 Kết quả đo p ổ hồng ngoại (IR) của chất KS1 do Streptomyces 183. 220 tổng hợp p áp khối thạch 1 Ặ Ấ Ề Kỷ nguyên hiện đại của hóa trị liệu kháng khuẩn đƣợc bắt đầu từ việc tìm... vi sinh vật hiếu khí do vậy độ thông khí là yếu tố quan trọng ảnh hƣởng đến khả năng sinh chất kháng sinh Nồng độ oxy thích hợp cho sinh tổng hợp KS là 2-8ml O2 /100ml môi trƣờng lên men - Nhiệt độ: đa số các xạ khuẩn sinh kháng sinh tại Việt Nam có nhiệt độ phát triển tốt 28-30o C, nhƣng nhiệt độ tối thích cho sinh tổng hợp chất kháng sinh là 22-28oC - pH môi trƣờng: pH thích hợp để sinh tổng hợp. .. chọn đề tài: "Nghiên cứu kháng sinh đƣợc sinh tổng hợp nhờ Streptomyces 183. 220 với 4 mục tiêu nhƣ sau:  Phân loại xạ khuẩn Streptomyces 183. 220 theo ISP  Tìm cách tăng khả năng sinh kháng sinh của chủng Streptomyces 183. 220  Nghiên cứu tìm ra môi trƣờng thích hợp lên men chìm sản xuất kháng sinh  Sơ bộ xác định cấu trúc của chất kháng sinh chính thu đƣợc 2 1 1.1 ạ c 1.1.1 Ổ QU về xạ k uẩ t uc... để sinh tổng hợp chất kháng sinh là pH trung tính, pH acid và kiềm ức chế quá trình sinh tổng hợp chất kháng sinh - Nhân giống: sinh tổng hợp chất kháng sinh phụ thuộc vào chất lƣợng của bào tử tức là tuổi giống Tuổi giống cấy chuyền vào môi trƣờng lên men cho hiệu suất sinh kháng sinh cao nhất là 24 giờ tuổi Lƣợng giống cấy chuyền từ 2-10% [14], [18] 1.3 ả tạo và bảo quả ố Vi sinh vật hiếm khi đƣợc... thống) 6 Ngày nay, kháng sinh không chỉ đƣợc tạo ra bởi các vi sinh vật mà còn đƣợc tạo ra bởi quá trình bán tổng hợp hoặc tổng hợp hóa học, do đó đƣợc định nghĩa nhƣ sau: “ KS là những chất có nguồn gốc vi sinh vật, đƣợc bán tổng hợp hoặc tổng hợp hóa học Với liều thấp có tác dụng kìm hãm hoặc tiêu diệt vi sinh vật gây bệnh”  Phân loại: dựa vào tính nhạy cảm của vi khuẩn đối với kháng sinh, dựa vào cơ... các kháng sinh đƣợc tìm ra nhờ nghiên cứu trên xạ khuẩn:  Năm 1999, kháng sinh lospomal HA – 92 ra đời, đƣợc tách chiết từ Streptomyces CDRLL – 312 tác dụng tăng sức đề kháng đối với các chất độc của chuột, ngoài ra kháng sinh này còn có hoạt tính chống nấm gây bệnh mạnh  Tại Nhật năm 2003, yatakemycin đã đƣợc tách chiết từ xạ khuẩn Streptomyces sp TP – A0356 bằng phƣơng pháp sắc kí cột Kháng sinh. .. của kháng sinh bắt đầu từ khi sản xuất penicilin để dùng trong lâm sàng (1941) Với sự phát triển của khoa học, ngƣời ta đã có thể tổng hợp, bán tổng hợp các kháng sinh tự nhiên (cloramphenicol), các chất có tính KS (sulfamid, quinolon) hay chiết xuất từ vi sinh vật những chất diệt đƣợc tế bào ung thƣ (actinomycin), diệt tụ cầu vàng đã kháng methicillin (MRSA) và các cầu khuẩn kháng vancomycin Streptomyces. .. nghiệm, bình nón, ống đong, … 2.2 ộ du 2.2.1 â cứu oạ Streptomyces 183. 220 theo ISP Tiến hành nuôi cấy chủng xạ khuẩn Streptomyces 183. 220 trên các môi trƣờng ISP, đọc kết quả và đánh giá 2.2.2 ọ ọc, cả tạo ố - Tiến hành sàng lọc ngẫu nhiên, lựa chọn 3 dạng chủng có HTKS cao nhất - Đột biến chủng bằng ánh sáng UV 2 lần để nâng cao khả năng sinh tổng hợp kháng sinh 20 2.2.3 me , c ết tác k á s - Từ 3 môi... v k uẩ k á Streptomyces uồ KS có oạt độ c ố ạ KS Trọng tâm của nghiên cứu này là các hoạt động kháng khuẩn in vitro của Streptomyces, một loại vi khuẩn thƣờng đƣợc tìm thấy trong đất và đƣợc biết đến nhờ khả năng sản xuất kháng sinh Streptomyces đƣợc phân lập từ các vùng khác nhau của Muðla, Thổ Nhĩ Kỳ đánh giá hoạt động ức chế trên bảy VSV Mƣời lăm Streptomyces đƣợc phân lập có hoạt tính kháng khuẩn . men sinh tng hp kháng sinh 9 1.5. Tách chit và tinh ch kháng sinh 10 1.5.1. Chit xut kháng sinh 10 1.5.2. Tinh ch kháng sinh 11  cu trúc kháng. 1.1.4.5. Phân loi x khun chi Streptomyces 5  kháng sinh 5 i kháng sinh 5 1.2.2. Lch s v nghiên cu kháng sinh 6 1.2.3. Các yu t n. KT QU VÀ BÀN LUN 27 nh tên khoa hc ca Streptomyces 183. 220 27 3.2. nh ph tác dng ca kháng sinh do Streptomyces 183. 220 tng hp 27 3.3. Kt qu la chn môi ng nuôi