Nghiên cứu biện pháp làm tăng độ tan và độ hòa tan của felodipin

Trang Hình 2.1 Mô hình thiết bị thử độ hòa tan felodipin từ hệ phân tán rắn 21 Hình 3.1 Đường chuẩn biểu diễn mối tương quan giữa nồng độ felodipin ban đầu trong dung dịch 1% natri lau

L LÀM T

K

TRƯ

NGH TĂNG

P DƯỢ

NỘI

ÁP HÒA T

ỢC SĨ

TAN

TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI

********

CHU QUỲNH ANH

NGHIÊN CỨU BIỆN PHÁP LÀM TĂNG ĐỘ TAN VÀ ĐỘ HÒA TAN

CỦA FELODIPIN KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ

Với lòng kính trọng và biết ơn sâu sắc, tôi xin gửi lời cảm ơn tới:

TS Nguyễn Thị Thanh Duyên ThS Hoàng Văn Đức

Những người thầy đã tận tình hướng dẫn và giúp đỡ tôi trong suốt quá trình thực hiện khóa luận này

Tôi xin chân thành cảm ơn các thầy cô giáo và các anh chị kỹ thuật viên Bộ

môn Công nghiệp, đặc biệt là DS Nguyễn Văn Thắng đã tạo điều kiện giúp đỡ tôi

trong quá trình làm thực nghiệm

Tôi cũng xin gửi lời cảm ơn tới Ban giám hiệu, các phòng ban Trường Đại học Dược Hà Nội cùng toàn thể các thầy cô giáo trong trường đã dạy tôi những kiến thức quý báu trong suốt quá trình học tập tại trường

Cuối cùng, tôi xin gửi lời cảm ơn sâu sắc tới gia đình và bạn bè đã luôn bên cạnh động viên tôi trong quá trình thực hiện khóa luận này

Hà Nội, ngày 10 tháng 5 năm 2013

Chu Quỳnh Anh

Lời cảm ơn

Mục lục

Danh mục kí hiệu và các chữ viết tắt

Danh mục các bảng

Danh mục các hình vẽ, đồ thị

ĐẶT VẤN ĐỀ 1

CHƯƠNG I: TỔNG QUAN 2

1.1 Vài nét về felodipin 2

1.1.1 Công thức 2

1.1.2 Tính chất lý hóa và kiểm nghiệm 2

1.1.3 Dược động học, tác dụng và chỉ định 3

1.1.4 Một số biệt dược chứa felodipin trên thị trường 3

1.2 Một số biện pháp làm tăng độ tan của dược chất ít tan 4

1.2.1 Làm giảm kích thước tiểu phân 4

1.2.2 Điều chỉnh pH 4

1.2.3 Sử dụng đồng dung môi 4

1.2.4 Tạo phức dễ tan 5

1.2.5 Sử dụng hệ phân tán rắn 5

1.2.6 Các phương pháp khác 5

1.3 Hệ phân tán rắn 5

1.3.1 Khái niệm 5

1.3.2 Phân loại 5

1.3.3 Một số phương pháp bào chế hệ phân tán rắn 7

1.3.4 Cơ chế làm tăng độ tan và tốc độ hòa tan dược chất trong hệ phân tán rắn 9

1.3.5 Ưu nhược điểm của hệ phân tán rắn 9

1.3.6 Một số chất mang thường được dùng trong hệ phân tán rắn 10

1.3.7 Các phương pháp đánh giá đặc tính của hệ phân tán rắn 13

CHƯƠNG II: NGUYÊN LIỆU, THIẾT BỊ VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN

CỨU 17

2.1 Nguyên liệu và thiết bị 17 1.1.1 Nguyên liệu 17

1.1.2 Thiết bị 17

2.2 Nội dung nghiên cứu 18

2.3 Phương pháp thực nghiệm 18

2.3.1 Các phương pháp bào chế 18

2.3.2 Các phương pháp đánh giá một số chỉ tiêu của hệ phân tán rắn 19

2.3.3 Các phương pháp khác 23

CHƯƠNG III: THỰC NGHIỆM, KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 25

3.1 Khảo sát lại một số tiêu chí trong đánh giá chất lượng của hệ phân tán rắn 25

3.1.1 Phương pháp định lượng felodipin trong hệ phân tán rắn và trong dịch thử hòa tan các mẫu thử chứa felodipin bằng phương pháp đo quang 25

3.1.2 Phương pháp định lượng felodipin trong đánh giá độ tan của felodipin nguyên liệu và trong hệ phân tán rắn 26

3.1.3 Phương pháp định lượng felodipin bằng phương pháp HPLC 27

3.2 Ảnh hưởng của một số chất mang tới độ tan và độ hòa tan của felodipin từ hệ phân tán rắn 30

3.2.1 Hệ phân tán rắn với chất mang là PVP K30 30

3.2.2 Hệ phân tán rắn với chất mang là HPMC E5 LV 32

3.2.3 Hệ phân tán rắn với chất mang là PEG 33

3.3 Ảnh hưởng poloxamer tới độ tan và độ hòa tan của felodipin từ hệ phân tán rắn 37

3.3.1 Hệ phân tán rắn với chất mang là PVP K30 kết hợp với poloxamer 37

3.3.2 Hệ phân tán rắn với chất mang là PEG 4000 kết hợp với poloxamer.39

3.3.3 Hệ phân tán rắn với chất mang là PEG 6000 kết hợp với poloxamer.41

3.4.1 Về điều chế hệ phân tán rắn của felodipin với chất mang là các polyme

thân nước 44

3.4.2 Về điều chế hệ phân tán rắn của felodipin với chất mang là các polyme

thân nước kết hợp với chất diện hoạt 46

KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT 49 Tài liệu tham khảo

Phụ lục

BP : Dược điển Anh (Bristish pharmacopoeia)

Trang Bảng 1.1 Một số biệt dược chứa felodipin có trên thị trường 3

Bảng 1.2 Phân loại các chất mang sử dụng trong hệ phân tán rắn 11

Bảng 2.1 Các nguyên liệu sử dụng trong nghiên cứu 17

Bảng 3.1 Độ hấp thụ quang của các mẫu chuẩn ở bước sóng λ= 363,5 nm 25

Bảng 3.2 Độ hấp thụ quang của các mẫu chuẩn ở bước sóng λ= 361,5 nm 26

Bảng 3.3 Thời gian lưu và diện tích pic của các mẫu xác định độ đặc

hiệu của phương pháp

27

Bảng 3.4 Thời gian lưu và diện tích pic của các mẫu xác định khoảng

tuyến tính của phương pháp

Bảng 3.7 Độ tan của felodipin nguyên liệu và trong HPTR với PVP K30

trong dung dịch poloxamer 1% trong nước

30

Bảng 3.8 Tỉ lệ FDP hòa tan từ mẫu thử với PVP K30 (n=3) 31

Bảng 3.9 Độ tan của felodipin nguyên liệu và trong HPTR với HPMC

E5 LV trong dung dịch poloxamer 1% trong nước

32

Bảng 3.10 Tỉ lệ FDP hòa tan từ mẫu thử với HPMC E5 LV (n=3) 33

Bảng 3.11 Độ tan của felodipin nguyên liệu và trong HPTR với PEG

trong dung dịch poloxamer 1% trong nước

34

Bảng 3.12 Tỉ lệ FDP hòa tan từ mẫu thử với PEG 4000 (n=3) 35

Bảng 3.13 Tỉ lệ FDP hòa tan từ mẫu thử với PEG 6000 (n=3) 36

Bảng 3.14 Độ tan của felodipin nguyên liệu và trong HPTR với PVP K30,

poloxamer trong dung dịch poloxamer 1% trong nước

37

Bảng 3.15 Tỉ lệ FDP hòa tan từ mẫu thử với PVP K30, poloxamer (n=3) 38

Bảng 3.16 Độ tan của felodipin nguyên liệu và trong HPTR với PEG

4000, poloxamer trong dung dịch poloxamer 1% trong nước

40

Bảng 3.17 Tỉ lệ FDP giải phóng từ HPTR, HHVL với PEG 4000,

poloxamer trong môi trường hòa tan trong 5 giờ (n=3)

40

Bảng 3.18 Độ tan của felodipin nguyên liệu và trong HPTR với PEG

6000, poloxamer trong dung dịch poloxamer 1% trong nước

42

Bảng 3.19 Tỉ lệ FDP hòa tan từ mẫu thử với PEG 6000, poloxamer (n=3) 42

Trang Hình 2.1 Mô hình thiết bị thử độ hòa tan felodipin từ hệ phân tán rắn 21

Hình 3.1 Đường chuẩn biểu diễn mối tương quan giữa nồng độ

felodipin ban đầu trong dung dịch 1% natri laurylsulfat trong đệm phosphat pH 6,5 với độ hấp thụ quang

25

Hình 3.2 Đường chuẩn biểu diễn mối tương quan giữa nồng độ

felodipin trong dung dịch poloxamer 1% với độ hấp thụ quang

26

Hình 3.3 Đường chuẩn biểu diễn mối tương quan giữa nồng độ

felodipin trong dung dịch với diện tích pic đáp ứng

28

Hình 3.4 Đồ thị hòa tan của felodipin trong mẫu thử với PVP K30 31

Hình 3.5 Đồ thị biểu diễn độ hòa tan của felodipin trong HHVLvà

HPTR với chất mang HPMC E5 LV

33

Hình 3.6 Đồ thị hòa tan của felodipin trong mẫu thử với PEG 4000 35

Hình 3.7 Đồ thị hòa tan của felodipin trong mẫu thử với PEG 6000 36

Hình 3.8 Đồ thị hòa tan của felodipin trong mẫu thử với PVP K30,

ĐẶT VẤN ĐỀ

Hiện nay, số người trên toàn thế giới được chẩn đoán tăng huyết áp đang ngày càng tăng nhanh Tăng huyết áp là yếu tố nguy cơ quan trọng nhất liên quan đến các bệnh mạch vành, suy tim, bệnh mạch máu não và bệnh thận mạn tính Năm

2005, trong số 17,5 triệu người tử vong do các bệnh tim mạch thì tăng huyết áp là nguyên nhân trực tiếp gây tử vong của 7,1 triệu người Do vậy, điều trị tăng huyết

áp trở thành nhu cầu thường xuyên và lâu dài của người bệnh

Trong các thuốc điều trị tăng huyết áp hiện nay, felodipin là thuốc thuộc nhóm chẹn kênh calci được sử dụng khá phổ biến Tuy nhiên, felodipin là dược chất thuộc nhóm II trong hệ thống phân loại sinh dược học, có khả năng thấm tốt nhưng độ tan hạn chế làm cho quá trình hấp thu dược chất giảm, ảnh hưởng tới sinh khả dụng của

thuốc Vì vậy, chúng tôi tiến hành thực hiện đề tài: “Nghiên cứu biện pháp làm

tăng độ tan và độ hòa tan của felodipin” với mục tiêu sau:

- Nghiên cứu ảnh hưởng của một số chất mang thân nước đến độ tan và độ hòa tan của felodipin trong hệ phân tán rắn

1.1.2 Tính chất lý hóa và kiểm nghiệm

- Tinh thể trắng hoặc vàng nhạt [8], nhiệt độ nóng chảy 145°C [20]

- Thực tế không tan trong nước, dễ tan trong aceton, ethanol khan, methanol và dichloromethan [8]

- Felodipin không bền với ánh sáng, cần bảo quản ở nơi khô ráo, nhiệt độ phòng, tránh ánh sáng

- Định tính: dung dịch FDP 15 μg/ml trong methanol có cực đại hấp thụ ở 238 nm

H N

Cl

1.1.3 Dược động học, tác dụng và chỉ định

Felodipin hấp thu gần như hoàn toàn qua đường uống nhưng chuyển hóa bước đầu qua gan chậm với sinh khả dụng từ 10-25%, đạt nồng độ tối đa trong huyết tương sau khoảng 3-5 giờ với tỉ lệ liên kết với protein huyết tương (chủ yếu là albumin) lên đến 99% Felodipin chuyển hóa ở cả gan và ruột thành dạng chuyển hóa không còn họat tính, bài tiết khoảng 70% qua thận và 30% qua phân Thời gian bán thải từ 11-25 giờ Felodipin gắn đặc hiệu trên tế bào cơ tim và cơ trơn thành

chế nucleotid phosphodiesterase vòng ở tế bào cơ trơn, làm tăng nucleotid vòng gây giãn cơ trơn mạch máu làm giảm huyết áp Felodipin và các thuốc thuộc nhóm dẫn chất 1,4-dihydropyridin tác dụng chủ yếu ưu tiên trên mạch, làm giãn mạch ngoại

vi, mạch vành và mạch não Ở liều điều trị, felodipin không gây hạ huyết áp thế đứng, ít gây nhịp tim nhanh do phản xạ [2], [3], [4], [25]

Felodipin được chỉ định trong điều trị tăng huyết áp và đau thắt ngực Trong điều trị tăng huyết áp, liều khởi đầu thông thường là 5 mg, liều duy trì từ 2,5-10 mg mỗi ngày Trong điều trị đau thắt ngực, liều thông thường là 5 mg, có thể tăng lên 10 mg nếu cần Hiệu chỉnh liều với bệnh nhân suy gan và người cao tuổi [25]

1.1.4 Một số biệt dược chứa felodipin có trên thị trường:

Bảng 1.1: Một số biệt dược chứa felodipin có trên thị trường

Tên biệt

dƣợc Dạng thuốc Hàm lƣợng felodipin Nhà sản xuất

AstraZeneca

Flodicar 5mg

1.2 Một số biện pháp làm tăng độ tan của dƣợc chất ít tan:

Sinh khả dụng của một dạng thuốc thường liên quan tới khả năng tan trong nước của dược chất đó Tăng độ tan cho các dược chất ít tan trong nước là một biện pháp cần thiết đề cải thiện sinh khả dụng của chúng

1.2.1 Làm giảm kích thước tiểu phân:

Theo phương trình Noey – Whitneys, diện tích bề mặt tiếp xúc của chất tan và dung môi ảnh hưởng tới độ tan của chất tan Khi kích thước tiểu phân chất tan giảm, tăng diện tích tiếp xúc và mức độ tương tác giữa dung môi và chất tan giúp tăng độ tan Các phương pháp có thể sử dụng để giảm kích thước tiểu phân dược chất như phương pháp xay, nghiền, micronization và nano nhũ tương Mỗi phương pháp có nguyên tắc và sử dụng thiết bị để giảm kích thước tiểu phân khác nhau Micronization đã được áp dụng với griseofulvin, progesteron, spironolacton, diosmin và fenofibrat Còn nano nhũ tương đã được áp dụng cho một số dược chất như tarazepid, paclitaxel, bupravaquon atovaquon và amphotericin B [9], [19]

1.2.2 Điều chỉnh pH:

Khi sử dụng các tá dược để điều chỉnh pH trong công thức bào chế, các thuốc ít tan trong nước có thể cho hoặc nhận proton để chuyển thành dạng có thể hòa tan Điều chỉnh pH có thể áp dụng cho cả thuốc dùng đường tiêu hóa và ngoài đường tiêu hóa, cả thuốc dạng lỏng và dạng rắn (tạo vi môi trường) [9]

1.2.3 Sử dụng đồng dung môi:

Trong phương pháp này, nước và một dung môi đồng tan với nước được trộn lẫn tạo thành một hệ dung môi có khả năng làm tăng độ tan của dược chất do làm thay đổi hằng số điện môi của dung môi ban đầu Đồng dung môi thường được kết hợp với điều chỉnh pH để cải thiện độ tan của dược chất trong dạng bào chế lỏng dùng đường tiêu hóa và ngoài đường tiêu hóa [21] Một số dung môi được sử dụng để tạo đồng dung môi như PEG 300, PEG 600, polyglycol, ethanol, dimethyl sulfoxid (DMSO), dimethyl acetoamid (DMA),…

1.2.4 Tạo phức dễ tan:

Phức hợp dược chất thân dầu-cyclodextrin (CD) được sử dụng khá phổ biến để cải thiện mức độ và tốc độ tan của các dược chất ít tan cũng như tăng sinh khả dụng của các dạng thuốc [9] Các CD là các phân tử hình nhẫn, bề mặt ngoài thân nước, phần thân dầu là các lỗ rỗng đường kính 5-8 Aº, đây chính là khoang chứa các dược chất thân dầu khi phức hình thành [17]

1.2.5 Sử dụng hệ phân tán rắn:

Dược chất được phân tán trong một hay nhiều chất mang hoặc hệ cốt bằng phương pháp thích hợp có thể làm tăng độ tan của dược chất ít tan trong nước Nhiều dược chất ít tan trong nước đã được cải thiện độ tan trong các chế phẩm bằng phương pháp này: griseofluvin-PEG, itraconazol-HPMC, nifedipin-PVP [10]

1.2.6 Các phương pháp khác:

- Tạo muối, tạo tiền thuốc

- Sử dụng chất diện hoạt làm tăng độ tan

- Tạo vi nhũ tương, nano nhũ tương

1.3 Hệ phân tán rắn:

1.3.1 Khái niệm:

Hệ phân tán rắn (HPTR) là hệ một pha rắn trong đó một hay nhiều dược chất được phân tán trong một hay nhiều chất mang (carriers) hoặc cốt (matrix) trơ về mặt tác dụng dược lý, được điều chế bằng phương pháp thích hợp [5]

Hệ phân tán rắn cải thiện độ tan của dược chất ít tan, làm tăng diện tích tiếp xúc giữa dược chất với môi trường hòa tan sau khi chất mang được hòa tan Chính vì vậy tốc độ giải phóng và hòa tan dược chất cũng tăng lên, điều này rất quan trọng trong vấn đề cải thiện sinh khả dụng của dược chất [5]

Hệ phân tán rắn có cấu trúc hỗn hợp eutecti được tạo ra bằng cách làm đông rắn nhanh dạng chảy đồng nhất hai thành phần có tính chất như trên

- Sự kết tủa dạng vô định hình trong cốt dạng tinh thể: tương tự như hỗn hợp eutecti nhưng dược chất tồn tại ở dạng vô định hình

- Dung dịch và hỗn dịch thủy tinh: dung dịch thuỷ tinh là hệ đồng thể, trong đó chất tan tan trong chất mang thủy tinh Hỗn dịch thủy tinh là hệ trong đó các hạt kết tủa

lơ lửng trong dung môi thủy tinh Năng lượng mạng lưới trong dung dịch và hỗn dịch thủy tinh thường thấp

- Dung dịch rắn: dung dịch rắn có thể xem như dung dịch lỏng, chỉ bao gồm một pha, không phân biệt số lượng các thành phần Đối với dung dịch rắn, kích thước các tiểu phân dược chất đã được giảm đến mức tối thiểu tuyệt đối của nó (kích thước phân tử) và mức độ giải phóng dược chất được xác định bằng mức độ giải phóng chất mang Có thể phân loại các dung dịch rắn theo sự trộn lẫn của các thành phần (dung dịch rắn đồng thể hay không liên tục) hoặc theo cách thức mà các phân

tử hòa tan được phân bố trong dung môi rắn (dung dịch rắn thay thế, kẽ hay vô định hình):

+ Dung dịch rắn liên tục: trong một dung dịch rắn liên tục, các thành phần có thể trộn lẫn ở tất cả các tỷ lệ Về mặt lý thuyết, điều này có nghĩa là độ bền liên kết giữa hai thành phần lớn hơn lực liên kết giữa các phân tử của mỗi thành phần riêng lẻ Các dung dịch rắn thuộc loại này chưa được ứng dụng trong dược phẩm

+ Dung dịch rắn không liên tục: trong các dung dịch rắn không liên tục, độ hòa tan của mỗi thành phần trong các thành phần khác hạn chế Dựa trên những nghiên cứu thực tế, Goldberg và các cộng sự đề xuất rằng dung dịch rắn không liên tục chỉ nên được áp dụng khi độ tan của hai thành phần ở mức trên 5%

+ Hệ dung dịch rắn thay thế: có kích thước của các phân tử chất tan lớn hơn 15% kích thước phân tử dung môi Các dung dịch rắn cổ điển có cấu trúc tinh thể, trong

đó các phân tử chất tan có thể hoặc thay thế cho các phân tử dung môi trong mạng tinh thể hoặc vừa với các khe hở giữa các phân tử dung môi

+ Hệ dung dịch rắn kẽ: trong các dung dịch rắn kẽ, các phân tử chất tan chiếm không gian kẽ giữa các phân tử dung môi trong mạng tinh thể Đường kính phân tử chất tan nhỏ hơn 5% so với đường kính phân tử dung môi

1.3.3 Một số phương pháp chế tạo hệ phân tán rắn:

HPTR có thể được chế tạo bằng các phương pháp sau đây [5], [10], [21], [23] :

Phương pháp đun chảy:

- Nguyên tắc chung: đun chảy chất mang rồi phối hợp dược chất vào chất mang đã đun chảy ở nhiệt độ thích hợp, khuấy trộn tới khi thu được dung dịch trong suốt, làm lạnh nhanh đồng thời vẫn khuấy trộn tới khi hệ đông rắn lại Sản phẩm được nghiền nhỏ và rây lấy các hạt có kích thước nhất định

- Phạm vi áp dụng: dược chất bền với nhiệt, chất mang có nhiệt độ nóng chảy tương đối thấp, độ linh động của chất mang khi ở trạng thái nóng chảy đủ để thay đổi sự kết hợp các phân tử dược chất

- Các phương pháp:

+ Phương pháp đùn nóng chảy (Hot stage extrusion): phương pháp này bao gồm quá trình đùn dược chất và chất mang đã được trộn trước với tốc độ đùn rất lớn ở nhiệt độ nóng chảy trong một khoảng thời gian ngắn Sản phẩm thu được đem làm nguội ở nhiệt độ phòng và nghiền nhỏ

+ Phương pháp đun chảy đông tụ (Melt agglomeration): nung nóng một hỗn hợp của dược chất, chất mang và tá dược ở nhiệt độ lớn hơn hoặc bằng nhiệt độ nóng chảy của chất mang, sau đó làm nguội và nghiền nhỏ

Phương pháp dung môi:

- Nguyên tắc chung: hòa tan dược chất và các chất mang trong một dung môi dễ bay hơi sau đó bốc hơi dung môi Trong phương pháp này, có thể hạn chế sự phân hủy dược chất và chất mang do nhiệt độ vì quá trình bốc hơi dung môi hữu cơ xảy ra ở nhiệt độ thấp Các bước cơ bản của quá trình điều chế HPTR theo phương pháp này bao gồm hòa tan dược chất và chất mang (thường là polyme) trong một dung môi hoặc một hỗn hợp các dung môi Loại bỏ dung môi, sản phẩm thu được đem nghiền thành bột

- Phạm vi áp dụng: dược chất và chất mang không bền với nhiệt Có dung môi thích hợp hòa tan cả dược chất và chất mang hoặc các dung môi khác nhau nhưng có khả năng trộn lẫn (nếu dược chất và chất mang không đồng tan trong một dung môi)

- Để bay hơi dung môi, người ta có thể sử dụng các biện pháp sau:

+ Bay hơi dung môi ở nhiệt độ phòng, kết hợp thổi khí giúp dung môi bay hơi nhanh hơn

+ Bốc hơi dung môi trên nồi cách thủy, làm khô trong bình hút ẩm

+ Bốc hơi dung môi dưới áp suất giảm bằng máy cất quay hoặc thiết bị sấy chân không ở nhiệt độ thấp

+ Kỹ thuật phun sấy: dược chất được hòa tan hoặc phân tán vào chất mang sau đó được phun vào một dòng khí nóng để loại bỏ dung môi Với kĩ thuật này, dung môi bay hơi nhanh, hạn chế hiện tượng tách pha khi HPTR hình thành, có thể kiểm soát kích thước tiểu phân rắn Với kĩ thuật phun sấy, dược chất tồn tại ở dạng vô định hình thường chiếm tỉ lệ cao hơn [12]

+ Kỹ thuật đông khô: gồm 3 giai đoạn là giai đoạn lạnh đông, giai đoạn thăng hoa

ẩm và giai đoạn bốc hơi ẩm liên kết còn lại Ưu điểm của phương pháp này là cải thiện độ hòa tan do làm thay đổi trạng thái kết tinh, tạo các lỗ xốp do dung môi bay hơi, do đó làm tăng khả năng hút nước, tránh phân hủy dược chất [1]

+ Kỹ thuật phun đông tụ: dung dịch được phun qua nitơ lỏng hoặc không khí lạnh khô và nhỏ giọt lạnh để đông khô Kĩ thuật này cũng hạn chế sự phân tách pha, có thể kiểm soát kích thước tiểu phân rắn

+ Kỹ thuật sử dụng chất lỏng siêu tới hạn (SCF): hòa tan dược chất và chất mang trong một dung môi thích hợp, dung dịch được qua một miệng vòi cùng với SCF để tách riêng dung môi Kĩ thuật này có thể giúp tạo ra hạt dược chất nằm trong khoảng giới hạn kích thước 5 – 2000 nm

Phương pháp đồng kết tủa: nhỏ từ từ dung môi vào dung dịch chứa dược chất và

chất mang kèm theo khuấy liên tục Trong quá trình thêm dung môi, dược chất và chất mang sẽ đồng kết tủa để tạo thành các vi hạt Hạt được lọc, sấy khô trong chân

không ở nhiệt độ phòng và giữ bên trong lồng ấp (37ºC) trong 12 giờ, sau đó được

đưa qua rây để lựa chọn kích thước phù hợp

Ngoài ra, HPTR còn có thể bào chế bằng phương pháp đồng nghiền, dung môi thấm ướt và chiếu xạ vi sóng [19]

1.3.4 Cơ chế làm tăng độ tan và tốc độ hòa tan dược chất trong hệ phân tán rắn:

-2

dụng do quá trình hấp thu dược chất từ đường tiêu hóa bị giới hạn bởi độ tan và tốc

độ hòa tan của dược chất [5] Đưa dược chất ít tan vào HPTR là một trong các phương pháp vật lý làm tăng độ tan của dược chất, cải thiện sinh khả dụng của thuốc HPTR làm tăng cả độ tan và tốc độ tan của dược chất, mức độ tăng các tiêu chí này phụ thuộc vào loại chất mang sử dụng, vào tỷ lệ giữa dược chất và chất mang, vào phương pháp tạo HPTR Sự tăng độ tan và tốc độ hòa tan của dược chất trong HPTR có thể theo một số cơ chế sau đây [5], [23]:

- Làm thay đổi trạng thái kết tinh của dược chất, hoặc chuyển từ dạng kết tinh sang dạng vô định hình có khả năng hòa tan tốt hơn (không đòi hỏi năng lượng để phá vỡ mạng tinh thể)

- Làm giảm kích thước của tiểu phân dược chất: dược chất được phân tán ở mức độ cực kì mịn, thậm chí ở mức độ phân tử nếu hệ có cấu trúc dung dịch rắn Sự giảm kích thước này không mắc phải hiện tượng kết tụ các tiểu phân mịn dưới tác động của lực Van der Waals do sự có mặt của chất mang bao quanh tiểu phân dược chất, tạo ra diện tích bề mặt hòa tan lớn hơn sau khi chất mang được hòa tan

- Làm tăng mức độ thấm ướt môi trường hòa tan của dược chất do có mặt của chất mang thân nước, đặc biệt là khi trong HPTR có mặt chất diện hoạt

- Làm giảm năng lượng của sự hòa tan

- Tạo phức dễ tan

1.3.5 Ưu nhược điểm của hệ phân tán rắn:

HPTR thường được sử dụng để cải thiện độ tan và độ hòa tan của các dược chất

ít tan do sự giảm kích thước tiểu phân dược chất, tăng khả năng thấm ướt và cải

thiện độ xốp của dược chất, cũng như hạn chế dạng tinh thể, tăng dạng vô định hình của tiểu phân dược chất Ngoài ra, đưa dược chất vào HPTR còn giúp che dấu mùi

vị của dược chất, dễ dàng ứng dụng trong dạng bào chế các dạng viên nén giải phóng nhanh hay kéo dài [18]

Tuy nhiên, HPTR cũng có một số nhược điểm sau:

- Độ ổn định: quá trình phân tách pha và kết tinh lại làm cho HPTR kém ổn định về mặt vật lý Quá trình này có thể làm giảm khả năng giải phóng dược chất của HPTR

- Các tính chất hóa lý của hệ phụ thuộc vào nhiều yếu tố: với phương pháp đun chảy, nhiệt độ nung nóng, thời gian nung nóng, phương pháp làm lạnh, phương pháp và cách thức tạo thành bột từ HPTR đều có thể ảnh hưởng đến tính chất của HPTR Đối với phương pháp sử dụng dung môi, tỉ lệ dược chất/dung môi hoặc dược chất/chất mang, kỹ thuật làm bay hơi dung môi cũng có ảnh hưởng đáng kể đến các tính chất hóa lý của hệ

- Phương pháp bào chế: đòi hỏi nhiệt độ cao (phương pháp đun chảy) hoặc sử dụng các dung môi hữu cơ độc hại (phương pháp bay hơi dung môi)

- Phát triển dạng bào chế: các tiểu phân của HPTR nhẹ, dễ dính sẽ gây khó khăn trong quá trình nghiền, rây, trộn và dập viên Nhược điểm này có thể làm giảm khả năng đưa các dược chất phân bố trong HPTR vào một dạng bào chế thích hợp

- Khả năng mở rộng qui mô sản xuất: tính chất hóa lý và sự ổn định của HPTR có thể bị ảnh hưởng khi mở rộng qui mô sản xuất [7]

1.3.6 Một số chất mang thường sử dụng trong hệ phân tán rắn:

Các chất mang sử dụng trong HPTR cần dễ tan trong nước hay các dung môi hữu

cơ thông thường, có nhiệt độ chuyển hóa thủy tinh cao, nhiệt độ nóng chảy thấp, bền vững về mặt nhiệt động, dễ loại dung môi ngay cả khi dung dịch có độ nhớt cao, không có tác dụng dược lý riêng, không độc với cơ thể và tạo được HPTR có

độ ổn định cao trong quá trình bảo quản [5]

- Phân loại:

Bảng 1.2: Phân loại các chất mang sử dụng trong hệ phân tán rắn [27]

Thế hệ 3: chất mang hoạt

- Đặc điểm của một số chất mang thường dùng:

+ Polyvinylpyrolidon (PVP): PVP là sản phẩm trùng hợp của vinylpyrolidon, có trọng lượng phân tử từ 2500 đến 3000000 Nhiệt độ chuyển hóa thủy tinh của một loại PVP không chỉ phụ thuộc vào khối lượng phân tử của nó mà còn vào phụ thuộc vào độ ẩm Nói chung, nhiệt độ chuyển hóa thủy tinh của các PVP cao nên PVP thích hợp hơn khi điều chế bằng phương pháp dung môi Khả năng tan trong nước của PVP khá tốt nên có thể cải thiện khả năng hòa tan và tính thấm của dược chất Khi tăng chiều dài phân tử PVP thì khả năng tan trong nước của chúng giảm trong khi độ nhớt của dung dịch tăng lên Tỷ lệ giữa dược chất và PVP trong HPTR cũng ảnh hưởng tới khả năng hòa tan và giải phóng dược chất từ hệ, khả năng này có xu hướng tăng theo tỷ lệ PVP trong hệ

Ví dụ: HPTR piroxicam/PVP có tỉ lệ giải phóng dược chất tăng cùng với sự tăng

tỷ lệ chất mang Tỷ lệ giải phóng cao nhất khi tỷ lệ chất mang/dược chất là 4/1 Nhưng nếu tiếp tục tăng tỷ lệ chất mang lên 5/1 và 9/1 thì tỷ lệ giải phóng dược chất lại giảm [21]

+ Polyethylenglycol (PEG): là các polyme của ethylene oxyd, có khối lượng phân

tử trong khoảng 200 – 300000 Độ nhớt của PEG tăng theo khối lượng phân tử của

nó Các PEG có khối lượng phân tử từ 4000-6000 thường xuyên được sử dụng để điều chế HPTR, bởi vì trong khoảng khối lượng phân tử này, khả năng tan trong nước khá cao và việc xác định hàm ẩm không phải là một vấn đề lớn vì điểm nóng chảy đã vượt quá 50ºC Ưu điểm của PEG khi điều chế HPTR là khả năng hòa tan trong nhiều loại dung môi hữu cơ khác nhau, nhiệt độ nóng chảy thường thấp (dưới 65ºC), phù hợp trong việc điều chế HPTR cả theo phương pháp đun chảy [23] Nếu

sử dụng PEG có khối lượng phân tử thấp, chế phẩm thay đổi mức độ đồng nhất, độ dính cũng là một yếu tố gây khó khăn khi tạo HPTR Các PEG với khối lượng phân

tử cao hơn cũng đã được sử dụng thành công để tăng độ tan và độ hòa tan của dược chất trong HPTR, chế phẩm có chứa PEG 8000 và 10000 tăng độ tan so với dược chất tinh khiết Khi tạo thành HPTR với các PEG, nếu tỷ lệ dược chất quá cao, khả năng dược chất sẽ tồn tại ở dạng tinh thể nhỏ trong HPTR nhiều hơn là phân tán dạng phân tử Nhưng nếu tỷ lệ chất mang quá cao có thể làm cho dược chất tồn tại hoàn toàn ở dạng vô định hình, do đó gây tăng quá mức sự hòa tan và giải phóng dược chất [7], [23], [21]

Ví dụ: Tỉ lệ gliclazid giải phóng tăng khi đưa vào HPTR trong PEG 4000, 6000 hoặc 8000 [13]

+ Các dẫn xuất của cellulose: cellulose là polysaccharid tự nhiên, thường gặp trong thực vật Phân tử là các chuỗi không phân nhánh, trong đó các đơn vị saccharid liên kết với nhau bằng liên kết β-1,4-glycosid Bằng quá trình alkyl hóa hoặc ester hóa, người ta tạo ra các dẫn xuất của cellulose như methylcellulose (MC),

celluloseacetatphthalat (CAP)…HPMC là hỗn hợp các ether của cellulose trong đó

có 16,5-30% là sản phẩm methyl hóa nhóm hydroxyl và 4-32% là sản phẩm hydroxypropyl hóa Trọng lượng phân tử HPMC nằm trong khoảng 10000-

1500000 HPMC tan trong nước, hỗn hợp ethanol: dichloromethan, methanol: dichloromethan [21] HPMC E5 LV có tỉ lệ nhóm methoxy từ 28-30%, nhóm hydroxypropyl từ 7-12%, độ nhớt của dung dịch 2% trong nước (khối lượng/thể tích) ở 20°C là 5 mPa s [22], [28]

+ Chất diện hoạt: là các chất mà ở nồng độ thấp hấp thụ lên các bề mặt làm thay đổi tính chất của bề mặt hoặc làm giảm năng lượng tự do giữa các bề mặt tiếp xúc nhau Các chất diện hoạt có cấu trúc đặc trưng gồm một đầu ưa nước và một đầu kỵ nước Với các đặc điểm như vậy, chất diện hoạt có khả năng làm thay đổi đặc tính nhiệt động học, mức độ tan rã, khuếch tán, hòa tan và giải phóng dược chất Chất diện hoạt ít khi được dùng đơn độc làm chất mang mà thường được dùng phối hợp với

các chất mang khác [5] Poloxamer là một nhóm chất diện hoạt không ion hóa được dùng làm chất gây phân tán, chất nhũ hóa, chất tăng độ tan, làm tá dược trơn cho viên nén, tác nhân gây thấm Poloxamer là tên gọi chung của một nhóm các đồng polyme của propylen oxid và ethylen oxid, phân tử có đầu kị nước là polypropylenoxid và phần thân nước là polyethyleneoxid Các poloxamer có thể phân loại theo khối lượng phân tử và tỷ lệ ethylen oxid trong phân tử Poloxamer

407 có khối lượng phân tử trung bình khoảng 9840-14600, trong đó polyoxyethylen chiếm khoảng 70-75% khối lượng phân tử, còn lại là polyoxypropylen Poloxamer

407 tan tốt trong nước và ethanol, chỉ số HLB 18-23 [22]

+ Ngoài ra, các chất mang thường được sử dụng khác là polyacrylat và

polvinylpyrolidon-polyvinylacetat copolyme (PVP-PVA), ure, đường, polyol và các polyme của chúng (chitosan và muối chitosanglutamat), các acid hữu cơ (acid succinic, acid citric,…) [21]

1.3.7 Các phương pháp đánh giá đặc tính của hệ phân tán rắn

- Kính hiển vi điện tử quét (Scanning Electron Microscope - SEM): đánh giá kích thước tiểu phân, đặc điểm hình thái bề mặt của dược chất và chất mang, cấu trúc đa hình của dược chất, sự phân tán đồng đều của các tiểu phân dược chất trong cốt [18]

- Đánh giá độ tan và độ hòa tan: so sánh độ hòa tan của dược chất, hỗn hợp vật lý của dược chất–chất mang và HPTR dược chất- chất mang có thể cho biết cơ chế của việc cải thiện khả năng giải phóng dược chất (độ tan/ thấm ướt/ giảm kích thước hạt) [18]

- Phân tích nhiệt vi sai (Differential Scanning Calorimetry - DSC): nghiên cứu sự thay đổi trạng thái vật lý của HPTR có thể xảy ra trong quá trình đun chảy do sự có mặt của các polyme có thể ảnh hưởng đến quá trình nóng chảy của dược chất Kết quả thu được cần được kiểm định lại bằng một phương pháp khác Nhìn chung, khi

tỷ lệ tinh thể dưới 2% sẽ khó có thể phát hiện được [18]

- Nhiễu xạ tia X: giúp đánh giá trạng thái kết tinh trong hệ Nhiễu xạ tia X là hiện tượng các chùm tia X nhiễu xạ trên bề mặt tinh thể của chất rắn do tính chất tuần hoàn của cấu trúc tinh thể tạo nên các cực đại và cực tiểu nhiễu xạ khi thỏa mãn điều kiện Bragg: 2d.sinθ = n.λ

d - khoảng cách giữa các mặt nguyên tử phản xạ

1.3.8 Một số nghiên cứu về hệ phân tán rắn chứa felodipin:

Kim J và cộng sự tiến hành nghiên cứu chế tạo HPTR của felodipin với các

chất mang PVP K30, HPMC 2910, poloxamer 407 bằng phương pháp dung môi Felodipin được hòa tan trong dung môi ethanol với lượng thích hợp (tùy theo chất mang), dung dịch này được nhỏ giọt vào chất mang Quá trình bốc hơi dung môi được tiến hành trong chân không ở nhiệt độ phòng, HPTR thu được đem nghiền nhỏ với chày cối Kết quả thu được cho thấy, với chất mang PVP K30, ở tỉ lệ FDP: PVP K30 là 1:10 và 1:15, độ hòa tan tương đối như nhau và đạt khoảng 63% ngay trong

1 giờ đầu Đối với chất mang là HPMC 2910, độ hòa tan cao nhất đạt khoảng 70%

ở tỉ lệ 1:10 nhưng quá trình hòa tan xảy ra chậm hơn Còn đối với chất mang là poloxamer 407, độ hòa tan cao nhất đạt khoảng 80% sau 1 giờ đầu ở tỉ lệ 1:10 giữa dược chất và chất mang [15]

Won D và cộng sự nghiên cứu làm tăng đặc tính hóa lý của hạt phân tán rắn

bằng kỹ thuật phun chất lỏng siêu tới hạn HPTR của FDP được tạo ra với chất mang HPMC và chất diện hoạt bằng phương pháp bay hơi dung môi thông thường

và phương pháp sử dụng chất lỏng siêu tới hạn Các nguyên liệu dùng là FDP, HPMC 2910, poloxamer 188, poloxamer 407, polyoxyethylen (60), dầu thầu dầu

- Phương pháp bốc hơi dung môi thông thường: FDP và HPMC được hòa tan và phân tán trong ethanol, sau đó thêm các chất diện hoạt vào, loại ethanol bằng một

C trong 24 giờ, HPTR thu được đem nghiền thành bột và bảo quản trong bình hút ẩm ở nhiệt độ phòng

- Phương pháp sử dụng chất lỏng siêu tới hạn (SCF): đầu tiên FDP, HPMC, chất diện hoạt được hòa tan và phân tán vào hỗn hợp ethanol: methylen clorid = 5,5:4,5

được thu lại

Kết quả cho thấy: Kích thước hạt của HPTR là từ 200 – 250 nm Kích thước hạt duy trì được 1 giờ theo phương pháp sử dụng SCF, và duy trì được trên 6 giờ đối với phương pháp bốc hơi dung môi thông thường trong nước cất Dựa vào dữ liệu phân tích nhiệt vi sai và nhiễu xạ tia X đã xác nhận sự chuyển thù hình của FDP từ dạng tinh thể sang dạng vô định hình trong HPTR theo cả hai phương pháp trên Độ tan của HPTR điều chế theo phương pháp sử dụng chất lỏng siêu tới hạn là 1,5-20 μg/ml, trong khi độ tan tối đa là 35-110 μg/ml, độ hòa tan là 90% sau 2 giờ [29]

Suknuntha K và cộng sự nghiên cứu đặc tính của HPTR dạng màng phim của

FDP với PVP và đánh giá tác động của dung môi tới đặc tính của hệ Hỗn hợp dung môi dichloromethan và ethanol được phối hợp ở các tỷ lệ 9/1, 7/3, 5/5, 3/7 và 1/9 về khối lượng Màng phim PVP K90 với 10% FDP được bào chế bằng cách hòa tan 0,9 g PVP K90 và 0,1 g FDP trong 10 ml hỗn hợp dung môi trong bình nón 50 ml, lắc cho tan hoàn toàn Một lượng dung dịch 10 ml được đưa lên khuôn kích thước 8

cm x 8 cm, khuôn được giữ cố định trên một bề mặt, kiểm soát để quá trình bay hơi dung môi diễn ra từ từ ở điều kiện nhiệt độ phòng Hệ tiếp tục được để thêm 12 giờ

ở nhiệt độ phòng để đảm bảo loại bỏ tất cả lượng dung môi còn lại HPTR được

đánh giá độ dày của màng phim, trạng thái kết tinh với phương pháp phân tích DSC

và nhiễu xạ tia X Kết quả cho thấy, với dung môi ethanol, độ tan của HPTR là cao nhất Tuy nhiên, ở tỉ lệ 5/5 giữa hai dung môi trong hỗn hợp, FDP ở trạng thái vô định hình trong chất mang và giữ ổn định được trạng thái này trong 2 tháng [24]

Dasgupta A nghiên cứu cải thiện độ tan của FDP bằng cách sử dụng HPTR với

các chất mang PEG ở các tỉ lệ dược chất/PEG là 1/1-1/2-1/3-1/4, PVP K30 ở các tỉ

lệ dược chất/PVP K30 là 1/1-1/2-1/3-1/4, hydroxyl β-cyclodextrin ở các tỉ lệ dược chất/HβCD là 1/1-1/2 và β – cyclodextrin ở tỉ lệ 1/1 so với dược chất HPTR được bào chế bằng phương pháp dung môi với dung môi được dùng là ethanol, thời gian trộn trong 30 phút Kết quả cho thấy độ tan tốt nhất của FDP là 14,68 và 10,08 µg/ml khi tạo HPTR với chất mang PEG và PVP K30 ở tỉ lệ 1/2 [11]

Konno H và cộng sự nghiên cứu ảnh hưởng của loại polyme đến đặc tính giải

phóng FDP từ HPTR vô định hình chứa FDP FDP được hòa tan trong ethanol và thêm vào các polyme khác nhau bao gồm PVP K30, HPMC và HPMCAS Dung môi được bay hơi chân không ở nhiệt độ phòng trong 8 giờ, sau đó sản phẩm thu được đem nung đến 160°C trong vài giây để đảm bảo rằng HPTR ở dạng vô định hình Kết quả cho thấy, sự giải phóng FDP từ HPTR với các chất mang đều cao hơn trạng thái cân bằng về độ tan của FDP dạng tinh thể, ngoại trừ HPTR chứa từ 10-15% PVP về khối lượng Mặt khác, tỷ lệ FDP giải phóng có sự khác nhau giữa các HPTR chứa các chất mang khác nhau Tỷ lệ giải phóng cao nhất đạt được trong vòng 60 phút với hệ chứa PVP trong khi thời gian này là từ 180 đến 240 phút với các hệ chứa HPMC Các polyme đều có tác dụng trong việc ức chế sự tái kết tinh của FDP trong HPTR trong đó hiệu quả nhất là PVP K30 [16]

Chương 2: NGUYÊN LIỆU, THIẾT BỊ VÀ PHƯƠNG PHÁP

NGHIÊN CỨU

2.1 Nguyên liệu và thiết bị

1.1.1 Nguyên liệu:

Bảng 2.1: Các nguyên liệu sử dụng trong nghiên cứu

1 Felodipin Supor (Trung Quốc) EP 7.0

2 PVP K30 Trung Quốc BP 2008

3 HPMC E5 Dow (Mỹ) Nhà sản xuất

4 PEG 4000 Singapore Nhà sản xuất

5 PEG 6000 Trung Quốc Nhà sản xuất

6 Poloxamer Sigmaaldric (Singapore) Nhà sản xuất

7 Dinatri hydrophosphat

dodecahydrat Trung Quốc

Tinh khiết hóa học

8 Natri dihydrophosphat

dihydrat Trung Quốc

Tinh khiết hóa học

9 Natri laurylsulfat Singapore Nhà sản xuất

10 Natri hydroxid Trung Quốc

Tinh khiết hóa học

11 Ethanol tuyệt đối Việt Nam DĐVN IV

12 Methanol Baker (Mỹ)

PA (dùng cho HPLC)

13 Acetonitril Baker (Mỹ)

PA (dùng cho HPLC)

14 Acid phosphoric Merck

PA (dùng cho HPLC)

15 Nước cất Việt Nam DĐVN IV

1.1.2 Thiết bị:

- Cân kỹ thuật SARTORIUS TE412 – Đức

- Cân phân tích SARTORIUS TE214S – Đức

- Máy khuấy từ IKA®C-MAG HS-4 – Đức

- Máy đo pH EUTECH Instrument – Thụy Điển

- Bể điều nhiệt Wisecircu® Fuzzy Control System – Đức

- Máy thử độ hòa tan ERWEKA DT600 – Đức

- Máy ly tâm Rotina 46 – Đức

- Máy đo quang UV – VIS HITACHI U-1900 – Nhật Bản

- Máy đo phổ nhiễu xạ tia X D8 Advance, Brucker – Đức

- Máy phân tích nhiệt vi sai DSC 1 Mettler Toledo – Thụy Sĩ

- Máy sắc ký lỏng hiệu năng cao Shimadzu CLASS-VP 5.03- Nhật Bản

1.2 Nội dung nghiên cứu:

1.2.1 Khảo sát ảnh hưởng của các chất mang PVP K30, HPMC E5 LV, PEG 4000, PEG 6000 đến độ tan và độ hòa tan của felodipin trong HPTR

1.2.2 Khảo sát ảnh hưởng của poloxamer đến độ tan và độ hòa tan của felodipin

trong HPTR với các chất mang PVP K30, PEG 4000, PEG 6000

1.3 Phương pháp thực nghiệm:

1.3.1 Các phương pháp bào chế:

Phương pháp bào chế hệ phân tán rắn:

- Cân các thành phần theo tỉ lệ thiết kế trong công thức

- Hòa tan FDP và poloxamer (PLX) (nếu có) trong lượng ethanol tuyệt đối thích hợp, thêm chất mang vào dung dịch dược chất trong ethanol, khuấy liên tục trên máy khuấy từ trong khi dung môi bay hơi, để 48 giờ trong bình hút ẩm để loại dung môi còn lại

- Nghiền nhỏ HPTR thu được với chày cối, rây qua rây 250, xác định hàm ẩm nhanh với cân xác định hàm ẩm (trừ HPTR chứa PEG), đóng lọ, bảo quản trong bình hút ẩm

Phương pháp chế tạo hỗn hợp vật lý:

- Cân các dược chất và chất mang theo tỷ lệ thiết kế giống thành phần của HPTR

- Trộn dược chất và chất mang thành hỗn hợp bột kép theo nguyên tắc trộn đồng lượng Rây hỗn hợp bột qua rây 250 để thu được hỗn hợp bột đồng nhất

1.3.2 Các phương pháp đánh giá một số chỉ tiêu của hệ phân tán rắn:

1.3.2.1 Phương pháp định lượng felodipin có trong hệ phân tán rắn, hỗn hợp vật lí

- Phương pháp đo quang:

+ Dung dịch 1% natri laurylsulfat (NaLS) trong đệm phosphat pH 6,5: cân 6,42 g natri dihydrophosphat dihydrat và 7,01 g dinatri hydrophosphat dodecahydrat hòa tan trong khoảng 900 ml nước cất, thêm 10,0 g NaLS, siêu âm cho tan hoàn toàn, điều chỉnh pH đến 6,5, chuyển vào bình định mức 1000 ml, bổ sung thể tích vừa đủ đến vạch bằng nước cất

mức 50 ml, hòa tan với khoảng 30 ml methanol, siêu âm 5 phút cho tan hoàn toàn,

bổ sung thể tích vừa đủ đến vạch bằng methanol

định mức 25 ml, bổ sung thể tích vừa đủ đến vạch bằng dung dịch 1% NaLS trong đệm phosphat pH 6,5

ml, bổ sung vừa đủ thể tích bằng dung dịch chuẩn 10,0 μg/ml pha từ dung dịch chuẩn gốc

+ Mẫu thử: Cân chính xác một lượng HPTR tương đương 5,0 mg FDP cho vào bình định mức 25 ml, hòa tan trong khoảng 15 ml methanol, siêu âm 5 phút cho tan hoàn toàn, bổ sung thể tích đến vạch bằng methanol Hút chính xác 5,0 ml dung dịch trên vào bình định mức 100 ml, bổ sung thể tích đến vạch bằng dung dịch 1% NaLS

bình định mức 10 ml, bổ sung vừa đủ thể tích bằng dung dịch vừa pha Ly tâm 5000 v/p/10p Thu lấy dịch trong, đo độ hấp thụ ở bước sóng 361,5 nm, mẫu trắng là dung dịch 1% NaLS trong đệm phosphat pH 6,5

+ Xác định hàm lượng của FDP theo công thức:

C : nồng độ dung dịch chuẩn (µg/ml)

m: khối lượng mẫu thử (μg)

- Phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao:

+ Dung dịch thử: cân chính xác một lượng mẫu thử (HPTR, HHVL) tương đương với 5,0 mg FDP vào bình định mức 50 ml, hòa tan trong khoảng 30 ml pha động, siêu âm 5 phút cho tan hoàn toàn, bổ sung thể tích vừa đủ bằng pha động Hút chính xác 5,0 ml dung dịch trên vào bình định mức 50 ml, bổ sung thể tích đến vạch bằng pha động

m: khối lượng mẫu thử (μg)

1.3.2.2 Phương pháp đánh giá độ tan của felodipin nguyên liệu và trong hệ phân tán rắn trong dung dịch poloxamer 1%

Pha dung dịch PLX 1% trong nước Cân một lượng HPTR hoặc FDP nguyên liệu tương đương khoảng 30 mg FDP (lượng dư) vào ống nghiệm có nút Thêm vào

mỗi ống nghiệm chính xác 10,0 ml dung dịch PLX 1%, đậy kín nút, giữ ổn định ở nhiệt độ ở 37°C trong 24 giờ trong bể điều nhiệt, khuấy trộn trong quá trình Sau 24 giờ, lấy các dung dịch đem ly tâm 5000 v/p/20 p( cần lấy mẫu ở cả thời điểm sau để kiểm tra sự bão hòa dược chất) Thu lấy dịch trong, pha loãng bằng dung dịch PLX 1% đến nồng độ khoảng 20,0 µg/ml Ly tâm dung dịch thu được 5000 v/p/10p, thu lấy dịch trong, đo độ hấp thụ ở λ = 361,5 nm Hoặc pha loãng bằng pha động đến nồng độ khoảng 10,0 μg/ml để định lượng bằng phương pháp HPLC Pha dung dịch

Từ kết quả này ta có thể tính toán số gam FDP tan trong 100 g dung môi

1.3.2.3 Phương pháp đánh giá khả năng hòa tan felodipin từ hệ phân tán rắn, hỗn hợp vật lí

+ Thời điểm lấy mẫu: 0,5h, 1h, 2h, 3h, 4h, 5h

Hình 2.1: Mô hình thiết bị thử độ hòa tan felodipin từ hệ phân tán rắn

- Dung dịch 1% NaLS trong đệm phosphate pH 6,5, dung dịch chuẩn gốc CG, dung

- Dung dịch thử: Tại các thời điểm quy định rút 12,0 ml dịch hòa tan, bổ sung 12,0

ml môi trường

- Tiến hành:

+ Mẫu trắng: dung dịch 1% NaLS ly tâm 5000 v/p/10p

+ Mẫu thử: ly tâm 5000 v/p/10p dịch hòa tan Hút 1,0 ml dung dịch chuẩn thêm vào bình định mức 10 ml, bổ sung vừa đủ thể tích bằng dịch hòa tan tương ứng đã ly tâm

+ Mẫu chuẩn: hút 1,0 ml dung dịch chuẩn thêm vào bình định mức 10 ml, bổ sung vừa đủ thể tích bằng dung dịch chuẩn 10,0 μg/ml

+ Đo độ hấp thụ của mẫu thử và mẫu chuẩn ở λ = 363,5 nm

- Tính toán kết quả:

+ Nồng độ FDP sau khi hiệu chỉnh ở lần hút thứ n được tính theo công thức sau:

V: thể tích môi trường thử hòa tan (V= 500 ml)

+ Phần trăm FDP hòa tan tại thời điểm t được tính theo công thức:

Cn: nồng độ FDP đã hiệu chỉnh ở lần hút thứ n (µg/ml)

m: khối lượng FDP trong mẫu (µg)

Mỗi mẫu thử 3 lần lấy kết quả trung bình Kết quả được báo cáo là kết quả trung bình

Độ lệch chuẩn giữa các mẫu: SD =

: phần trăm giải phóng trung bình của các mẫu tại một thời điểm (%)

1.3.2.5 Phân tích nhiệt vi sai (DSC)

Mẫu phân tích được nghiền mịn, khối lượng mỗi mẫu trên đĩa nhôm khoảng 5,0

mg, phân tích nhiệt vi sai trên giải nhiệt từ 30-200°C với tốc độ gia nhiệt 10°C/ phút, tốc độ dòng khí nitơ 20 ml/phút

2.3.3 Các phương pháp khác:

2.3.3.1 Phương pháp xây dựng đường chuẩn của felodipin trong dung dịch

poloxamer 1%

Pha dung dịch PLX 1% với dung môi nước

trong mục 2.3.2.1 Từ dung dịch chuẩn gốc pha loãng thành các dung dịch chuẩn thứ cấp có nồng độ 5,0; 7,5; 10,0; 12,5; 15,0; 17,5; 20,0; 22,5; 25,0 µg/ml Ly tâm dung dịch PLX 1% ở 5000 v/p/10p làm mẫu trắng Ly tâm các dung dịch chuẩn

5000 v/p/10p

Quét phổ hấp thụ của FDP trong dung dịch PLX 1% với mẫu trắng là dung dịch PLX 1% trong khoảng 200-500 nm để xác định bước sóng hấp thụ cực đại Đo độ hấp thụ của các dung dịch chuẩn ở bước sóng hấp thụ cực đại Xây dựng mối tương quan giữa độ hấp thụ ở bước sóng hấp thụ cực đại với nồng độ FDP trong dung dịch

2.3.3.2 Phương pháp xây dựng đường chuẩn của felodipin trong dung dịch 1% natri laurylsulfat trong đệm phosphat pH 6,5

Chuẩn bị các dung dịch 1% NaLS trong đệm phosphat pH 6,5, dung dịch chuẩn

dịch chuẩn thứ cấp có nồng độ 0,5; 1,0; 4,0; 6,0; 8,0; 10,0; 12,0 µg/ml Mẫu trắng là dung dịch 1% NaLS trong đệm phosphat pH 6,5 ly tâm 5000 v/p/10p Ly tâm các dung dịch chuẩn 5000 v/p/10p, hút 1,0 ml dung dịch chuẩn thêm vào bình định mức

10 ml, bổ sung thể tích đến vạch bằng các dung dịch chuẩn thứ cấp đã ly tâm làm mẫu chuẩn

Quét phổ hấp thụ của FDP trong dung dịch 1% NaLS trong đệm phosphat pH 6,5 trong khoảng 200-500 nm để xác định bước sóng hấp thụ cực đại Đo độ hấp thụ của các dung dịch chuẩn ở bước sóng hấp thụ cực đại Xây dựng mối tương quan giữa độ hấp thụ của FDP ở bước sóng hấp thụ cực đại với nồng độ FDP trong dung dịch

Chương III: THỰC NGHIỆM, KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN

3.1 Khảo sát lại một số tiêu chí trong đánh giá chất lượng của hệ phân tán rắn

3.1.1 Phương pháp định lượng felodipin trong hệ phân tán rắn và trong dịch thử hòa tan các mẫu thử chứa felodipin bằng phương pháp đo quang:

Quét phổ hấp thụ UV của FDP trong dung dịch 1% NaLS trong đệm phosphat

pH 6,5 với λ = 200 – 500 nm, ta thu được hai vị trí bước sóng mà tại đó độ hấp thụ

Xây dựng đường chuẩn biểu diễn sự phụ thuộc của nồng độ FDP trong dung dịch 1% NaLS trong đệm phosphat pH 6,5 với độ hấp thụ quang theo phương pháp

đã trình bày ở mục 2.3.3 Độ hấp thụ quang của các mẫu chuẩn ở bước sóng hấp thụ cực đại λ= 363,5 nm được trình bày trong bảng và hình sau:

Bảng 3.1: Độ hấp thụ quang của các mẫu chuẩn ở bước sóng λ= 363,5 nm

Hình 3.1: Đường chuẩn biểu diễn mối tương quan giữa nồng độ felodipin ban đầu

trong dung dịch 1% natri laurylsulfat trong đệm phosphat pH 6,5 với độ hấp thụ quang

y = 0.0157x + 0.1898 R² = 0.9969

Nhận xét: với đường chuẩn thu được có R2= 0,9969, ta có thể sử dụng phương pháp đo quang để định lượng FDP trong HPTR và trong dịch thử hòa tan các mẫu thử chứa FDP

3.1.2 Phương pháp định lượng felodipin trong đánh giá độ tan của felodipin nguyên liệu và trong hệ phân tán rắn:

Quét phổ hấp thụ UV của FDP trong dung dịch PLX 1% với λ = 200 – 500 nm,

ta thu được hai vị trí bước sóng mà tại đó độ hấp thụ quang của FDP đạt cực đại là

Để khảo sát mối tương quan giữa nồng độ của FDP trong dung dịch PLX 1% với độ hấp thụ quang, tiến hành xây dựng đường chuẩn của FDP trong dung dịch PLX 1% theo phương pháp đã trình bày ở mục 2.3.3 Độ hấp thụ quang của các mẫu chuẩn ở bước sóng hấp thụ cực đại λ= 361,5 nm được trình bày trong bảng và hình sau:

Bảng 3.2: Độ hấp thụ quang của các mẫu chuẩn ở bước sóng λ= 361,5 nm

C

(μg/ml) 5,0 7,5 10,0 12,5 15,0 17,5 20,0 22,5 25,0

Độ hấp

thụ 0,09 0,123 0,164 0,203 0,246 0,290 0,329 0,371 0,403

Hình 3.2: Đường chuẩn biểu diễn mối tương quan giữa nồng độ felodipin trong

dung dịch PLX 1% với độ hấp thụ quang

y = 0.0161x + 0.0053 R² = 0.9991

Nhận xét: với đường chuẩn thu được có R2= 0,9991, ta có thể sử dụng phương pháp đo quang để định lượng FDP trong đánh giá độ tan của FDP nguyên liệu và trong HPTR

3.1.3 Phương pháp định lượng felodipin bằng phương pháp HPLC:

Phương pháp định lượng FDP bằng HPLC được tiến hành theo phương pháp trình bày ở mục 2.3.2 Tiến hành thẩm định một số chỉ tiêu của phương pháp này

 Xác định độ đặc hiệu của phương pháp định lượng (specificity)

- Chuẩn bị mẫu trắng, mẫu chuẩn và mẫu thử:

- Mẫu trắng: pha động

- Mẫu chuẩn: dung dịch FDP chuẩn có nồng độ 10,0 µg/ml

- Mẫu thử: dung dịch được pha từ mẫu HPTR nồng độ FDP khoảng 10,0 µg/ml

- Tiêm lần lượt các mẫu: mẫu trắng, mẫu chuẩn, mẫu thử

Bảng 3.3: Thời gian lưu và diện tích pic của các mẫu xác định độ đặc hiệu của

Nhận xét: không xuất hiện pic trên sắc ký đồ của mẫu trắng Mẫu chuẩn và mẫu

thử cho thời gian lưu tương ứng giống nhau (phụ lục 4) Chứng tỏ rằng phương pháp định lượng FDP bằng hệ thống HPLC đạt yêu cầu về độ đặc hiệu

 Xác định khoảng tuyến tính

- Chạy sắc ký lần lượt các mẫu chuẩn có nồng độ FDP từ 0,5 – 20,0 μg/ml Kết quả

được trình bày trong bảng sau: