Ứng dụng tinh bò sữa holstein friesian phân biệt giới tính nhập ngoại để phát triển nhanh đàn bò sữa ở mộc châu sơn la

19 Bảng 3.1: Hoạt lực tinh trùng sau giải ñôngcủa tinh bò HF phân biệt giới tính...27 Bảng 3.2: Tỷ lệ tinh trùng sống sau giải ñông của tinh bò HFphân biệt giới tính dạng cọng rạ.... Mặc

BỘ GIÁO DỤC VÀ ðÀO TẠO

TRƯỜNG ðẠI HỌC NÔNG NGHIỆP HÀ NỘI

-o0o -

VŨ THỊ MỸ BÌNH

ỨNG DỤNG TINH BÒ SỮA HOLSTEIN FRIESIAN PHÂN BIỆT GIỚI TÍNH NHẬP NGOẠI ðỂ PHÁT TRIỂN NHANH ðÀN BÒ SỮA Ở MỘC CHÂU-SƠN LA

LỜI CAM ðOAN

Tôi, Vũ Thị Mỹ Bình người ký tên dưới ñây xin cam ñoan ñây là công trình nghiên cứu khoa học của riêng tôi Các số liệu, kết quả nêu trong luận văn này là trung thực, chính xác và chưa ñược ai công bố trong bất kỳ công trình nào khác

Mọi sự giúp ñỡ thực hiện luận văn này ñã ñược cảm ơn và các thông tin trích dẫn trong luận văn này ñã ñược chỉ rõ nguồn gốc

Hà Nội, ngày tháng năm 2013

Vũ Thị Mỹ Bình

LỜI CẢM ƠN

Trong quá trình nghiên cứu ñể hoàn thành luận văn của mình, tôi ñã nhận ñược sự chỉ bảo tận tình, sự giúp ñỡ quý báu của các thầy giáo, cô giáo, các nhà khoa học, các nhà quản lý, và gia ñình

Nhân dịp này, cho phép tôi ñược bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới:

Tổ chức:

Bộ môn Ngoại Sản - Khoa Thú y- Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội

Bộ môn Sinh lý ñộng vật và Tập tính vật nuôi - Viện Chăn nuôi

Công ty Cổ phần Giống bò sữa Mộc Châu

Công ty TNHH ðầu tư và Phát triển Nam Thái

Công ty Sexing Technologies, Hoa Kỳ

MỤC LỤC

Lời cam ñoan i

Lời cảm ơn ii

Mục lục iii

Danh mục bảng v

Danh mục hình, ảnh và biểu ñồ vi

Danh mục các chữ viết tắt vii

MỞ ðẦU 1

1 ðặt vấn ñề 1

2 Mục ñích của ñề tài 2

2.1 Ý nghĩa khoa học của ñề tài 2

2.2 Ý nghĩa thực tiễn của ñề tài 2

CHƯƠNG 1 TỔNG QUAN TÀI LIỆU 3

1.1 ðặc ñiểm tinh dịch bò 3

1.2 Sự tạo tinh và thành thục của tinh trùng 3

1.3 Hình thái và cấu tạo tinh trùng bò 4

1.4 Hoạt ñộng của tinh trùng 6

1.5 ðặc ñiểm tinh trùng sau giải ñông 7

1.6 Một số yếu tố cơ bản về ñông lạnh tinh trùng 9

1.7 Một số nhân tố làm tăng sức kháng tinh trùng 11

2 Tinh bò phân biệt giới tính 14

3 Hoạt ñộng sinh sản ở bò cái 16

3.1 Sự thành thục về tính 16

3.2 Tình hình nghiên cứu trong và ngoài nước 19

CHƯƠNG 2 ðỐI TƯỢNG, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 21

2.1 ðối tượng, ñịa ñiểm và thời gian 21

2.2 Nội dung 22

2.2.1 Nghiên cứu chỉ tiêu số lượng, chất lượng 22

2.2.2 Nghiên cứu tỷ lệ thụ thai lần ñầu trên ñàn bò cái HF 23

2.2.3 Nghiên cứu tỷ lệ bê cái sinh ra và ñánh giá hiệu quả kinh tế khi sử dụng tinh bò HF dạng cọng rạ phân biệt giới tính 23

2.3 Phương pháp 23

2.3.1 Phương pháp nghiên cứu một số chỉ tiêu số lượng, chất lượng tinh bò HF dạng cọng rạ phân biệt giới tính 23

2.3.2 Phương pháp nghiên cứu tỷ lệ thụ thai lần ñầu trên ñàn bò cái HF 24

2.3.3 Phương pháp nghiên cứu tỷ lệ bê cái sinh ra và ñánh giá hiệu quả kinh tế khi sử dụng tinh bò HF dạng cọng rạ phân biệt giới tính 24

2.4 Xử lý số liệu 25

CHƯƠNG 3 KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 26

3.1 Một số chỉ tiêu chất lượng tinh bò phân biệt giới tính dạng cọng rạ sau khi giải ñông 26

3.1.1 Hoạt lực tinh trùng sau giải ñông 26

3.1.2 Tỷ lệ tinh trùng sống sau giải ñông 28

3.1.3 Tỷ lệ tinh trùng kỳ hình 31

3.1.4 Số lượng tinh trùng trong một cọng rạ 34

3.1.5 Vận tốc chuyển ñộng của tinh trùng sau giải ñông 37

3.1.6 ðộ dài vận ñộng của tinh trùng sau giải ñông 39

3.2 Kết quả phối giống tinh phân biệt giới tính nhập khẩu từ Hoa Kỳ 41

3.2.1 Tỷ lệ phối giống lần một có chửa trên bò tơ 42

3.2.2 Tỷ lệ phối giống lần một có chửa trên bò lứa thứ nhất 45

3.2.3 Tỷ lệ phối giống lần một có chửa trên bò lứa thứ hai 46

3.2.4 Tỷ lệ phối giống lần một có chửa trên bò lứa thứ ba 47

3.2.5 Tỷ lệ phối giống lần một có chửa trên bò lứa thứ tư 49

3.2.6 So sánh tỷ lệ phối giống lần một có chửa ở các lứa ñẻ khác nhau 50

3.2.7 Tỷ lệ phối giống lần một có chửa khi phối giống bằng tinh PBGT của các ñực giống 53

3.2.8 Tỷ lệ bê cái sinh ra 55

3.2.9 Hiệu quả kinh tế khi sử dụng tinh phân biệt giới tính 57

KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 60

1 Kết luận 60

2 Kiến nghị 61

TÀI LIỆU THAM KHẢO 62

DANH MỤC BẢNG

Bảng 1: Thành phần hoá học của tinh dịch bò 3

Bảng 2: Kích thước của bào thai bò qua các tháng tuổi 19

Bảng 3.1: Hoạt lực tinh trùng sau giải ñôngcủa tinh bò HF phân biệt giới tính 27

Bảng 3.2: Tỷ lệ tinh trùng sống sau giải ñông của tinh bò HFphân biệt giới tính dạng cọng rạ 29

Bảng 3.3 Tỷ lệ tinh trùng kỳ hình sau giải ñông của tinh bò HF phân biệt giới tính 32

Bảng 3.4 Số lượng tinh trùng trong một cọng rạcủa tinh bò HF phân biệt giới tính 34

Bảng 3.5 Vận tốc chuyển ñộng của tinh trùng sau giải ñôngvới tinh bò HF phân biệt giới tính 37

Bảng 3.6: ðộ dài vận ñộng của tinh trùng sau giải ñôngở tinh bò HF phân biệt giới tính 40

Bảng 3.7 Tỷ lệ phối giống lần một có chửa trên ñàn bò tơ khisử dụng tinh phân biệt giới tính nhập khẩu từ Hoa Kỳ 43

Bảng 3.8 Tỷ lệ phối giống lần một có chửa trên bò lứa nhất 45

Bảng 3.9 Tỷ lệ phối giống lần một có chửa trên bò lứa thứ hai 46

Bảng 3.10.Tỷ lệ phối giống lần một có chửa trên bò lứa thứ ba 48

Bảng 3.11.Tỷ lệ phối giống lần một có chửa trên bò lứa thứ tư 49

Bảng 3.12 So sánh tỷ lệ phối giống lần một có chửaở các lứa ñẻ khác nhau 51

Bảng 3.13 Tỷ lệ phối giống lần một có chửa trên ñàn bò cáicủa các ñực giống 54

Bảng 3.14 Tỷ lệ bê cái sinh ra 56

Bảng 3.15 Tính hiệu quả kinh tế khi sử dụng tinh phân biệt giới tính 58

DANH MỤC HÌNH, BIỂU ðỒ

Hình 2.1 Cấu tạo tinh trùng 6

Hình 2.2: Sơ ñồ hoạt ñộng của tinh trùng 7

Hình 3 Quá trình chọn lọc tinh phân biệt giới tính 35

Biểu ñồ 3.1 Hoạt lực tinh trùng sau giải ñông của tinh bò HF phân biệt giới tính 28

Biểu ñồ 3.2: Tỷ lệ tinh trùng sống sau giải ñông của tinh bò HF phân biệt giới tính dạng cọng rạ 31

Biểu ñồ 3.3 Tỷ lệ tinh trùng kỳ hình sau giải ñông của tinh bò HF phân biệt giới tính 33

Biểu ñồ 3.4 Số lượng tinh trùng trong một cọng rạ sau khi giải ñông 36

Biểu ñồ 3.5 Vận tốc chuyển ñộng của tinh trùng sau giải ñôngvới tinh bò HF phân biệt giới tính 39

Biểu ñồ 3.6 ðộ dài vận ñộng của tinh trùng sau giải ñông ở tinh bò HF phân biệt giới tính 41

Biểu ñồ 3.7 Tỷ lệ phối giống lần một có chửa trên ñàn bò tơ khi sử dụng tinh phân biệt giới tính nhập khẩu từ Hoa Kỳ 44

Biểu ñồ 3.8 Tỷ lệ phối giống lần một có chửa trên bò lứa thứ nhất 46

Biểu ñồ 3.9 Tỷ lệ phối giống lần một có chửa ở lứa thứ hai 47

Biểu ñồ 3.10 Tỷ lệ phối giống lần một có chửa ở lứa thứ ba 49

Biểu ñồ 3.11 Tỷ lệ phối giống lần một có chửa ở lứa thứ tư 50

Biểu ñồ 3.12a So sánh tỷ lệ phối giống lần một có chửa ở các lứa ñẻ khác nhau 52

Biểu ñồ 3.12b Tỷ lệ thụ thai ở các lứa ñẻ khác nhau khi sử dụng tinh phân biệt giới tính 53

Biểu ñồ 3.13 Tỷ lệ phối giống lần một có chửa trên ñàn bò cái của các ñực giống 55

Biểu ñồ 3.14 Tỷ lệ bê cái sinh ra 57

MỞ ðẦU

1 ðặt vấn ñề

Những thành tựu về khoa học công nghệ trong lĩnh vực thụ tinh nhân tạo (TTNT) trên thế giới nói chung và ở Việt Nam nói riêng ñã góp phần thúc ñẩy, tăng nhanh số lượng, chất lượng ñàn bò và phát triển chăn nuôi bò cao sản ñạt hiệu quả cao Thụ tinh nhân tạo giúp cho việc cải tạo giống vật nuôi nhanh hơn, tăng hiệu quả kinh tế cao hơn, xóa mờ khoảng cách của không gian và thời gian trong chăn nuôi, ñồng thời tránh ñược một số bệnh lây lan qua ñường sinh dục Trong những năm gần ñây, việc nghiên cứu và ứng dụng thành công công nghệ sản xuất tinh ñông lạnh phân biệt giới tính trên thế giới là một bước phát triển vượt bậc của công nghệ sinh sản ðặc biệt ñối với bò sữa, con vật có giá trị kinh

tế cao, bên cạnh việc sử dụng tinh thường (Conventional semen) thì tinh bò phân biệt giới tính (Sexed or Sorted semen) là lựa chọn tối ưu cho việc tăng nhanh về

số lượng và chất lượng ñàn bò sữa

Việt Nam là nước có kiểu khí hậu nhiệt ñới với nhiệt ñộ không khí thường trên 25 ñộ C, ñộ ẩm trên 80%, do ñó gây khó khăn với việc chăn nuôi bò sữa Tuy nhiên, Mộc Châu (Sơn La) cùng với Lâm ðồng là những vùng có một kiểu khí hậu ñặc thù như các khu vực ôn ñới với nhiệt ñộ không khí khoảng 15-20 ñộ

C và ñộ ẩm dưới 60%, cho phép phát triển các ñàn bò sữa và những cánh ñồng cỏ trên thảo nguyên bao la

Năm 2012, ñàn bò sữa Holstein Friesian (HF) ở Mộc Châu ñã ñạt hơn 12.000 con, ở Mộc Châu ñang thực hiện chương trình phát triển mở rộng quy mô sản xuất theo hướng kết hợp giữa phát triển chăn nuôi hộ gia ñình và trang trại tập trung với quy mô 500-1.000 con/trại Trong kế hoạch 2015-2020, ñàn bò sữa ñạt 17 nghìn con vào năm 2015 và 30 nghìn con vào năm 2020 với sản lượng sữa lên tới 150 nghìn tấn góp phần lớn vào tăng trưởng ngành chăn nuôi nói chung,

bò sữa nói riêng

ðể thực hiện ñược mục tiêu trên, việc áp dụng các tiến bộ khoa học và công nghệ sinh học trong chăn nuôi bò sữa, ñặc biệt là sử dụng tinh bò HF ñông

lạnh phân biệt giới tinh trong TTNT cho ñàn bò sữa ở Mộc Châu ñể tăng nhanh tiến bộ di truyền, nâng cao năng suất và chất lượng sản phẩm trong chăn nuôi bò

sữa là ñiều cần thiết Do vậy, chúng tôi tiến hành nghiên cứu ñề tài “Ứng dụng tinh bò sữa Holstein Friesian (HF) phân biệt giới tính nhập ngoại ñể phát triển nhanh ñàn bò sữa ở Mộc Châu-Sơn La” nhằm giúp cho việc sử dụng tinh

bò HF phân biệt giới tính hiệu quả hơn và góp phần phát triển ngành chăn nuôi

bò sữa ở Mộc Châu

2 Mục ñích của ñề tài

ðề tài góp phần vào công cuộc phát triển nhanh ñàn bò sữa Mộc Châu nói riêng và Việt Nam nói chung

2.1 Ý nghĩa khoa học của ñề tài

Kết quả của ñề tài góp phần bổ sung cơ sở lý luận khoa học về chất lượng tinh bò HF phân biệt giới tính, ñộ tuổi phù hợp của bò cái ñể phối giống TTNT, tinh bò HF phân biệt giới tính ñạt hiệu quả cao và tỷ lệ bê cái sinh ra khi sử dụng tinh bò HF phân biệt giới tính

ðây là nguồn thông tin quan trọng cho việc biên soạn sách, tài liệu giảng dạy, tập huấn, nghiên cứu khoa học và phục vụ thực tiễn cho phát triển chăn nuôi

bò sữa ở Mộc Châu nói riêng và Việt Nam nói chung

2.2 Ý nghĩa thực tiễn của ñề tài

Kết quả của ñề tài là dẫn liệu tốt cho người chăn nuôi, các cơ sở chăn nuôi

bò sữa ở Mộc Châu nói riêng và Việt Nam nói chung khi lựa chọn sử dụng tinh

bò HF phân biệt giới tính ñể tăng nhanh ñàn gia súc, phát triển chăn nuôi bò sữa

có hiệu quả kinh tế cao

CHƯƠNG 1 TỔNG QUAN TÀI LIỆU

1.1 ðặc ñiểm tinh dịch bò

Tinh dịch gồm có tinh trùng (3-5%) và tinh thanh (95-97%), tinh trùng ñược sinh ra từ những ống sinh tinh ở dịch hoàn còn tinh thanh ñược sinh ra từ các tuyến sinh dục phụ

Bảng 1: Thành phần hoá học của tinh dịch bò

1.2 Sự tạo tinh và thành thục của tinh trùng

Khi bò ñực ñến tuổi thành thục về tính thì dịch hoàn bắt ñầu sản sinh ra tinh trùng, tinh trùng là tế bào sinh dục ñực (tế bào duy nhất có khả năng tự vận ñộng) ñã hoàn chỉnh về hình thái, cấu tạo, ñặc ñiểm sinh lý, sinh hóa bên trong

và có khả năng thụ thai Quá trình hình thành tinh trùng ở bò ñực là một quá trình liên tục trong ống sinh tinh từ khi con ñực thành thục về tính ñến khi già yếu Các tế bào phôi nguyên thủy phát triển thành tinh nguyên bào rồi biệt hóa thành tinh trùng Các tế bào Sertoli làm nhiệm vụ cung cấp chất dinh dưỡng cho quá trình hình thành tinh trùng, quá trình này có thể chia thành 5 giai ñoạn chính:

Giai ñoạn sinh sản: Tế bào phôi nguyên thủy biệt hóa thành tinh nguyên

bào, tinh nguyên bào này xuất hiện không lâu trước khi thành thục về tính, là những tế bào lớn hình tròn, có chất nhiễm sắc phân tán rất ñiển hình, có dạng hạt nhỏ li ti hay hạt phấn hoa, nó nằm ở màng ñáy trong lòng ống sinh tinh, người ta thấy có 3 dạng khác nhau gồm dạng tế bào phôi “A”, dạng “trung gian” và dạng

tế bào phôi “B”

Giai ñoạn sinh trưởng: giai ñoạn này tinh nguyên bào tăng kích thước,

ñến cuối giai ñoạn sinh trưởng tế bào phôi ñược gọi là tinh bào cấp I (Cyt I), quá trình này phân chia gián phân cho ra những Cyt I với 2n nhiễm sắc thể (NST), giai ñoạn này xảy ra từ 15 ñến 17 ngày

Giai ñoạn thành thục: ðặc trưng của giai ñoạn này là số lượng nhất ñịnh

các lần phân chia giảm nhiễm bộ nhiễm sắc thành ñơn bội, giai ñoạn này gồm hai lần phân chia liên tiếp:

Lần 1: theo cách phân chia giảm, tạo ra tinh bào cấp II (Cyt II) với n nhiễm sắc thể, xảy ra từ 13 ñến 17 ngày

Lần 2: theo cách phân chia ñều, phân chia NST có sau lần phân chia 1 ñể tạo ra tinh tử, xảy ra nhanh từ 1 ñến 2 ngày

Giai ñoạn biến thái: giai ñoạn này nhân tế bào thu nhỏ lại và biến thành ñầu

tinh trùng, phần lớn tế bào chất dồn về một phía tạo thành cổ và thân Một số thể Golgi tập trung ở ñầu mút trước của tiền tinh trùng tạo thành Acrosom, các màng bọc và xoang Acrosom Acrosom cùng với màng nhân và màng ngoài tạo thành mũ trước chóp của tinh trùng và nối với tế bào Sertoli ñể nuôi dưỡng tinh trùng (tinh trùng non), giai ñoạn này xảy ra trong khoảng thời gian từ 14 ñến 15 ngày

Giai ñoạn phát dục: giai ñoạn này xảy ra ở dịch hoàn phụ, tinh trùng non

tiếp tục phát dục và thành thục Trong quá trình di chuyển từ ñầu ñến cuối phụ dịch hoàn, tinh trùng phải di chuyển khá dài Quá trình này khá nhiều tinh trùng non bị phân hủy (có thể tới 50%), quá trình di chuyển kéo dài từ 14 ñến 15 ngày

1.3 Hình thái và cấu tạo tinh trùng bò

Tinh trùng bò hình dạng giống con “nòng nọc” có chiều dài từ 68-80 µm,

có thể chia làm 4 phần chính gồm ñầu, cổ, ñoạn giữa và ñuôi (Hiroshi, 1992;

Trần Tiến Dũng và cs, 2002 )

ðầu tinh trùng: Có hình Ovan dài từ 8,0 ñến 9,5 µm, rộng từ 3,3 ñến 5,5 µm, dày

2 µm, chứa nhân tế bào nơi có ADN là vật chất di truyền các ñặc ñiểm của con ñực Bao lấy phần chỏm là thể ñỉnh chứa enzyme hyaluronidaza có chức năng phá vỡ màng ngoài (Mucopolysaccarit) của tế bào trứng ñể mở ñường cho nhân tinh trùng vào dung hợp với nhân của trứng Sự nguyên vẹn của thể ñỉnh giữ vai trò quan trọng như là chỉ số ñánh giá về khả năng thụ tinh của tinh trùng

Cổ tinh trùng: là phần rất ngắn cắm vào hõm của ñáy ở ñầu, dễ dàng bị gãy Cổ

chứa hai trung tử, trung tử gần nhân và trung tử xa nhân, là nơi bắt nguồn của bó trục của ñuôi tinh trùng

ðoạn giữa: ñoạn này ñược nối vào cổ và dày hơn ñuôi, có chiều dài 14,8µm,

ñường kính trong khoảng từ 0,7 ñến 1,0µm ðoạn giữa có một tập hợp sợi trục (2 sợi trục chính và 9 sợi vòng), bọc quanh là một bao ty thể xoắn và màng tế bào chất ðầu cuối của ñoạn giữa là một vòng nhẫn, ñoạn này giàu phospholipids, chứa nhiều oxydase và cung cấp năng lượng cho tinh trùng

ðuôi tinh trùng: Là ñoạn còn lại cho ñến hết chót ñuôi, có chiều dài từ 45 ñến

60µm, ñường kính từ 0,3 ñến 0,7µm, gồm hai phần là ñoạn chính và chót ñuôi ðoạn chính có 9 sợi trục nối vào vòng nhẫn, bao quanh là một bó sợi trục coi như nguyên sinh chất Chót ñuôi là phần tận cùng của ñuôi, nó chỉ gồm hai sợi trung tâm, ñược bao bọc bằng màng tế bào

Nếu phân ñoạn theo chức năng của từng bộ phận thì tinh trùng có thể chia thành hai phần chính:

Phần ñầu lưu giữ yếu tố di truyền và các men liên quan ñến năng lực thụ tinh của tinh trùng

Phần ñuôi là cơ quan có chức năng vận ñộng bằng nguồn năng lượng của

ty thể và cấu trúc của ñuôi

Hình 2.1 Cấu tạo tinh trùng

1.4 Hoạt ñộng của tinh trùng

Trạng thái hoạt ñộng của tinh trùng thể hiện chất lượng tinh dịch, nếu tinh trùng hoạt ñộng càng mạnh thì chất lượng càng tốt Tinh trùng có 3 hình thức vận ñộng cơ bản:

Vận ñộng tiến thẳng: ñây là những tinh trùng có khả năng thụ thai

Vận ñộng xoay tròn: những tinh trùng này thường không có khả năng thụ thai Vận ñộng tại chỗ: là những tinh trùng non, dị tật, không có khả năng thụ thai

Chuyển ñộng của một tinh trùng ñược phân tích là chuyển ñộng theo ñường ziczăc, theo ñường trung bình và ñường thẳng Tương ứng với 3 dạng chuyển ñộng trên, tinh trùng có 3 dạng vận tốc và 3 dạng ñường ñi:

Màng ty lạp thể

VAP (Velocity Average Path): vận tốc chuyển ñộng của tinh trùng theo ñường trung bình (µm/giây)

VSL (Velocity Straight Line): vận tốc chuyển ñộng của tinh trùng theo ñường thẳng (µm/giây)

Ba dạng ñộ dài ñường ñi của tinh trùng:

DCL (Distance Curve Line): ñộ dài ñường ziczăc (µm)

DAP (Distance Average Path): ñộ dài ñường trung bình (µm)

DSL (Distance Straight Line): ñộ dài ñường thẳng (µm)

Hình 2.2: Sơ ñồ hoạt ñộng của tinh trùng

Nguồn: Nguyễn Tấn Anh (1985)

1.5 ðặc ñiểm tinh trùng sau giải ñông

Nền tảng của bảo tồn tinh trùng ñã có hơn nửa thế kỷ trước ñây bằng việc phát hiện ra những tác nhân có tính chất bảo vệ trong lòng ñỏ trứng khi làm lạnh

và glycerol ñể ñông lạnh tinh trùng gà và trâu bò Trong những năm qua, những ñiều chỉnh kỹ thuật thực nghiệm ñã ñược ñưa vào các kỹ thuật bảo quản lạnh tinh trùng với mục ñích là mở rộng phương pháp ñối với nhiều loài và cải tiến hiệu quả của quá trình Mặc dầu ñã có những cải tiến, nhưng khả năng sống và thụ tinh sau giải ñông của tinh trùng ñược bảo quản lạnh bị giảm xuống do các tế bào

bị tổn thương tăng lên trong quá trình bảo quản lạnh Quá trình bảo quản lạnh liên quan ñến các bước như giảm nhiệt ñộ, làm mất nước tế bào, ñông lạnh và giải ñông Tinh trùng không thích nghi ñược với nhiệt ñộ thấp, vì thế bảo quản

lạnh những tế bào này ñã làm giảm khả năng sống và chức năng bình thường của

tế bào Tổn thương tế bào ở các mức ñộ khác nhau là do các cơ chế khác nhau ở mỗi pha bảo quản lạnh, và tình trạng chức năng của các tế bào ñông lạnh-giải ñông là kết quả của những tổn thương tích luỹ trong suốt quá trình ñông lạnh (Nguyễn Văn Lý, 2002)

Tinh trùng ñộng vật có vú rất mẫn cảm với việc hạ nhiệt ñộ từ nhiệt ñộ cơ thể xuống gần ñiểm ñông lạnh của nước Tổn thương tinh trùng, ñược biết là do sốc lạnh, ñược quan sát thấy là mất khả năng chuyển ñộng của tinh trùng khi ñược làm ấm trở lại

Một kết quả hợp lý ñối với bảo quản lạnh tinh trùng ñược ñánh giá như duy trì hoạt lực của tinh trùng khoảng 50% so với mẫu tinh trùng tươi, ñã ñạt ñược ở hầu hết các loài có sử dụng chất bảo quản lạnh tinh trùng trong sinh sản Tuy nhiên, số tinh trùng có khả năng vận ñộng trong một liều dẫn tinh cần thiết

ñể ñạt ñược khả năng thụ thai tốt có sự giao ñộng giữa các loài Tinh trùng ñược ñưa vào bảo quản lạnh lúc bắt ñầu quá trình hoạt hoá tinh trùng Tuy nhiên, khi giải ñông, tinh trùng có những ñặc tính ñiển hình của giai ñoạn hoạt hoá xẩy ra trước Nhiều khía cạnh của hoạt ñộng chức năng tinh trùng ñông lạnh-giải ñông khác nhau so với tinh trùng tươi do kết quả của quá trình bảo quản lạnh ở những phương pháp bảo quản lạnh tốt nhất, khoảng một nửa số tinh trùng có hoạt lực ban ñầu không sống sót khi giải ñông Trong số những tinh trùng có hoạt lực, những tổn thương gần gây chết tác ñộng chức năng hoạt ñộng của tinh trùng ñông lạnh-giải ñông, làm biến ñổi hình dạng và cấu trúc bình thường của tinh trùng (tinh trùng kỳ hình)

Tinh trùng ñông lạnh-giải ñông có những ñặc tính giống như những ñặc tính có ñược của tinh trùng ñã qua quá trình hoạt hoá, những ñặc tính quan sát thấy như khả năng sống bị giảm, giảm nhu cầu thời gian tiếp xúc với ñường sinh dục cái và liều tác nhân hoạt hoá ñể phát triển khả năng hoạt hoá ñể có thể xâm nhập tế bào trứng, tăng kiểu phản ứng huỳnh quang chlotetracycline (CTC) tương ứng với trạng thái hoạt hoá, và giảm khả năng bám dính vào các tế bào biểu mô ống dẫn trứng

Tinh trùng ñể bảo quản lạnh ñược tiếp xúc với các ñiều kiện kết hợp của chất pha loãng huyết tương tinh dịch, nhiệt ñộ thấp, và môi trường ưu trương Những ñiều kiện này dẫn ñến mất và tổ chức lại các thành phần màng nguyên sinh chất tinh trùng tương tự như những sự kiện quan sát ñược trong quá trình hoạt hoá Những thay ñổi này của màng, khi gần chết, ñã làm giảm thời gian sống và khả năng tương tác của tinh trùng với môi trường ñường sinh dục cái, tương tự như những hiện tượng quan sát ñược ở tinh trùng ñã hoạt hoá

1.6 Một số yếu tố cơ bản về ñông lạnh tinh trùng

Hiện tượng ñông băng chất lỏng

Tinh trùng là một tế bào sống, vận ñộng ngoài cơ thể, rất mẫn cảm với sự thay ñổi của ñiều kiện môi trường xung quanh Trong quá trình ñông lạnh, tinh trùng sẽ chịu ảnh hưởng của hiện tượng ñông băng chất lỏng Khi một chất lỏng ñược làm lạnh, quá trình ñông băng xảy ra, quá trình này gồm tiền ñông băng (Supercooling), tạo nhân (nucleation), giãn nở của tinh thể băng (growth of ice crystal) và kết tinh hoàn thiện tại một nhiệt ñộ nhất ñịnh (Eutetic Point), Khi ñông lạnh tinh dịch sự tạo tinh thể và giãn nở tinh thể băng chỉ xảy ra trong ñiều kiện ñông lạnh chậm, còn khi ñông lạnh cực nhanh thì hai hiện tượng trên không xảy ra, mà xảy ra hiện tượng thủy tinh hóa (Vitrification), tạo ra các hạt băng nhỏ

li ti, loại trừ ñược hiện tượng giãn nở tinh thể (Mazur, 1989)

Hiện tượng ñông băng nội bào

Tinh trùng bị chết hoặc bị mất năng lực hoạt ñộng khi cấu tạo nội bào bị phá vỡ do việc hình thành tinh thể nước nội bào Nếu tinh trùng nằm trong dung dịch nước muối sinh lý có thể loại trừ ñược hiện tượng này vì ñược các phân tử nước dạng lỏng bao quanh, mặc dù dung dịch ngoại bào bắt ñầu ñông băng ở nhiệt ñộ -2oC hoặc -5oC Như vậy, quá trình ñông băng sẽ không làm hại tới tế bào tinh trùng cho ñến khi nước nội bào ñông lạnh mặc dù dung môi môi trường bao quanh ñã ñông lạnh (Mazur, 1989)

Sự mất nước của tế bào tinh trùng

Nếu nước nội bào thoát ra ngoài, tinh trùng sẽ bị teo lại nhưng vẫn có tinh trùng sống ñược ở nhiệt ñộ thấp hoặc cực thấp -196oC Trong quá trình làm lạnh,

nước ngoại bào ñông băng làm áp suất thẩm thấu chênh lệch, nước nội bào thoát

ra khỏi tinh trùng và tiếp tục ñông băng phần ngoại bào Có 80% nước nội bào bị ñông lạnh ở -15oC và ñược thoát ra ngoài do ñó ngăn ngừa ñược hiện tượng ñông băng nội bào (Hà Văn Chiêu, 1999)

Phần lớn nước nội bào thoát ra khỏi tinh trùng ở -30oC, tinh trùng có thể chịu lạnh ở -30oC, có thể tồn tại ñược ở -196oC còn tế bào bình thường thì bị phá hủy, tuy nhiên cũng có tinh trùng không có khả năng chịu lạnh do các biến ñổi lý-hóa-sinh xảy ra Những biến ñổi lý-hóa-sinh có thể xảy ra trong tế bào bị phá hủy ở nhiệt ñộ thấp, thay ñổi cấu trúc nội bào là do thay ñổi liên kết hydro ở chuỗi polymer Sự ñông ñặc hóa không thể quay trở lại như cũ và sự kết tủa protein do mất nước của nguyên sinh chất

Hiện tượng ñông băng ngoại bào

Trong khi ñông lạnh ngoại bào sẽ xảy ra hiện tượng nồng ñộ chất hòa tan kèm theo áp suất thẩm thấu tăng lên và kéo theo những thay ñổi về pH Các chất ñiện giải như Natri, Kali có nhiều nhất trong tinh thanh và chúng tồn tại ở dạng Natri clorua, Kali clorua Ở ñiểm Eutectic, nồng ñộ các muối này cao nhất, là khi nhiệt ñộ ở -21,2oC ñối với Natri clorua và -11,1oC ñối với Kaliclorua và biên ñộ nhiệt ñộ này có hại cho tinh trùng Do có sự tăng nồng ñộ chất hòa tan ñi kèm với tăng áp suất thẩm thấu cũng như pH thay ñổi tất cả xảy ra trong biên ñộ nhiệt ñộ này (Hà Văn Chiêu, 1999)

Chuyển ñộng của nước và sự giãn nở của tinh thể nước gây ra hủy hoại cơ học ñối với tinh trùng

Hiện tượng giải ñông giống như ñông lạnh có ảnh hưởng ñến tinh trùng do chênh lệch áp suất thẩm thấu, sự di chuyển của nước qua màng tế bào tinh trùng và sự giãn nở của các tinh thể nước ñá trong quá trình ñông lạnh hoặc tan băng có thể gây tổn thương tinh trùng Bọt khí tồn tại trong tinh thể băng cũng có thể gây tổn hại tinh trùng trong quá trình này (Hà Văn Chiêu, 1999)

Các tổn thương trên có thể ñược loại trừ bằng cách giảm kích cỡ các tinh thể băng và làm số lượng tinh thể nhỏ hơn Tốc ñộ làm lạnh nhanh có

thể làm tăng tinh thể nhỏ ñó khi ñông lạnh Nói cách khác là khi làm lạnh nhanh sẽ ngăn ñược sự lớn lên của các tinh thể băng trong dung dịch và tạo ñiều kiện ñông lạnh giống như thủy tinh hóa Tuy vậy, băng thủy tinh gồm các tinh thể băng sẽ không ổn ñịnh ở nhiệt ñộ trên -129oC, sự chuyển ñộng

và tái tinh thể hóa của chúng sẽ gây tổn hại ñến tinh trùng Chuyển ñộng sẽ tăng lên trên -40oC và dễ gây tổn hại tinh trùng ñặc biệt là ở khoảng -20oC (Hiroshi, 1992)

Những ảnh hưởng trên có thể gây biến ñổi hình thái tinh trùng, ñặc biệt là sự dị hình acrosome, gây rò rỉ lipid ra khỏi thể ñỉnh, ở tinh trùng bò ñực thấy rõ hiện tượng rò rỉ choline plasmalogen, lecithin và sphingomielin, gây ra phá hủy màng sinh chất và giảm nguồn năng lượng cho tế bào tinh trùng gây hiện tượng thấm qua của các hợp chất vô cơ, với tinh trùng bò ñực ion K và Mg ra khỏi tế bào còn ion Na và K thì ở lại, các hợp chất cao phân

tử ra khỏi tinh trùng như: Hyaluronidase, lactic dehydrogenase, oxaloacetic transminase và ankaline phosphatase Nói chung hiện tượng ñông băng làm giảm sức sống, sức vận ñộng và trao ñổi chất, có khoảng từ

glutamic-10 ñến 50% số tinh trùng trong tinh dịch bị chết mặc dù ñã ñược pha vào môi trường có glyceryl Tuy nhiên, các tinh trùng sống có cả các tinh trùng vận ñộng và trao ñổi chất kém Sự trao ñổi chất của tinh trùng thấy rõ ở quá trình glycolysis hơn là quá trình hô hấp (Hiroshi, 1992)

1.7 Một số nhân tố làm tăng sức kháng tinh trùng

Khi ñông lạnh hoặc chống ñông các hiện tượng nêu trên sẽ ñe dọa sức sống của tinh trùng, nhưng khi có biện pháp chống ñông thì khả năng tồn tại của tinh trùng là thực tế Các nhân tố sau ñây giúp tinh trùng tồn tại khi ñông lạnh hoặc giải ñông (Ditto, 1992)

Thành phần của môi trường pha loãng

Thành phần cơ bản của môi trường pha loãng tinh dịch là ñường saccharid, chất ñệm và lòng ñỏ trứng gà Sức sống của tinh trùng khi ñông lạnh và giải ñông khác nhau tùy theo các thành phần này

Nồng ñộ tối ưu của lòng ñỏ trứng từ 15 ñến 20%, nếu nồng ñộ này quá

thấp hoặc quá cao thì không tốt cho tinh trùng, mặc dù lòng ñỏ trứng ñã bảo

vệ tinh trùng không bị tổn hại khi ñông lạnh Chức năng này chủ yếu do tác ñộng của lipoprotein và lecithin trong lòng ñỏ ðường saccharide ñóng vai trò quan trọng trong môi trường, do tác ñộng ñến áp suất thẩm thấu, nó có tác dụng bảo vệ tinh trùng khi ở nhiệt ñộ thấp và là nguồn năng lượng cho tinh trùng

Những saccharide có khối lượng phân tử cao, làm cho hoạt lực của tinh trùng tốt hơn sau khi ñông lạnh và giải ñông Các saccharide có phân tử lượng cao (tính theo phân tử lượng giảm dần) bao gồm: trisaccharide, disaccharide, hexoses và pentone Trong số hexose thì glucose có hiệu quả nhất, còn các chất ña ñường polysaccharide thì ít có tác dụng Bảo vệ lạnh bằng saccharide là nhờ có nhiều nhóm hydroxyl (-OH) trong cấu trúc, do ñó

có xu hướng hình thành liên kết hydro

Chất ñệm có vai trò quan trọng trong duy trì màng sinh chất của tinh trùng khi ñông lạnh và khi giải ñông, trong kích thích trao ñổi chất diễn ra bình thường ở tinh trùng sau khi giải ñông ñồng thời duy trì sức sống của chúng Chất ñệm phải phù hợp như là môi trường khi ñông lạnh và phải có ñặc tính sau:

- Duy trì mức thấp nhất về sự tổn hại cho tinh trùng do các muối gây ra

- Phải tan trong nước với hằng số phân ly ñiện tích 6-8

- Khả năng thấm qua màng sinh chất phải thấp và có sức ñề kháng mạnh với các enzyme ðệm ion zwitter có những tính chất trên nên nó tốt hơn so với ñệm phosphate hoặc ñệm Natri citrate ðệm ion zwitter là Trihydroxy mythylaminomethane (Tris) và N-hydroxymethyl-2-aminoethanesulfonic acid (TES)

Bảo quản ở 5oC trước khi ñông lạnh sẽ tăng cường sức kháng ñông cho tinh trùng bò Thông thường tinh bò sau khi khai thác và ñủ tiêu chuẩn pha chế thì tiến hành xử lý gồm:

- Pha loãng lần ñầu tinh dịch ở 35oC

- Làm lạnh dần xuống 5oC và bảo quản từ 1,5 ựến 2 giờ (cách 1)

- Pha loãng lần hai với môi trường có chứa glycerol

- Cân bằng trong 2 ựến 3 giờ

- đông lạnh tinh trùng

- Bảo quản tinh trùng ựã làm lạnh ở 5oC trước khi pha loãng lần hai ựã nâng cao ựáng kể tỷ lệ sống của tinh trùng sau khi ựông lạnh và giải ựông Một cách khác (cách 2) của phương pháp này là bảo quản qua ựêm (từ 20 ựến 22h), tinh trùng ựã làm lạnh ở 5oC, trước khi pha loãng lần hai Sức sống của tinh trùng theo cách xử lý hai tốt hơn so với cách xử lý thông thường (cách 1) Cách thứ ba là bảo quản tinh trùng khi ựã cân bằng với glycerol trong 20 ựến 22h, ở 5oC sau khi pha loãng lần hai Cách hai tốt hơn nhiều so với cách thứ ba

và ựiều này thể hiện sức kháng ựông của tinh trùng khác nhau tùy theo giai ựoạn nhạy cảm với nhiệt ựộ thấp (Tsuyoshi, 1992)

Nồng ựộ glycerol và thời gian cân bằng

Nồng ựộ glycerol trong môi trường pha loãng cuối cùng ựể làm ựông lạnh tinh trùng bò vào khoảng 7%, nhưng tỷ lệ này có hơi khác nhau tùy theo các thành phần của môi trường pha loãng Nồng ựộ tối ưu cho sức sống của tinh trùng là 11% sữa khử bơ Nồng ựộ glyceryl trong môi trường pha loãng có mối tương quan ựáng tin cậy với tốc ựộ giải ựông, ựó là nồng ựộ glycerol cao trong môi trường pha loãng là cần thiết cho tốc ựộ giải ựông nhanh (Hiroshi, 1992)

Thời gian từ lúc bổ sung glycerol vào trong môi trường pha loãng (pha loãng lần hai) ựến khi bắt ựầu làm ựông lạnh ựược gọi là thời gian cân bằng glycerol

Tốc ñộ làm lạnh tối ưu này khác nhau không chỉ theo loại tế bào mà còn theo các yếu tố như các thành phần của thể vẩn tế bào và loại chất chống ñông băng Chẳng hạn dung dịch ñường saccharide ñược ñông lạnh nhanh (ñông lạnh

từ 2 ñến 4 phút, 5oC xuống -79oC), cho hoạt lực tinh trùng sau giải ñông cao hơn

so với ñông lạnh chậm (ñông lạnh 45 phút, từ -5oC xuống -79oC), vì ñã ngăn cản ñược ảnh hưởng của dung dịch Môi trường pha loãng có nồng ñộ glycerol từ 5 ñến 7% ñược ñông lạnh nhanh (ñông lạnh từ 3 ñến 5 phút, từ 5oC xuống -130oC) cho hoạt lực tinh trùng cao hơn so với ñông lạnh chậm (ñông lạnh từ 20 ñến 40 phút, từ 5oC xuống -79oC) (Hiroshi, 1992)

Tốc ñộ giải ñông

Tốc ñộ giải ñông tinh ñông lạnh có ảnh hưởng ñến sức sống, hoạt lực, tỷ lệ acrosome bình thường và quá trình trao ñổi chất của tinh trùng Giải ñông tinh cọng rạ bằng nước 35oC sức sống của tinh trùng cao hơn so với nước 4oC hoặc

20oC Giải ñông từ 35 ñến 37oC cũng cho tỷ lệ acrosome bình thường cao hơn so với nước 4oC hoặc 20oC Nhưng nếu giải ñông bằng nước có nhiệt ñộ cao hơn nữa, chẳng hạn nước ở 90oC, sẽ làm giảm sức sống của tinh trùng Nếu tinh trùng ñược bảo quản ở 37oC sau khi giải ñông, cọng nào ñược giải ñông nhanh ở nhiệt ñộ cao hơn sẽ có sức sống của tinh trùng cao hơn

Thời gian bảo quản

Tinh trùng ñông lạnh phải luôn ñược bảo quản ngập chìm trong Nitơ lỏng (-196oC), nếu bảo quản tốt sau vài chục năm, tỷ lệ sống và sức hoạt ñộng của tinh trùng vẫn không thay ñổi, khả năng thụ tinh vẫn không bị giảm (Hà Văn Chiêu, 1996) Thụy Sỹ, tinh bò ñông lạnh bảo quản 20 năm vẫn thụ tinh

và bò mẹ ñẻ bê con ngày 25 tháng 7 năm 1975 Ở Nhật Bản tinh cọng rạ bảo quản từ 4 ñến 13 năm vẫn có sức hoạt ñộng từ 45 ñến 55% và có tỷ lệ thụ tinh

là 54% Có nhiều trường hợp tinh bảo quản 20 năm vẫn có tỷ lệ thụ tinh là 69,8% (Hiroshi, 1992)

2 Tinh bò phân biệt giới tính

Từ những báo cáo sơ bộ ñầu tiên về quá trình chọn lọc tinh trùng qua

“Flow cytometer” ñã có những ghi nhận ñáng chú ý về việc phát triển kỹ thuật chọn lọc dựa trên hàm lượng DNA Ban ñầu ñó là chọn lọc những tinh trùng

mang nhiễm sắc thể X và tinh trùng mang nhiễm sắc thể Y, sau ñó thống kê số

bê con sinh ra thông qua quá trình thụ tinh nhân tạo các tinh trùng ñã ñược chọn lọc bằng phương pháp chọn lọc chân không “Flow cytometer” Một công

cụ ñã ñược sử dụng trong nhiều nghiên cứu trong phân tích ñiện quang và sau này là chọn lọc tế bào nhờ phân tích huỳnh quang

Flow cytometry-phân giới tinh trùng ñã có nhiều cải tiến và chọn lọc có hiệu quả so với 20 năm trước ñây Hiện nay, theo như Bestville Sperm Sexing Technology, tinh trùng ñược xác ñịnh với một chuỗi DNA cụ thể và ñược kích thích bằng một tia laser UV ñể ño hàm lượng DNA Cho thêm thuốc nhuộm (màu ñỏ) vào trong mẫu ñể xác ñịnh những tinh trùng bị chết và chọn lọc ra những tinh trùng sống Hiện nay, tại các cơ sở của công ty Sexing Technologies ñều sử dụng tia laser ở trạng thái rắn ñể kích thích tia UV, phân tách trực giao kép (tại 00 và 900), vòi phun ñịnh hướng và thiết bị kỹ thuật ñiện tử ñể chọn lọc những tinh trùng mang nhiễm sắc thể X và tinh tinh trùng mang nhiễm sắc thể Y từ những tiểu quần thể có khoảng 8000 tế bào (lớn hơn 90% so với tinh nguyên), quần thể ban ñầu hoạt ñộng có 40.000 tế bào Kết quả của hiệu quả chọn lọc là có khoảng 42% tinh trùng mang nhiễm sắc thể X sống và tinh trùng mang nhiễm sắc thể Y (sống và chết) so với mẫu ban ñầu

có giả thuyết tỷ lệ X:Y là 1:1

Hình ảnh minh họa:

3 Hoạt ựộng sinh sản ở bò cái

3.1 Sự thành thục về tắnh

Gia súc sau một thời kỳ sinh trưởng và phát triển nhất ựịnh thì có khả năng sinh sản Tuổi con vật bắt ựầu có khả năng sinh sản gọi là tuổi thành thục về tắnh Tuổi này ựược ghi nhận bởi lần ựầu ựộng dục và rụng trứng lần ựầu tiên của con cái và ở con ựực biểu hiện bằng sự có mặt của tinh trùng tự do trong ống sinh tinh và dịch hoàn phụ Tinh trùng và trứng gặp nhau có khả năng thụ thai Tuổi thành thục về tắnh ở bò khoảng từ 8 ựến 12 tháng và phụ thuộc vào nhiều yếu tố, ựặc biệt là dinh dưỡng

động dục

Khi con vật thành thục về tắnh dưới ảnh hưởng của follicle stimulating hormone (FSH), một trong những nang trứng trên buồng trứng phát triển Trong nang trứng này có một trứng thành thục hiển diện Khi nang trứng phát triển ựầy

ựủ, nó bắt ựầu sản xuất estrogen Estrogen vào máu và làm dừng sự giải phóng FSH của tuyến yên Vào khoảng sau 2 ngày kể từ khi phân tiết estrogen thì bò ựộng dục và xuất hiện những dấu hiệu ựặc biệt

Thời gian ựộng dục trung bình kéo dài khoảng 18 giờ (dao ựộng từ 6 ựến

36 giờ) Giai ựoạn ựộng dục quan trọng nhất là giai ựoạn ựứng yên Khoảng 90% số bò cái ựộng dục ựứng yên từ 10 ựến 24 giờ đây là giai ựoạn mà bò cái chấp nhận giao phối

Trong quá trình ựộng dục, tuyến yên bắt ựầu giải phóng Luteinizing hormone (LH) Dưới ảnh hưởng của LH, nang trứng vỡ ra và trứng ựược giải phóng đó là sự rụng trứng, xảy ra vào khoảng 10 ựến 14 giờ sau khi những dấu hiệu ựộng dục biến mất, trứng di chuyển vào ống dẫn trứng Quá trình thụ tinh xảy ra trong ống dẫn trứng, nói cách khác ống dẫn trứng là nơi trứng gặp tinh trùng

Dưới ảnh hưởng của LH, chỗ nang trứng rụng biến ựổi thành thể vàng, thể vàng bắt ựầu sản xuất progesterone và chúng ựược giải phóng ra sau ựộng dục 2 ựến 3 ngày, nếu bò có thai thể vàng tồn tại và duy trì tác dụng

Sự chuẩn bị tử cung cho quá trình mang thai ựược bắt ựầu bằng oestrogen và tiếp theo là progesterone

Nếu bò không mang thai thì thể vàng bắt ñầu từ từ tiêu biến sau ñộng dục từ

12 ñến 13 ngày do sự tác ñộng của Prostaglandin từ tử cung Vào ngày thứ 18-19 thì thể vàng hoàn toàn tiêu biến và tử cung trở lại bình thường Lúc này, tuyến yên lại bắt ñầu giải phóng FSH và một vài ngày sau ñó bò lại bắt ñầu ñộng dục lại Nếu bò mang thai, thể vàng tiếp tục tồn tại và sản xuất progesterone trong vòng 5 tháng ñầu kì mang thai Sau khi bò mang thai ñược 5 tháng, chức năng của thể vàng giảm dần và màng nhau thực hiện chức năng này

Trong thời gian mang thai, progesterone có những chức năng sau:

- Ngăn ngừa bò cái ñộng dục

- Hạn chế chức năng của oxytoxin

- ðiều chỉnh thay ñổi của màng nhày tử cung, cần thiết cho phát triển bào thai

- Tham gia vào việc tạo lập mô bầu vú

Chu kỳ ñộng dục

Sự rụng trứng có chu kỳ, mỗi lần rụng trứng ñược biểu hiện ra bằng hiện tượng ñộng dục một cách có chu kỳ gọi là chu kỳ ñộng dục Ở bò cái chu kỳ ñộng dục trung bình là 21 ngày (dao ñộng từ 18 ñến 24 ngày)

Sự thụ tinh

Là sư kết hợp của trứng và tinh trùng xảy ra ở 1/3 phía trên ống dẫn trứng Nơi xảy ra khi một tế bào tinh trùng thực sự lọt vào tế bào trứng Sự thụ tinh thông thường xảy ra ở 1/3 ống dẫn trứng

Khi bò cái ñược phối giống, hàng triệu tinh trùng ñược phóng vào âm ñạo, gần cổ tử cung, tinh trùng di chuyển qua cổ tử cung ða số tinh trùng ñến ñược vị trí thụ tinh trong vòng 2 ñến 4 giờ sau khi phối giống Chúng di chuyển nhờ vào

sự tự vận ñộng và co bóp của cơ tử cung và ống dẫn trứng Ở trong tử cung và ống dẫn trứng, tinh trùng có thể duy trì khả năng thụ tinh với trứng trong khoảng

từ 15 ñến 20 giờ Sự rụng trứng xảy ra từ 10 ñến 14 giờ sau khi kết thúc ñộng dục Trứng thành thục chỉ có thể sống ñược từ 4 ñến 6 giờ, nên sự thụ tinh chỉ xảy ra trong vòng từ 4 ñến 6 giờ sau khi rụng trứng Vì giới hạn thời gian tinh trùng có thể sống trong ống dẫn trứng nên không ñược phối giống giai ñoạn bắt ñầu ñộng dục Một quy luật quan trọng là phối giống cho bò cái ở nửa sau của giai ñoạn ñộng dục

Trứng sau khi thụ tinh di chuyển từ ống dẫn trứng đến sừng tử cung cần khoảng 3 đến 4 ngày và lúc này thường ở giai đoạn 16 tế bào

Mang thai

Sau khi thụ tinh, trứng được thụ tinh phân chia thành hai tế bào, từ hai tế bào phân chia thành bốn tế bào, từ bốn tế bào phân chia thành tám tế bào Trong thời gian đĩ, phơi di chuyển qua ống dẫn trứng đi vào một trong hai sừng tử cung Lúc này, sự phân chia tế bào vẫn tiếp tục, hình thành túi phơi và làm tổ tại sừng tử cung Sau một vài tuần các cơ quan của thai nhi được hình thành

Vào ngày thứ 10 hình thành màng nhau ngồi (màng đệm) Ngày 17 hình thành màng ối Màng niệu cũng được hình thành Khoảng trống giữa các màng bào thai chứa đầy dịch Các màng kết hợp với nhau tạo thành nhau thai Lúc 33-

35 ngày thì phơi bị đạt kích thước từ 1-2cm, lúc này phơi gắn chặt với tử cung thơng qua màng đệm Cuối tháng thứ hai nĩ phát triển hình thành một con bê nhỏ

cĩ chiều dài khoảng 8 cm, sau 3 tháng cĩ hình thù rõ ràng là một con bê

Những yếu tố khác cũng ảnh hưởng đến thời gian mang thai

- Giới tính và kích thước của bào thai, kinh nghiệm cho thấy thai con đực

đẻ muộn hơn so với thai con cái

- Bị chửa đa thai đẻ sớm hơn

- Bị tơ cĩ thời gian mang thai ngắn hơn bị già một vài ngày

Thường một con bị chỉ đẻ một bê, thỉnh thoảng cĩ bị đẻ sinh đơi

Những biểu hiện của bị mang thai

Khơng động dục lại: Dấu hiệu đầu tiên dự đốn bị cĩ thể mang thai là

khơng thấy bị động dục lại Tuy nhiên, điều này khơng chắc chắn lắm vì cĩ thể

bị đã qua chu kì động dục nhưng khơng phát hiện được

Kích thước bụng: Khi bị mang thai 4 tháng trở lên, kích thước bụng tăng

dần, điều này cĩ thể quan sát được khi đứng phía sau bị, dạ cỏ đẩy tử cung sang bên phải

Bầu vú: Sản lượng sữa ở bị mang thai giảm nhanh hơn ở bị khơng mang

thai Trong thời gian cạn sữa, trước khi đẻ 4 tuần, bầu vú bắt đầu căng lên là do

sự phát triển của mô bầu vú và hình thành chất dịch Ở bò tơ kích thước bầu vú

bắt ñầu tăng lên sớm hơn bò rạ

Sự di chuyển của bào thai: Sau khi bò mang thai ñược 6 tháng, trong khi

vắt sữa người vắt sữa ghé ñầu vào mạn sườn bên phải có thể cảm nhận ñược sự

di chuyển của thai

Bảng 2: Kích thước của bào thai bò qua các tháng tuổi

Lúc 7 tuần Kích thước của bào thai bằng con chuột nhắt (5 cm)

2-3 tháng Kích thước của bào thai bằng con chuột lớn (15 -17 cm) 4-5 tháng Khối lượng của bào thai bằng 10% khối lượng sơ sinh

5 tháng Kích thước của bào thai bằng con mèo lớn (35cm)

6 tháng Thai dài bằng nửa chiều dài của con bê mới ñẻ

7 tháng Khối lượng của bào thai bằng 1/2 khối lượng sơ sinh 7,5 tháng Bào thai có thể sống ñược

9 tháng Thai dài 80-90 cm, khối lượng 30-55 kg

Nghiên cứu tỷ lệ phối giống có chửa trên ñàn bò cái HF tại Lâm ðồng, Phạm Ngọc Thiệp và Nguyễn Xuân Trạch (2004) công bố, dao ñộng từ 56 ñến 65% Trong khi ñó, Ngô Thành Vinh và CS (2005) cho biết, tỷ lệ phối giống có chửa trên ñàn bò cái HF tại Ba Vì dao ñộng từ 48,75 ñến 60%

Theo Andersson và CS (2004) nghiên cứu trên ñàn bò cái tại Phần Lan, tỷ

lệ phối giống có chửa dao ñộng từ 42,2 ñến 46,4%

3.2 Tình hình nghiên cứu trong và ngoài nước

Trong quá trình sản xuất, chế biến và bảo quản sản phẩm tinh ñông lạnh, tinh trùng sẽ phải trải qua quá trình ñông lạnh ở -196oC Khả năng của tinh trùng chịu ñựng ñược ñông lạnh ở -196oC gọi là sức kháng ñông của tinh trùng và thường ñược ño bằng tỷ lệ hồi phục lại của tinh trùng sau khi ñông lạnh hoặc giải ñông Sức kháng ñông của tinh trùng là khác nhau tùy theo giống, tuổi, cá thể và ñiều kiện lúc lấy tinh của ñực giống

Bò ñực giống có tuổi từ 1 ñến 1,5 tuổi, tinh trùng có sức kháng ñông cao Nhưng

từ 6 năm tuổi trở lên sức kháng ñông của tinh trùng giảm xuống (Hiroshi, 1992)

Tác giả Lê Bá Quế (2007) nghiên cứu trên ñàn bò ñực giống HF trưởng thành nhập khẩu từ Hoa Kỳ về Việt Nam cho biết, hoạt lực tinh trùng sau giải ñông là 45,61%

Phùng Thế Hải (2009) nghiên cứu một số chỉ tiêu số lượng, chất lượng tinh dịch và khả năng sản xuất tinh ñông lạnh của bò ñực giống HF sinh tại Việt Nam cho biết, hoạt lực tinh trùng sau giải ñông là 40,44% và tỷ lệ phối giống lần một có chửa trên ñàn bò cái là 56,33%

Ditto (1992) cho biết tỷ lệ thụ tinh của tinh trùng trong mùa hè nóng bức

có thể thấp hơn so với tinh trong mùa mát mẻ

Hallap và CS (2005) công bố, tỷ lệ thụ thai khám lúc 90 ngày tuổi sau phối giao ñộng từ 52,2% ñến 76,0% trên ñàn bò cái HF ở Thụy ðiển

CHƯƠNG 2 ðỐI TƯỢNG, NỘI DUNG

VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU

2.1 ðối tượng, ñịa ñiểm và thời gian

ðối tượng:

Tinh bò HF phân biệt giới tính dạng cọng rạ của 7 bò ñực giống nhập ngoại từ công ty Sexing Technologies, Hoa Kỳ, số hiệu chi tiết như sau:

Các bò cái trong thí nghiệm ñể phối giống TTNT bằng tinh bò HF phân biệt giới tính ñều khỏe mạnh bình thường, có khối lượng tương ñồng và ñược chăm sóc nuôi dưỡng theo quy trình kỹ thuật về quản lý và chăm sóc bò sữa theo tiêu chuẩn cơ sở Các bò cái ñược nuôi trong ô chuồng có mái che, có máng ăn

và máng uống Hàng ngày, chuồng trại, máng ăn uống ñược vệ sinh sạch sẽ, bò ñược vận ñộng tắm chải Quy trình phòng bệnh cho bò cái ñược thực hiện nghiêm ngặt và kiểm tra thú y ñịnh kỳ

và ñánh giá hiệu quả kinh tế khi sử dụng tinh bò HF dạng cọng rạ phân biệt giới

tắnh tại Công ty Cổ phần Giống bò sữa Mộc Châu (Thị trấn Nông trường Mộc Châu, huyện Mộc Châu, tỉnh Sơn La)

đặc ựiểm tự nhiên, khắ hậu vùng Mộc châu-Sơn La

Mộc Châu là huyện miền núi nằm trên cao nguyên ựá vôi vùng Tây Bắc,

về hướng đông nam của tỉnh Sơn La, có diện tắch tự nhiên 2.061 km2 Là huyện mang ựặc trưng của một huyện miền núi Tây Bắc, ựịa hình bị chia cắt mạnh có nhiều núi cao hiểm trở và nhiều thung lũng rộng, ựộ cao trung bình từ 950-1.050m so với mặt nước biển, có cao nguyên rộng lớn và tương ựối bằng phẳng Mộc Châu nằm trong vùng khắ hậu nhiệt ựới gió mùa, mùa ựông lạnh khô, mùa hè mát ẩm và mưa nhiều Mộc Châu có ựộ cao lớn lại nằm giữa sông đà và sông Mã do ựó khắ hậu ở Mộc Châu quanh năm mát mẻ, nhiệt ựộ không khắ trung bình/năm khoảng 18,50C, lượng mưa trung bình/năm khoảng 1.560 mm độ ẩm không khắ trung bình 85% Nền nhiệt ựộ thấp như vậy nên Mộc Châu là một trong số ắt nơi của Việt Nam có ựiều kiện tự nhiên thuận lợi phát triển chăn nuôi

bò sữa HF nguồn gốc ôn ựới

+ Hoạt lực tinh trùng sau giải ựông (%)

+ Tỷ lệ tinh trùng sống sau giải ựông (%)

+ Tỷ lệ tinh trùng kỳ hình sau giải ựông (%)

+ Số lượng tinh trùng trong một cọng rạ (triệu/cọng rạ)

+ Vận tốc chuyển ựộng của tinh trùng sau giải ựông (ộm/giây)

+ độ dài ựường ựi của tinh trùng (ộm)

2.2.2 Nghiên cứu tỷ lệ thụ thai lần ñầu trên ñàn bò cái HF

Nghiên cứu tỷ lệ thụ thai lần ñầu tiên trên ñàn bò cái HF ở các ñộ tuổi sinh sản khác nhau (bò tơ, lứa thứ nhất, lứa thứ hai, lứa thứ ba và lứa thứ tư) khi phối giống TTNT với tinh bò HF dạng cọng rạ phân biệt giới tính gồm các chỉ tiêu sau:

+ Tỷ lệ thụ thai lần ñầu trên ñàn bò cái HF ở các ñộ tuổi sinh sản khác

nhau (bò tơ, lứa thứ nhất, lứa thứ hai, lứa thứ ba và lứa thứ tư)

+ Tỷ lệ thụ thai lần ñầu trên ñàn bò cái HF của từng bò ñực giống

2.2.3 Nghiên cứu tỷ lệ bê cái sinh ra và ñánh giá hiệu quả kinh tế khi sử dụng tinh bò HF dạng cọng rạ phân biệt giới tính

+ Tỷ lệ bê cái sinh ra theo từng bò ñực giống

+ Hiệu quả kinh tế khi sử dụng tinh bò HF dạng cọng rạ phân biệt giới tính

2.3 Phương pháp

2.3.1 Phương pháp nghiên cứu một số chỉ tiêu số lượng, chất lượng tinh bò HF dạng cọng rạ phân biệt giới tính

Lấy ngẫu nhiên 9 liều tinh bò HF dạng cọng rạ phân biệt giới tính của mỗi

bò ñực giống ở các lô sản xuất khác nhau Tiến hành giải ñông ở 37 ñộ C trong

30 giây, sau ñó xác ñịnh một số chỉ tiêu số lượng, chất lượng tinh bò HF dạng cọng rạ phân biệt giới tính như sau:

Hoạt lực tinh trùng sau giải ñông, số lượng tinh trùng trong một cọng rạ, vận tốc chuyển ñộng của tinh trùng sau giải ñông (µm/giây), ñộ dài ñường ñi của tinh trùng ñược xác ñịnh bằng phần mềm CASA trên máy Sperm Version (hãng Minitube)

Tỷ lệ tinh trùng sống sau giải ñông ñược xác ñịnh bằng phương pháp nhuộm mầu với eosin và ñếm trên kính hiển vi 500 tinh trùng rồi tính toán bằng phép tính số học thông dụng

Số lượng tinh trùng sống

Tỷ lệ tinh trùng kỳ hình ñược xác ñịnh bằng phương pháp nhuộm mầu với eosin và ñếm trên kính hiển vi 500 tinh trùng rồi tính toán bằng phép tính số học thông dụng

Số lượng tinh trùng kỳ hình

K (%) = 500 X 100

2.3.2 Phương pháp nghiên cứu tỷ lệ thụ thai lần ựầu trên ựàn bò cái HF

Nghiên cứu tỷ lệ thụ thai lần ựầu trên ựàn bò cái HF ở các ựộ tuổi sinh sản khác nhau (bò tơ, lứa thứ nhất, lứa thứ hai, lứa thứ ba và lứa thứ tư) khi phối giống TTNT với tinh bò HF dạng cọng rạ phân biệt giới tắnh

Tiến hành theo dõi phát hiện ựộng dục và phối giống TTNT với tinh bò

HF phân biệt giới tắnh của 7 bò ựực giống cho các bò cái HF các ựộ tuổi sinh sản khác nhau (bò tơ, lứa thứ nhất, lứa thứ hai, lứa thư ba và lứa thứ tư), Các bò cái

HF khỏe mạnh, sinh sản bình thường, có khối lượng tương ựồng ở từng ựộ tuổi sinh sản và ựược chăm sóc nuôi dưỡng theo cùng một tiêu chuẩn của cơ sở Các dẫn tinh viên thực hiện phối giống TTNT có tay nghề cao, tuổi nghề từ 3 năm trở lên Sau 90 ngày phối giống, tiến hành khám qua trực tràng xác ựịnh có thai hay không và ựánh giá tỷ lệ phối giống lần một có chửa ựược tắnh bằng công thức:

Số bò cái có chửa

Tỷ lệ phối giống lần một có chửa (%) =

Số bò cái ựược phối giống ừ 100

2.3.3 Phương pháp nghiên cứu tỷ lệ bê cái sinh ra và ựánh giá hiệu quả kinh tế khi sử dụng tinh bò HF dạng cọng rạ phân biệt giới tắnh

Tiếp tục chăm sóc nuôi dưỡng và theo dõi các bò cái thắ nghiệm cho tới khi bò ựẻ, xác ựịnh tỷ lệ bê cái sinh ra theo công thức:

Số bò bê cái

Tỷ lệ bê cái sinh ra (%) = x 100

Tổng số bê sinh ra đánh giá hiệu quả kinh tế khi sử dụng tinh bò HF dạng cọng rạ phân biệt giới tắnh bằng cách tắnh tỷ lệ bê con sinh ra khi phối giống bằng tinh phân biệt giới tắnh và tinh thường nhập khẩu từ Hoa Kỳ, số lượng tinh là 1.000 liều ựối với

cả tinh thường và tinh phân giới Chi phắ thụ tinh nhân tạo và các chi phắ liên quan ựến quá trình thụ tinh (trừ chi phắ tinh) ựược quy bằng nhau giữa 2 nhóm bò sửa dụng tinh phân giới và tinh thường và quy về giá trị bằng 0

đơn giá của tinh thường và tinh phân giới là ựơn giá ựang ựược áp dụng ở thị trường hiện nay với với ựơn giá tịnh thường từ $7-$10 và ựơn giá tinh phân giới từ $35-$45 và lấy trung bình là 190.000 ựồng và 800.000 ựồng tương ứng với tinh thường và tinh phân giới

đơn giá bán bò ựược tắnh theo giá trị trường trung bình hiện nay là 12.000.000 ựồng/bê cái và 2.600.000 ựồng/bê ựực

Tỷ lệ thụ thai của tinh bò phân biệt giới tắnh theo kết quả nghiên cứu trình bày ở phần 3 Tỷ lệ thụ thai của tinh bò thường tại Mộc Châu theo Phùng Thế Hải và Cs (2012) là 91,91%

Tỷ lệ bê con chết sau sinh hoặc tỷ lệ thai chết lưu ựược loại bỏ trong cả

hai phương pháp tắnh này

2.4 Xử lý số liệu

để ước tắnh các giá trị trung bình bình phương nhỏ nhất (LSM: Least Square Mean) của các biến số theo các lớp ựược xử lý bằng mô hình tuyến tắnh tổng quát Proc GLM trong chương trình SAS 9.1 (2004) Các phân lớp về cá thể,

ựộ tuổi sinh sản và tương tác giữa chúng ựược xử lý là những ảnh hưởng của lớp hay ảnh hưởng ổn ựịnh Mức ựộ khác nhau của các giá trị LSM ở mức P≤0,05 ựược xem là có ý nghĩa so sánh về mặt thống kê

Các số liệu có bản chất là tỷ lệ phần trăm (hoạt lực tinh trùng sau giải ựông, tỷ lệ tinh trùng sống sau giải ựông, tỷ lệ tinh trùng kỳ hình sau giải ựông,

tỷ lệ thụ thai lần ựầu) trước khi xử lý ựược chuyển dạng ựể tắnh toán theo Y=Degrees (asin(sqrt(x/100))) Sau khi tắnh toán xong, kết quả ựược chuyển dạng trở lại

đánh giá về ảnh hưởng của cá thể bò ựực và ựộ tuổi sinh sản của bò cái ựến tỷ lệ thụ thai lần ựầu sử dụng mô hình phân tắch:

b j : là ảnh hưởng của ựộ tuổi sinh sản của bò cái (j=6)

e ijk : là sai số ngẫu nhiên

CHƯƠNG 3 KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN

3.1 Một số chỉ tiêu chất lượng tinh bò phân biệt giới tính dạng cọng rạ sau khi giải ñông

Chất lượng tinh bò sau giải ñông là yếu tố quan trọng nhất ñánh giá chất lượng sinh sản của ñực giống Tinh bò ñông lạnh sau khi giải ñông có chất lượng tốt thì khả năng thụ thai mới cao, ngược lại thì tỷ lệ thụ thai sẽ thấp hoặc dẫn ñến

bò cái không thể thụ thai do chất lượng tinh trùng sau giải ñông quá thấp không ñáp ứng yêu cầu ñể quá trình thụ thai xảy ra ðể ñánh giá chất lượng tinh bò sau giải ñông thì các yếu tố quan trọng như : số lượng tinh trùng, hoạt lực tinh trùng,

tỷ lệ tinh trùng sống, tỷ lệ tinh trùng kỳ hình, vận tốc của tinh trùng

ðể ñánh giá chất lượng tinh trùng sau giải ñông chúng tôi tiến hành ñánh giá một số chỉ tiêu chi tiết như sau:

3.1.1 Hoạt lực tinh trùng sau giải ñông

Hoạt lực tinh trùng sau giải ñông là số lượng tinh trùng có khả năng tiến thẳng sau quá trình ñông lạnh tinh Hoạt lực tinh trùng sau giải ñông là chỉ tiêu quan trọng quyết ñịnh tới kết quả thụ thai ở bò cái trong công tác TTNT, nếu hoạt lực tinh trùng sau giải ñông cao thì tỷ lệ thụ thai cao và ngược lại Hoạt lực tinh trùng sau giải ñông chịu ảnh hưởng của nhiều yếu tố như chất lượng tinh tươi ñưa vào sản xuất tinh, kỹ thuật sản xuất tinh, môi trường pha loãng, sức kháng ñông của tinh trùng (yếu tố cá thể), kỹ thuật giải ñông Kết quả ñánh giá hoạt lực tinh trùng sau giải ñông của tinh bò HF phân biệt giới tính ñược trình bày ở bảng 3.1

Qua bảng 3.1 cho thấy, trung bình hoạt lực tinh trùng sau giải ñông của tinh bò HF phân biệt giới tính ñạt 34,47% Trong ñó cao nhất là hoạt lực tinh trùng sau giải ñông của bò ñực giống HF số hiệu 551HO00486, ñạt 39,12% Hoạt lực tinh trùng sau giải ñông thấp nhất là của bò ñực giống HF số hiệu 551HO00433, chỉ ñạt tương ứng là 29,21% (P<0,05)

Bảng 3.1: Hoạt lực tinh trùng sau giải ñông của tinh bò HF phân biệt giới tính

Ghi chú: Trong cùng một cột, các giá trị trung bình có chữ cái khác nhau

là khác nhau có ý nghĩa thống kê (P<0,05)

Tác giả Mostari và cs (2005), cho biết hoạt lực của tinh trùng sau giải ñông của tinh bò HF không phân biệt giới tính ñạt từ 56,67% tới 59,22% Ở Việt Nam, Lê Bá Quế (2007) nghiên cứu trên bò ñực giống HF trưởng thành nhập khẩu từ Hoa Kỳ, hoạt lực tinh trùng sau giải ñông của tinh bò HF ñông lạnh không phân biệt giới tính ñạt 45,61% và hoạt lực tinh trùng sau giải ñông của các

bò ñực giống khác nhau là có sự khác biệt tùy thuộc vào sức kháng ñông của tinh trùng của từng cá thể

Theo tiêu chuẩn Việt Nam TCVN 8925:2012 quy ñịnh hoạt lực tinh trùng trong một cọng rạ 0,25 ml hoặc 0,5ml của tinh bò ñông lạnh không phân biệt giới tính tối thiểu cần ñạt 40% Tuy nhiên, theo tiêu chuẩn của Hoa Kỳ, hoạt lực tinh của tinh trùng sau giải ñông có sự khác biệt so với quy ñịnh của Việt Nam

Hoạt lực tinh trùng sau giải ñông

Biểu ñồ 3.1 Hoạt lực tinh trùng sau giải ñông của tinh bò HF phân biệt giới tính

Như vậy, hoạt lực tinh trùng sau giải ñông của tinh bò HF phân biệt giới tính thấp hơn so với tinh thường và thấp hơn so với quy ñịnh ñối với tinh bò không phân biệt giới tính ðồng thời, hoạt lực tinh trùng sau giải ñông của tinh bò HF phân biệt giới tính cũng có sự khác nhau giữa các bò ñực giống HF khác nhau, nguyên nhân do sức kháng ñông của tinh trùng của từng cá thể là khác nhau

Nguyên nhân do việc sản xuất tinh bò phân biệt giới tính ñược tiến hành qua nhiều bước như nhuộm huỳnh quang, chiếu tia laser, tách tinh trùng X, Y bằng ñiện trường và thiết bị lệch ñiện áp cao tần…khiến cho sức sống và sức hoạt ñộng của tinh trùng giảm ñi Do vậy, hoạt lực sau giải ñông của tinh bò phân biệt giới tính thấp hơn so với tinh bò không phân biệt giới tính

3.1.2 Tỷ lệ tinh trùng sống sau giải ñông

Tinh trùng sống là tinh trùng còn hoạt ñộng ñược ở trạng thái di ñộng, có thể di ñộng tiến thẳng, di ñộng vòng quanh hoặc dao ñộng Tỷ lệ tinh trùng sống

khác hoạt lực tinh trùng, hoạt lực tinh trùng là chỉ tiêu ñánh giá tỷ lệ tinh trùng sống có hoạt ñộng tiến thẳng còn tỷ lệ tinh trùng sống là tính toàn bộ tinh trùng còn sống trong ñó bao gồm những trinh trùng hoạt ñộng tiến thẳng, tinh trùng vận ñộng vòng quanh và tinh trùng không vận ñộng tiến thẳng mà chỉ dao ñộng

Tỷ lệ tinh trùng sống có ảnh hưởng rất lớn ñến sức hoạt ñộng của quần thể tinh trùng, nếu tỷ lệ tinh trùng sống cao, sức hoạt ñộng của tinh trùng thường sẽ cao

và ngược lại Cũng có trường hợp tỷ lệ tinh trùng sống cao nhưng hoạt lực tinh trùng không cao, vì số lượng tinh trùng hoạt ñộng tiến thẳng ít hơn số lượng tinh trùng không hoạt ñộng tiến thẳng Kết quả ñánh giá tỷ lệ tinh trùng sống sau giải ñông của tinh bò HF phân biệt giới tính ñược trình bày ở bảng 3.3

Bảng 3.2: Tỷ lệ tinh trùng sống sau giải ñông của tinh bò HF

phân biệt giới tính dạng cọng rạ

Ghi chú: Trong cùng một cột, các giá trị trung bình có chữ cái khác nhau

là khác nhau có ý nghĩa thống kê (P<0,05)

Qua bảng 3.2 cho thấy, trung bình tỷ lệ tinh trùng sống sau giải ñông của tinh bò phân biệt giới tính ñạt 58,78% Bò ñực HF số hiệu 551HO00426 có tỷ lệ tinh trùng sống sau giải ñông cao nhất ñạt 71,90% Thấp nhất là bò ñực HF số hiệu 551HO00457, tỷ lệ tinh trùng sống chỉ ñạt 41,67%

Nghiên cứu trên tinh dịch của bò HF nhập từ Hoa Kỳ về Việt Nam, Lê Bá Quế (2007) cho biết tỷ lệ tinh trùng sống ñạt trung bình 78,68% Tác giả Al-

Badry (2012) khi nghiên cứu tinh ựông lạnh bò Friesian nuôi tại Iraq cho biết khi giải ựông tỷ lệ tinh trùng sống ựạt 77,11%

Trong quá trình làm lạnh ựể ựông băng kiểm tra khoảng 10 - 50% tinh trùng bị chết do quá trình ựông băng xảy ra (Theo Maria, 1995 trắch từ Hà Văn Chiêu, 1999) Theo Maria (1995) trắch từ Hà Văn Chiêu (1999) sau khi giải ựông còn khoảng 50% ựến 90% tinh trùng sống ựược nhờ khả năng chịu lạnh của chắnh bản thân tinh trùng và tác dụng hỗ trợ của các chất hóa học có trong môi trường pha loãng tinh dịch đường có tác dụng cân bằng áp suất thẩm thấu, chống ựông và là nguồn năng lượng cho tinh trùng hoạt ựộng sau giải ựông (Dương đình Long, 1978); vì cấu trúc hóa học của ựường có nhiều nhóm hydroxyl ựể tạo mối liên kết hydrogen trong cấu trúc của tế bào tinh trùng Các Lipoprotein, lecitin trong lòng ựỏ trứng gà có tác dụng như một chất chống ựông cho tinh trùng Chất ựệm Tris có tác dụng giữ nguyên màng tinh trùng trong quá trình ựông lạnh và thúc ựẩy trao ựổi chất sau giải ựông Glycerol trong môi trường pha tinh có tác dụng như một chất chống ựông, chắnh vì có khả năng thẩm thấu qua màng tế bào, có khả năng hòa tan trong nước mạnh nên có tác dụng như

là một dung môi cho các chất tan khác trong môi trường pha loãng, làm hạn chế

sự tạo tinh thể nước và thúc ựẩy quá trình thủy tinh hóa tạo hạt nhỏ tránh sự giãn

nở của tinh thể nước ựồng thời có tác dụng ngấm vào tinh trùng thay thế nước nội bào bị thoát ra ngoài giúp tinh trùng không bị teo do mất nước đây là một vấn ựề ựã ựược nhiều nhà khoa học nghiên cứu ựể giảm ảnh hưởng xấu cho tinh trùng trong quá trình sản xuất tinh ựông lạnh nhằm nâng cao hiệu quả chăn nuôi

bò ựực giống

Tỷ lệ tinh trùng sống sau giải ñông

Biểu ñồ 3.2: Tỷ lệ tinh trùng sống sau giải ñông của tinh bò HF phân

Tỷ lệ tinh trùng kỳ hình (K) là tỷ lệ tinh trùng bị dị dạng về hình thái học

so với tổng số tinh trùng trong một cọng rạ Các dạng kỳ hình của tinh trùng sau giải ñông thường gặp như tinh trùng có giọt bào tương bám theo, biến dạng hay khuyết tật ở ñầu, ñuôi: ñầu méo, to, hai ñầu, ñuôi gấp khúc, hai ñuôi, ñuôi xoăn,

có giọt bào tương, thể ñỉnh phù, tháo rời, vỡ… Tỷ lệ tinh trùng kỳ hình phụ thuộc vào nhiều yếu tố như giống, lứa tuổi, ñiều kiện nuôi dưỡng, thời tiết, bệnh tật, di truyền, kỹ thuật xử lý tinh dịch, kỹ thuật ñông lạnh tinh dịch, thời gian bảo quản tinh ñông lạnh ðặc biệt với tinh phân biệt giới tính thì tỷ lệ tinh trùng kỳ hình

còn bị ảnh hưởng bởi quá trình chọn lọc giới tính của tinh trùng

Tỷ lệ kỳ hình càng cao thì chất lượng tinh trùng càng kém và ngược lại

Tỷ lệ tinh trùng kỳ hình ảnh hưởng ñến tỷ lệ thụ thai khi tiến hành thụ tinh nhân tạo Kết quả ñánh giá tỷ lệ tinh trùng kỳ hình sau giải ñông của tinh bò HF phân biệt giới tính ñược thể hiện ở bảng 3.4

Qua kiểm tra cho thấy 100% số lần kiểm tra ñạt tiêu chuẩn về tỷ lệ kỳ hình của tinh trùng sau khi giải ñông theo quy ñịnh của tiêu chuẩn 10 TCVN 531- 2002 (K ≤ 20%)

Lê Bá Quế (2007) cho biết tỷ lệ tinh trùng kỳ hình sau giải ñông của bò ñực giống HF nhập khẩu từ Hoa Kỳ về Việt Nam là 9,99%

Theo kết quả công bố của Hiroshi (1992) ở Nhật Bản, tỷ lệ tinh trùng kỳ hình sau giải ñông dao ñộng từ 1% ñến 20%

Kết quả nghiên cứu của chúng tôi có tỷ lệ tinh trùng kỳ hình sau giải ñông nằm trong khoảng kết quả nghiên cứu của Hiroshi (1992) và lớn hơn kết quả nghiên cứu của Lê Bá Quế (2007)

Như vậy, chất lượng tinh bò sữa HF phân biệt giới tính nhập khẩu từ Mỹ khá cao chứng tỏ sức khỏe của ñực giống tốt

Bảng 3.3 Tỷ lệ tinh trùng kỳ hình sau giải ñông

của tinh bò HF phân biệt giới tính

Ghi chú: Trong cùng một cột, các giá trị trung bình có chữ cái khác nhau

là khác nhau có ý nghĩa thống kê (P<0,05)