Phương pháp Sắc ký lỏng HPLC

Phương pháp Sắc ký lỏng HPLC PGS Ph¹m gia HuÖ Hµ Néi 10-2010 §¹i c¬ng vÒ S¾c ký 1. Mét sè kh¸i niÖm më ®Çu 2. C¬ së lý thuyÕt (s¬ lîc) 3. ng dông S¾c KÝ trong Ph©n tÝchỨ Khái niệm mở đầu v SK Định nghĩa - PP tách - dựa vào tốc độ di chuyển khác nhau - dới tác động 2 pha Tĩnh và Động không hoà lẫn vào nhau (trong SK l ng, pha ng = ch t l ng) Chất PT Phân bố giữa 2 pha A S M A = chất Phân tích S = Pha tĩnh M = Pha động lỏng Qu¸ tr×nh s¾c ký Pha tĩnh Sắc đồ khai triển Sắc đồ Rửa giải t1 t3 t4 t0 t2 aaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaa aaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaa aaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaa aaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaa aaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaa aaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaa aaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaa aaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaa aaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaa aaaaaaaaa t1 t2 1.3. Ph©n lo¹i s c ký l ngắ ỏ • Theo bản chất của phương pháp Hấp phụ, Phân bố, Trao đổi ion, SK theo cỡ, SK ái lực, SK điện • Theo bản chất của các pha pha thuận, pha đảo • Theo cách tiến hành: SK khai triển, SK rửa giải • Theo phương tiện: SK trên cột, SK trên mặt phẳng (giấy, lớp mỏng) Cơ sở Lý thuyết Tốc độ di chuyển các chất Sự mở rộng dải Thuyết về Đĩa Thuyết động học Ph6ơng trình Van Deemter Độ phân giải Tèc ®é di chuyÓn w Thời gian , phút w = chiều rộng pic tiêm mẫu t o Tín hiệu đến detector t R 0 [...]... lượng Phương pháp đường chuẩn Phương pháp đường chuẩn thêm Phương pháp chuẩn nội Phương pháp chuẩn hoá S K điều chế Sắc Ký Khối Phổ Sắc ký lỏng Hiệu năng cao HPLC Các tên gọi khác S K lỏng cổ điển S K lỏng hiện đại: HPLC, các đặc điểm Máy HPLC 4 Bm Tiờm móu 5 Ct SK 2 Lc 1 Dung mụi 6 Detector 7 Mỏy ghi 8 Các bộ phận chính Dung môi và bình dung môi Bơm cao áp Bộ tiêm mẫu Cột sắc ký Các... Đo quang, PDA Huỳnh Quang, RI Điện hoá, MS Bộ bơm mẫu, bơm mẫu tự động Bơm tiêm, Van tiêm Vũng mu Bỡnh Pha ng Vũng mu Bỡnh Pha ng Bm mu Mu tha Ct Ct Các phương pháp HPLC Sắc ký Phân bố: Săc ký lỏng lỏng BPC S K pha thuận : pha tĩnh phân cực NH2, CN SắC Kí pha đảo: pha tĩnh ít phân cực C2, C8, C18, Phenyl hay dùng nhất Pha tĩnh của BPC CH3 | - Si - OH | CH3 + Nhóm silanol của silicagel CH3 CH3 CH3 |... Siloxan Pha thun : R = NH2, CN (phõn cc) Pha o: R = C8, C18, C6H5 (khụng phõn cc) C8 PT thuốc trừ sâu MeOH-H2O gradient 67-80% Sắc ký Hấp Phụ Pha tĩnh Đặc tính bột mịn, xốp, dt bm lớn, độ ẩm Các loại Silicagel, Alumina, kiezelguhr Pha động Sưc dung môi, độ phân cực Sắc ký Trao đổi ion Chất trao đổi ion: cỏc ionit Các loại cationit (SCX, WCX) Đặc điểm S K cation S K anion S K chất hữu cơ anionit... tán dọc Sự chuyển khối (vận chuyển chất) Hiu lc ca ct Sc ký = 1 phng phỏp tỏch Ct = tỏch hn hp Cn + nc (C+N) C1 + t l cn tng dn C2 + N2 N1 a trờn ct SK ~ Tng trờn ct ct Cn + Nc Sự doãng pic -Hiu lc ca ct Chiu cao a lý thuyt H S a lý thuyt ca ct: N=L/H S a lý thuyt ca 1 m ct: n Vớ d: L=15 cm, N=15 000 H=0,001 cm, n= 100 000 Thuyết động học Phương trình Van Deemter H H = A + B/u + C u SK khớ H U . Phương pháp Sắc ký lỏng HPLC PGS Ph¹m gia HuÖ Hµ Néi 10-2010 §¹i c¬ng vÒ S¾c ký 1. Mét sè kh¸i niÖm më ®Çu 2. C¬ së lý thuyÕt (s¬ lîc) 3. ng dông S¾c KÝ trong Ph©n tÝchỨ . Phân bố giữa 2 pha A S M A = chất Phân tích S = Pha tĩnh M = Pha động lỏng Qu¸ tr×nh s¾c ký Pha tĩnh Sắc đồ khai triển Sắc đồ Rửa giải t1 t3 t4 t0 t2 aaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaa aaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaa aaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaa aaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaa aaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaa aaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaa aaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaa aaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaa aaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaa aaaaaaaaa t1 t2 . t¸n xo¸y • KhuÕch t¸n däc • Sù chuyÓn khèi (vËn chuyÓn chÊt) Hi u l c c a c tệ ự ủ ộ Sắc ký = 1 phương pháp tách C t = ấ tách hỗn hợp Cồn + nước (C+N) Cồn + Nước C1 + N1 C2 + N2 tỷ lệ cồn tăng