Chương 1: ĐẠI CƯƠNG VỀ MELOXICAM 1.1. MỞ ĐẦU: Meloxicam (MLC) là thuốc kháng viêm non-steroid mạnh, là dẫn xuất của oxicam của họ acid enolic. Thuốc này để chữa bệnh: viêm khớp, viêm khớp xương mãn tính, và các bệnh ở khớp. Tuy nhiên, ngoài khả năng trị liệu, Meloxicam còn có độc tính cao đối với người và động vật. Hiện nay ở nước ta, Meloxicam được xác định trong các phòng thí nghiệm có thiết bị hiện đại, kỹ thuật viên lành nghề, mất nhiều thời gian và giá thành cao. Vấn đề được đặt ra là cần có một kỹ thuật phân tích đơn giản có kết quả tin cậy trong thời gian ngắn nhất với chi phí thấp nhất để xác định thuốc ở mức độ vết. Trong các phương pháp phân tích điện hóa, phương pháp Von – Ampe được dùng rộng rãi do có các ưu điểm về độ nhạy rất cao, kỹ thuật phân tích đơn giản, độ chính xác và độ lặp lại cao; giá thành tương đối rẻ. Các loại điện cực rắn được dùng rộng rãi do hạn chế các tác động đến sức khỏe con người và môi trường sống. Để đáp ứng nhu cầu cấp bách của xã hội, đề tài “Nghiên cứu xác định hàm lượng Meloxicam trong mẫu dược phẩm và mẫu sinh học bằng phương pháp Von – Ampe trên điện cực Glassy Carbon” được chúng tôi nghiên cứu do có những ưu thế về thiết bị, hóa chất không đắt và dễ tìm, dễ thực hiện, với thời gian phân tích t ương đối nhanh, có độ chính xác và độ chọn lọc cao, giới hạn phát hiện thấp và có thể thực hiện ở đa số các phòng thí nghiệm.
ĐẠI HỌC QUỐC GIA TP.HCM TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN NGUYỄN THỊ THÙY LIÊN NGHIÊN CỨU XÁC ĐỊNH HÀM LƯỢNG MELOXICAM TRONG MẪU DƯỢC PHẨM VÀ MẪU SINH HỌC BẰNG PHƯƠNG PHÁP VON – AMPE TRÊN ĐIỆN CỰC GLASSY CARBON Chun ngành: Hóa Phân Tích Mã số: 1.04.03 LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC – HÓA HỌC HƯỚNG DẪN KHOA HỌC: TS NGUYỄN PHƯỚC THÀNH THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH - 2011 LỜI CẢM ƠN Trước tiên, tác giả xin chân thành cảm ơn Quý Thầy cô, tập thể giảng viên trường Đại học Khoa Học Tự Nhiên thành phố Hồ Chí Minh, khoa Hóa, mơn Hóa Phân Tích cung cấp kiến thức vơ bổ ích q báu q trình học tập trường, giúp tác giả trang bị thêm kiến thức để ngày hoàn thiện nghiệp vụ chuyên môn tạo điều kiện cho tác giả đem kiến thức giúp ích cho xã hội Đặc biệt TS Nguyễn Phước Thành tận tình hướng dẫn, giúp đỡ tạo điều kiện tốt cho em hoàn thành luận văn Những lời cảm ơn sau tác giả xin gởi đến cha mẹ, gia đình, anh, chị em, bạn bè đồng nghiệp hết lịng quan tâm, động viên, khích lệ, chia sẻ giúp đỡ để tác giả hoàn thành luận văn tốt nghiệp iv CÁC KÍ HIỆU VIẾT TẮT ACN Acetonitril ASV Phương pháp von- ampe hòa tan anod CSV Phương pháp von - ampe hòa tan catod DMF Dimetylformamid DP Xung vi phân B–R Đệm Britton - Robinson GCE Điện cựcGlassy Carbon HMDE Điện cực giọt thủy ngân treo LOD Giới hạn phát LOQ Giới hạn định lượng MeOH Methanol MFE Điện cực màng thủy ngân chất rắn trơ MLC Meloxicam RSD Độ lệch chuẩn tương đối SCE Điện cực Calomen bão hòa RP - HPLC – UV/ VIS Phương pháp sắc kí lỏng hiệu cao pha đảo, đầu dò UV – Vis v MỤC LỤC Trang Lời cảm ơn iv Các ký hiệu viết tắt v Chỉ dẫn bảng số liệu vi Chỉ dẫn hình vẽ viii PHẦN TỔNG QUAN Chương 1: ĐẠI CƯƠNG VỀ MELOXICAM 1.1 MỞ ĐẦU 1.2 CÔNG THỨC, TÍNH CHẤT VẬT LÝ, HĨA HỌC, CƠ CHẾ 1.2.1 Công thức 1.2.2 Tính chất vật lý 1.2.3 Tính chất hóa học 1.2.4 Hàm lượng 1.2.5 Cơ chế tác động 1.2.6 Độc tính 1.2.7 Mục đích việc xác định MLC Chương : CƠ SỞ LÝ THUYẾT VÀ CÁC PHƯƠNG PHÁP XÁC ĐỊNH 2.1 PHƯƠNG PHÁP VON – AMPE 2.1.1 PHƯƠNG PHÁP VON – AMPE HÒA TAN 2.1.2 CÁC YẾU TỐ TRONG Q TRÌNH TÍCH GĨP VÀ HỊA TAN: 2.1.2.1 Q TRÌNH TÍCH GĨP 2.1.2.2 QUÁ TRÌNH HÒA TAN 10 2.1.3 ĐIỆN CỰC LÀM VIỆC 11 2.1.4 ĐIỆN CỰC RẮN 11 2.1.4.1 ĐIỆN CỰC GLASSY CARBON 11 2.1.4.2 CƠ CHẾ PHẢN ỨNG OXI H ÓA CỦA MELOXICAM TRÊN ĐIỆN CỰC GC 12 i 2.2 CÁC PHƯƠNG PHÁP KHÁC ĐỂ XÁC ĐỊNH MELOXICAM 12 2.2.1 PHƯƠNG PHÁP PHỔ PHÂN TỬ VÙNG UV 13 2.2.2 PHƯƠNG PHÁP SẮC KÍ LỎNG HIỆU NĂNG CAO PHA ĐẢO, ĐẦU DÒ UV – VIS (RP - HPLC – UV/ VIS) 13 PHẦN THỰC NGHIỆM 14 Chương 3: KHẢO SÁT QUY TRÌNH PHÂN TÍCH 15 3.1 HÓA CHẤT, THIẾT BỊ 15 3.1.1 HÓA CHẤT: 15 3.1.2 THIẾT BỊ 15 3.2 TỐI ƯU HÓA MỘT SỐ THÔNG SỐ 16 3.2.1 KHẢO SÁT ĐIỆN CỰC GLASSY CARBON 16 3.2.2 KHẢO SÁT ẢNH HƯỞNG CỦA THẾ VÀ THỜI GIAN HOẠT HÓA ĐẾN CƯỜNG ĐỘ DÒNG HÒA TAN MLC 17 3.2.3 KHẢO SÁT ĐỘ LẶP LẠI CỦA CƯỜNG ĐỘ DÒNG 19 3.2.4 KHẢO SÁT NỀN 20 3.2.5 KHẢO SÁT DUNG MÔI 21 3.2.6 pH DUNG DỊCH VÀ NỒNG ĐỘ ĐỆM 22 3.2.7 THỜI GIAN TÍCH GĨP 24 3.2.8 THẾ TÍCH GĨP 25 3.2.9 TỐC ĐỘ QUÉT THẾ VÀ BIÊN ĐỘ XUNG 26 3.2.10 KHẢO SÁT TỐC ĐỘ KHUẤY 27 3.2.11 CÁC CHẤT GÂY NHIỄU 29 3.2.11.1.CÁC CHẤT CÙNG HỌ OXICAM 29 3.2.11.2 ẢNH HƯỞNG CỦA LACTOSE 29 3.2.11.3 ẢNH HƯỞNG CỦA URE 30 3.2.12 ĐƯỜNG CHUẨN, GIỚI HẠN PHÁT HIỆN, GIỚI HẠN ĐỊNH LƯỢNG32 3.2.12.1 KHẢO SÁT ĐƯỜNG CHUẨN 32 ii 3.2.12.2.GIỚI HẠN PHÁT HIỆN, GIỚI HẠN ĐỊNH LƯỢNG 33 3.2.12.3 KHẢO SÁT ĐƯỜNG THÊM CHUẨN, GIỚI HẠN PHÁT HIỆN, GIỚI HẠN ĐỊNH LƯỢNG TRÊN MẪU NƯỚC TIỂU 35 Chương : PHÂN TÍCH MẪU MELOXICAM 37 4.1 PHÂN TÍCH MẪU MELOXICAM TRONG MẪU DƯỢC PHẨM: 37 4.1.1 PHƯƠNG PHÁP XỬ LÝ MẪU DƯỢC PHẨM 37 4.1.1.1 XỬ LÝ MẪU ĐỂ PHÂN TÍCH BẰNG PHỔ UV 37 4.1.1.2 X LÝ MẪU ĐỂ PHÂN TÍCH BẰNG PHƯƠNG PHÁP S C KÍ Ử Ắ LỎNG HIỆU NĂNG CAO PHA ĐẢO, ĐẦU DÒ UV – VIS (RP-HPLC–UV/VIS) 37 4.1.1.3 XỬ LÝ MẪU ĐỂ PHÂN TÍCH BẰNG VON AMPE DÙNG GCE 37 4.1.2 QUY TRÌNH PHÂN TÍCH MẪU DƯỢC PHẨM 38 4.1.2.1 MẪU MEBILAX 7.5mg – DƯỢC HẬU GIANG - VIỆT NAM 38 4.1.2.2 MẪU MELOXICAM 7.5mg – DƯỢC BẾN TRE – VIỆT NAM 43 4.1.2.3 MẪU MOBIMEX 7.5mg – DƯỢC PYMEPHARCO – VIỆT NAM 46 4.1.2.4 MẪU MOBIC 7.5 mg – ĐỨC 49 4.2 PHÂN TÍCH MẪU MELOXICAM TRONG MẪU SINH HỌC LÀ MẪU NƯỚC TIỂU: 51 4.2.1 PHƯƠNG PHÁP XỬ LÝ MẪU NƯỚC TIỂU 51 4.2.2 QUY TRÌNH PHÂN TÍCH MẪU NƯỚC TIỂU 52 Chương 5: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 54 5.1 KẾT QUẢ 54 5.2 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 57 5.2.1 KẾT LUẬN 57 5.2.2 KIẾN NGHỊ 57 PHỤ LỤC 58 TÀI LIỆU THAM KHẢO 60 iii DANH MỤC CÁC BẢNG SỐ LIỆU Trang Bảng 1: thông số kỹ thuật cài đặt cho máy Von – Ampe 16 Bảng Các số liệu khảo sát hoạt hóa điện cực glassy carbon 18 Bảng Các số liệu khảo sát thời gian hoạt hóa điện cực glassy carbon 18 Bảng Khảo sát độ lặp lại cường độ dòng, MLC μg /mL 19 Bảng Cường độ dòng Meloxicam μg /mL dung môi 22 Bảng 6: Cường độ dòng Meloxicam μg/ mL giá trị tích góp hấp phụ 26 Bảng Cường độ dòng Meloxicam μg/ mL biên độ xung 27 Bảng 8: Cường độ dòng Meloxicam μg/ mL giá trị tốc độ khuấy 28 Bảng Các số liệu khảo sát ảnh hưởng Lactose 29 Bảng 10 Các số liệu khảo sát ảnh hưởng Ure 31 Bảng 11: Giá trị cường độ pic đo sử dụng để dựng đường chuẩn 32 Bảng12: giới hạn phát giới hạn định lượng phương pháp 33 Bảng 13: Hiệu suất thu hồi RSD MLC 34 Bảng14: Giá trị cường độ pic đo khảo sát đường thêm chuẩn MLC mẫu nước tiểu 35 Bảng15: giới hạn phát giới hạn định lượng phương pháp thêm chuẩn mẫu nước tiểu 36 Bảng 16 Giá trị độ hấp thu đo khảo sát đường chuẩn 40 Bảng 17 Số liệu độ hấp thu mẫu Mebilax 7.5 mg – Dược Hậu Giang 41 Bảng 18 Số liệu chiều cao pic mẫu Mebilax 7.5 mg – Dược Hậu Giang 41 Bảng 19 Số liệu chiều cao pic mẫu Mebilax 7.5 mg – Dược Hậu Giang thêm chuẩn 42 Bảng 20 Số liệu chiều cao pic mẫu Meloxicam 7.5 mg – Dược Bến Tre 44 Bảng 21 Số liệu chiều cao pic mẫu Meloxicam 7.5 mg – Dược Bến Tre thêm chuẩn.45 Bảng 22 Số liệu chiều cao pic mẫu Mobimex 7.5 mg – Dược Pymepharco 47 vi Bảng 23 Số liệu chiều cao pic mẫu Mobimex 7.5 mg – Dược Pymepharco thêm chuẩn 48 Bảng 24 Số liệu chiều cao pic mẫu Mobic 7.5 mg – Đức 49 Bảng 25 Số liệu chiều cao pic mẫu Mobic 7.5 mg – Đức thêm chuẩn 51 Bảng 26 Số liệu chiều cao pic mẫu nước tiểu số thêm chuẩn 52 Bảng 27 Số liệu chiều cao pic mẫu nước tiểu số thêm chuẩn 53 Bảng 28 So sánh kết phương pháp Von – Ampe, điện cực GC phương phổ UV 56 vii DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ Trang Hình Phổ đồ cho q trình oxi hóa μg / mL MLC điện cực GC có khơng có hoạt hóa: 1- khơng hoạt hóa điện cực; – hoạt hóa điện cực + 1.8 V 240s, thời gian hấp phụ 120s, ν = 10 mV/s 17 Hình Biểu diễn phụ thuộc cường độ dòng μg / mL Meloxicam vào hoạt hóa 18 Hình Biểu diễn phụ thuộc cường độ dòng μg/ mL Meloxicam vào thời gian hoạt hóa 19 Hình Biểu diễn phụ thuộc cường độ dòng Meloxicam μg / mL vào số lần lặp lại phép đo 20 Hình Phổ đồ Meloxicam μg / mL dung dịch đệm khác nhau, pH 6.0 – Đệm B – R 0.5 M , 2- Đệm acetate 0.2 M, 3- Đệm phosphate 0.2 M 21 Hình Phổ đồ μg / mL MLC dung môi khác nhau: MeOH, ACN, DMF 22 Hình Biểu diễn dịch chuyển pic theo pH μg / mL MLC 23 Hình Ảnh hưởng nồng độ đệm Phosphate lên cường độ pic μg / mL MLC 24 Hình Phổ đồ μg / mL MLC thời gian tích góp khác nhau: – tích góp 60s; – tích góp 90s; – tích góp 120s ;4- tích góp – 180s; 5- tích góp 240s 25 Hình 10 Ph đồ μg / mL MLC tích góp khác nhau: –thế tích góp ổ +0.1V; –thế tích góp -0.1V; –thế tích góp 0.0V 26 Hình 11 Phổ đồ μg / mL MLC biên độ xung khác nhau: – biên độ 25 mV; – biên độ 50mV 27 Hình 12 Ảnh hưởng tốc độ khuấy lên cường độ pic μg /mL MLC, hoạt hóa +1.8 V 240s, thời gian hấp phụ 120s, ν = 10 mV/s 28 viii Hình 13 Ảnh hưởng Lactose lên cường độ pic μg /mL MLC, hoạt hóa +1.8 V 240s, thời gian hấp phụ 120s, ν = 10 mV/s 30 Hình 14 Ảnh hưởng Ure cường độ pic MLC (μg/mL), hoạt hóa +1.8 V 240s, thời gian hấp phụ 120s, ν = 10 mV/s 31 Hình 15 Đường chuẩn Meloxicam, tích góp 120s; – pic MLC 0.5 μg/L, - pic MLC 1.0 μg/L , 3- pic MLC 1.5 μg/L, 4- pic ML 2.0 μg/L, 5- pic MLC 2.5 μg/L 32 Hình 16 Đường chuẩn MLC, thời gian tích góp 120s, điện cực glassy carbon hoạt hóa 33 Hình 17 Đường thêm chuẩn MLC mẫu Mebilax – DHG 1- mẫu Mebilax; 2, 3, 4, – thêm chuẩn MLC nồng độ 0.3; 0.5; 1.0; 1.5 μg/mL mẫu Mebilax – DHG 34 Hình 18 Đường thêm chuẩn MLC mẫu nước tiểu 1, 2, 3, 4, – thêm chuẩn MLC nồng độ 10; 15; 20; 25; 30 μg/mL mẫu nước tiểu 35 Hình 19 Phổ UV MLC 7.5mg 39 Hình 20 Đường chuẩn MLC đo bước sóng 362 nm 40 Hình 21 Phổ đồ xác định MLC mẫu Mebilax 7.5 mg – Dược Hậu Giang 42 Hình 22 Phổ đồ thêm chuẩn MLC mẫu Mebilax 7.5 mg – Dược Hậu Giang: – mẫu Mebilax; 2- thêm chuẩn MLC 0.5 μg/mL; 3- thêm chuẩn MLC 1.0 μg/mL 43 Hình 23 Phổ đồ xác định MLC mẫu Meloxicam 7.5 mg – Dược Bến Tre 44 Hình 24 Phổ đồ thêm chuẩn MLC mẫu Meloxicam 7.5 mg – Dược Bến Tre: – mẫu Meloxicam- Dược Bến Tre; 2- thêm chuẩn MLC 0.5 μg/mL; 3- thêm chuẩn MLC 1.0 μg/mL 46 Hình 25 Phổ đồ xác định MLC mẫu Mobimex 7.5 mg – Dược Pymepharco 47 Hình 26 Phổ đồ thêm chuẩn MLC mẫu Mobimex 7.5 mg – Dược Pymepharco: –mẫu Mobimex- Dược Pymepharco; 2- thêm chuẩn MLC 0.5 μg/mL; 3- thêm chuẩn MLC 1.0 μg/mL 48 ix 48 Cân khối lượng mẫu = 42.78 0.01 mg Cân khối lượng chất chuẩn : 2.50 0.01 mg, 5.00 0.01 mg Hoạt hóa điện cực 50 mL đệm Phosphate 0.2 M pH 6.0 240s Sau xử lý mẫu xong, rút 100 µL cho vào tế bào đo ghi nhận kết bảng 23 hình 26: Bảng 23 Số liệu chiều cao pic mẫu Mobimex 7.5 mg – Dược Pymepharco thêm chuẩn Mẫu Mobimex 7.5 mg thêm I tb % RSD C Hiệu suất thu hồi (%) chuẩn (µA) (µg/mL) Mẫu Mobimex + 0.5 µg/mL 3.7556 2.4953 0.8393 92.86 Mẫu Mobimex + 1.0 µg/mL 5.4714 2.3183 1.3367 96.17 Hình 26 Phổ đồ thêm chuẩn MLC mẫu Mobimex 7.5 mg – Dược Pymepharco: –mẫu MobimexDược Pymepharco; 2- thêm chuẩn MLC 0.5 µg/mL; 3- thêm chuẩn MLC 1.0 µg/mL 49 Nhận xét: Do mẫu dược phẩm tương đối q trình xử lý khơng làm mẫu nên hiệu suất quy trình xử lý mẫu Mobimex 7.5 mg – dược Pymepharco đạt 92.86 – 96.17 % Tuy hiệu suất thu hồi không đạt cao mẫu Mebilax – dược Hậu Giang nằm giới hạn chấp nhận 4.1.2.4 MẪU MOBIC 7.5 mg – ĐỨC: * Phương pháp Von – Ampe, điện cực GC: - Xác định mẫu Mobic 7.5 mg – Đức: Cân 20 viên thuốc Mobic 7.5 mg – Đức: m20 = 5452.0 mg khối lượng trung bình viên m tb1 = 272.60 0.01 mg Hoạt hóa điện cực 50 mL đệm Phosphate 0.2 M pH 6.0 240s Sau xử lý mẫu xong, rút 100 µL cho vào tế bào đo ghi nhận kết bảng 24 hình 27: Bảng 24 Số liệu chiều cao pic mẫu Mobic 7.5 mg – Đức I tb KBO % (µA) Mẫu Mobic 7.5 mg 6.1334 – Đức C (µg/mL) Hàm lượng Hàm lượng (mg/ RSD 0.21 (mg/ viên) 20 viên) 3.3129 1.49 7.45 149.00 0.14 50 Hình 27 Phổ đồ xác định MLC mẫu Mobimex 7.5 mg – Dược Pymepharco Nhận xét: MLC mẫu thuốc Mobic 7.5 mg – Đức đủ hàm lượng (đạt 99.33 %) để sử dụng cho người bệnh - Xác định mẫu Mobic 7.5 mg thêm chuẩn – Đức: Mẫu Mobic 7.5 mg Đức làm thêm chất chuẩn MLC vào trước xử lý mẫu Thực 03 mẫu, mẫu đo lần, lấy kết trung bình Cân khối lượng mẫu = 68.15 0.01 mg Cân khối lượng chất chuẩn : 2.50 0.01 mg, 5.00 0.01 mg Hoạt hóa điện cực 50 mL đệm Phosphate 0.2 M pH 6.0 240s Sau xử lý mẫu xong, rút 100 µL cho vào tế bào đo ghi nhận kết bảng 25 hình 28: 51 Bảng 25 Số liệu chiều cao pic mẫu Mobic 7.5 mg – Đức thêm chuẩn Mẫu Mobic 7.5 mg I tb (µA) KBO % RSD suất Hiệu (µg/mL) thêm chuẩn C thu hồi (%) Mẫu Mobic + 0.5 µg/mL 3.8681 0.08 2.0823 0.8719 99.39 Mẫu Mobic + 1.0 µg/mL 5.6488 0.10 1.7388 1.3881 101.31 Hình 28 Phổ đồ thêm chuẩn MLC mẫu Mobic 7.5 mg – Đức: –mẫu Mobimex- Đức; 2- thêm chuẩn MLC 0.5 µg/mL; 3- thêm chuẩn MLC 1.0 µg/mL Nhận xét: Do mẫu dược phẩm tương đối trình xử lý không làm mẫu nên hiệu suất quy trình xử lý mẫu Mobic 7.5 mg – Đức đạt 99.39 – 101.31 % 4.2 PHÂN TÍCH MẪU MELOXICAM TRONG MẪU SINH HỌC LÀ MẪU NƯỚC TIỂU: 4.2.1 PHƯƠNG PHÁP XỬ LÝ MẪU NƯỚC TIỂU: Mẫu nước tiểu lọc bốn lần giấy lọc băng xanh Lấy 1.0 mL mẫu nước tiểu pha loãng đệm Phosphate 0.2 M (pH 6.0) thành 10.0 mL 52 4.2.2 QUY TRÌNH PHÂN TÍCH MẪU NƯỚC TIỂU : Xác định hàm lượng MLC mẫu nước tiểu (của bệnh nhân mắc bệnh Gout bệnh viện Long Thành – Đồng Nai) phương pháp thêm chuẩn Hoạt hóa điện cực 50 mL đệm Phosphate 0.2 M pH 6.0 240s Thể tích tế bào đo 50 mL gồm : 100 µL mẫu nước tiểu + Vx mL chuẩn MLC 1000 µg/mL + ( 50 – 0.1 – Vx) mL dung dịch đệm Phosphate 0.2 M (pH 6.0) Thực 03 mẫu, mẫu đo lần, lấy kết trung bình Kết trình bày bảng 26, 27, hình 29 hình 30 : Bảng 26 Số liệu chiều cao pic mẫu nước tiểu số thêm chuẩn I tb (µA) KBO RSD (%) C (µg/mL) Hiệu suất thu hồi (%) Mẫu nước tiểu số 5.1370 0.20 3.9523 16.3579 Hình 29 Phổ đồ thêm chuẩn 15 µg/ mL MLC mẫu nước tiểu số 2.3 109.05 53 Bảng 27 Số liệu chiều cao pic mẫu nước tiểu số thêm chuẩn I tb (µA) KBO % RSD C (µg/mL) Hiệu suất thu hồi (%) Mẫu nước tiểu số 5.1449 0.11 2.1398 16.4487 2.3 109.66 Hình 30 Phổ đồ thêm chuẩn 15 µg/ mL MLC mẫu nước tiểu số Nhận xét: Hàm lượng MLC mẫu nước tiểu xác định phương pháp Von – Ampe hòa tan thêm chuẩn có hiệu suất thu hồi khoảng: 109.05 – 109.66 % 54 Chương 5: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 5.1 KẾT QUẢ Với thông số khảo sát đề tài, tiến hành kiểm tra mẫu dược phẩm nước Mebilax – dược Hậu Giang, Meloxicam – Bến Tre, Mobimex – dược Pymepharco, nước Mobic – Đức mẫu nước tiểu người mắc bệnh Gout, đồng thời kiểm tra đối chứng phương pháp phổ UV Kết hình 31 32: Hình 31 Phổ đồ MLC mẫu dược phẩm 1- mẫu Mebilax 7.5 mg – Dược Hậu Giang ; - mẫu Meloxicam 7.5 mg – Dược Bến Tre ; 3- Mobimex 7.5 mg – Dược Pymepharco ; 4- mẫu Mobic 7.5 mg – Đức 55 Hình 32 Phổ đồ MLC mẫunước tiểu thêm chuẩn: – mẫu nước tiểu số thêm chuẩn; 2mẫu nước tiểu số thêm chuẩn Trong đề tài này, đạt số yêu cầu mục tiêu đề : - Đưa quy trình phân tích mẫu dược phẩm mẫu nước tiểu chứa MLC phương pháp Von - Ampe với điện cực glassy carbon, dùng kỹ thuật xung vi phân mà nước chưa có đề tài nghiên cứu phương pháp Áp dụng quy trình vào phân tích hàm lượng MLC mẫu dược phẩm nước mẫu dược phẩm nước cho kết tin cậy, mẫu đạt tiêu chuẩn đủ hàm lượng sử dụng cho người bệnh; mẫu nước tiểu thêm chuẩn đánh giá hàm lượng MLC tồn dư thể người bệnh sau sử dụng thuốc - Đối chứng kết với phương pháp phổ UV (hiện sử dụng số công ty dược phẩm Việt Nam) bảng 28 : 56 Bảng 28 So sánh kết phương pháp Von – Ampe, điện cực GC phương phổ UV Hàm lượng MLC % RSD Hàm lượng MLC (1 viên) Phương pháp Von – Ampe, 7.45 (20 viên) 0.86 149.00 0.14 0.70 149.40 0.21 điện cực GC Phương pháp phổ UV 7.47 Bảng 28 cho thấy dùng phương pháp Von – Ampe để xác định hàm lượng MLC mẫu dược phẩm thay cho phương pháp phổ UV kết hai phương pháp tương đương nhau, phương Von – Ampe có ưu thiết bị khơng đắt tiền, hóa chất sử dụng nhiều so với phương pháp phổ UV 57 5.2 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ: 5.2.1 KẾT LUẬN: Sau tối ưu điều kiện phân tích, phương pháp Von – Ampe xung vi phân với điện cực glassy carbon thiết lập để : Xác định hàm lượng vết MLC dược phẩm mẫu nước tiểu người bệnh Gout với thiết bị đơn giản, thời gian phân tích tương đối ngắn giá thành phân tích mẫu chấp nhận Tiến hành ứng dụng phân tích số mẫu dược phẩm thị trường mẫu nước tiểu người mắc bệnh Gout cho kết chấp nhận được, so sánh với phương pháp phổ UV sử dụng số công ty dược phẩm Việt Nam, hai phương pháp cho kết tương đương Đánh giá độ tuyến tính, giới hạn phát độ lặp lại tốt Với điều kiện thiết bị mơn Hóa Phân Tích phương pháp tỏ hiệu quả, đáp ứng tốt mục tiêu luận văn đề 5.2.2 KIẾN NGHỊ: Vấn đề đặt phương pháp áp dụng để xác định chất họ Oxicam khơng ? Vì cấu trúc chúng tương tự nhau, có chế oxi hóa cấu trúc phân tử, hình dạng khơng gian khác nên muốn xác định chất họ Oxicam cần phải khảo sát sơ để tìm thông số tối ưu Với kết đạt được, phương pháp định hướng xác định định tính định lượng chất thuộc họ Oxicam cho nghiên cứu sau Do điều kiện thời gian có hạn nên chúng tơi khơng sâu vào nghiên cứu phản ứng xảy bề mặt điện cực chất họ Oxicam Tuy có số hạn chế định phương pháp điện hóa, phương pháp đề nghị đề tài “phương pháp Von – Ampe dùng điện cực Glassy Carbon” có độ nhạy cao, quy trình chiết tách đơn giản, nhanh hữu hiệu để xác định Meloxicam mẫu dược phẩm mẫu nước tiểu người bệnh Gout 58 PHẦN PHỤ LỤC Cơng thức tính hàm lượng MLC viên thuốc: + Theo phương pháp Von –Ampe hòa tan : m= MLC * 50 * 10 * 1000 = * MLC (mg) 100 *1000 MLC : nồng độ MLC tính theo phương trình đường chuẩn + Theo phương pháp phổ UV : m= MLC * 25 * 196.16 *100 (mg) (m viên = 196.16mg ; m lấy = 104.43 mg) * 104.43 * 1000 MLC : nồng độ MLC tính theo phương trình đường chuẩn Cơng thức tính hiệu suất thu hồi: H (%) = mhs mmau * 100% mchuan mhs, mmau: khối lượng tính từ mẫu hiệu suất mẫu Cơng thức tính sai số: Tính độ lệch chuẩn mẫu: n (xi xtb) i1 S= = KBO n 1 Độ lệch chuẩn tương đối: % RSD = S * 100% xtb Phương trình hồi quy tuyến tính: y = bx + a; N: số cặp (x, y); m: số lần lặp lại phép đo Phương sai dư: s residue, Y = y a y b xy Phương sai a: sa = s residue, Y * N 2 x N x ( x) 59 Phương sai b : sb = s residue, Y * N N x ( x) Độ lệch chuẩn dư theo X : s residue, X = s residue,Y b Tính KBO kết phân tích mẫu thực tế dựa vào phương trình hồi quy tuyến tính: u(xtb * ) = s residue, X * 1 N ( y * ytb) N m b N x ( x ) U(xtb * ) = t 0.95, f residue * u(xtb * ) ; f residue = N - = 3; t 0.95, = 3.18 Biểu diễn kết quả: µ(xtb * )= xtb * U(xtb * ) Tính tốn LOD, LOQ: - Đo 11 lần dung dịch nền, có cường độ dịng trung bình ( Itrung bình nền, µA), nền; Itrung bình + nền, Itrung bình + 10 nền; LOD = 3* nền*3/b; LOQ = 10/3 * LOD Công thức áp dụng số lần thực thí nghiệm N 30 - Dựa vào PTHQTT: y = a + bx để tính: LOD = t0.95, f * LOQ = Sresidue * b N m ; N *m f = N + m - = + -2 = ; t0.95, = 2.45 10 * LOD Ở đây, chúng tơi tính LOD LOQ theo phương trình hồi quy tuyến tính đường chuẩn 60 TÀI LIỆU THAM KHẢO TÀI LIỆU TIẾNG VIỆT [1] TS Nguyễn Bá Hoài Anh (2000), Nghiên cứu chế tạo điện cực màng chọn lọc ion Cu2+, S2-, CN- ứng dụng chúng với phương pháp cực phổ kiểm sốt mơi trường nước, luận án tiến sĩ hóa học, trường Đại học Khoa Học Tự nhiên Tp HCM [2] Vũ Thùy Dung (2009), Xác định acid Folic dược phẩm phương pháp Von – Ampe sử dụng điện cực Glassy Carbon, khóa luận tốt nghiệp, trường Đại học Khoa Học Tự nhiên Tp HCM [3] Dược điển Việt Nam IV (), NXB Y học, trang 384 – 387 [4] Nguyễn Hữu Đĩnh – Trần Thị Đà (1999), Ứng dụng số phương pháp nghiên cứu cấu trúc phân tử, NXB Giáo Dục, trang 129 – 164 [5] Phạm Hải Tùng – Phạm Gia Huệ (1978), Hóa học phân tích tập II, NXB Y học, trang 187 [6] Nguyễn Việt Huyến (1999), Cơ sở phương pháp phân tích điện hóa, Tủ sách Đại học Khoa Học Tự nhiên Hà Nội, trang 172- 183 [7] TS Trần Chương Huyến – Phạm Luận – Từ Vọng Nghi (1990), Cơ sở lý thuyết số phương pháp phân tích điện hóa đại, Tủ sách Đại học Tổng Hợp Hà Nội, trang 77 – 126 [8] Thạc sĩ Nguyễn Thị Nhật Lệ (2008), Nghiên cứu xác định hàm lượng Sudan I tương ớt phương pháp Von – Ampe điện cực Glassy Carbon, luận văn thạc sĩ khoa học - hóa học, trường Đại học Khoa Học Tự nhiên Tp HCM [9] PGS.TS Cù Thành Long (2008), Giáo trình xử lý thống kê thực nghiệm hóa học, Tủ sách Đại học Khoa Học Tự nhiên Tp HCM [10] PGS.TS Nguyễn Thị Xuân Mai (1998), Thực tập chuyên ngành Phân tích trắc quang, Tủ sách Đại học Khoa Học Tự nhiên Tp HCM 61 [11] Ths Nguyễn Minh Trúc (2007), Nghiên cứu hoạt tính điện hóa kháng sinh Chloramphenicol điện cực Glassy Carbon ứng dụng phân tích, luận văn thạc sĩ khoa học - hóa học, trường Đại học Khoa Học Tự nhiên Tp HCM [12] Sở Y Tế Đồng Nai (2009), Tiêu chuẩn sở viên nén Amebic CTCP Dược Đồng Nai TÀI LIỆU TIẾNG ANH [13] A Radi, M A El ries, F El – Anwar, and Z El Sherif (2001), “Electrochemical oxidation of Meloxicam and its determination in tablet dosage form”, Analytical letter, 34 (5), pages 739 – 748 [14] Abd –Elgawad Radi, Mohamed Ghoneim, and Amr Beltagi (2001), “Cathodic Adsorptive Stripping Square-Wave Voltammetry of the Anti-in ammatory Drug Meloxicam”, Chem Pharm Bull, 49 (10), pages 1257—1260 [15] Alina Cristian, Emilia Elena Iorgulescu and Constantin Mihailciuc (2010), “Electrochemical studies using activated glassy carbon”, Rev Roum Chim, 55 (5), pages 329 – 334 [16] Dorothée Jürgen and Eberhard Steckhan (1992), “Influence of the supporting electrolyte and the pH on the electrooxidative actionvation of glassy carbon electrodes” , J Electroanal Chem., 333, pages 177 – 193 [17] Emirhan Nemutlu* / Sedef Kir (2004), “Validated Determination of Meloxicam in Tablets by Using UV Spectrophotometry”, Hacettepe University, Journal of Faculty of Pharmacy, Volume 24 / Number 1, pages 13-24 [18] G.N Kamau (1988), “ Surface prepatation of glassy carbon electrodes”, Analytica Chimica Acta, 207, pages -16 [19] Ing–Feng Hu, Dale H Karweik and Theodore Kuwana (1985), “ Activation and deactivation of glassy carbon electrodes”, J Electroanal Chem., 188, pages 59- 72 62 [20] Joseph Wang and Lori D Hutchins (1985), “ Activation of glassy carbon electrodes by althernating current eletrochemical treatment”, Analytica Chimica Acta, 167, pages 325 – 334 [21] Joseph Wang (2000), Analytical Electrochemistry- Second Edition, Wiley – VCH, Newyork, page 75 – 84 [22] Khalil Farhadi and Ahmad Karimpour (2007), “ Eletrochemical Determination of Meloxicam in Pharmatical Preparation and Biological Fluids Using Oxidized Glassy Carbon Electrodes”, Chem Pharm Bull, 55 (4), pages 638 – 642 [23] M Noel and P N Anantharaman (1986), “ Voltammetric studies on Glassy Carbon electrodes I: Electrochemical behaviour of Glassy Carbon electrodes in H2SO4, Na2SO4 and NaOH media”, Surface and Coatings Technology, 28, pages 161 – 179 [24] M Saeed Arayne, Najma Sultana and farhan Ahmed Siddiqui (2005), “ A new RP – HPLC method for analysis of Meloxicam in tablets”, Pakistan Journal of Pharmaceutical Sciences, Vol 18, No 1, pages 58 -62 TÀI LIỆU TỪ INTERNET [25].http://www.asaanalytics.com/asv.php [26] https://www.basinc.com/mans/EC_epsilon/Techniques/Stripping/stripping.html [27] http://www.chem.usu.edu/~sbialkow/Classes/565/ASV.html [28] http://www.dhgpharma.com.vn/1/index.php?view=product&ID=119 [29] http://en.wikipedia.org/wiki/Adsorptive_stripping_voltammetry [30].http://www.eurohealthcare.net/index.php?o=modules&n=product&f=product_deta il&idpro=17&id=53 [31].http://www.files.chem.vt.edu/chem-ed/echem/anstrip.html [32] http://www.medicinenet.com/meloxicam/article.htm [33] http://www.thuocbietduoc.com.vn/thuoc/thuoc-goc459.aspx [34] http://www.tracedetect.com/asv.html [35].http://wildlife1.wildlifeinformation.org/s/00Chem/ChComplex/Meloxicam.htm#P hysProp ... rộng rãi phân tích điện hóa phương pháp Von – Ampe hòa tan 2.1.1 PHƯƠNG PHÁP VON – AMPE HỊA TAN: Phương pháp Von ? ?Ampe hịa tan dùng để định tính định lượng hợp chất có hàm lượng nhỏ nhờ việc... Tích Phương pháp Von – Ampe điện cực Glassy carbon để xác định hàm lượng MLC mẫu dược phẩm mẫu nước tiểu có khả phát định lượng tốt Để hoàn thành mục tiêu đề tài này, cần lựa chọn loại điện cực. .. trợ điện cực Pt 2.1.4 ĐIỆN CỰC RẮN: Có hai loại điện cực rắn: điện cực rắn trơ mặt hóa học, điện hóa điện cực Vàng, Platin, Carbon; điện cực rắn không trơ điện cực Bạc, Đồng, Niken Điện cực