Nghiên cứu quy trình xác định atorvastatin bằng phương pháp von ampe trên điện cực glassy cacbon ( GC)”

KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP PHẠM THỊ HƯƠNG – K57A Lời cảm ơn Những dòng kháo luận này, xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc TS Nguyễn Thị Kim Thường quan tâm, giúp đỡ, hướng dẫn động viên suốt trình thực hoàn chỉnh đề tài Tôi xin chân thành cảm ơn thầy, cô giáo khoa Hóa nói chung môn phân tích nói riêng truyền đạt cho em kiến thức vô quý báu suốt trình học tập nghiên cứu khoa, tạo điều kiện thuận lợi mặt thiết bị hóa chất giúp em hoàn thành khóa luận Cuối xin chân thành cảm ơn tới gia đình, bạn lớp K57AHóa học, bạn sinh viên phòng thí nghiệm hóa phân tích trao đổi giúp đỡ cho suốt trình nghiên cứu Hà Nội, ngày tháng Sinh Viên Phạm Thị Hương năm KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP PHẠM THỊ HƯƠNG – K57A DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT STT Tiếng anh Tiếng việt Viết tắt Anodic Stripping Voltammetry Von-ampe hòa tan anốt ASV Asorptive Stripping Voltammetry Von-ampe hòa tan hấp phụ AdSV Cathodic Stripping Voltammetry Von-ampe hòa tan catốt CSV Cyclic Voltammetry Von-ampe vòng CV Differential Pulse Voltammetry Von-ampe hòa tan xung vi phân DPV Limit of Detection Giới hạn phát LOD Limit of Quantity Giới hạn định lượng LOQ Liquid ChromatographySắc kí lỏng khối phổ khối phổ Tandem Mass Spectrometry LCMS/MS Low -Density Lipoprotein Cholesterol xấu LDL STT Tiếng anh Tiếng việt Viết tắt KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP PHẠM THỊ HƯƠNG – K57A 10 Mercury Film Electrode Điện cực màng thủy ngân MFE 11 Hanging Mercury Dropping Electrode Điện cực giọt thủy ngân treo HMDE 12 High Perfomanc Liquid Chromatography Phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao HPLC 13 High performance thin layer chromatography Sắc kí mỏng hiệu cao HPTLC 14 Reversed- Phase HighPerformance Liquid Chromatography Sắc kí lỏng pha đảo RPHPLC 15 Static Mercury Dropping Electrode Điện cực giọt thủy ngân tĩnh SMDE 16 Stripping Voltammetry Von-ampe hoà tan SV Von-ampe hòa tan sóng vuông SqW Square-Wave Stripping Voltammetry 17 KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP PHẠM THỊ HƯƠNG – K57A DANH MỤC BẢNG SỐ LIỆU TRONG KHÓA LUẬN DANH MỤC HÌNH VẼ, ĐỒ THỊ TRONG KHÓA LUẬN KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP PHẠM THỊ HƯƠNG – K57A KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP PHẠM THỊ HƯƠNG – K57A Mục Lục Contents KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP PHẠM THỊ HƯƠNG – K57A Mở đầu Hiện nay, hợp chất có hoạt tính sinh học dùng làm thuốc chữa bệnh cho người có nhiều loại, mà hàm lượng hoạt chất dược phẩm có tính chất định đến liều dùng khả chữa bệnh, đồng thời khả chuyển hóa đào thải thuốc thể người cần theo dõi kiểm tra Thuốc sử dụng nhằm mục đích chữa bệnh nhiều tổ chức cá nhân lợi dụng cho đời nhiều loại thuốc giả, thuốc chất lượng làm nguy hại cho sức khỏe kinh tế cho người Ngày 27-5-2014, theo nghiên cứu Tổ chức Y tế Thế giới (WHO), tốc độ tăng trưởng hàng năm "ngành công nghiệp tội lỗi" lên tới 100% từ năm sang năm khác Theo WHO, thuốc giả chiếm tới 30% chí, có lên tới 50% lượng dược phẩm lưu hành số nước phát triển, Nigeria Guinee, 10 viên thuốc bán có tới viên thuốc giả Các mẫu thuốc giả chủ yếu thuốc kháng sinh, thuốc giảm đau, thuốc giảm yếu tố độc hại thể (hạ đường huyết, giảm cholesterol ) Điều khiến nhiều người quan tâm tỉ lệ thuốc giả Việt Nam ngày diễn biến phức tạp, nên công tác kiểm tra ngày khó khăn Theo TS Trương Quốc Cường, Cục trưởng Cục Quản lý dược- Bộ Y tế, tỷ lệ thuốc chất lượng Việt Nam dao động khoảng 3% thuốc giả 0,02% Vì vậy, vấn đề kiểm định lại hàm lượng thuốc theo tiêu chuẩn vấn đề quan trọng thực cần thiết Mặt khác, việc định lượng kiểm định chất lượng thuốc dạng bào chế, cần phải có phương pháp phân tích lượng thuốc nhỏ mẫu sinh học để tìm hiểu khả tồn tại, khả hấp phụ thuốc thể Ngày nay, có nhiều phương pháp dùng để xác định xác nhóm chất có hoạt tính sinh học, chủ yếu phương pháp sắc ký HPLC, GC, , phương pháp UV-VIS… Tuy nhiên phương pháp đòi hỏi thiết bị tương đối đắt tiền, quy trình phân tích phức tạp…Vì cần đòi hỏi phương pháp đảm bảo độ đúng, độ chọn lọc mà quy trình đơn giản chi phí phân tích không cao Trong phương pháp phân tích công cụ đại, phương pháp Von-ampe hòa tan đáp ứng yêu cầu đặt Vì vậy, chọn phương pháp Von-ampe hòa tan hấp phụ để thực đề tài khóa luận mình:“ Nghiên cứu quy trình xác định Atorvastatin phương pháp von-ampe điện cực glassy cacbon ( GC)” Atorvastatin thuốc làm giảm lượng Cholesterol máu bổ trợ cho trình làm giảm lipid khác, dùng cho người tăng Cholesterol máu, người có nguy mắc bệnh tim mạch KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP PHẠM THỊ HƯƠNG – K57A Chương 1: TỔNG QUAN 1.1.Giới thiệu Atorvastatin 1.CấuủtạoacAnsrvàihđóệ x Atorvastatin thuốc làm giảm cholesterol Tên khoa học, theo IUPAC: (3R,5R)-7-[2-(4-fluorophenyl)-3-phenyl-4-(phenylcarbamoyl)-5-(propan-2-yl)- 1Hpyrrol-1-yl]-3,5-dihydroxyheptanoic axit biết đến với tên thương mại Liptor hay Atova.[1] Công thức cấu tạo Atorvastatin: Hình 1: Công thức cấu tạo Atorvastatin Công thức phân tử : C33H35FN2O5, khối lượng mol 558,64( g/mol); pKa=4,6[1] Hoạt chất sử dụng Atorvastatin Atorvastatin Canxi Hình 2: Công thức cấu tạo Atorvastatin Canxi AtorvasinCxcóêkhọeIUPlà:(bR,d)-2rfuopnyihx5sl3e-4(carbmoy)p1htnid:2e.CôgứcấuạolàH18a6F2N4O03hy(C32)5.H[1] trAovasincxókhốilượngpâtửà209,14(g/mol) Atorvastatin dạng muối Atorvastatin Canxi tồn dạng bột tinh thể tan nước: 20,4 µg/mL( pH 2,1); 1,23 mg/mL( pH 6,0), tan etanol, tan hoàn toàn metanol.[1] KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP PHẠM THỊ HƯƠNG – K57A 21.DượclựhọvàđộngủaAtosrCix 1.1.2.1 Dược lực học Atorvastatin chất ức chế cạnh tranh chọn lọc men khử 3-hydroxy-3methylglutaryl coenzyme A (HMG-CoA), enzyme khóa sinh tổng hợp cholesterol Sử dụng Atorvastatin làm giảm lượng cholesterol, Atorvastatin làm giảm lipoprotein cholesterol Atorvastatin ức chế trình chuyển hóa HMGCoA thành mevalonat, tiền chất sterol, bao gồm cholesterol Atorvastatin canxi tan nước cất; acetonitrin; tan etanol tan nhiều metanol Atorvastatin để điều trị tăng lipit máu phòng bệnh tim mạch.[2][3] 1.1.2.2.Dược động học Atorvastatin hấp thu nhanh chóng sau uống, nồng độ thuốc huyết tương tối đa đạt vòng 1-2 Mức độ hấp thu nồng độ Atorvastatin tăng tỉ lệ với liều lượng Atorvastatin Atorvastatin dạng viên có độ khả dụng sinh học 95-99% so với dạng dung dịch Độ khả dụng sinh học tuyệt đối Atorvastatin khoảng 14% độ khả dụng toàn thân hoạt động ức chế men khử HMG- CoA khoảng 30% Tính khả dụng toàn thân thấp lọc niêm mạc đường tiêu hóa chuyển hóa lần đầu gan Khoảng 98 % atorvastatin gắn kết với protein huyết tương Nồng độ thuốc huyết tương dùng thuốc buổi chiều tối thấp dùng buổi sáng, nhiên nồng độ thuốc huyết tương xấp xỉ 0,25 % cho thấy thấm thuốc vào tế bào hồng cầu thấp, hiệu giảm LDL Thể tích phân phối trung bình Atorvastin khoảng 381 lít Trên 98% Atorvastatin gắn kết với protein huyết tương Tỉ lệ hồng cầu huyết tương xấp xỉ 0,25 cho thấy thấm thuốc vào tế bào hồng cầu thấp Atorvastatin chuyển hóa thải trừ chủ yếu qua mật sau trình chuyển hóa gan gan Tuy nhiên, thuốc không qua chu trình gan ruột Thời gian bán hủy huyết tương trung bình Atorvastatin người khoảng 14 giờ, nửa thời gian hoạt động ức chế men khử HMG- CoA 10-20 có đóng góp chất chuyển hóa có hoạt tính Dưới 2% lượng Atorvastatin uống vào tìm thấy nước tiểu.[2][3] KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP PHẠM THỊ HƯƠNG – K57A 1.2.Các phương pháp xác định Atorvastatin 1.2Phươngắpácskí BaHia cộng sử dụng phương pháp HPLC kết hợp với detecter huỳnh quang dùng để xác định đồng thời Amlodipin Atorvastatin hỗn hợp thuốc Quá trình đo huỳnh quang sử dụng bước sóng kích thích bước sóng huỳnh quang 361nm 274nm; 442nm 378nm cho Amlodipin Atorvastatin Trong phương pháp này, BaHia tách Atorvastaitn Amlodipin cách cho qua cột C18 với thành phần pha động hỗn hợp dung dịch acetonitrin: photphat (C= 0,015M; pH=3, tỉ lệ thể tích v/v=45:55) LOD LOQ Atorvastatin Amlodipin 0,869 µg/mL; 1,149 µg/mL 2,633 µg/mL; 3,483 µg/mL.[15] Beata Stanisz Lukas Kania sử dụng phương pháp HPLC để xác định Atorvastatin mẫu dược phẩm Tác giả sử dụng cột C18 để tách Atorvastatin; dung môi hỗn hợp acetonitrin nước theo tỉ lệ thể tích v/v = 48 : 52, pH điều chỉnh pH = với axit orthophotphoric Chất phân tích phát bước sóng λ = 245 nm Khoảng tuyến tính thuốc 0,04 - 0,4 mg/mL, hệ số tương quan R2 = 0,9990.[19] Hafez sử dụng phương pháp HPLC để xác định Amlodipin Atorvastatin mẫu thuốc Phương pháp thực cột C 18 100A(250×4,6mm; 2,6µm); pha động hỗn hợp dung dịch dihydrogen photphat( pH=5,5; C= 0,03M) acetonitrin ( 65:35v/v), bơm vaò hệ thiết bị với tốc độ 1,2ml/phút 40°C Mẫu thuốc phát bước sóng 240nm Từ điều kiện trên, tác giả thu khoảng tuyến tính 5,18- 15,54; 5,26- 15,78 µg/mL; độ xác: 99,73± 0,46%; 100,22± 1,04%; độ chụm: 100,34± 0,61; 101,01± 1,72%; giới hạn phát hiện: 0,16 0,17µg/ mL; giới hạn định lượng: 0,48 0,52 µg/ mL tương ứng cho Amlodipin Atorvastatin.[20] Srinivasa cộng sử dụng phương pháp LC-MS/MS để định lượng Atorvastatin, Metformin and Glimepiride huyết tương người Tác giả sử dụng Carbamazepin chất nội chuẩn(IS) Mẫu tách cột C18 Alltima HP, với thành phần pha động acetonitrin 10mM amoni axetat ( pH 3,0) với tỉ lệ 60:40( V/V); tốc độ dòng 1,1mL/phút Khoảng tuyến tính 0,50– 150,03 ng/mL cho Atorvastatin, 12,14– 1207,50 ng/mL cho Metformin 4,97– 494,29 ng/mL cho Glimepiride.[26] 10 KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP PHẠM THỊ HƯƠNG – K57A ưu: pH=4; hấp phụ 0,5V; thời gian hấp phụ 30s; tốc độ quét 10mV/s Kết đo thu sau : Bảng 9: Ảnh hưởng nồng độ Atorvastatin đến cường độ dòng píc CM.10-6M 9,17 27,03 44,25 68,97 84,75 I(nA) 149 458 726 1150 1400 Hình 18: Đường von-ampe phụ thuộc vào nồng độ Atorvastatin khoảng nổng độ 10-5M ÷10-4M 37 KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP PHẠM THỊ HƯƠNG – K57A 1600 1400 1200 Y=A+B*X I(nA) 1000 Parameter Value Error -A 1.5022 7.76042 B 16.5499 0.14306 800 600 400 R SD N P -0.99989 8.75512