Khảo sát, đánh giá nguồn gen một số giống lúa nếp năng suất, chất lượng, kháng bệnh bạc lá và đạo ôn bằng chỉ thị phân tử DNA

B GIÁO D C VÀ ðÀO T O TRƯ NG ð I H C NÔNG NGHI P HÀ N I NGÔ TH H NG GIANG KH O SÁT, ðÁNH GIÁ NGU N GEN M T S GI NG LÚA N P NĂNG SU T, CH T LƯ NG, KHÁNG B NH B C LÁ VÀ ð O ÔN B NG CH TH PHÂN T LU N VĂN TH C SĨ HÀ N I - 2013 DNA B GIÁO D C VÀ ðÀO T O TRƯ NG ð I H C NÔNG NGHI P HÀ N I NGÔ TH H NG GIANG KH O SÁT, ðÁNH GIÁ NGU N GEN M T S GI NG LÚA N P NĂNG SU T, CH T LƯ NG, KHÁNG B NH B C LÁ VÀ ð O ÔN B NG CH TH PHÂN T CHUYÊN NGÀNH : CÔNG NGH SINH H C Mà S : 60.42.02.01 NGƯ I HƯ NG D N KHOA H C: PGS.TS PHAN H U TÔN HÀ N I - 2013 DNA L I CAM ðOAN Tơi xin cam đoan s li u k t qu nghiên c u lu n văn trung th c chưa h ñư c s d ng ñ b o v m t h c v Tôi xin cam ñoan m i s giúp ñ cho vi c th c hi n lu n văn ñã ñư c c m ơn thơng tin trích d n ñư c ch rõ ngu n g c Tác gi lu n văn Ngô Th H ng Giang Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i – Lu n văn th c s khoa h c Nông nghi p ……………………… ii L I C M ƠN ð hồn thành t t đ tài th c t p t t nghi p s n l c, ph n ñ u c a b n thân, tơi cịn nh n đư c r t nhi u s giúp đ c a th y, giáo, gia đình, b n bè ngư i thân Tơi xin chân thành bày t lòng bi t ơn sâu s c t i th y giáo PGS TS Phan H u Tơn, ngư i chu đáo, t n tình tr c ti p hư ng d n, giúp ñ su t th i gian th c t p hoàn thành lu n văn t t nghi p ð ng th i xin chân thành c m ơn th y giáo, cô giáo, cán b B môn Công ngh sinh h c ng d ng, Khoa Công ngh sinh h c- ðH Nơng Nghi p Hà N i t o u ki n thu n l i cho th i gian th c t p t t nghi p Qua đây, tơi xin g i l i c m ơn đ n gia đình, b n bè nh ng ngư i ln bên c nh đ ng viên, quan tâm giúp đ tơi su t trình h c t p th c hi n đ tài Tơi xin trân tr ng c m ơn! Hà N i, ngày 02 tháng 08 năm 2013 Tác gi lu n văn Ngô Th H ng Giang Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i – Lu n văn th c s khoa h c Nông nghi p ……………………… iii M CL C L i cam ñoan ii L i c m ơn iii M cl c iv Danh m c ch vi t t t kí hi u vii Danh m c b ng viii Danh m c hình ix Tóm t t x M ð U ð tv nđ M c đích u c u Chương T NG QUAN TÀI LI U 1.1 Ngu n g c phân lo i lúa 1.1.1 Ngu n g c 1.1.2 Phân lo i 1.2 Khai thác ngu n gen lúa ñ a phương 1.2.1 Hi n tr ng ngu n gen lúa ñ a phương 1.2.2 Các hư ng s d ng ngu n gen ñ a phương 1.2.3 Nguyên nhân m t mát ngu n gen 1.3 Ch n gi ng lúa ch t lư ng cao 1.3.1 Nghiên c u v ch t lư ng g o 1.3.2 Hư ng ch n t o tình hình ch n t o gi ng lúa ch t lư ng cao nư c ta 14 1.4 Ch n gi ng lúa kháng b nh b c 16 1.4.1 Tác h i c a b nh 16 1.4.2 Tri u ch ng b nh 17 1.4.3 Nguyên nhân gây b nh 17 1.4.4 ð c ñi m phát sinh, phát tri n y u t nh hư ng ñ n s phát sinh, phát tri n c a b nh Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i – Lu n văn th c s khoa h c Nông nghi p ……………………… 18 iv 1.4.5 Cơ s khoa h c c a ch n gi ng lúa kháng b c 19 1.5 Ch n gi ng lúa kháng b nh đ o ơn 25 1.5.1 Tác h i c a b nh 25 1.5.2 Cơ s c a tính kháng b nh đ o ơn 26 1.5.3 ng d ng ch th phân t nghiên c u ch n t o gi ng kháng b nh đ o ơn 27 Chương V T LI U VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN C U 28 2.1 V t li u 28 2.2 Th i gian nghiên c u 28 2.3 ð a ñi m nghiên c u 28 2.4 N i dung nghiên c u 28 2.5 Phương pháp 28 2.5.1 Thí nghi m ngồi đ ng ru ng 28 2.5.2 Thí nghi m đánh giá ch t lư ng 30 2.5.3 Ki m tra kh mang gen kháng b nh b c b ng phương pháp lây nhi m nhân t o 2.5.4 Ki m tra kh mang gen kháng b nh ñ o ôn b ng phương pháp lây nhi m nhân t o 2.5.5 2.6 33 ng d ng ch th DNA xác ñ nh kh ch a gen 34 35 Phương pháp x lý s li u 38 Chương K T QU VÀ TH O LU N 40 3.1 K t qu đánh giá tính tr ng nông sinh h c 40 3.1.1 Th i gian sinh trư ng 40 3.1.2 Chi u cao cây, chi u dài bơng m t s đ c m v địng 42 3.1.3 S nhánh t i ña, s nhánh h u hi u, ki u ñ nhánh 47 3.1.4 Năng su t y u t c u thành su t 50 3.2 M t s ch tiêu xác ñ nh ch t lư ng g o 53 3.2.1 Các ch tiêu liên quan t i ch t lư ng thương trư ng c a g o 53 3.2.2 ðánh giá ch t lư ng xay xát 58 3.2.3 Các ch tiêu liên quan t i ch t lư ng n u nư ng c a g o 60 Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i – Lu n văn th c s khoa h c Nông nghi p ……………………… v 3.3 K t qu ñánh giá kh kháng b nh b c 65 3.3.1 K t qu lây nhi m nhân t o 65 3.3.2 K t qu PCR ki m tra gen kháng b c 67 3.3.3 So sánh k t qu PCR v i k t qu lây nhi m nhân t o 69 3.4 K t qu ñánh giá kh kháng b nh đ o ơn 72 3.4.1 K t qu lây nhi m nhân t o 72 3.4.2 K t qu PCR ki m tra gen kháng đ o ơn 72 3.4.3 So sánh k t qu lây nhi m nhân t o v i k t qu PCR 73 3.5 Gi i thi u m t s m u gi ng lúa có tri n v ng 74 K T LU N VÀ ð NGH 76 K t lu n 76 ð ngh 76 TÀI LI U THAM KH O 78 PH L C 81 Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i – Lu n văn th c s khoa h c Nông nghi p ……………………… vi DANH M C CÁC CH VI T T T VÀ KÍ HI U Ký hi u t t CNSH NST NSTN IRG Công ngh sinh h c Nhi m s c th Năng su t ti m International Rice Genbank - ngân hàng gen lúa Qu c t IRRI AFLP BAC BAD2 Internationnal Rice Research Institute – Vi n nghiên c u lúa qu c t Amplified Fragment Length Polymorphic ADN Bacterial Artificial Chromosome - nhi m s c th nhân t o c a vi khu n Enzyme betaine aldehyde dehydrogenase EDTA EAP ESP Ethylendiamine tetra acetic acid External antisense primer – m i ngo i biên c a c p m i phát hi n gen fgr External sense primer – m i ngo i biên c a c p m i phát hi n gen fgr IFAP INSP PCR RFLP RADP SDS SNPs SSRs Tris-HCl N i dung Internal fragrant antisense primer – m i n i biên c a c p m i phát hi n gen fgr Internal non-fragrant sense primer – m i n i biên c a c p m i phát hi n gen fgr Polymerase chain reaction – ph n ng chu i trùng h p, k thu t ch th phân t nh m nhân m t ño n DNA ñã bi t trư c Restriction fragment length polymorphism – s ña hình v chi u dài c a nh ng đo n c t gi i h n Randomly amplified polymorphism – đa hình đo n DNA đư c nhân ng u nhiên Sodium dodecyl sulphate Single nucleotide polymorphisms – hi n tư ng đa hình đơn nucleotide Simple sequence repeats – k thu t ch th phân t nh m nhân ho c lai ño n l p DNA nguyên b n (Tris hydroxylmethyl) amino methane Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i – Lu n văn th c s khoa h c Nông nghi p ……………………… vii DANH M C B NG STT Tên b ng Trang 1.1 Thi t h i su t b nh đ o ơn 26 3.1 Th i gian sinh trư ng c a m u gi ng lúa (ngày) 41 3.2 Chi u cao t i đa, chi u dài bơng, chi u dài, chi u r ng địng 43 3.3 S nhánh t i ña, s nhánh h u hi u ki u ñ nhánh 48 3.4 Năng su t y u t c u thành su t 51 3.5a Chi u dài d ng hình g o xay 54 3.6b D ng n i nhũ, ñ b c b ng c a n i nhũ, màu s c h t g o 57 3.7 T l g o l t, g o tr ng 59 3.8 Mùi thơm, nhi t đ hóa h hàm lư ng amylose 63 3.9 Ph n ng c a dịng đ ng gen v i ch ng vi khu n 65 3.10 So sánh k t qu xác ñ nh gen kháng b ng PCR lây nhi m nhân t o 70 3.11 So sánh k t qu xác ñ nh gen kháng b ng PCR lây nhi m nhân t o 73 3.12 Các m u gi ng lúa có tri n v ng 75 Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i – Lu n văn th c s khoa h c Nông nghi p ……………………… viii DANH M C HÌNH STT 1.1 Tên hình Trang Ho t ñ ng c a h m i ñư c mô t nghiên c u c a Bradbury c ng s (2005) 11 3.1a Thí nghi m xác ñ nh nhi t ñ hóa h , ñ phân h y ki m 60 3.2b Thí nghi m xác ñ nh hàm lư ng amylose 61 3.3c ði n di s n ph m PCR gen thơm 62 3.3 Hình nh lây nhi m nhân t o c a dịng đ ng gen 66 3.4a ði n di s n ph m PCR gen Xa4, s d ng c p m i MP2 67 3.4b ði n di s n ph m PCR gen Xa7, s d ng c p m i P3 68 3.4c ði n di s n ph m PCR gen xa5, s d ng c p m i RG556 trư c enzyme 3.4d 68 ði n di s n ph m PCR gen xa5, s d ng c p m i RG556 sau enzyme DraI 3.5 68 ði n di s n ph m PCR xác ñ nh m u gi ng mang gen Pi-ta 72 Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i – Lu n văn th c s khoa h c Nông nghi p ……………………… ix 262bp 297bp Hình 3.4b ði n di s n ph m PCR gen Xa7, s d ng c p m i P3 Ladder 5.10943 IR24, ñ i ch ng âm N42 IRBB7, ñ i ch ng dương 7.N51-1 10168 8.NV2 10 Hình 3.4c ði n di s n ph m PCR gen xa5, s d ng c p m i RG556 trư c enzyme 10 11 12 450bp Hình 3.4d ði n di s n ph m PCR gen xa5, s d ng c p m i RG556 sau enzyme DraI Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i – Lu n văn th c s khoa h c Nông nghi p ……………………… 68 Ladder 10180 N57 IR24, ñ i ch ng âm 10944 10 10963 IRBB5,ñ i ch ng dương N51-1 11 10970 10132 12 10985 N55 3.3.3 So sánh k t qu PCR v i k t qu lây nhi m nhân t o So sánh k t qu PCR k t qu lây nhi m nhân t o c a m u gi ng (B ng 3.10), chúng tơi đưa m t s k t lu n sau: +12 m u gi ng có ch a gen xa5 (xác đ nh b ng PCR) kháng hồn toàn v i ch ng vi khu n tương t IRBB5 Riêng 10926 ch a gen xa5 kháng v a v i ch ng kháng hoàn tồn v i ch ng cịn l i 35 m u gi ng có ch a gen Xa4 kháng ch ng 2B, 3A tương t dịng đ ng gen IRBB4 23 m u gi ng ch a gen Xa7 ñ u kháng ho c kháng v a v i ch ng: 1, 2B, 3A, 5A, tương t IRBB7 Ch ng t xác ñ nh gen kháng b ng PCR xác nh ng m u gi ng ch a gen kháng xa5 v t li u r t t t cho ch n gi ng kháng b nh + Trong m u gi ng ch a gen kháng Xa4 Xa7 m u 10940, N42 kháng hồn tồn v i ch ng vi khu n Ch ng t có s k t h p c a gen kháng tính kháng tương đ i b n v ng + M t s m u gi ng ñư c xác ñ nh ch a gen kháng Xa4 ho c Xa7, không ch a gen kháng xa5 ho c không ch a gen kháng (theo k t qu PCR) l i kháng ñư c s ch ng vi khu n nhi u so v i đ i ch ng Ví d m u gi ng N3 xác ñ nh b ng PCR cho kêt qu ch a gen Xa4 không ch a Xa7 hay xa5 ho c N21-1 không ch a Xa4, xa5 Xa7 k t qu lây nhi m nhân t o kháng ñư c c ch ng vi khu n Nh ng m u gi ng có th ch a m t gen kháng khác ngồi xa5, nh ng trư ng h p c n ki m tra thêm đ xác đ nh xác gen kháng Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i – Lu n văn th c s khoa h c Nông nghi p ……………………… 69 B ng 3.10: So sánh k t qu xác ñ nh gen kháng b ng PCR lây nhi m nhân t o STT KH gi ng 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 10132 10140 10168 10180 10203-1 10430 10566 10926 10929 10940 10941 10942 10943 10944 10945 10946 10947 10948 10953 10955 10960 10962 10963 + + + + + _ _ _ _ + + _ _ _ _ + + _ + + _ _ + _ _ + _ _ + _ _ + + + + + + + _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ + _ _ _ + + + _ _ _ _ _ _ _ _ + _ _ + + _ 24 25 10964 10966 + _ _ _ _ _ 26 27 28 29 30 31 32 33 10967 10968 10969 10970 10971 10972 10973 10981 + _ + + + + _ _ _ + _ _ _ _ + _ _ + _ _ _ _ _ + K t qu PCR Xa4 Xa7 xa5 K t qu lây nhi m nhân t o 2B 3A 5A R R R R R R R R R R R R R R R R R R M R R R R R R R R R R R R R R M M R R R R R R R R R S S R S M S R R R R S S S R S R S R R R R R S M R S R R R R R R M M M R R R S R R M R R S S R S M S R R R R M S S M S M R R R S R R S M R S R R R M R R M M M M R M R R M S R R S S S S R S S M M S R R R S R R M S S S S S S S S S M S M S M R R R R R R R R M R R R S S S M S S S S R R R R R R R R R R S S R R S S R R S S R R S S R R S S R S R R R R R R R R M M R M S R S S R R Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i – Lu n văn th c s khoa h c Nông nghi p ……………………… TL R/M/S 2R/5S 2R/2M/3S 7R 2R/5S 5R/2M 5R/2S 7R 6R/1M 7R 7R 3R/3M/1S 2R/3M/2S 1R/4M/2S 4R/3M 5R/2S 4R/3M 4R/3S 7R 4R/2M/1S 3R/1M/3S 7R 7R 2R/1M/4S 1R/3M/3S 7S 2R/2M/3S 7R 2R/1M/4S 3R/3S/1M 2R/5S 2R/5S 7R 7R 70 STT KH gi ng K t qu PCR Xa4 Xa7 xa5 34 35 36 37 10985 10995 10996 10997 + + _ _ + _ ─ + _ _ _ _ 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 11000 11004 11006 11022 11024 N1 N2 N3 N14 N17 N20 N21-1 N21-2 N22 N27 N30 N39 N42 N44 N46 N51-1 N51-2 N55 N57 N58 _ _ _ + + + + + + + _ _ + + + _ + + _ _ + _ + _ + + + + _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ + + + + + _ + _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ + + + + _ K t qu lây nhi m nhân t o 2B 3A 5A R S R R R R S S R S S S R S M R S S S S S R R R S R S R M M R S R S R R R M R S S R M M M R S S M S R R R R R R R R R R R R R R S R R R R R R R R R R R R R R S R S S S S S R S S S R S S S S R R M M R S R M M M R M S M S R S S M M S R S M M R S S S S R R M R R S R R R R R M S M S S M R S S S M R S R R R R R S R R R R R S R R M S R S M R R R R R R R R R R R R R R R R R R R R R R R R R R R R S 63 NV2 _ + _ S 64 NV3 _ _ _ S 40R/ T l R/M/S c a ch ng 10M/ 14S Kí hi u: R: resistance (kháng); M: M R S R M S S S S 55R/ 56R/ 36R/ 6M/ 4M/ 2M/ 3S 4S 26S moderate resistance S R M 36R/ 10M/ 18S (kháng TL R/M/S 5R/2S 2R/5S 1R/1M/5S 5R/2S 3R/2M/2S 7R 5R/2S 2R/3M/2S 4R/2M/1S 2R/1M/2S 2R/5S 7R 3R/2M/2S 3R/3M/1S 3R/3M/1S 7R 2R/2M/3S 2R/5S 2R/3M/2S 7S 1R/2M/4S 7R 4R/3S 3R/2M/2S 7R 7R 7R 7R 1R/2M/4S 2R/1M/4S 1M/6S S M S S S S 22R/ 31R/ 10M/ 16M/ 32S 17S v a); S: susceptible (nhi m) D u “+”: Có ch a gen; d u “-” : Không ch a Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i – Lu n văn th c s khoa h c Nơng nghi p ……………………… 71 3.4 K t qu đánh giá kh kháng b nh đ o ơn 3.4.1 K t qu lây nhi m nhân t o Sau t o ñư c bào t n m ñ o ơn, chúng tơi ti n hành phun mù liên t c gi , ñ m b o ñ m ñ t 90%, t o ñi u ki n thu n l i cho trình xâm nh p c a bào t n m gây b nh S d ng gi ng ñ i ch ng dương BL24 ñ i ch ng âm BC15 K t qu đư c trình bày t i B ng 3.11 Trong 64 m u gi ng nghiên c u có 17 m u gi ng có tính kháng cao, 23 m u gi ng có tính kháng, 14 m u gi ng b nhi m, m u gi ng b nhi m n ng ñ i v i ch ng n m ñ o ôn lây nhi m 3.4.2 K t qu PCR ki m tra gen kháng đ o ơn ð phát hi n kh ch a gen Pi-ta m u gi ng, s d ng c p m i YL155/ YL87, nhân ño n gi a c a gen có kích thư c kho ng 1042bp (Yulin Jia, 2003) S n ph m PCR ñư c ñi n di gel agarose 1,5% nh ng gi ng có gen kháng, v ch băng có kích thư c kho ng 1042 bp, cịn nh ng gi ng khơng ch a gen Pi-ta khơng có v ch băng K t qu ch y PCR cho th y 64 m u gi ng nghiên c u, có 23 m u gi ng mang gen kháng Pi-ta (B ng 3.11) 1042bp Hình 3.5 ði n di s n ph m PCR xác ñ nh m u gi ng mang gen Pi-ta 1- Ladder 2- BL24 – ñ i ch ng dương 3- BC15– ñ i ch ng âm 4- 10132 5- 10929 6- 10943 7- N1 8- N42 9- N57 Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i – Lu n văn th c s khoa h c Nông nghi p ……………………… 72 3.4.3 So sánh k t qu lây nhi m nhân t o v i k t qu PCR B ng 3.11 So sánh k t qu xác ñ nh gen kháng b ng PCR lây nhi m nhân t o TT KH gi ng 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 ðC (+) 10132 10140 10168 10180 10203-1 10430 10566 10926 10929 10940 10941 10942 10943 10944 10945 10946 10947 10948 10953 10955 10960 10962 10963 10964 10966 10967 10968 10969 10970 10971 10972 10973 BL24 KQ lây nhi m nhân t o Ph n ng C pñ kháng b nh nhi m R S HS M R M S HS HR M R R HR S S R HR R R R R HR S R S HR S R HR S S R R Gen Pi-ta + _ _ _ + _ _ _ + + + _ + _ _ _ + + + _ _ + _ + _ _ _ _ _ _ _ + + TT 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 ðC (-) KH gi ng 10981 10985 10995 10996 10997 11000 11004 11006 11022 11024 N1 N2 N3 N14 N17 N20 N21-1 N21-2 N22 N27 N30 N39 N42 N44 N46 N51-1 N51-2 N55 N57 N58 NV2 NV3 BC15 KQ lây nhi m nhân t o C p Ph n ng ñ kháng b nh nhi m R HR R HR HR S HR R R HR HR R R R S HR S S HR HR HR HS S M HR M M HR HS M R HR S Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i – Lu n văn th c s khoa h c Nông nghi p ……………………… Gen Pi-ta _ _ _ + _ _ + _ + _ + + + _ _ _ _ _ + _ _ _ + _ + _ _ _ + _ _ + _ 73 Ph n l n gi ng có ph n ng kháng kháng cao lây nhi m nhân t o có ch a gen kháng Pi-ta Tuy nhiên, có 19 m u gi ng có ph n ng kháng kháng cao v i ch ng n m lây nhi m, l i không ch a gen kháng Pi-ta: ði u có th m u gi ng có ch a gen khác kháng đư c ch ng n m lây nhi m 3.5 Gi i thi u m t s m u gi ng lúa có tri n v ng Sau t p h p đ y đ s li u v tính tr ng nông sinh h c quan tr ng liên quan t i su t, ch tiêu ch t lư ng kh kháng b nh b c chúng tơi n ch n 14 m u gi ng có ph m ch t t t, kh kháng b c su t cao Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i – Lu n văn th c s khoa h c Nông nghi p ……………………… 74 B ng 3.12: Các m u gi ng lúa có tri n v ng TGST S S h t P1000 h t NSTN Nhi t ñ Hàm lư ng (ngày) hh/khóm ch c/bơng (g) (t /ha) hóa h amylose Xa4, xa5, Xa7, fgr 148 7.2 118.9 28.2 108.6 Th p 1.7 10929 xa5, Xa7, fgr, Pi-ta 131 4.1 197.5 30.8 112.2 TB 5.3 10940 Xa4, Xa7, Pi-ta 123 6.4 164.4 28.6 135.4 Th p 4.2 N2 Xa4, fgr, Pi-ta 127 10.0 107.0 30.0 144.5 Th p 1.0 10962 xa5, fgr, Pi-ta 139 6.0 245.2 20.1 158.6 Th p 3.9 10948 xa5, Pi-ta 120 6.8 185.8 21.4 121.8 Th p 1.9 10963 Xa4, fgr 131 5.8 250.0 24.3 104.6 0.9 10132 122 7.6 134.8 26.6 122.6 Th p TB 10 10947 137 11.2 138.4 27.1 142.0 TB 5.2 STT KH gi ng N51-1 Ch a gen Xa4, Pi-ta Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i – Lu n văn th c s khoa h c Nông nghi p ……………………… 4.9 75 K T LU N VÀ ð NGH K t lu n T nh ng k t qu nghiên c u, ñánh giá ñ c ñi m nông sinh h c, ch t lư ng kh kháng b nh b c c a 64 m u gi ng lúa k trên, có m t s k t lu n sau: K t qu kh o sát ñ c ñi m nông sinh h c su t c a m u gi ng cho th y: m u gi ng có đ c m nơng sinh h c r t đa d ng, có 14 m u gi ng có su t cao so v i ñ i ch ng TK90 41 m u gi ng có hàm lư ng amylose th p, 23 m u gi ng có hàm lư ng amylose r t th p, v t li u ưu tiên ch n gi ng có hàm lư ng amylose th p 13 m u có gen fgr g o có mùi thơm (10929, 10944, 10962, 10963, 10971, 10995, 11006, N2, N17, N22, N30, N51-1, NV2) s ngu n v t li u ưu tiên ch n gi ng lúa thơm m u gi ng: 10168 N51-1 ch a c gen kháng; m u gi ng: N55 ch a gen Xa4 xa5; m u gi ng:10940, 10941, 10985, N42 ch a gen Xa4 Xa7; 4m u gi ng: 10929, 10968, N51-2, N57 ch a gen xa5 Xa7 nh ng v t li u r t t t ch n t o gi ng lúa kháng b nh b c 23 m u gi ng mang gen kháng Pi-ta v t li u r t t t ch n t o gi ng lúa kháng b nh đ o ơn K t qu n ch n ñư c 10 m u gi ng lúa có tri n v ng (trình bày t i B ng 3.12) S d ng ch th phân t DNA ñ xác ñ nh gen thơm gen kháng b nh b c cho k t qu r t t t xác ð ngh T nh ng nghiên c u v ñ c ñi m nông sinh h c, su t, ch t lư ng kh kháng b nh b c lá, đ o ơn c a m u gi ng chúng tơi đ ngh đưa kh o nghi m 10 m u gi ng lúa tri n v ng k Còn m u gi ng lúa ch ch a gen thơm ho c ch ch a gen kháng b nh b c ho c đ o ơn s làm v t li u cho vi c Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i – Lu n văn th c s khoa h c Nông nghi p ……………………… 76 lai t o gi ng lúa m i Các m u gi ng có bi u hi n mùi thơm không ch a gen thơm gi ng có kh kháng t t thí nghi m lây nhi m nhân t o chưa phát hi n ñư c gen kháng c n ti p t c ti n hành nghiên c u v sau C n ti p t c nghiên c u s tương tác gi a gen kháng b c ñ xác ñ nh s tương tác c a chúng s làm tăng hay gi m m c ñ bi u hi n b nh ð ngh nên áp d ng phương pháp PCR nghiên c u ti p theo ñ xác ñ nh gen thơm, gen kháng b nh b c đ o ơn Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i – Lu n văn th c s khoa h c Nông nghi p ……………………… 77 TÀI LI U THAM KH O I- TÀI LI U TI NG VI T Bùi Chí B u, Nguy n Th Lang (2007), Ch n gi ng tr ng phương pháp truy n th ng phân t , NXB Nông nghi p Hargrove c ng s (1979), “Qu gen”, T p chí BVTV Lê Doãn Diên (2003), Nâng cao ch t lư ng lúa g o ph c v tiêu dùng xu t kh u, NXB Nông nghi p, Hà N i Lê Lương T (1980), “B nh b c c a vùng đ ng b ng sơng H ng”, Tuy n t p cơng trình nghiên c u KHKT Nông Nghi p – NXB Nông Nghi p Hà N i Nguy n Th Lan (2007), Bài gi ng h c ph n lương th c, Trư ng ðH H ng ð c Thanh Hóa Nguy n Th Thanh (2007), Bài gi ng ch n gi ng, Trư ng ðH H ng ð c - Thanh Hóa Nguy n Văn Hoan, 2000, Giáo trình ch n gi ng ng n ngày, NXB GD Ph m Văn Phư ng (2006), ng d ng kĩ thu t ñi n di protein SDS-PAGE ñ nghiên c u ñ c ñi m di truy n ch n gi ng lúa, Lu n án ti n sĩ, C n Thơ Phan H u Tôn (2004), Chi n lư c ch n t o gi ng lúa ch ng b nh b c Vi t Nam, tài li u online mi n B c 10 Phan H u Tơn (2005), Giáo trình CNSH ch n t o gi ng tr ng, NXB Nông Nghi p Hà N i 11 T Minh Sơn (1996), “K t qu nghiên c u v b nh b c lúa vi khu n T p chí BVTV (s 6), năm 1996 Vi t Nam”, 12 Vi n lúa Qu c T (IRRI) (1996), H th ng tiêu chu n ñánh giá lúa, Vi n KHKT Vi t Nam d ch 13 Vũ Tri u Mân, Lê Lương T (2004), Giáo trình B nh nơng nghi p, Trư ng đ i h c Nơng nghi p, tr 183-187 II- TÀI LI U TI NG ANH 14 Ahn, S.N., Bollich, C.N., McClung, A.M and Tanksley, S.D (1993), RFLP analysis of genomic regions associated with cooked kernel elongation in rice, Theor Appl Genet No.87, pp 27-32 15 Bui Chi Buu (2000), Aromatic rices of Vietnam, Aromatic Rice Oxford and IBH Publishing Co Pvt Ltd, New Delhi, India, pp 188-190 16 Buttery, R.G., Ling, L.C., Juliano, B.O and Turnbaugh, J.G (1983), Cooked rice aroma and 2-acetyl-1-pyrroline in rice, J Agril Food Chem 31, pp 823-826 17 Buttery, R.G., Ling, L.C and Mon, T.R (1986), Quantiative analysis of 2-acetyl-1pyrroline in rice , J Agril Food Chem 34, pp 112-114 18 Chowdhury, V.K., Yadav, N.R., R.C., Jah, R.K., Sangwan, V., Rohilla, J.S and Chowdhary, J.P (1997), Development of transgenic Basmati rice plants using Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i – Lu n văn th c s khoa h c Nông nghi p ……………………… 78 Agrobacterium, electroporation and protoplast transformation systems, General meeting of The International Program on Rice Biotechnology, September 1519, 1997 Malacca, Malaysia, pp 49 (Abstr.) 19 Cordeiro, G.M., Christopher, M.J., Henry, R.J and Reinke, R.F (2002), Indentification of microsatellite markers for fragrance in rice by analysis of the rice genome sequence, Molecular Breeding No.9, pp 245-250 20 Dhulappanavar, C.V (1976), Inheritance of scent in rice, Euphytica 25,pp 659-662 21 Dhulappanavar, C.V., Hiremath, S.R and Sathyavathi, G.P 1975, Linkage between a basic gene for anthocyanin pigmentation and a complementary gene for purple spectrum in rice, Euphytica 24, pp 633-638 22 Ghose, K.L Mand Butany, W.T (1952), Studies on inheritance of some characters in rice, Indian J Genet Pl Breed 12, pp 26-30 23 Jin, Q.S., Waters, D.L.E., Cordeiro, G.M., Henry, R.L and Reinke, R.F (2003), A single nucleotide polymorphism (SNP) marker linked to the fragrance gene in rice (Oryza sativa), Plant Sci No, pp 165 : 359-364 24 Kadam, B.S and Patankar, V.K (1938), Inheritance of aroma in rice, Chron Bot 4, pp 32 25 Lang, N.T and Buu, B.C (2000), Identification and fine mapping of SSR marker linked to fgr gene of rice, Omonrice No.10, pp 14-20 26 Louis M.T Bradbury, Timothy L Fitzgerald, Robert J Henry, Qingsheng Jinand Danie, L.E Waters (2005), The gene for fragrance in rice, Plant Biotechnology Journal, pp 363-370 27 Mew T.W (1987), Annu Rev Phytopathol, pp 359 – 382 28 Pandey, A (1994), Restriction Fragment Length Polymorphism Analysis of Phenotypic Traitsin Rice, Ph.D Thesis, IARI, New Delhi 29 Pandey, M., Sadananda, A.R., Dhar, M., Mohapatra, T., Gupta, N., Singh, V.P., Zaman, F.U and Sharma, R.P (1995) Towards molecular tagging of genes for quality traits in rice Proceedings of Third International Rice Genetics Symposium, October 16-20, 1995 IRRI, Manila, Philippines 30 Qiao-Quan Liu, Qian-Feng Li, Xiu-Ling Cai, Hong-Mei Wang, Shu-Zhu Tang, HengXiu Yu, Zong-Yang Wang, and Ming-Hong Gu (2006), Molecular Marker – Assisted Selection for Improved Cooking and Eating Quality of Tow Elite Parents of Hybird Rice, Crop science (publish online) 31 R.K Singh, G.S Khush, US Singh, AK Singh, Sanjay Singh (2000), Breeding Aromatic Rice for High Yield, Improved Aroma and Grain Quality, Aromatic Rice, Oxford and IBH Publishing Co Pvt Ltd, New Delhi, India, pp 71-106 32 R.K Singh, US Singh, G.S Khush, Rashmi Rohilla (2000) Genetics and Biotechnology of Quality Traits in Aromatic Rices Aromatic Rice Oxford and IBH Publishing Co Pvt Ltd, New Delhi, India, pp 17-70 33 Robert Henry, Daniel Waters (2006), New Markers for Australian Rice Improvement A report for the Rural Industries Researchand Development Corporation, Australian government Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i – Lu n văn th c s khoa h c Nông nghi p ……………………… 79 34 Siddiq, E.A (1990), Export prospects of Indian basmatic rices, Indian Farming No.40: pp 4547 35 Wakil Ahmad Sarhadi, Nguyen Loc Hien, Mehran Zanjani, Wahida Yosofzai, Tadashi Yoshihashi,Yutaka Hiratai (2008) Comparative Analyses for Aroma and Agronomic Traits of Native Rice Cultivars from Central Asia J Crop Sci Biotech No.11 (1) , pp17 - 22 Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i – Lu n văn th c s khoa h c Nông nghi p ……………………… 80 PH L C Ph l c 1: Danh sách m u gi ng ST T KH gi ng 10132 10140 10168 10180 10203-1 Tên g i Năm 2002 2002 2002 2002 10430 10566 10926 10929 Kh u h u đa C m tím N p tr ng H i dương B o Ái, Yên Bình, Yên Bái ðông Quan, L c Yên, Yên Bái Tavan, Sapa, Lào cai Phong niên, B o th ng, Lào cai H ng ti n, Hương trà, Alư i, Th a Thiên Hu Xã tam gia, L c bình, L ng sơn Sa pa, Lào Cai Bát Xát, Lào Cai H i dương 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 10940 10941 10942 10943 10944 10945 10946 10947 10948 N p ðen Dâu Thanh Hà Kh u Say Pu N p hom N pn t Lúa ngoi Chiêm m c Nàng soi Lúa ba Lúa Mi n Ngo Gia Chiêm b u Lúa cáy Lúa lau Chiêm mu n N p hoa trăng Vũ di Vũ di N p hoa trăng Vũ di Kh u L ch Kh u dao ðèo ñàng N p Pl nh c u Pl nh mèo (d ng khác), n p D ng khác c a n p Bát Xát, Lào Cai Bát Xát, Lào Cai Bát Xát, Lào Cai Bát Xát, Lào Cai Bát Xát, Lào Cai Bát Xát, Lào Cai Sìn H , Lai Châu Sìn H , Lai Châu Sìn H , Lai Châu Sìn H , Lai Châu Sìn H , Lai Châu Mư ng Tè, Lai Châu Mư ng Tè, Lai Châu Mư ng Tè, Lai Châu Mư ng Tè, Lai Châu Yên Th , B c Giang B c Giang B c Giang B c Ninh B c Ninh Na Hang, Tuyên Quang Na Hang, Tuyên Quang M c Châu, Sơn La B n Có – Tu n Giáo – ði n Biên Nhà Minh –ðáp, B n Chiêng ðông May- C.Pha – T Châu B n Sai - T Châu – Sơn La 34 35 10953 10955 10960 10962 10963 10964 10966 10967 10968 10969 10970 10971 10972 10973 10981 10985 10995 N p Cam (2) N p Cam (3) N p2 Lúa n p c m ð a ñi m thu th p N p Aham-P 2002 2004 2005 2007 2007 2007 2007 2007 2007 2008 2008 2008 2008 2008 2008 2008 2008 2008 2008 2008 2008 2008 2008 2008 2008 2008 2008 2008 2011 2011 2011 Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i – Lu n văn th c s khoa h c Nông nghi p ……………………… 81 36 37 10996 10997 11000 38 39 40 11004 11006 11022 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 11024 N1 N2 N3 N14 N17 N20 N21-1 N21-2 N22 N27 N30 N39 N42 N44 N46 N51-1 N51-2 N55 N57 N58 NV2 NV3 c m (lúa n p) D ng khác c a n p c m lúa t N p, d ng khác c an pc m N p l y t Mai Sơn, khác c a n p c m N pc m Pel nh ñ (n p) D ng khác c a gi ng N p c a ngư i H’mông Gi ng N p c a ngư i H’mông B n Sai - T Châu – Sơn La 2011 B n Sai - T Châu – Sơn La 2011 B n Sai - T Châu – Sơn La 2011 B n Sai - T Châu – Sơn La B n Nà giác- Ph ng Lái- Sơn La B n Nà giác- Ph ng Lái – TC- Sơn La 2011 2011 2011 B n Nà giác- Ph ng Lái – TC- Sơn La 2011 Gi ng c i ti n ñư c b o t n t i Trung tâm b o t n phát tri n ngu n gen tr ng, trư ng ðH Nông nghi p HN Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i – Lu n văn th c s khoa h c Nông nghi p ……………………… 82 ...B GIÁO D C VÀ ðÀO T O TRƯ NG ð I H C NÔNG NGHI P HÀ N I NGÔ TH H NG GIANG KH O SÁT, ðÁNH GIÁ NGU N GEN M T S GI NG LÚA N P NĂNG SU T, CH T LƯ NG, KHÁNG B NH B C LÁ VÀ ð O ÔN B NG... th phân t ñ ñánh giá 64 m u gi ng lúa n p m i thu th p b o qu n t i b môn Công ngh sinh h c, trư ng ð i h c Nông nghi p-Hà N i tìm m u gi ng có ch a gen thơm, gen kháng b nh b c Xa4, xa5, Xa7 gen. .. kháng b nh b c đ o ơn b ng ch th phân t DNA? ?? M c đích u c u 2.1 M c đích Dùng ch th phân t DNA đ xác ñ nh ñánh giá m u gi ng lúa n p m i thu th p có kh cho su t cao, ch t lư ng t t mang gen kháng