Nghiên cứu khả năng kháng oxy hóa của các phân đoạn cao chiết từ trà xanh (cameilla sinensis)

ĐẠI HỌC QUỐC GIA THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN NGUYỄN THỊ HIỀN THEO DÕI QUÁ TRÌNH TAUTOME DẠNG IMINO-AMINO CỦA CYTOSINE BẰNG XUNG LASER SIÊU NGẮN Chuyên ngành: Vật lý lý thuyết vật lý toán Mã số: 60 44 01 LUẬN VĂN THẠC SĨ VẬT LÝ NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC PGS TSKH LÊ VĂN HỒNG THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH - 2011 LỜI CẢM ƠN Để hồn thành tốt khóa học luận văn này, nhận động viên, giúp đỡ từ thầy cơ, gia đình bạn bè Thông qua luận văn, xin gửi lời cảm ơn chân thành đến tất người Tôi xin gửi lời tri ân sâu sắc đến Thầy hướng dẫn Lê Văn Hồng Thầy tận tình hướng dẫn, bảo tạo điều kiện thuận lợi cho tơi suốt q trình thực luận văn Tơi xin cảm ơn tất thầy, cô môn Vật lý lý thuyết, Trường Đại học Khoa học Tự nhiên Thành phố Hồ Chí Minh nhiệt tình giảng dạy, truyền thụ kiến thức khoa học thời gian tham gia học tập nhà trường Tơi xin cảm ơn thành viên nhóm nghiên cứu Khoa Vật lý, Trường Đại học Sư phạm Thành phố Hồ Chí Minh giúp đỡ tơi để luận văn hoàn thành thời gian nhanh Xin trân trọng cảm ơn! Thành phố Hồ Chí Minh, tháng 06 năm 2011 Học viên cao học Nguyễn Thị Hiền -1- MỞ ĐẦU Ngày nay, nhiều bệnh nghiêm trọng chứng minh hậu stress oxy hóa Những tác động từ mơi trường gây tượng cân hệ thống kháng oxy hóa thể Vì khuynh hướng tìm hiểu chất kháng oxy hóa bổ sung nhà khoa học không ngừng nghiên cứu phát triển Những khám phá hoạt tính kháng oxy hóa số loại dược liệu hiệu chúng việc ngăn ngừa chữa trị loại bệnh nguy hiểm ung thư, xơ vữa động mạch, tim mạch… thu hút quan tâm ý nhà nghiên cứu Cây trà có tên khoa học Camellia sinensis, có nguồn gốc từ Trung Quốc, Ấn Độ, Myanmar Từ xa xưa người Trung Quốc biết sử dụng trà loại thảo dược để chữa trị số bệnh đơn giản Sau nhờ hương vị đặc trưng, trà chế biến thành loại thức uống phổ biến du nhập đến nhiều nơi giới Càng ngày có nhiều nghiên cứu chứng minh trà xanh có khả kháng lại nhiều loại bệnh nhờ hoạt tính kháng oxy hóa Thành phần trà xanh bao gồm nhiều chất khác Trong polyphenol cho thành phần có hoạt tính kháng oxy hóa cao Tuy nhiên nhiều nghiên cứu gần cho thấy hoạt tính sinh học trà xanh quy định thành phần khác Ngồi ra, nhiều phân tích cho thấy báo cáo chưa cho kết luận thống tác dụng tích cực trà xanh Do thực đề tài “ Nghiên cứu khả kháng oxy hóa phân đoạn cao chiết trà xanh” nhằm mục tiêu sau: Khảo sát xây dựng quy trình tách chiết phân đoạn cao chiết toàn phần từ trà xanh Và xác định phân đoạn có khả kháng oxy hóa tốt Các phân đoạn phân tách không bị loại thành phần có ích, đồng thời việc phân đoạn làm giàu cấu tử có hoạt tính kháng oxy hóa LỜI MỞ ĐẦU Khoa học kỹ thuật phát triển, nhà nghiên cứu ngày có nhu cầu hiểu biết sâu cấu trúc phân tử Việc thu nhận thơng tin cấu trúc phân tử thực nhiều phương pháp như: phân tích quang phổ [12], nhiễu xạ điện tử [10], nhiễu xạ tia X [9] Tuy nhiên, độ phân giải phương pháp thường cỡ pico giây (1ps = 10-12 s) trở lên Trong đó, dao động nguyên tử diễn thang thời gian femto giây (1fs = 10-15 s) điện tử chuyển động quanh hạt nhân mức atto giây (1as = 10-18 s) Như vậy, độ phân giải thời gian phương pháp kể lớn nhiều lần so với khỏang thời gian diễn vận động phân tử Do đó, sử dụng phương pháp ta thu thông tin cấu trúc tĩnh phân tử khoảng cách góc liên kết nguyên tử, mà chưa thể thu nhận thông tin cấu trúc động phân tử Thông tin động phân tử thơng tin gắn liền với chuyển động cấp độ nguyên tử, phân tử, chẳng hạn lệch khỏi vị trí cân nguyên tử phân tử, hay thay đổi cấu trúc bẻ gãy liên kết hình thành cấu trúc Do đó, biết thơng tin cấu trúc động phân tử khoảng thời gian femto giây ( 10−15 s) mong muốn nhà khoa học [19], [26], [27] Laser xung cực ngắn đời tạo điều kiện cho nhà nghiên cứu sâu khám phá cấu trúc động phân tử, kể đến kỹ thuật chụp ảnh phân tử Khi chùm laser cường độ mạnh tương tác với nguyên tử, phân tử, hiệu ứng phi tuyến xảy phát xạ sóng hài bậc cao (High-order harmonic generation – HHG) Cường độ HHG (thang logarit) theo tần số có đặc điểm thay đổi miền giá trị tần số ta gọi miền phẳng (plateau), miền kết thúc điểm dừng (cut-off) [29], sau điểm cường độ HHG giảm mạnh khơng Nhằm giải thích chế hình thành đặc tính HHG, mơ hình cơng nhận sử dụng rộng rãi mơ hình ba bước Lewenstein [29] Đây mơ hình bán cổ điển, giải thích phát xạ HHG dựa chuyển động điện tử nguyên tử, phân tử tác dụng điện trường laser Cụ thể, ban đầu điện tử bị ion hóa theo chế xuyên hầm miền tự do; tác dụng trường laser mạnh, điện tử gia tốc nửa chu kỳ đầu trường laser; trường laser đổi chiều, điện tử quay trở lại tương tác với ion mẹ phát sóng hài thứ cấp, HHG Vì HHG kết va chạm ion mẹ điện tử nên HHG phát lúc mang thông tin cấu trúc phân tử mẹ Đây tảng cho việc thu nhận thông tin cấu trúc phân tử từ nguồn liệu HHG, nhiều nhà khoa học quan tâm sử dụng [2], [27], [28], [34] Đáng ý cơng trình [19] nhóm nghiên cứu Canada vào năm 2004 Trong cơng trình này, tác giả sử dụng nguồn liệu sóng hài bậc cao (HHG) phát tương tác phân tử N2 với nguồn laser cực mạnh tái tạo thành cơng hình ảnh orbital lớp (HOMO) phân tử Đặc biệt, nguồn laser sử dụng có độ dài xung 30 fs, hình ảnh HOMO thu coi thông tin động phân tử Tiếp đến cơng trình [33], [35], tác giả khẳng định sử dụng nguồn liệu HHG để theo dõi q trình đồng phân hóa HCN/HNC q trình đồng phân hóa acetylen/vinyliden cách cho laser có xung cực ngắn (10 fs) cường độ cực mạnh (~1014W/cm2) tương tác với phân tử Phát triển kết cho phân tử phức tạp có ý nghĩa khoa học thực tiễn Phân tử acid deoxyribonucleic (ADN) biết đến phân tử mang thơng tin di truyền mã hóa cho hoạt động sinh trưởng phát triển dạng sinh vật sống ADN tạo thành hai chuỗi xoắn kép liên kết với liên kết hydro, sợi đơn chuỗi polynucleotide gồm nhiều nucleotide nối với liên kết phosphodieste [1] ADN gồm thành phần bản: bazơ nitơ (base), đường pentose, nhóm phosphate Thơng tin di truyền chứa ADN giải mã dạng trình tự xếp base Base phân tử ADN gồm adenine (A) guanine (G), cytosine (C) thymine (T) Các nghiên cứu lý thuyết thực nghiệm [1], [6], [15], [32] base thường tồn hai dạng đồng phân hỗ biến (tautomer): với A C dạng phổ biến amino dạng gặp imino; G T dạng phổ biến keto, dạng gặp enol Tuy nhiên trình phát triển sinh vật, đơi số điều kiện đó, base không tồn dạng tautomer phổ biến mà chuyển sang dạng tautomer gặp enol imino Quá trình gọi hỗ biến hóa học (tautome) [1] Các dạng gặp dù có thời gian tồn ngắn thời gian đó, chúng huy động vào trình tổng hợp ADN đột biến xảy ra, dẫn đến hậu thông tin di truyền không nguyên vẹn cho hệ sau Tuy nhiên nay, tính tốn dừng lại việc xác định thông tin tĩnh cấu trúc base [36], [42] Xác định tầm quan trọng việc nghiên cứu trình tautome, đồng thời mong muốn tiếp cận hướng phát triển đầy tiềm năng, tơi tìm hiểu chế phát xạ sóng hài bậc cao sử dụng chế để thu nhận thông tin động theo dõi trình tautome cytosine, bốn base ADN Đó lý tơi chọn đề tài: “Theo dõi trình tautome dạng imino- amino cytosine xung laser siêu ngắn” Để thực mục tiêu đó, tơi xác định nội dung nghiên cứu sau: - Trước tiên, tơi tìm hiểu kiến thức tổng quan đề tài, bao gồm: + Cơ sở lý thuyết phân tử ADN, base trình tautome base, đặc biệt cytosine; + Lý thuyết laser chế phát xạ sóng hài bậc cao cho laser xung siêu ngắn tương tác với phân tử; + Phương pháp mô động lực học phân tử với gần BornOpenheimer; phương pháp lý thuyết phiếm hàm mật độ DFT Đồng thời, luận văn thực chủ yếu phương pháp mô nên làm quen học hỏi cách sử dụng phần mềm tính tốn Gaussian 03W, Gaussview, Origin 8.0 đặc biệt ngơn ngữ lập trình Fortran 7.0; Các phần mềm dùng việc mô trạng thái khác phân tử cần nghiên cứu, mô HHG vẽ đồ thị minh họa cho kết tính tốn - Tiếp theo, tơi mơ động lực học phân tử trình tautome cytosine phương pháp phiếm hàm mật độ (DFT) với phép gần BornOppenheimer, tích hợp phần mềm Gaussian [16] Dựa vào vị trí cực tiểu lượng phân tử ứng với cấu hình hình học định xác định trạng thái cân tautomer chuyển tiếp lượng tối thiểu kích hoạt để xảy q trình chuyển hóa đồng phân Mặt (PES) vẽ để minh họa trạng thái tautomer chuyển tiếp - Sau đó, tơi tiến hành tính tốn tính tốn sóng hài bậc cao (HHG) phát xạ laser hồng ngoại (bước sóng 800nm), độ dài xung cực ngắn (5fs) cường độ mạnh (2.1014W/cm2) tương tác với phân tử cytosine dạng khí + Do nguồn liệu HHG thực tế cịn hạn chế nên tơi thực mơ HHG thơng qua chương trình Lewmol 2.0 viết ngơn ngữ Fortran 7.0 dựa mơ hình ba bước Leweinstein Chương trình tính tốn Lewmol xây dựng nhóm nghiên cứu vật lý nguyên tử phân tử quang học Đại học quốc gia Kanas, Mỹ [25], [46], sau phát triển nhóm nghiên cứu Khoa Vật lý trường Đại học Sư phạm Thành phố Hồ Chí Minh hướng dẫn PGS TSKH Lê Văn Hồng [2] Chương trình tính tốn kiểm chứng qua cơng trình đăng tạp chí Vật lý quốc tế có uy tín [33], [34] Ở đây, tơi tiếp thu kỹ thuật mô sử dụng công cụ hữu hiệu để thực luận văn + Trong chương trình Lewmol, laser tương tác chủ yếu với electron lớp ngồi (tức HOMO) phân tử Do đó, thay thiết lập trình tương tác laser với phân tử, ta thiết lập tính tốn HOMO chúng Để có HOMO tương đối xác phục vụ cho việc mơ HHG, tơi dùng hệ hàm sở 6-31G+(d,p) chương trình Gaussian + Ngoài ra, phân tử cytosine cần định phương để liệu HHG thu có tính đồng cao Kỹ thuật định phương phân tử chùm laser yếu nhiều nhà khoa học sử dụng nhằm giải toán giữ cho phân tử hướng theo phương định chúng tương tác với laser [7], [8] Ở đây, không sâu nghiên cứu chế định phương phân tử cytosine mà giả định định phương theo mong muốn Thiết bị thu liệu HHG đặt theo phương truyền laser vào để đo HHG có phân cực vng góc với vectơ phân cực chùm laser vào - Tiếp theo, tiến hành phân tích phổ HHG phát từ trạng thái đồng phân chuyển tiếp cytosine theo góc định phương khác từ đến 1800 theo phương song song vng góc với vectơ phân cực laser, tơi hy vọng phân biệt trạng thái - Sau cùng, khảo sát HHG cấu trúc hình học khác phân tử cytosine đường chuyển hóa đồng phân (thu nhận từ mô động lực học phân tử) cách cho laser tương tác liên tục với phân tử suốt q trình tautome Từ đó, tơi đưa khả theo dõi trình tautome cytosine laser xung cực ngắn Trên sở đó, bố cục luận văn chia thành ba chương: Chương 1: Cơ sở lý thuyết phương pháp tính tốn Chương 2: Chuyển động hạt nhân hydro trình tautome dạng imino – amino Chương 3: Phát xạ sóng hài bậc cao cytosine dấu vết trình tautome Trong chương 1, đưa sở lý thuyết phát xạ sóng hài (HHG) Vì nguồn HHG phát xạ cơng cụ để khảo sát thu nhận thông tin cấu trúc động phân tử nên việc tìm hiểu chế phát xạ HHG cần thiết Phần đầu chương trình bày laser; lý thuyết tương tác laser với nguyên tử, phân tử trình phát xạ HHG Tiếp đến, tơi đề cập đến mơ hình ba bước nhà khoa học Lewenstein Trong phần cuối chương, giới thiệu phần mềm Gaussian trình bày phương pháp mô động lực học phân tử với phép gần BornOppenheimer Phép gần tách rời chuyển động hạt nhân với chuyển động điện tử, nhằm đơn giản hóa việc giải phương trình Schrodinger cho hệ phân tử mà ta xét Trong chương 2, tơi trình bày q trình tautome dạng imino-amino cytosine Trước hết, đề cập đến cấu trúc phân tử ADN trình tautome base Bản chất q trình tautome dịch chuyển nguyên tử hydro từ vị trí cân sang vị trí cân khác Đây nguyên nhân dẫn đến đột biến trình chép tái ADN Tiếp theo, tiến hành mơ q trình tautome cytosine phân tử chuyển từ trạng thái imino sang trạng thái amino Sau đó, tơi khảo sát lượng phân tử tương ứng với cấu trúc hình học khác suốt q trình tautome Từ đó, tơi thu mặt phẳng đường phản ứng hóa học phân tử lượng kích hoạt để xảy q trình chuyển hóa đồng phân Nội dung chương khảo sát trình tương tác phân tử cytosine với laser xung cực ngắn phương pháp mô thông qua chương trình Lewmol 2.0 Trong chương này, trình tự bước mơ HHG kết tính tốn để thu nhận thông tin cấu trúc phân tử cần thiết cho trình phát xạ HHG trình bày cụ thể Phân tích liệu HHG có được, tơi rút thơng tin có ý nghĩa cần quan tâm, khả phân biệt trạng thái cân tautomer trạng thái chuyển tiếp phân tử; khả tìm kiếm dấu vết động lực học phân tử trình tautome dạng imino – amino cytosine Trong phần kết luận, tơi tóm tắt lại kết thu luận văn Vì toán tương tác laser với phân tử tốn lớn, việc thu nhận thơng tin cấu trúc phân tử q trình có phát xạ sóng hài bậc cao vấn đề quan tâm nhiều nên đưa hướng phát triển luận văn để tiếp tục nghiên cứu Phần danh mục tài liệu tham khảo liệt kê 46 tài liệu tham khảo, bao gồm tài liệu tiếng Việt 44 tài liệu tiếng Anh, mà tơi tìm hiểu nghiên cứu trình thực luận văn P -BuOH.4 0,650 0,653 0,651 0,651 ± 0,002 P -BuOH.5 0,685 0,680 0,691 0,685 ± 0,006 P -BuOH.6 0,350 0,350 0,354 0,351 ± 0,002 0,456 0,459 0,450 0,455 ± 0,005 Vitamin C B ng 9: M t ph n phân quang xác nh hi u su t kháng g c hydroxyl c a cao toàn o n cao chi t trà xanh n ng 400 μg/ml M u th nghiệm OD1 OD2 OD3 ODTB M không 0,247 0,250 0,251 0,249 ± 0.002 n 0,568 0,562 0,569 0,566 ± 0,004 0,679 0,683 0,682 0,681 ± 0,002 u th Cao toàn ph P -BuOH P -N c 0,456 0,444 0,469 0,456 ± 0,013 P -BuOH.1 0,390 0,397 0,392 0,393 ± 0,004 P -BuOH.2 0,265 0,263 0,264 0,264 ± 0,001 P -BuOH.3 0,324 0,327 0,325 0,325 ± 0,002 P -BuOH.4 0,838 0,840 0,836 0,838 ± 0,002 P -BuOH.5 0,794 0,797 0,798 0,796 ± 0,002 P -BuOH.6 0,367 0,369 0,364 0,367 ± 0,003 0,623 0,630 0,628 0,627 ± 0,004 Vitamin C B ng 10: M t ph n phân quang xác nh hi u su t kháng g c hydroxyl c a cao toàn o n cao chi t trà xanh phân o n n ng 600 μg/ml M u th nghiệm OD1 OD2 OD3 ODTB M không 0,247 0,250 0,251 0,249 ± 0.002 n 0,712 0,725 0,721 0,719 ± 0,007 u th Cao toàn ph P -BuOH 0,785 0,781 0,780 0,782 ± 0,003 P -N c 0,608 0,611 0,609 0,609 ± 0,002 P -BuOH.1 0,510 0,516 0,515 0,514 ± 0,003 P -BuOH.2 0,290 0,293 0,291 0,291 ± 0,002 P -BuOH.3 0,330 0,331 0,334 0,332 ± 0,002 P -BuOH.4 0,985 0,981 0,983 0,983 ± 0,002 P -BuOH.5 0,935 0,933 0,939 0,936 ± 0,003 P -BuOH.6 0,427 0,425 0,414 0,422 ± 0,007 0,810 0,816 0,812 0,813 ± 0,003 Vitamin C B ng 11: M t ph n phân quang xác nh hi u su t kháng g c hydroxyl c a cao toàn o n cao chi t trà xanh n ng 800 μg/ml M u th nghiệm OD1 OD2 OD3 ODTB M không 0,247 0,250 0,251 0,249 ± 0.002 n 0,846 0,845 0,847 0,846 ± 0,001 0,898 0,882 0,885 0,888 ± 0,009 u th Cao toàn ph P -BuOH P -N c 0,707 0,710 0,708 0,708 ± 0,002 P -BuOH.1 0,703 0,701 0,700 0,701 ± 0,002 P -BuOH.2 0,312 0,311 0,311 0,311 ± 0,001 P -BuOH.3 0,347 0,350 0,345 0,347 ± 0,003 P -BuOH.4 1012 1,015 1,011 1,013 ± 0,002 P -BuOH.5 1,079 1,070 1,074 1,074 ± 0,005 P -BuOH.6 0,610 0,612 0,613 0,612 ± 0,002 Vitamin C B 1,021 ng 12: M t ph n phân quang xác 1,023 1,028 1,024 ± 0,004 nh hi u su t kháng g c hydroxyl c a cao toàn o n cao chi t trà xanh n ng 1000 μg/ml M u th nghiệm OD1 OD2 OD3 ODTB M không 0,247 0,250 0,251 0,249 ± 0.002 n 0,932 0,935 0,934 0,934 ± 0,002 1,069 1,072 1,071 1,071 ± 0,002 u th Cao toàn ph P -BuOH P -N c 0,780 0,778 0,779 0,779 ± 0,001 P -BuOH.1 0,813 0,810 0,815 0,813 ± 0,003 P -BuOH.2 0,325 0,320 0,321 0,322 ± 0,003 P -BuOH.3 0,428 0,425 0,430 0,428 ± 0,003 P -BuOH.4 1,134 1,135 1,132 1,134 ± 0,002 P -BuOH.5 1,271 1,270 1,268 1,270 ± 0,002 P -BuOH.6 0,621 0,625 0,620 0,622 ± 0,003 1,159 1,157 1,154 1,157 ± 0,003 Vitamin C Bảng 13: M t phân quang xác o n cao chi t trà xanh M u th nghiệm nh hi u su t kháng DPPH c a cao toàn ph n n ng 2μg/ml OD1 OD2 OD3 ODTB Mẫu thử không 1,044 1,040 1,45 1,043 ± 0,003 Cao toàn ph 0,979 0,983 0,980 0,981± 0,002 0,975 0,977 0,980 0,977 ± 0,003 1,040 1,041 1,042 1,041 ± 0,001 P -BuOH P -N n c P -BuOH.4 0,951 0,957 0,950 0,953 ± 0,004 P -BuOH.5 0,963 0,966 0,957 0,962 ± 0,005 Bảng 14: M t phân quang xác o n cao chi t trà xanh M u th nghiệm nh hi u su t kháng DPPH c a cao toàn ph n n ng 4μg/ml OD1 OD2 OD3 ODTB Mẫu thử khơng 1,044 1,040 1,45 1,043 ± 0,003 Cao tồn ph 0,936 0,953 0,960 0,950 ± 0,012 0,915 0,917 0,911 0,914 ± 0,003 n P -BuOH P -N c 1,035 1,040 1,042 1,041 ± 0,001 P -BuOH.4 0,777 0,774 0,780 0,777 ± 0,003 P -BuOH.5 0,850 0,854 0,849 0,851 ± 0,003 Bảng 15: M t phân quang xác o n cao chi t trà xanh M u th nghiệm nh hi u su t kháng DPPH c a cao toàn ph n n ng μg/ml OD1 OD2 OD3 ODTB Mẫu thử không 1,044 1,040 1,45 1,043 ± 0,003 Cao toàn ph 0,862 0,864 0,858 0,861 ± 0,003 0,787 0,791 0,790 0,789 ± 0,002 n P -BuOH P -N c 0,959 0,927 0,959 0,958 ± 0,001 P -BuOH.4 0,557 0,561 0,559 0,559 ± 0,002 P -BuOH.5 0,635 0,638 0,643 0,639 ± 0,004 Bảng 16: M t phân quang xác o n cao chi t trà xanh M u th nghiệm nh hi u su t kháng DPPH c a cao toàn ph n n ng 12 μg/ml OD1 OD2 OD3 ODTB Mẫu thử không 1,044 1,040 1,45 1,043 ± 0,003 Cao toàn ph 0,765 0,770 0,771 0,769 ± 0,003 0,687 0,682 0,685 0,685 ± 0,003 n P -BuOH P -N c 0,845 0,846 0,845 0,845 ± 0,001 P -BuOH.4 0,277 0,270 0,275 0,274 ± 0,004 P -BuOH.5 0,425 0,421 0,418 0,421 ± 0,004 Bảng 17: M t phân quang xác o n cao chi t trà xanh M u th nghiệm nh hi u su t kháng DPPH c a cao toàn ph n n ng 16 μg/ml OD1 OD2 OD3 ODTB Mẫu thử không 1,044 1,040 1,45 1,043 ± 0,003 Cao toàn ph 0,695 0,692 0,700 0,769 ± 0,004 0,523 0,529 0,525 0,526 ± 0,003 n P -BuOH P -N c 0,725 0,727 0,725 0,726 ± 0,001 P -BuOH.4 0,090 0,095 0,093 0,093 ± 0,003 P -BuOH.5 0,278 0,275 0,270 0,274 ± 0,004 Bảng 18: M t phân quang xác o n cao chi t trà xanh M u th nghiệm nh hi u su t kháng DPPH c a cao toàn ph n n ng 20 μg/ml OD1 OD2 OD3 ODTB Mẫu thử không 1,044 1,040 1,45 1,043 ± 0,003 Cao toàn ph 0,509 0,507 0,502 0,506 ± 0,004 n P -BuOH 0,364 0,360 0,365 0,363 ± 0,003 P -N c 0,558 0,553 0,559 0,557 ± 0,003 P -BuOH.4 0,080 0,078 0,080 0,079 ± 0,001 P -BuOH.5 0,119 0,111 0,109 0,113 ± 0,005 Bảng 19: M t phân quang xác o n cao chi t trà xanh M u th nghiệm nh hi u su t kháng DPPH c a cao toàn ph n n ng 24 μg/ml OD1 OD2 OD3 ODTB Mẫu thử không 1,044 1,040 1,45 1,043 ± 0,003 Cao toàn ph 0,207 0,210 0,208 0,208 ± 0,002 0,103 0,110 0,107 0,107 ± 0,004 n P -BuOH P -N c 0,425 0,427 0,430 0,427 ± 0,003 P -BuOH.4 0,081 0,078 0,080 0,079 ± 0,001 P -BuOH.5 0,100 0,099 0,101 0,100 ± 0,001 Bảng 20: M t phân quang xác o n cao chi t trà xanh M u th nghiệm nh hi u su t kháng DPPH c a cao toàn ph n n ng 30 μg/ml OD1 OD2 OD3 ODTB Mẫu thử không 1,044 1,040 1,45 1,043 ± 0,003 Cao toàn ph 0,108 0,104 0,106 0,106 ± 0,002 0,112 0,109 0,118 0,113 ± 0,005 n P -BuOH P -N c 0,227 0,225 0,227 0,226 ± 0,001 P -BuOH.4 0,081 0,083 0,083 0,081 ± 0,001 P -BuOH.5 Bảng 21: M t Nồng độ 0,101 quang xác 0,093 0,093 0,097 ± 0,006 nh hi u su t kháng DPPH c a vitamin C OD1 OD2 OD3 ODTB 1,044 1,040 1,45 1,043 ± 0,003 0,961 0,965 0,960 0,962 ± 0,003 0,859 0,852 0,859 0,857 ± 0,004 0,552 0,550 0,549 0,550 ± 0,002 0,413 0,411 0,414 0,413 ± 0,002 10 0,205 0,204 0,202 0,204 ± 0,002 12 0,081 0,078 0,080 0,080 ± 0,002 (μg/ml) Phi uk t qu 1: Phi uk t qu ki m nghi ms MM10080428 Phi uk t qu 2: Phi uk t qu ki m nghi ms MM10080427 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu tiếng Việt [1] Đặng Ngọc Dung, Phạm Thiện Ngọc (2002) Chiết xuất đánh giá sơ thành phần polyphenol chè xanh Việt Nam TC Nghiên cứu y học [2] Mai Tuyên, Vũ Bích Lan, Ngô Đại Quang (1999) Nghiên cứu chiết xuất xác định tác dụng kháng oxi hóa polyphenol trà xanh Tạp chí hóa học cơng nghiệp hóa chất, số 6, 9-14 [3] Nguyễn Kim Phi Phụng Các phương pháp cô lập chất hữu NXB Đại học quốc gia TP Hồ Chí Minh [4] Nguyễn Ngọc Kính, Phạm Kiến Nghiệp (1979) Giáo trình chè: dùng trường đại học nông nghiệp [5] Nguyễn Thị Mai Phương, Nguyễn Thị Ngọc Dao (2003) Tác dụng dịch chiết chè xanh lên vi khuẩn sâu Streptococcus mutans TC Dược liệu, tập 8, số 4, 110-114 [6] Ngô Hữu Hợp (1984) Hóa Sinh chè, Đại học bách khoa Hà Nội [7] Phạm Thiện Ngọc (2003) Chiết xuất Polyphenol từ chè xanh Việt nam, đánh giá tác dụng polyphenol rối loạn chuyển hóa lipid thỏ uống cholesterol trạng thái chống oxi hóa thỏ bị chiếu xạ Đề tài cấp Bộ, Cơ quan chủ trì: Trường ĐH Y Hà Nội [8] Phạm Thiện Ngọc, Nguyễn Thị Hà, Đặng Ngọc Dung (2003) Tác dụng dịch chiết polyphenol chè xanh peroxy hoá lipid xơ vữa động mạch thỏ uống cholesterol TC Y học Việt Nam [9] Trần Thị Ngọc Châu (2010) Tận dụng phế phụ phiệu cơng nghiệp có nguồn gốc tử thực vật để thu nhận số sản phẩm có giá trị Luận văn thạc sĩ Đại học khoa học tự nhiên Thành phố Hồ Chí Minh [10] Vịng Bính Long (2010) Tổng hợp dẫn xuất Chitosan với Aldehyde thơm, Amonium bậc bốn khảo sát số hoạt tính sinh học Luận văn Thạc sĩ, Trường Đại học Khoa học Tự nhiên Tp.HCM Tài liệu tiếng Anh [11] Ali K.Atoui, Abdelhak Mansouri, George Boskou, Panagiotis Kefalas (2005) Tea and Herbal infusions: Their antioxidant activity and phenolic profile Food Chemistry 89, 27-36 [12] Biao-Shi Wang, Bian-Sheng Li, Qing-Xiao Zeng, Hui-Xia Liu, (2008), Antioxidant and free radical scavenging activities of pigment extracted from molasses alcohol waste water, Food Chemistry, 107, 1198-1204 [13] Bo Jiang, Hongyan Zhang, Changjian Liu, Yanying Wang, Shengdi Fan (2009) Extraction of water-soluble polysaccharide and the antioxidant activity from Ginkgo biloba leaves Med Chem Res [14] Bor-Ru Lin, chia-Jung Yu, Wang-Chuan Chen, Hsuan-Shu Lee, Huei-Min Chang, Yen-Chih Lee, Chiang-Ting Chien and Chau-Fong Chen (2009) Green tea extract supplement reduces D-galactosamine-induced acute liver injury by inhibition of apoptotic and proinflammatory signaling Journal of Biomedical Science, 16:35 [15] Chiehming J.Chang, Kuo-Lung Chiu, Ying-Ling Chen, Ching-Yuan Chang (2000) Separation of catechins from green tea using carbon dioxide extraction Food Chemistry 68, 109-113 [16] Dimitrios I.Tsimogiannis, Vassiliki Oreopoulou (2006) The contribution of flavonoid C-Ring on the DPPH free radical scavenging efficiency A kinetic approach for the 3’, 4’-hydroxy substituted members Innovative Food Science and Emerging Technologies 7, 140-146 [17] D.Villano, M.S.Fenandez-Pachon, M.L.Moya, A.M.Troncoso, M.C GarciaParrilla (2007) Radiacal scavenging ability of polyphenolic compounds towards DPPH free radical Talanta 71, 230-235 [18] E.W.C Chan, Y.Y.Lim, K.L.Chong, J.B.L Tan, S.K.Wong (2010) Antioxidant properties of tropical and temperate herbal teas Journal of Food Composition and Analysis 23, 185-189 [19] Frank Pajonk, Anja Riedisser, Michael Henke, William H McBride, and Bernd Fiebich (2006) The effects of tea extracts on proinflammatory signaling BMC Med.; 4: 28 [20] Gongming Zheng, Liangxiong Xu, Ping Wu, Haihui Xie, Yueming Jiang, Feng Chen, Xiaoyi Wei (2009) Polyphenol from longan seeds and their radicalscaveging activity Food Chemistry 116, 433-436 [21] Gordana Rusak, Drazenka Komes, Sasa Likie, Dunja Horzic and Maja Kovac (2008) Phenolic content and antioxidative capacity of green and white tea extracts depending on extraction condition and the solvent used Food Chemistry Vol.110, Issue 4, 852-858 [22] Haixa Chen, Min Zhang, Bijun Xie (2005) Components and antioxydant activity of polysaccharide conjugate from green tea Food chemistry 90, 17-21 [23] Haiyan Wang, Mouming Zhao, Bao Yang, Yueming Jiang, Guohua Rao (2007) Identification of polyphenol in tobacco leaf and their antioxidant and antimicrobial activities Food Chemmistry 107, 1399-1406 [24] Hakim IA, Harris RB, Brown S, Chow HH, Wiseman S, Agarwal S, Tal-Bot W (2003) Effect of increased tea consumption on oxidative DNA damage among smokers: arandomized controlled study J Nutr, 133:3303S-3309S [25] Hiroshi Tsuneki, Mitsuyo Ishizuka, Miki Terasawa, Jin-Bin Wu, Toshiyasu Sasaoka and Ikuko Kimura (2004) Effect of green tea on blood glucose levels and serum proteomic patterns in diabetic (db/db) mice and on glucose metabolism in healthy humans BMC Pharmacology, 4:18 [26] Horace D Graham (1992) Stabilization of the Prussian Blue color in the determination of polyphenols J.Agnic Food Chem 40, 801-805 [27] Ikeda I, Tshuda K, Suzuki Y, Kobayashi M, Unno T, Tomoyori, Goto H, Kawata Y, Imaizumi K, Nozawa A, Kakuda T (2005) Tea catechins with a galloyl moiety suppress postprandial hypertriacylglycerolemia by delaying lymphatic transport of dietary fat in rats J Nutr; 135:155-9 PubMed:15671206 [28] Jianping Liu, Jianmin Xing and Yutong Fei (2008) Green tea (Camellia sinensis) and cancer prevention: a systematic review of randomized trials and epidemiological studies Chinese Medicine, 3:12 [29] Joyce Ferreira Severino, Bernard A Goodman, Christopher W.M.Kay, Klaus Stolze, Daniel Tunega, Thomas G.Reichenauer, Katharina F.Pirker (2009) Free radicals generated during oxidation of green tea polyphenols: electron paramagnetic resonance spectroscopy combined with density functional theory calculations Free Radical Biology&Medicine 46, 1076-1088 [30] Jun–Jie Dong, Jian-Hui Ye, Jian-Liang Lu, Xin-Qiang Zheng, Yue-Rong Liang (2010) Isolation of antioxidant catechins from green tea and its decaffeination Food Biaprod Process [31] Kadriye Isil Berker, Kubilay Guclu, Izzet Tor, Birsen Demirata, resat Apak Total antioxidant capacity assay using optimized Ferricyanide/ Prussian Blue Method Food Anal Methods [32] Keon Wook Kang, Soo Jin Oh, Shi Yong Ryu, Gyu Yong Song, Bong-Hee Kim, Jong Seong Kang, Sang Kyum Kim (2010) Evaluation of the total oxy radical scavenging capacity of catechins isolated from green tea Food Chemistry 121, 1089-1094 [33] Koutatsu Maruyama, Hiroyasu Iso, Satoshi Sasaki and Yoko Fukino The association between concentration of green tea and blood glucose levels J.Clin Biochem Nutr., 44, 41-45 [34] Kuriyama S, Shimazu T, Ohmori K, Kikuchi N, Nakaya N, Nishino Y, Tsubono Y, Tsuji I (2006) Green tea consumption and mortality due to cardiovascular diesease, cancer, and all cause in Japan The Ohsaki study JAMA, 296:12551265 [35] L.Alvarez-Jubete, H.Wijingaard, E.K.Arendt, E.Gallagher (2010) Polyphenol composition and in vitro antioxydant activity of amaranth, quinoa buckwheat and wheat as affected by sprouting and baking Food Chemistry 119, 770-778 [36] Laurie SA, Miller VA, Grant SC, Kris MG, Ng KK (2005) Phase I study of green tea extract in patients with advanced lung cancer Cancer Chemother Pharmacol, 55:33-38 [37] Lee MJ, Maliakal P, Chen L, Meng X, Bondoc FY, Prabhu S, Lambert G, Mohr S, Yang CS (2002) Pharmacokinetics of Tea Catechins after Ingestion of Green Tea and (-)-Epigallocatechin-3-gallate by Humans: Formation of Different Metabolites and Individual variability Cancer Epidemiol Biomarkers Prev, II:1025-1032 [38] Lin Wang, Bishu Pan, Jianchun Sheng, Juan Xu, Quihui Hu, (2007), Antioxidant activity of spirulina platensis extracts by super critical carbon dioxide extraction, Food Chemistry, 105, 36-41 [39] Munevver Sokmen, Maria Angelova, Ekaterina Krumova, Svetlana Pashova, Stefka Ivacheva, Atalay Sokmen, Julia Serkedjieva (2005) In vitro antioxidant activity of polyphenol extracts with antiviral properties from Geranium sanguineum L Life Science 76, 2981-2993 [40] Ngo Dai Nghiep (2008) Biological activities of Chitin Oligosaccharide and their derivaties Thesis for the degree of doctor of Philosophy Pukyong National University [41] Phạm Thanh Quan, Tong Van Hang, Nguyen Hai Ha, Bach Long Giang (2007) Total polyphenols, total, catechin content and DPPH free radical scavenger activity of several types of Vietnam commercial green tea Science & technology development, Vol 10, No.10 [42] Pham Thanh Quan, Le Thanh Hung, Tran Thi Ha Thai (2006) Theoretical study of the spin density distribution of the gren tea catechins radicals Science & technology development, Vol 09, No.11 [43] Praveen K.Vayalil, Anshu Mital, Yukihiko Hara, Craig A Elmets And Santosh K.Katiyar (2004) Green tea polyphenol prevent ultraviolet light-induced oxidative damage and matrix metalloproteinases expression in mouse skin The society for Investigative Dermatology, Inc 122(6): 1480-1487 [44] Senji Sakanaka, Yumi Tachibana, Yuki Okada (2005) Preparation and antioxidant properties of extracts of Japanese peermisimmon leaf tea (Kakinoha-cha) Food Chemistry 89, 569-575 [45] Sung I.Koo and Sang K.Noh (2007) Green tea inhibitor of the intestinal absorption of lipids: Potential mechanism of its lipid – lowering effect J Nutr Biochem March; 18(3): 179-183 [46] Vasyl M Sava, Swen -Ming Yang, Men Yeng Hong, Ping Cheng Yang, Guewha Steven Huang (2001) Isolation and characterization of melamic pigments derive from tea and tea polyphenols Food Chemistry 73 177-184 [47] Wenbin Liang, colin W.Binns, Le Jian and Andy H.Lee (2006) Does the consumption of green tea reduce the risk of lung Cancer among smoker Advance Access Publication , 4(1)17-22 [48] Yokozawa Takako; Nakagawa Takako; Kitani Kenichi (2002) Antioxidative activity of green tea polyphenol in cholesterol-fed rats Journal of agricultural and food chemistry [49] Yokozawa Takako; Ju Cho Eun; Hara Yukihiko; Kitani Kenichi (2001) Antioxidative activity of green tea treated with radical initiator 2,2'-Azobis(2amidinopropane) dihydrochloride Journal of Agricultural and Food Chemistry [50] Yuta Saito, Yasuko Hasebe-Takenaka, Toshihiko Ueda, Takako Nakanishi-Ueda, Shotaro Kosuge, Masaki Aburada, Tsutomu Shimada, Yukinobu Ikeya, Hidetoshi Onda, Hirotsugu Ogura, Yoko Taguchi, Hajime Yasuhara, and Ryohei Koide (2007) Effects of Green Tea Fractions on Oxygen-Induced Retinal Neovascularization in the Neonatal Rat J Clin Biochem Nutr [51] Zhanyong Guo, Hongying Liu, Xiaolin Chen, Xia Ji, and Pengcheng Li, (2006), Hydroxyl Radicals scavenging activoty of N-substituted Chitosan and Quaternized chitosan, Bioorganic & Medical Chemistry Letters, 16, pp 6348-6350 [52] Zhongshan Zhang, Quanbin Zhang, Jing Wang, Xuelia Shi, Huofang Song, Jingjing Zhang, (2009), In vitro antioxidant activities of acetylated, phosphorylated and benzuylated derivatives of porphyran extracted from Porphyra haitanensis, Carbohydrate Polymers [53] Zhu, Manqun; Huang, Tzou-Chi; Lin, Jen-Kun; Yang, Chung S.; Ho, Chi-Tang (2002) Free Radical and Oxidative Reactions of (-)-Epigallocatechin and (-)Epigallocatechin Gallate, Two Major Polyphenols in Green Tea ACS Symposium Series [54] Zuofa Zhang, Jie jin and Liang Shi, (2008), Antioxidant activity of the derivatives of Polyssccharide Extract from a Chinese Medical herb ( Ramulus mori), Food Sci Technol.Res.,14(2), 160-168 ... trình tách chiết phân đoạn cao chiết tồn phần từ trà xanh Và xác định phân đoạn có khả kháng oxy hóa tốt Các phân đoạn phân tách khơng bị loại thành phần có ích, đồng thời việc phân đoạn làm giàu... ra, nhiều phân tích cho thấy báo cáo chưa cho kết luận thống tác dụng tích cực trà xanh Do thực đề tài “ Nghiên cứu khả kháng oxy hóa phân đoạn cao chiết trà xanh? ?? nhằm mục tiêu sau: Khảo sát... trưng, trà chế biến thành loại thức uống phổ biến du nhập đến nhiều nơi giới Càng ngày có nhiều nghiên cứu chứng minh trà xanh có khả kháng lại nhiều loại bệnh nhờ hoạt tính kháng oxy hóa Thành