MỞ ĐẦUHoa lan là một trong những giống hoa rất được yêu thích không chỉ về màu sắc, kiểu dáng mà còn mang một nét đẹp rất sang trọng và trang nhã. Chính vì vậy hiện nay rất nhiều hộ gia đình đang có thú chơi hoa lan. Nguyên nhân của trào lưu trên là do cuộc sống ngày càng phát triển, nhu cầu tạo góc vườn nhỏ, mang màu xanh cây lá thiên nhiên vào trong nhà của những người dân ngày càng cao. Với ưu điểm ít chiếm diện tích, không quá khó trồng, cho hoa đẹp lại lâu tàn nên việc chọn, trồng và tạo một vườn lan nhỏ trong khuôn viên nhà là sự lựa chọn của nhiều người.Bên cạnh đó, hoa lan là sản phẩm cây trồng có giá trị kinh tế cao, ngày càng có nhiều cơ sở kinh doanh hoa lan mọc lên, kinh doanh nhiều chủng loại. Nhưng làm sao để có số lượng lớn cây giống, đồng đều, chất lượng cao là một vấn đề khó 16. Trong những năm gần đây, cùng với sự phát triển của công nghệ sinh học, ngành vi nhân giống cây đặc biệt trên đối tượng cây hoa lan từng bước phát triển, nhiều đơn vị nhà nước cũng như tư nhân đã mạnh dạn đầu tư để sản xuất cây giống phục vụ cho nông dân. Tuy nhiên qui mô cũng như những hạn chế về đội ngũ kỹ thuật cũng như kiến thức về lĩnh vực này có hạn về trang bị kỹ thuật hiện đại, vì thế cây giống có chất lượng thấp không đồng đều, không đáp ứng được nhu cầu của thị trường. Hầu hết các giống hoa lan phải nhập giống từ Thái Lan.Hiện nay, việc nghiên cứu và nhân giống hoa lan đã được tiến hành ở nhiều nơi, nhưng hầu hết đều chưa có thành tựu nào đột biến để ngành nhân giống hoa lan phát triển đáp ứng được nhu cầu của thị trường. Những thành công hiện nay thường là nhân giống với quy mô sản xuất nhỏ. Trong đó kỹ thuật nhân giống hoa lan phổ biến hiện nay là nhân giống trên môi trường thạch. Ngoài ra, hiện nay trên thế giới nhiều nước có ngành công nghệ sinh học phát triển đã ứng dụng các công nghệ cao để nhân nhanh giống cây trồng như: hệ thống fermenter, bioreactor, quang tự dưỡng,… Ở nước ta các công nghệ này mới chỉ thực hiện ở phòng thí nghiệm của một số trường Đại Học, Viện Nghiên cứu hoặc trung tâm công nghệ sinh học trong mấy năm gần đây. Tuy nhiên việc nghiên cứu xác định môi trường thích hợp cho từng cây trồng nhân bằng các hệ thống này còn rất hiếm. Để từng bước áp dụng công nghệ mới trong sản xuất cây lan giống ở nước ta, đẩy nhanh tiến độ sản xuất cây giống theo quy mô công nghiệp, góp phần khắc phục sự thiếu hụt cây giống trong sản xuất hiện nay. Chúng tôi tiến hành đề tài: Nghiên cứu nhân giống vô tính in vitro giống lan Dendrobium Sena Red’’ nhằm tìm ra môi trường thích hợp nhân giống lan Dendrobium Sena Red.
Trang 1TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA ĐÀ NẴNGKHOA HOÁ
N G À N H C Ô N G N G H Ệ S I N H H Ọ CĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP
Trang 3Hoa lan có khoảng 750 chi và 15.000–25.000
loài, trong đó Dendrobium in vitro có giá trị:
ĐẶT VẤN ĐỀ
Giá trị kinh tế cao.
Số lượng lan lớn và bảo tồn giống quý.Số lượng lan lớn và bảo tồn giống quý.
Tạo ra lan Dendrobium siêu bông.
Sản xuất cây con quanh năm.Cung cấp cây con để bán.Cung cấp cây con để bán.
Hạn chế sự khai thác cây hoang dại.
Trang 4ĐẶT VẤN ĐỀ
Giới thiệu một số dạng hoa đẹp của lan Dendrobium
D Sena red D Salaya Gold D Salaya White
D Pink Mini D Chan Chao D Negro
Trang 5VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP
Hoa lan Dendrobium Sena Red
Trang 6VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP
Bước 1: Nhân protocorm
Bước 1: Nhân protocormBước 2:
Nhân nhanh chồi
Bước 2:
Nhân nhanh chồi
Bước 3: tạo rễBước 3:
tạo rễ
Môi trường MS
(Murashige & Skoog, 1962) + chất điều hòa sinh trưởng, pH= 5.8- Điều kiện nuôi cấy: to
25 ± 1 oC, ánh sáng 2000-3000 lux
Môi trường MS
(Murashige & Skoog, 1962) + chất điều hòa sinh trưởng, pH= 5.8- Điều kiện nuôi cấy: to
25 ± 1 oC, ánh sáng 2000-3000 lux
Trang 7
`
Cây nonTạo rễ
Cụm chồi phát triển
Cây con 5 - 7 cm và 3 – 4 lá Tách cụm protocorm chuyển sang môi
trường nhân protocorm(tách 4 miếng)
Nhân nhanh cụm chồi Môi trường nuôi cấy và cụm chôi (tách 4 miếng)
Cụm protocorm phát triển chuyển sang môi trường nhân nhanh chồi (tách 4 miếng)
Cụm chồi phát triển chuyên sang môi trường tạo rễ (tách 4 miếng)
Cụm chồi gồm nhiều thể chồi
Quy trình nghiên cứu
Dendrobium Sena red
Trang 8KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN
Bảng 3.1 Kết quả nhân protocorm ở môi trường BAKý
Nồng độ mg/l
Tình trạng Protocorm Ghi chú2 tuầnSau 4 tuần
M000+Protocorm nhỏ ít có hiện tượng hoá vàng và đen.
M10,5+++Protocorm mới xanh nhưng ít.M21+++++Protocorm nhiều nhưng nhỏ.
M43++Protocorm xanh nhưng ít gần giống môi trường MS.
Trang 9KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN
Hình 3.1 Kết quả nhân protocorm ở môi trường BA
- M0 protocorm kém phát triển - M3 protocorm phát triển nhanh và xanh mướt nhất
- M1, M2 xanh và chậm hơn còn M3nhưng quá cao protocom nhỏ và trắng.
Trang 10Bảng 3.2 Kết quả nhân protocorm ở môi trường NAA
KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN
Ký hiệu
Nồng độ NAA (mg/l)
Tình trạng Protocorm Ghi chú2 tuầnSau 4 tuần
M000+Protocorm nhỏ ít có hiện tượng hoá vàng và đen.
nhiều phát triển chồi.
M60,5+++Protocorm xanh to và ít.
M71+++Protocorm xanh ít và nhỏ.
M81,5++Protocorm nhỏ hơi vàng và ít.
Trang 11KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN
- M5 protocorm xanh mướt nhất phát triển khá
- M6, M7, M8 xanh
nhưng chậm hơn cao protocom nhỏ và màu xanh hơi vàng.
Hình 3.2 Kết quả nhân protocorm ở môi trường NAA
Trang 12Bảng 3.3 Kết quả nhân protocorm ở môi trường nồng độ 2mg/l BA với NAA
KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN
Ký hiệu
M1020,5+++++Protocorm xanh to và ít hơn.
M1121+++Protocorm phát triển tương đối
M1221,5++Protocorm xanh bắt đầu phát triển.
Trang 13Hình 3.4 Kết quả nhân protocorm ở môi trường nồng độ BA 2mg/l kết hợp với NAA
Trang 14Ký hiệu
Tình trạng Protocorm
Ghi cShúNAA BA 2
Sau 4 tuần
Bảng 3.4 Kết quả nhân protocorm ở môi trường nồng độ NAA 0,1mg/l kết hợp với BA đến sự nhân nhanh protocorm
KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN
Trang 15KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN
- M14 protocorm tốt
- Nồng độ chất điều hòa cao protocom nhỏ và màu xanh hơi vàng bắt đầu hóa nâu.
Hình 3.4 Kết quả nhân protocorm ở môi trường nồng độ NAA 0.1mg/l kết hợp với BA
M0
Trang 16KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN
Nhận xét môi trường nhân protocorm
Như vậy:
- Sau 30 ngày các protocorm đều tăng lên về kích thước, có màu xanh bóng, phát triển thành khối to tròn và có sự xuất hiện chồi ở tất cả các môi trường
Trang 17Nồng độ
KHSố
chồi/mẫu cấy
Chiều cao chồi(mm)MS0M0 1,69 ± 0,75c6,7±0,15c
1MB2 2.93±0,82b11,5±0,2b
2MB3 2.86±0,79ab10,04±0,16ab
3MB4 2.28±0,65c8,2±0,1c Biểu đồ 3.1: Ảnh hưởng nồng độ chất điều hoà sinh trưởng BA đến quá trình nhân nhanh chồi
KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN
3.2.1 Khảo sát sự ảnh hưởng của nồng độ BA đến sự nhân nhanh chồi
Bảng 3.5 Kết nhân nhanh chồi trên môi trường MS bổ sung BA
Môi trường
Trang 18KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN
- MB2, MB3, MB4 chồi phát triển nhỏ và thập hơn.
Trang 19CĐHST Nồng độ
Ký Hiệu
Số
chồi/mẫu cấy
Chiều cao chồi(mm)MS0M01,59 ± 0,73c6,7±0,15c
BA 0,5mg/l+ NAA
trưởng0,5mg/l BA kết hợp NAA đến quá trình nhân nhanh chồi
KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN
3.2.1 Khảo sát sự ảnh hưởng của nồng độ BA kết hợp NAA đến sự nhân nhanh
chồi
Bảng 3.6 Kết nhân nhanh chồi trên môi trường MS bổ sung BA kết hợp với NAA
Môi trường
Trang 20KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN
Hình 3.6 Kết quả nhân nhanh chồi ở môi trường nồng độ 0,5 mg/l BA kết hợp NAA
- MBN5 chồi phát triển nhanh nhất và xanh
mướt nhất và phát triển rất tốt xuất hiện 2-3 lá
- MBN6, MBN7, MBN8trên và số lượng chồi không mập mạp.
Trang 21KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN
NHẬN XÉT MÔI TRƯỜNG NHÂN CHỒI
Như vậy
chồi của lan Dendrobium “Sena Red”
độ kết hợp NAA 0,1mg/l với BA 0,5mg/l thuận lợi cho việc phát triển chồi và tạo rễ sau này.
Trang 22KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN
Bảng 3.7 Kết quả tạo rễ trên môi trường MS bổ sung NAA
3.3.1 Khảo sát sự ảnh hưởng của nồng độ NAA đến
tạo rễ lan
Biểu đồ 3.3: Ảnh hưởng nồng độ chất điều hoà sinh trưởng NAA đến sự tạo rễ lan
Nồng độ
Tỷ lệ (%)
Số rễ/cây Độ dài rễ (mm)
Chiều cao cây (mm)
Môi trường
Trang 23KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN
Trang 24KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN
MT Ký hiệu
Nồng độ mg/l
Tỷ lệ (%)
Số rễ/cây Độ dài rễ (mm)
Chiều cao cây (mm)
MN1 0,1811,88 ± 0,3ab3,8 ± 0,45c39 ± 0,83MN2 0,5851,78 ± 0,4b7,3±0,8b36 ± 0,59MN3 1751,75±0,24c6.6± 0,38b33 ± 0,4
Bảng 3.8 Kết quả tạo rễ trên môi trường MS bổ sung IAA
Biểu đồ 3.4 Ảnh hưởng chất điều hoà sinh trưởng IAA đến sự ra rễ lan Dendrobium
Số lượng rễ đạt 1-3 nhưng mập và dài, cây con thấp, lá có màu xanh đậm.
Môi trường
Trang 25KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN
Hình 3.8 Cây lan in vitro được thu hoạch sau 1 tháng nuôi cấy trong môi trường bổ sung chất điều hoà sinh trưởng IAA
Trang 26Môi trường tốt nhất cho sự phát triễn rễ là môi trường bổ
chiều cao, số lượng rễ và cây cứng cáp hơn
Với nồng độ thích hợp nhất thì tạo lượng rễ tốt nhất
KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN
NHẬN XÉT MÔI TRƯỜNG TẠO RỄ
Trang 27
Môi trường nhân protocorm
- Môi trương MS có bổ sung BA với 2mg/l nồng độ tốt nhất cho việc nhân protocorm.
Môi trường nhân nhanh chồi
- Thì môi trường tốt nhất cho việc nhân BA với nồng độ 0,5mg/l, và kết hợp giữa BA 0,5mg/l với NAA 0,1mg/l tốt nhân chồi tạo rễ
- Môi trường tốt nhất cho việc tạo rễ lan Dendrobium Sena Red là
môi trường có bổ sung NAA 0,5mg/l.
KẾT LUẬN
Trang 28Áp dụng trên các đối tượng hoa lan Dendrobium lai khác
nhằm đánh giá hiệu quả nông học và hiệu quả kinh tế
Trang 29XIN CHÂN THÀNH CẢM ƠN
THẦY CÔ VÀ CÁC BẠN LẮNG NGHE!