tìm hiểu phương pháp Rapid amplification of 5’cDNA (5RACE)

Rapid amplification of 5’cDNA end (5RACE)Rapid Amplification of cDNA Ends (RACE) – là quy trình nhằm khuếch đại trình tự acid nucleic từ khuôn mẫu mRNA giữa một trình tự bên trong đã được xác định và một trình tự chưa biết ở đầu 5’ hoặc 3’ của mRNA.RACE được nghiên cứu một cách độc lập bởi nhiều nhà khoa học và được đặt bởi nhiều tên gọi khác nhau như: RACE; PCR mỏ neo; PCR một bên.

Rapid amplicaon of 5’cDNA - end Nhóm 7: - Lê Văn Duy Thanh - Nguyễn Minh Thành - Trương Thị Hoài Thu - Nguyễn Thị Thu Thủy - Trương Thanh Tỉnh - Hồ Thị Trang - Trịnh Xuân Tùng 3. Kỹ thuật 5’ RACE 2. Ứng dụng 1. Giới thiệu Nội dung 1/ Giới thiệu: • Rapid Amplification of cDNA Ends (RACE) – là quy trình nhằm khuếch đại trình tự acid nucleic từ khuôn mẫu mRNA giữa một trình tự bên trong đã được xác định và một trình tự chưa biết ở đầu 5’ hoặc 3’ của mRNA. • RACE được nghiên cứu một cách độc lập bởi nhiều nhà khoa học và được đặt bởi nhiều tên gọi khác nhau như: RACE; PCR mỏ neo; PCR một bên. 2/ Ứng dụng 1 Khuếch đại và tạo dòng các RNA hiếm. 2 Phân tích biểu hiện gen 3 Phát hiện các tác nhân gây bệnh ở các loài 4 Nghiên cứu cấu trúc, đặc điểm một số gene chưa rõ trình tự RACE được ứng dụng nhiều trong y học và sinh học RACE được ứng dụng nhiều trong y học và sinh học 3/ Kỹ thuật a/ Tách mRNA b/ Thiết kế mồi c/ Tổng hợp cDNA d/ Tinh sạch cDNA - Loại bỏ dNTP, enzyme RNase, GSP1 - Dùng cột S.N.A.P. e/ Gắn đuôi polyC vào cDNA - Thêm các thành phần: - Ủ 2-3 phút ở 94°C, làm lạnh trong 1 phút. - Thêm 1 ml TdT (Terminal deoxynucleotidyl transferase), trộn nhẹ nhàng, và ủ trong 10 phút ở 37°C. - Nhiệt bất hoạt các polyC ở 65°C trong 10 phút. - Làm lạnh. Thành phần Thể tích (μl) Nước cất 6.5 Đệm 5X 5.0 dCTP 2mM 2.5 Mẫu cDNA đã tinh sạch 10.0