BÁO CÁO HẾT MÔN PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU DƯỢC LIỆU XÂY DỰNG TIÊU CHUẨN DƯỢC LIỆU CÂY MƯỚP

BÁO CÁO HẾT MÔN PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU DƯỢC LIỆU XÂY DỰNG TIÊU CHUẨN DƯỢC LIỆU CÂY MƯỚP Từ lâu, cây mướp là một trong những loài cây quen thuộc của người dân Việt Nam, bên cạnh đó trái mướp còn là nguyên liệu không thể thiếu trong bửa ăn của các bà nội trợ. Ngoài ra cây mướp còn dùng để làm thuốc có tác dụng giảm ho, long đờm, bình suyễn…

TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y DƯỢC CẦN THƠ

KHOA DƯỢC

BỘ MÔN DƯỢC LIỆU

BÁO CÁO HẾT MÔN PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU DƯỢC LIỆU

XÂY DỰNG TIÊU CHUẨN DƯỢC LIỆU CÂY MƯỚP

Luffa cylindrica (L.) M J Roem

TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y DƯỢC CẦN THƠ

KHOA DƯỢC

BỘ MÔN DƯỢC LIỆU

BÁO CÁO HẾT MÔN PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU DƯỢC LIỆU

XÂY DỰNG TIÊU CHUẨN DƯỢC LIỆU CÂY MƯỚP

Luffa cylindrica (L.) M J Roem

Người thực hiện : Nguyễn Thị Hồng Cẩm MSSV : 8079248

Lớp : Dược K21B Nhóm 5 (tiểu nhóm 6)

Năm 2010 - 2011

Mục lục

Lời mở đầu Trang

I Tổng quan : 4

1 Định danh dược liệu 4

2 Mô tả cây 4 3 Phân bố và sinh thái 6

4 Cách trồng 6 5 Bộ phận dùng 6

6 Thành phần hóa học 6

7 Tác dụng dược lý – công dụng 7

8 Những bài thuốc từ cây Mướp 7

II Tiêu chuẩn chất lượng và phương pháp thử kèm theo kết quả thực nghiệm : 8

1 Khảo sát bột dược liệu 8

2 Soi bột dược liệu 9

3 Đặc điểm vi phẫu 11

3.1Vi phẫu lá 12

3.2Vi phẫu thân 16

3.3Vi phẫu rễ 22

4. Phân tích sơ bộ thành phân hóa thực vật 23

5. Ứng dụng kỹ thuật sắc ký trong nghiên cứu hóa thực vật .26 III. Xây dựng tiêu chuẩn cho dược liệu cây Mướp: 27

1. Định danh dược liệu 27

2. Mô tả cây 27

4 Định tính 28

4.1 Định tính bằng phương pháp hóa học : 28

4.2 Định tính bằng phương pháp sắc ký lớp mỏng : 29

5 Định lượng 30

6 Độ ẩm 30

7 Bảo quản 32

8 Tính vị, công năng 32

9 Công dụng – cách dùng 32

IV Kết luận 33 Tài liệu tham khảo

Lời mở đầu

Từ lâu, cây mướp là một trong những loài cây quen thuộc của người dânViệt Nam, bên cạnh đó trái mướp còn là nguyên liệu không thể thiếu trongbửa ăn của các bà nội trợ Ngoài ra cây mướp còn dùng để làm thuốc có tácdụng giảm ho, long đờm, bình suyễn…

Để góp phần phổ biến rộng rải cây thuốc và thực phẩm Cây mướp là loạicây quen thuộc dễ tìm, rẽ tiền được trồng rất nhiều ở đồng bằng sông CữuLong, phục vụ cho công tác phòng và chữa bệnh cho nhân dân Trong bài báocáo này, thông qua những tài liệu sưu tầm được và kết quả thực nghiệm trongquá trình thực tập, tôi xin được giới thiệu những đặc điểm của cây mướp,bước đầu làm cơ sở cho việc xây dựng tiêu chuẩn kiểm nghiệm nhằm đảmbảo được tính an toàn, hiệu quả và chất lượng của những sản phẩm (từ câymướp) sau này cho người sử dụng

I Tổng quan:

1 Định danh dược liệu.

 Tên gọi : Mướp

 Tên khác : Mướp ta, Mướp hương, ty qua

 Tên khoa học : Luffa cylindrica M J Roem

 Thuộc ngành ngọc lan, họ : bầu bí (Cucurbitaceae)

2 Mô tả cây:

Cây mướp thuộc loại dây leo bằng tua cuốn Thân nhẵn, có cạnh vàkhía dọc Lá mọc so le, chia 5 thùy, dài 15 – 25cm, gốc hình tim, đầunhọn mép khía răng, gân lá chân vịt, nổi rỏ ở mặt dưới, cuống lá dài 10 –12cm, tua cuốn dài, mập, thường chẻ 3

Hoa màu vàng, đơn tính, mọc ở kẻ lá, hoa đực tụ họp thành chùmnhiều hoa, hơi có lông, 5 phiến nhọn, tràng 5 cánh rời, đầu tròn, nhị 5,trong đó có 4 cái dính thành đôi, hoa cái mọc đơn độc

Quả hình trụ, dài, thẳng hoặc hơi cong, có khía dọc, khi già vỏ quảgiữa hóa xơ, hạt dẹt, có cánh, màu đen nhạt Mùa cho hoa quả : tháng 5-7

Luffa cylindrica M J Roem

3 Phân bố sinh thái:

Mướp là loại rau ăn quen thuộc, được trồng ở khắp các nước thuộcvùng Nam Á, Đông Nam Á và cả ở vùng Bắc Á như Trung Quốc và NhậtBản Cây ưa khí hậu nóng ẩm của vùng nhiệt đới, cận nhiệt đới

Mướp là loại cây có tốc độ sinh trưởng nhanh, côn trùng và gió là haitác nhân truyền phấn và thụ phấn cho cây Sau khi quả già, cây tự tàn lụikết thúc vòng đời trong khoảng thời gian từ 4 – 4,5 tháng

4 Cách trồng:

Mướp được trồng khắp nơi, phổ biến ở vườn hoặc trên cánh đồng, đôikhi ở bờ ao và làm giàn nhô ra mép ao, vừa dễ thoát nước vừa đủ ẩm, mátthường xuyên cho cây sinh trưởng và phát triển

Trồng mướp trước hết phải làm giàn, mướp được nhân giống bằng hạtgià đã được phơi thật khô Hạt mướp nảy mầm sau 5 – 7 ngày Khi cây đãleo lên giàn, chú ý ngắt bớt lá để cây có nhiều chồi nhánh Nếu cành lá quádày thì tỉa bớt Không bấm ngọn mà bắt ngọn leo cho đều khắp giàn

5 Bộ phận dùng:

- Quả tươi, lá, thân, dây, rễ, hạt và xơ mướp

- Thường dùng quả non Nếu quả già thì loại bỏ vỏ ngoài và hạt, chỉ dùng xơ

6 Thành phần hóa học:

Quả tươi, lá và cành mướp có chứa các saponin triterpen có tên chung

là lusiosid Ngoài ra, quả còn chứa chất đắng, chất nhầy, xylan, galactan,

mỡ, protein 1,5% Trong quả tươi có nhiều choline, phytin, các acid amin

tự do: lysin, glycin, alanin, acid aspartic, leucin

Dầu hạt mướp có khoảng 35,5% các acid chủ yếu là palmitic, stearic,oleic, linoleic, trong đó acid linoleic chiếm 50 – 70%

Rễ mướp chứa nhiều vitamin B và C, muối khoáng (nitrat kali), cácmen ribonuclease và acid bryonilic

Hoa mướp cái có β sitosterol, apigenin và acid oleanolic

7 Tác dụng dược lý – công dụng:

Quả mướp hương non được dùng làm thực phẩm, có tác dụng làmtăng tiết sửa cho phụ nữ sau khi sinh đẽ và làm máu lưu thông , giúp nhuậntràng

Lá sắc với cây cứt lợn, uống chữa phù thũng Dùng ngoài, lá tươi giảnát, ép lấy nước bôi chữa chốc lở đầu, mẫn ngứa do giời leo Lá vò nát cònchửa bệnh zôna Xơ mướp dùng chữa trĩ ra máu, rong huyết, rong kinh,kiết lỵ, tiêu chảy ra máu

Thân dây mướp dùng chữa viêm xoang mũi, chảy nước mũi có mùi hôi

Rễ chữa đau nữa đầu, viêm mũi, viêm xoang, viêm tuyến vú, ho, đaulưng, trúng phong

8 Các bài thuốc từ cây thuốc:

Lá mướp nấu uống chữa ho, hen kéo dài, với liều 10 – 15g giả nhỏvới ít muối, thêm nước gạn uống chữa viêm họng

Lá mướp tươi 60g, thăng ma 3g, hoạt thạch 30g, sắc uống như tràchữa say nắng, sốt cao

Xơ mướp đốt tồn tính, nghiền thành bột, uống mỗi ngày 4 – 8g, chialàm 2 lần, chữa trĩ ra máu, rong huyết, rong kinh, kiết lỵ, tiêu chảy ra máu

Xơ mướp 20g phối hợp với hạt đay quả dài 12g (giả dập sao) sắc với200ml nước còn 50ml, uống lúc nóng chữa hen

Thân dây mướp 30g, xa tiền tử 30g, hổ trượng 15g, hoàng bá 10g sắcnước uống ngày một thang, chữa đau lưng hông do thấp nhiệt

Rễ mướp 15 – 30g dưới dạng thuốc sắc chữa đau nửa đầu, viêm mũi,viêm xoang

II Tiêu chuẩn chất lượng và phương pháp thử kèm theo kết quả thực nghiệm

1 Khảo sát bột dược liệu:

Khảo sát bột dược liệu bằng kính hiển vi để tìm ra những đặc điểm vihọc đặc trưng của bột dược liệu, giúp cho việc định danh, xác định độ tinhkhiết, phân biệt dược liệu này với dược liệu dễ bị nhầm lẫn và phát hiệngiả mạo nếu có

Chuẩn bị bột để soi: thân, lá cây mướp cắt nhỏ, sấy ở nhiệt độ

khoảng 600C, tán nhỏ, nghiền nát hoặc dùng máy xay Rây qua rây số 32(rây mịn)

Quan sát bột bằng cảm quan : bột màu xanh sậm, xốp nhẹ, vị đắng,

không mùi

Thân lá mướp trước khi nghiền và sau khi nghiền

2 Soi bột dược liệu:

Cách lên tiêu bản bột soi : nhỏ 1 – 2 giọt chất lỏng để soi (thường là

nước) nhỏ lên lame, lấy một lượng bột dược liệu khoảng bằng đầu tăm chovào giọt nước đó, khuấy kỹ Đậy lamelle lên trên lame, dùng ngón tay dichuyển nhẹ trên lamelle cho bột phân tán đều Dùng giấy lọc thắm nhanhnước thừa ở mép lamelle

Soi kính hiển vi ta thấy được một số cấu tử sau: tế bào lổ khí kiểu

hỗn bào, mạch vòng, mạch vạch, lông che chở đa bào, mạch xoắn, mạchđiểm, mạch đồng tiền, mảnh bần

Tế bào lổ khí kiểu hỗn bào

Mạch đồng tiền

3 Đặc điểm vi phẫu :

Chọn mẫu: dùng mẫu tươi (thân, lá, rễ mướp)

Cắt vi phẫu: dùng lưỡi lam cắt lát thật mỏng để nhuộm

+ Vi phẫu sau khi nhuộm xong có thể ngâm vào nước cất

+ Vi phẫu chuẩn bị xong soi bằng nước

Để kiểm nghiệm một dược liệu là đúng hay sai hay để xây dựng tiêuchuẩn cho một dược liệu mới thì không phải dựa vào mô tả là đủ, mà cầnphải dựa vào đặc điểm vi học, định tính, thử tinh khiết, định lượng và một

số nội dung khác

Đặc điểm vi phẫu của các cơ quan thực vật là một đặc điểm quantrọng trong kiểm nghiệm dược liệu Vì vậy, khi quan sát các mẫu người tathường loại bỏ tế bào chất, nhuộm màu màng tế bào để việc quan sát dễdàng hơn

3.1 Vi phẫu lá

Quan sát lá: Bằng cách tách riêng lớp biểu bì (thường là biểu bì dưới

của lá), người ta có thể xé, dùng dao lam tách hay cạo lấy lớp ngoài cùng

Kỷ thuật này thường được áp dụng cho dược liệu tươi Các đặc điểm quansát của tế bào biểu bì lá là: lổ khí kiểu hỗn bào, biểu bì mang lông tiết,biểu bì mang lông che chở, lông che chở

Biểu bì mang lông che chở Biểu bì mang lông tiết

Quan sát gân lá: cấu tạo gân lá: lông che chở, biểu bì, mô dày, mô

mềm đạo, libe 1, gổ 1

Cấu tạo vi phẫu gân lá mướp

Lông che chở Biểu bì trên

Biểu bì dưới

Mô dày góc

Mô mềm đạo Libe 1

Gỗ 1

Cấu tạo vi phẫu phiến lá

Biểu bì trên

Mô giậu

3.2 Vi phẫu thân

Cấu tạo vi phẫu của thân non (cấp 1): lông che chở, lớp biểu bì, mô

mềm đạo, mô dày, mô cứng, libe 1, gổ 1

Cấu tạo vi phẫu thân non

Cấu tạo chi tiết vi phẫu thân non

Lông che chở Lớp biểu bì

Mô dày

Mô cứng

Mô mềm đạo

Gỗ 1 Libe 1

Cấu tạo vi phẫu của thân già (cấp 2): lớp bần, mô dày, mô cứng, bó gổhình chử V, gổ 2, libe 2, mạch gổ, tinh thể calci oxalat, mô mềm tủy đạo(tủy có thể bị hủy một phần).

Cấu tạo vi phẫu thân già

Cấu tạo chi tiết vi phẫu thân già

Lớp bần

Mô dày góc

Mô cứng

Bó gỗ hình chử V Mạch gỗ

Libe 2

Mô mềm đạo

Cấu tạo vi phẫu thân già

Mô mềm tủy đạo (tủy

bị hủy một phần)

Gỗ 2

Libe 2

Tinh thể calci oxalat nằm trong lớp tế bào mô dày của thân già

Tinh thể calci oxalat nằm trong lớp tế bào mô mềm của thân già

3.3 Vi phẫu rễ

Cấu tạo vi phẫu rễ (cấp 2): lớp bần, mô mềm vỏ, mô cứng, libe 2, gổ

2, mạch gổ, mô mềm gổ(tia tủy)

Cấu tạo vi phẫu rễ già

Mạch gỗ

Gỗ 2

Mô mềm

gỗ (tia tủy)

Cấu tạo vi phẫu rễ già

4 Phân tích sơ bộ thành phần hóa thực vật

A Nguyên tắc:

Chiết tách hỗn hợp các chất có trong cây mướp thành 3 phân đoạntheo độ phân cực tăng dần: kém phân cực, phân cực trung bình và phâncực mạnh bằng cách chiết bột cây mướp lần lượt với các dung môi: etherdầu, cồn 96%, nước Xác định các nhóm hợp chất trong từng dịch chiếtbằng các phản ứng đặc trưng

Lớp bần

Mô cứng

Tia tủy

Mạch gỗ Libe 2

Mô mềm vỏ

Gỗ 2

lọc và cô lạiKhoảng 50ml dịch chiết ether

 Chiết dịch chiết cồn:

Bã dược liệu

cồn 96% hồi lưuDịch chiết cồn

HCl 10% /cách thủychiết lại bằng etherDịch chiết cồn thủy phân

 Chiết dịch chiết nước:

Bã dược liệu

chiết với nước nóng

để nguội, cô lạiKhoảng 50ml dịch chiết nước

(phần lớn để định tính trực tiếp)Phần còn lại

HCl 10% /cách thủy

5. Ứng dụng kỹ thuật sắc ký trong nghiên cứu hóa thực vật Định tính Saponin triterpenoid bằng sắc ký lớp mỏng:

 Bản mỏng: silica gel F254 (2,5 x 10cm)

 Hệ dung môi khai triển: CHCl3 – MeOH (10:0,5)

 Dung dịch thử : lấy 1g bột dược liệu cho vào bình nón nút mài100ml, thêm 30ml CHCl3, đun trên bếp cách thủy 15 phút Để nguội, lọc.Dịch lọc đem bốc hơi đến còn khoảng 5ml

 Tiến hành chấm sắc ký: chấm lên bản mỏng 20µl dung dịch thử(chấm băng) Sau khi khai triển, để khô bản mỏng ở nhiệt độ phòng, quansát dưới ánh sáng thường, soi UV 254 nm và 365 nm

 Thuốc thử phát hiện màu: VS (Vanillin-Sulfuric)

 Ghi nhận lại sắc ký đồ

SKLM: Sau khi triển khai

* Quan sát bằng mắt thường: có 4 vết xuất hiện với màu sắc khác nhau:

Vết 1 có màu vàng lẫn nâu, Rf = 0 , 84

4 , 7

2 , 6



Vết 2 có màu xanh ngả vàng, Rf = 0 , 79

4 , 7

9 , 5



Vết 3 có màu vàng, Rf = 0 , 41

4 , 7

3



Vết 4 có màu vàng nhạt, Rf = 0 , 11

4 , 7

8 , 0



* Soi UV 254nm: vết 1, 2 và 3 tắt quang

IV Xây dựng tiêu chuẩn cho dược liệu cây Mướp:

1. Định danh dược liệu

 Tên gọi : Mướp

 Tên khác : Mướp ta, Mướp hương, ty qua

 Tên khoa học : Luffa cylindrica M J Roem

Thuộc ngành ngọc lan, họ : bầu bí (Cucurbitaceae)

2. Mô tả cây

Cây mướp thuộc loại dây leo bằng tua cuốn Thân nhẵn, có cạnh vàkhía dọc Lá mọc so le, chia 5 thùy, dài 15 – 25cm, gốc hình tim, đầunhọn mép khía răng, gân lá chân vịt, nổi rỏ ở mặt dưới, cuống lá dài 10 –12cm, tua cuốn dài, mập, thường chẻ 3

Hoa màu vàng, đơn tính, mọc ở kẻ lá, hoa đực tụ họp thành chùmnhiều hoa, hơi có lông, 5 phiến nhọn, tràng 5 cánh rời, đầu tròn, nhị 5,trong đó có 4 cái dính thành đôi, hoa cái mọc đơn độc

Quả hình trụ, dài, thẳng hoặc hơi cong, có khía dọc, khi già vỏ quảgiữa hóa xơ, hạt dẹt, có cánh, màu đen nhạt Mùa cho hoa quả : tháng 5-7

3. Đặc điểm soi bột – vi phẫu

3.1Soi bột

Bột dược liệu có màu xanh sậm, xốp, nhẹ, vị đắng không mùi Soi kính hiển vi thấy được tế bào lỗ khí kiểu hỗn bào, mạch vòng, mạch vạch, lông che chở da bào, mạch xoắn, mạch điểm, mạch đồng tiền, mảnh bần

3.2Vi phẫu

A. Quan sát gân lá: mặt dưới lồi nhiều hơn mặt trên, lớp cutin ở

biểu bì trên dày hơn lớp biểu bì dưới Nằm sát dưới biểu bì là mô dày, kếđến là mô mềm đạo, libe nằm phía ngoài, phần gỗ nằm phía trong

B. Quan sát phiến lá: tế bào biểu bì trên dày hơn biểu bì dưới, nằm

tiếp với biểu bì trên là mô giậu 2 lớp tế bào hình chử nhật, lớp trên dàyhơn lớp dưới, nằm dưới mô giậu là mô xốp: gồm các tế bào đa giác cạnhtròn, không đều

C. Quan sát thân: vi phẫu thân hình ngũ giác, biểu bì tế bào hình

chử nhật, bên ngoài có nhiều lông che chở, mô dày tế bào hình bầu dụcxếp thành từng cụm Mô mềm đạo cũng có tế bào hình bầu dục, mô cứnglớp tế bào hình đa giác liên tục quanh thân Hệ thống dẫn gồm 2 vòng bólibe – gỗ kiểu chồng kép, mạch gỗ tiết diện gần tròn Mô mềm tủy đạo, tủy

có thể bị hủy một phần

D. Quan sát rễ: vi phẫu rễ gần tròn Bần gồm 1-2 lớp tế bào hình

chữ nhật Mô mềm đạo hình bầu dục kích thước không bằng nhau, trong

mô mềm rải rác có những cụm tế bào hóa mô cứng, libe 2 tế bào hình chữnhật Gổ 2 chiếm tâm và chia thành nhiều cụm bởi các mô mềm gỗ(tiatủy), mạch gổ 2 to, nhiều, xếp lộn xộn

4. Định tính

Phản ứng tạo bọt: Lấy 5ml dịch chiết cồn cho vào chén sứ cô trên

bếp cách thủy tới cắn Hòa cắn trong 5ml cồn 25% trên bếp cách thủy, lọc vào ống nghiệm Thêm 5ml nước và lắc mạnh theo chiều dọc ống nếu có bọt bền trong 15 phút: có saponin

Phản ứng Liebermann – Burchard: Lấy 5ml dịch chiết ether cho

vào chén sứ cô trên bếp cách thủy tới cắn Hòa cắn trong 1ml anhydrid acetic, thêm vào dung dịch 0,5 ml chloroform.Dùng pipet Pasteur thêm cẩn thận 1 – 2 ml H2SO4 đậm đặc xuống đáy ống nghiệm Quan sát vòng ngăn cách:

+ Có màu hồng đến đỏ tím thì sơ bộ kết luận dược liệu cóSaponin triterpen

+ Có màu xanh dương đậm hay xanh lá cây thì sơ bộ kết luận cósaponin steroid

Hợp chất khử : Lấy 5ml dịch chiết cồn cho vào chén sứ cô trên bếp

cách thủy tới cắn Hòa cắn với 3ml nước cất trên bếp cách thủy, để nguộilọc thêm vào dịch lọc 0,5 ml dung dịch Fehling A và 0,5 ml dung dịchFehling Đun cách thủy 5 phút Nếu có tủa đỏ gạch dưới đáy ống nghiệm:

Có các hợp chất khử (chủ yếu là đường khử)

4.2 Định tính bằng phương pháp sắc ký lớp mỏng :

- Bản mỏng: Silica gel F254 tráng sẵn; kích thước 2,5x10cm(không cần hoạt hóa)

- Dung môi khai triển: cloroform – methanol (10:0,5)

- Dung dịch thử: Lấy 1 g bột thô dược liệu, cho vào bình nón nútmài100ml, thêm 30ml CHCl3, đun hồi lưu khoảng 15 phút, Dịch lọcđem bốc hơi đến còn khoảng 5ml làm dung dịch chấm sắc ký

- Dung dịch đối chiếu: Dung dịch saponin chuẩn

- Cách tiến hành: Chấm riêng biệt lên bản mỏng 20 l mỗi dungdịch trên Triển khai sắc ký cho đến khi dung môi đi được khoảng 7-

8 cm, lấy bản mỏng ra, để khô ở nhiệt độ phòng, quan sát dưới ánhsáng tự nhiên, soi UV 254 và 365nm

- Phát hiện bằng dung dịch H2SO4 10% hoặc thuốc thử sulfuric Sau khi phun hoặc nhúng, sấy bản mỏng ở 110oC x 2 – 3phút (để trên khay nhôm đặt trên bếp điện, trong thủ hốt)

vanilin-Trên sắc ký đồ của dung dịch thử phải có vết chính cùng màu,cùng Rf với vết của saponin đối chiếu

Ghi nhận lại sắc ký đồ , vẽ lại sắc ký đồ , tính Rf các vết , nhậnxét

5. Định lượng

 Cân 10g dược liệu đã xác định độ ẩm, chiết với 200ml MeOHtrong Soxhlet từ 6 – 8 giờ Dịch chiết được cô dưới áp suất giảm đến khicòn khoảng 50ml

 Cho toàn bộ dịch chiết nóng này vào một erlen nút mài 250ml,

để nguội Thêm vào erlen này 150ml ether ethylic lắc đều, đậy kín và đểhỗn hợp qua đêm ở nơi mát

 Gạn bớt lớp dung dịch trong ở phía trên, phần còn lại được lọclấy tủa, rửa tủa với 10ml ether ethylic rồi cho tủa vào một erlen 200ml, hòatan tủa bằng cách đun nóng với 50ml MeOH Làm nguội và kết tủa lại mộtlần nửa với 150ml ether ethylic Để dung dịch ở nơi mát cho đến khi lắnghoàn toàn Gạn bớt lớp dung dịch trong ở phía trên, phần còn lại được đem

ly tâm (hoặc lọc hút) lấy tủa Rửa tủa với ether ethylic (3 lần x 10ml)

 Cho tủa này vào một chén kết tinh đã cân bì, sấy ở 500C cho đến