nghiên cứu về cây vối (cleistocalyx operculatus roxb)

Năm 1986, Nguyễn Đức Minh, phòng đông y thực nghiệm Viện nghiên cứu đông y đã tiến hành nghiên cứu thăm dò tính chất kháng sinh của lá và nụ cây vối đối với một số vi khuẩn Gram+ và Gr-

Em xin chân thành cảm ơn Ban chủ nhiệm khoa Hoá học, các thầy các

cô trong bộ môn Hoá hữu cơ, khoa Hoá trường ĐHKHTN-ĐHQGHN, các thầy các cô trong bộ môn Hoá sinh thực nghiệm Viện KHTN và CNQG, và các phòng máy khối phổ, phòng cộng hưởng từ hạt nhân, phòng phổ hấp thụ nguyên tử thuộc Viện hoá học-Trung tâm khoa hoá tự nhiên và công nghệ Quốc gia, cùng toàn thể anh chị nghiên cứu sinh, học viên cao học trong phòng hợp chất thiên nhiên và các bạn cùng khoá đã giúp đỡ em trong quá trình làm việc tại khoa

Hà Nội, tháng 12 năm 2006

Đỗ Thị Thanh

MỤC LỤC

Trang

PHẦN II MỤC TIÊU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 25

4.4.1 Chiết phân lớp các chất trong lá vối 38

4.4.3 Sắc ký lớp mỏng khảo sát cặn cloroform 40

4.4.3.1 Phương pháp sắc ký lớp mỏng (SKLM) 40 4.4.3.2 Kết quả khảo sát SKLM cặn C 41

4.4.5 Phân lập các chất từ nhóm C5 bằng sắc ký cột nhanh 43 4.4.6 Phân lập các chất từ nhóm C6 bằng sắc ký cột nhanh 44 4.4.7 Phân lập các chất từ nhóm C7 bằng sắc ký cột nhanh 46

có tác dụng chữa bệnh, song các hợp chất này có một số hạn chế nhất định, như là gây những phản ứng phụ không mong muốn Mặt khác, Việt Nam là nước đang phát triển, thu nhập bình quân đầu người thấp, các loại thuốc chữa bệnh hầu hết nhập từ nước ngoài và có giá thành cao, gây nên khó khăn cho người sử dụng Do đó, nhà nước đã có chủ trương tăng cường sản xuất thuốc trong nước, hạn chế nhập khẩu, hạ giá thành sản phẩm Một trong các nguồn nguyên liệu sản xuất thuốc được lấy ra từ thiên nhiên Vì vậy vấn đề đang được đặc biệt quan tâm là nghiên cứu các hợp chất được tách ra từ sản phẩm thiên nhiên

Trong số các loài cây cần quan tâm nghiên cứu có cây vối (Cleistocslyx

dụng vối làm thuốc chữa các bệnh đường ruột, viêm họng, bệnh ngoài da Từ năm 1991 trở lại đây, một số công trình trong nước và trên thế giới nghiên cứu cây vối cho thấy hàm lượng flavonoit chứa trong cây cao và một số chất

có hoạt tính kháng HIV Đặc biệt một nghiên cứu gần đây nhất cho thấy nước chiết của nụ Vối là thành phần của thuốc trợ tim Như vậy, cùng với sự thuận lợi về nguyên liệu thì đây là những lý do khích lệ chúng tôi nghiên cứu cây vối Việt Nam

PHẦN I TỔNG QUAN 1.1 Khái quát về họ Sim Myrtaceae

Cây vối có tên khoa học là Cleistocalyx operculatus Roxb, thuộc chi Cleistocalyx, họ Sim Mytaceae Các cây thuộc họ Sim thường mọc xen lẫn

với các cây gỗ khác thành đai rừng nhiệt đới, ít khi mọc thuần loại

Họ Sim phân bố ở các vùng rừng nhiệt đới và Á nhiệt đới, chủ yếu ở châu Mỹ và châu Úc

Họ Sim là một họ lớn gồm 90 chi và 3000 loài, cây thuộc họ Sim có đặc điểm thực vật như sau :

Cây gỗ lớn, cây nhỡ hoặc cây bụi Lá đơn, hoặc mép có khía răng, lá thường mọc đối nhau và có tuyến mỡ Hoa mọc thành cụm ở nách hay ở đầu cành, có hình xim hoặc hình chùm Hoa đều lưỡng tính Đài hình ống dính hoàn toàn vào bầu hay chỉ dính một ít Lá đài gồm 4-5 cánh xếp lợp vào nhau,

ít có ống dài nguyên

Nhị xếp thành một hay nhiều dãy rời nhau hoàn toàn hoặc dính ở gốc thành ống ngăn : bao phấn đính ở lưng hay gốc Đĩa mật không có hay nếu có thì hình vành khăn, che kín ở phía gốc vòi Bầu hoàn toàn hạ hay hạ một phần, có 4-5 ô hay nhiều hơn; vòi đơn kéo dài, đầu tròn, rất ít khi chia 3-4 thuỳ; trong bầu thì noãn xếp thành hai hay nhiều dãy Quả nang hoặc thịt, có sợi và thường được bọc kín bởi ống đài Trong quả thường có 1 hạt, hạt có nội nhũ, phôi thẳng hay cong, đôi khi nạc với hai lá mầm không xa nhau

1.2 Tổng quan về chi Cleistocalyx [6,9]

vật riêng : quả nạc, khi chín không nở Vòi không có lông, ô quả không có vách ngang chia thành ô nhỏ, ống đài nguyên hay rách bất định, đài nguyên thành mũ, quả mập có một hạt Cụm hoa xim hay chuỳ

Sau đây là giới thiệu một số cây đại diện thuộc chi Cleistocalyx thường thấy ở Việt Nam

1.2.1 Cleistocalyx circumcissa

Tên ở Việt Nam là Trâm Ô

Đặc điểm thực vật : Cây đại mộc cao 15m, nhánh mảnh, lá có phiến xoan thon, dài 4-7cm, chót có mũ, có đốm trong gân phụ, rất mảnh, nụ cao 13mm, rộng 3mm, phần của đài và cánh hoa làm thành một lớp rụng sớm với nhị, noãn gồm 3 buồng, quả mập

Phân bố : rừng Biên Hoà

1.2.2 Cleistocalyx nigrans

Tên Việt Nam : Trâm lá đen

Đặc điểm thực vật : Cây đại mộc nhỏ, nhánh vàng đỏ Lá có phiến bầu dục, màu nâu đen trên mặt lúc khô, gân phụ cách nhau 2-3mm, cuống dài 1cm Chùm tụ tán cao 6cm ở ngọn nhánh, hoa trắng, nụ dài 5mm, hoa 5 cánh rụng 1 lượt, tiểu nhị nhiều Quả mập tròn, lúc khô đen, to hơn 1cm, một hạt Phân bố : rừng Bình Dương, Thủ Đức

1.2.3 Cleistocalys nervosum

Tên Việt Nam : Trâm nấp vối

Đặc điểm thực vật : Cây đại mộc trung, nhánh non dẹp, không lông Lá

có phiến bầu dục thon, dài 12-13cm, có đốm nâu, gân phụ vào 10 cặp, gân

nắp cao; hoa có 4 cánh, cao 3mm, có nhiều tiểu nhụy Phì quả tròn hay dài, to 7-14mm, đỏ hoặc đỏ đen chói, nạc ngọt, một hạt

Phân bố : rừng và Bắc Trung Nam

1.2.4 Cleistocalyx rehnervinus

Tên Việt Nam : Vối gân mạng

Đặc điểm thực vật : Cây đại mộc nhỏ, nhánh tròn xám, to 2-3mm Lá

có phiến bầu dục đến trái xoan, to 9-14x5.5-7cm chót lá rộng, đáy tròn gân phụ mịn, cách nhau 4-8mm, gân cách bìa 2-3mm Phát hoa ở lá và ngọn Hoa như không cọng, cao 7mm, đài rụng thành chóp, tiểu nhụy nhiều Trái tròn, to 1.5mm, lùm bụi

1.2.5 Cleistocalyx consperipuactatus

Tên Việt Nam : Vối nước

Đặc điểm thực vật : Cây gỗ thường xanh, cao 20-25m Vỏ dày 6-8mm, màu xám trắng hay nâu đen nhạt Cành non màu nâu xám, hình vuông, lúc già hình cột tròn Lá đơn, mọc đối, hình bầu dục dạng trứng ngược dài 6-12cm, rộng 2.5-5.5cm, đầu tròn tù Hoa mọc cụm, sinh ra đầu cành Hoa lưỡng tính, đài đính thành 1 thể dạng mũ, lúc nở hoa rụng dạng vòng Nhiều nhị, rời nhau, lúc chồi hoa cong vào Quả mọng hình cầu hay hình trứng, lúc chín có màu nâu tím Một năm có 2 mùa hoa nở vào tháng 3 và giữa tháng 7

Phân bố : Thanh Hoá, Nghệ Tĩnh, Bình Trị Thiên, Quảng Nam, Đà Nẵng, GiaLai-KonTum

1.3 Tổng quan về cây Vối (Cleistocalyx operculatus)

1.3.1 Đặc điểm thực vật

Cây nhỡ, cao 5-6m có khi hơn, cành non, tròn hay hơi hình 4 cạnh, nhẵn Lá có cuống, dài 8-20cm, hình trứng, rộng 5-10cm Hai mặt lá có những đốm màu nâu, cuống dài 1-1.5cm Hoa gần như không có cuống, màu lục trắng nhạt hợp thành cụm hoa hình tháp toả ra ở những lá đã rụng Quả hình cầu hay hơi hình trứng, đường kính 7-12cm, xù xì Toàn lá, cành non, và nụ vối có mùi thơm đặc biệt dễ chịu của vối [3,5]

1.3.2 Phân bố

Cây vối được trồng và mọc hoang ở khắp các tỉnh nước ta, chủ yếu để lấy lá ủ nấu nước uống Vối còn thấy ở các nước nhiệt đới châu Á, Trung Quốc [3,4]

1.3.3 Ứng dụng của cây vối

Vối được trồng để lấy gỗ dùng trong xây dựng, làm công cụ, vỏ có chất dùng để nhuộm đen Quả vối ăn được

Lá vối tươi đem thái nhỏ, rửa sạch nhựa rồi cho vào thùng ủ cho đến khi đen đều thì lấy ra rửa sạch, phơi khô dùng để nấu làm nước uống rất thông dụng ở nông thôn Việt Nam Nụ và hoa thu hái vào vào tháng tư hoặc tháng sáu dương lịch cũng được pha làm trà uống Kinh nghiệm dân gian thường phối hợp lá vối với lá Hoắc hương làm nước uống lợi tiêu hóa Nước sắc đậm đặc của lá cây dùng như thuốc sát trùng, để rửa mụn nhọt, lở loét, ghẻ Lá, vỏ thân, hoa còn dùng làm thuốc chữa bệnh đầy bụng, khó tiêu, mụn nhọt, viêm đại tràng mãn tính, ly trực trùng [3,4,5]

Năm 2003, Đào Thị Thanh Hiền, trường ĐH Dược Hà Nội và những người khác đã tiến hành thử nghiệm nghiên cứu một số tác dụng của cây vối Kết quả cho thấy :

- Tính kháng khuẩn của lá vối, đặc biệt là lá vối ủ có tác dụng rất tốt

trên vi khuẩn E.coli, là loại vi khuẩn thường gây ra bệnh đường ruột, và hai vi

khuẩn Gr(+) và Gr(-) thường gặp ở bệnh viêm da Điều này làm sáng tỏ việc uống nước sắc lá vối để chữa bệnh tiêu chảy và tắm nước sắc lá vối để chữa bệnh viêm da của nhân dân

- Nước sắc lá vối ủ có tác dụng lợi mật rất mạnh, kết quả này góp phần giải thích được vì sao nhân dân ta thường uống nước sắc lá vối để chữa bệnh đầy bụng, khó tiêu

- Kết quả thử tác dụng độc tế bào của mẫu chiết từ lá vối bước đầu cho thấy cả tinh dầu và cao thô toàn phần đều có khả năng ức chế sự phát triển tế bào ung thư (ung thư gan, ung thư màng tim, ung thư tử cung) Điều này mở

ra hướng nghiêm cứu mới đối với dược liệu lá vối

Năm 1986, Nguyễn Đức Minh, phòng đông y thực nghiệm Viện nghiên cứu đông y đã tiến hành nghiên cứu thăm dò tính chất kháng sinh của

lá và nụ cây vối đối với một số vi khuẩn Gram(+) và Gr(-) đã đi tới kết luận rằng: ở tất cả các giai đoạn phát triển của cây, lá và nụ vối đều có tác dụng kháng sinh, vào mùa đông, tính kháng sinh cao nhất ở lá và hoàn toàn không độc đối với cơ thể [7]

Đặc biệt năm 2002, một nhóm nhà khoa học Trung Quốc đã công bố kết quả ngiên cứu về cây vối: nước chiết của nụ vối là thành phần của nước

1.3.4 Thành phần hóa học

1.3.4.1 Thành phần hóa học của tinh dầu nụ hoa vối

Năm 1994, Lê Thị Anh Đào, Nguyễn Xuân Dũng, và Hoàng Văn Lựu

đã nghiên cứu thành phần hóa học của tinh dầu vối [10] ở các địa phương khác nhau của tỉnh Nghệ An, thu được những kết quả như sau :

+ Hàm lượng tinh dầu dao động trong khoảng 0.1-0.4% Hàm lượng tinh dầu vối ở Quế Phong (0.4%) là cao nhất Thấp nhất là tinh dầu vối ở thành phố Vinh (0.1%) Trong các bộ phận khác nhau của cây vối thì hàm lượng dầu cao nhất tập trung ở nụ hoa (0.48%), trong đó hoa đã nở lượng tinh dầu giảm dần (0.28%) và ít nhất trong hoa già (0.18%)

Huyện Nam Đàn Huyện Tân Kỳ Huyện Quế Phong Thành phố Vinh Thành phố Vinh Thành phố Vinh

0.10 0.18 0.20 0.21 0.24 0.40 0.48 0.28 0.18

Bảng 1.1: Hàm lượng tinh dầu vối ở các địa phương của Nghệ An

+ Thành phần hóa học của tinh dầu vối được chỉ ra trong bảng dưới đây:

Stt Tên chất

Hoa vối (nụ + hoa ) (%)

Nụ vối (%)

Hoa già (%)

Lá (%)

Qua bảng 1.2 nhận thấy thành phần chính của tinh dầu vối là :

1) β-myrcen 24.6% (trong lá); 32.3% (trong nụ hoa vối); 35.1% (trong

nụ); 38% (trong hoa già)

2) (Z)-β-oxymen dao động từ 29.1% (trong nụ hoa); 34.6% (trong nụ);

32.5% (trong hoa già ; 32.1% (trong lá)

3) (E)-β-oxymen 12.0-13.3% (trong nụ hoa); và 9.4% (trong lá)

4) β-caryophyllen 14.5% (trong lá), cao hơn hẳn trong hoa và nụ

(4.2-5.3%)

5) α-pinen dao động trong khoảng 1.8-3.7% Trong lá cao nhất là

3.7%

6) Caryophyllen và α-humulen trong lá cao hơn trong hoa

Như vậy thành hóa học của tinh dầu nụ hoa già là như nhau nhưng hàm lượng của các chất khác nhau, trong tinh dầu lá vối thì ít chất hơn (28 chất)

1.3.4.2 Thành phần hóa học của nụ hoa vối

Năm 1990, nhóm tác giả Zhang, Fengxian, Liumeifang: Lu Renrong (Trung Quốc) đã phân lập một số chất trong hoa và nụ vối :

Axit xinamic (C9H8O2) (1); axit galic (C7H6O5) (2); etylgalat (C9H10O5) (3); 7-hidroxi-5-metoxi-6,8-dimetylflavon (C18H18O4) (4); 2,4-đihidroxyl-6-metoxi-3,5-dimetylchacon (C18H18O4) (5); 5,7-đihidroxi-6,8-đimetylflavanon (C17H16O4) (6); axit oleanolic (C30H48O3) (7); axit ursolic (C30H48O3) (8); β-sitosterol (C27H40O) (9);

Cấu trúc của các chất đã được xác định :

ch= ch cooh

cooh

oh ho

oh

cooc2h5

oh oh ho

5 6

3 4 5

5 6 7 8 9 10

18 11

12 13

20 19

25

17 26

1.4 Một số tritecpenoit cú hoạt tớnh sinh học liờn quan đến đối tượng nghiờn cứu

1.4.1 Các tritecpen khung oleanan

Theo các kết quả nghiên cứu của Woldemichael G.M [28], axit

oleanolic có hoạt tính kháng 2 chủng vi khuẩn B Subtilis (MIC=8 g/ml) và S.aureus (MIC=64 g/ml) Trong khi đó, hoạt tính chống ung thư của nó lại

dựa trên sự ngăn cản quá trình sao mã của virus HIV-1 ở trên tế bào H9 (IC50=21,8 g/ml; EC50=1,7 g/ml)

COOH

HO Axit oleanolic(2) Các saponin có chứa khung oleanan như Gleditsia saponin C tách ra từ

loài Gleditsia japonica và Gymnocladus G tách ra từ loài Gumnocladus chinensis cũng thể hiện khả năng chống HIV in vitro khá mạnh

O

OH O

O

OH

OH

O O

O

CH2

OH

OH OH

OH OH

OH

O

O C

O

CH2O

O

O

OH OH

O

CH 3 OH

C O

C O

HO HO

HOCH 2

O

O

OH O

CH2O

O

OH OH

OH OH

O

O

OH OH

O

CH3OH

O O C

O

C O

HO HO

HOCH2

O OO

Gleditsia saponin C

Trong khi đó, Glycyrrhizin, một saponin chính tách ra từ cây Cam thảo

nhãn (Glycyrrhiza glabra) lại ức chế sự phát triển của một số loài virus bao gồm cả virus HIV-1 in vitro Các kết quả nghiên cứu trên bệnh nhân AIDS ở

Nhật cho thấy Glycyrhizin làm chậm quá trình phát triển của virus HIV Rất

có thể nó đã kìm hãm quá trình sao chép của virus HIV in vitro

O

OH OH

O COOH

Glycyrrhizin Theo những nghiên cứu mới nhất thì 3 tritecpen mới khung oleanan là: (23Z)-coumaroyl hedreagenin, (23E)- coumaroyl hedreagenin và (3Z)-

coumaroyl hedreagenin, tách ra từ cây Rau mương lông (Ludwigia octovalis),

có hoạt tính gây độc tế bào rất tốt trên 2 dòng tế bào ung thư KB và HT29 với giá trị IC50trong khoảng 1,2-3,6 M Hoạt tính của 3 tritecpen này có thể so sánh với Etoposide (IC50=1,2-2,3 M), một loại thuốc chống ung thư

1.4.2 Các hợp chất khác

Các dẫn xuất tritecpen khung ursan: axit

2,19-đihiđroxy-3-oxo-12-ursen-28-oic, axit ursolic, axit maslinic tách ra tư cây Geum japonicum đều

thể hiện hoạt tính ức chế enzym proteaza của virus HIV-1 khá tốt Giá trị nồng

độ ức chế 50% tế bào HIV của axit ursolic là 18,6 g/ml

COOH HO

coumaroyl maslinic, các dẫn xuất của axit maslinic phân lập từ loài Licania

heteromorpha, lại thể hiện khả năng kháng một số loại vi khuẩn Gram (+) và

nấm men

COOH HO

RO

1.5 Một số đặc điểm của flavonoit liên quan đến đối tượng nghiên cứu của đề tài

1.5.1 Sự phân bố flavonoit trong thực vật

Trong thực vật bậc thấp flavonoit ít được gặp Trong ngành rêu chỉ phát hiện được rất ít chất Trong dương xỉ số lượng flavonoit ít nhưng đều có mặt các nhóm anthocyanin, flavanon, flavon, chacon, dihydrochacon

Ngành hạt trần có khoảng 700 loài, 20 họ, số lượng flavonoit cũng không nhiều nhưng cũng đủ các nhóm anthocyanidin, leucoanthocyanidin, flavanon, flavon, flavonol, isoflavon Nét đặc trưng của ngành hạt trần có khác thực vật bậc thấp và ngành hạt kín ở chỗ sự hiên diện của nhiều dẫn chất biflavonoit

Flavonoit tập trung chủ yếu vào trong ngành hạt kín ở lớp 2 lá mầm

Có rất nhiều họ chứa flavonoit và đủ các loại flavonoit Tuy nhiên cũng có một vài nét đặc trưng cho một số họ; ví dụ, họ Asteraceae là một họ lớn với 15.000 loài , 1000 chi, có rất nhiều dẫn chất thuộc các nhóm khác nhau Tuy nhiên một số chi có nét đặc trưng riêng của nó; ví dụ, các chi Carthamus, Coreopsis, Cosmos, Dahlia thì hay gặp các dẫn chất chalcon và auron Chi Gymnosperma, Ageratum thì gặp các dẫn chất flavon và flavonol có nhiều nhóm thế có oxy (có thể đến 8 nhóm) Họ Fabaceae thì hay gặp các chất thuộc nhóm isoflavonoit Họ Rutaceae thường gặp các flavon và flavonol có nhiều nhóm methoxy Họ Theaceae hay gặp các flavan-3-ol Họ Raunculaceae và Paeoniaceate hay gặp các dẫn chất flavonol 3,7 diglycosid Họ Rosaceae chi Rurbus và Prunus ở trong quả hay gặp cá anthocyanin có mạch đường phân

Lớp một lá mầm có 53 họ nhưng cho đến nay chỉ khoảng trên 10 họ tìm thấy có flavonoit : Amaryllidaceae, Araceae, Cannaceae, Commelinaceae, Idrilaceae, Lemnaceae, Liliaceae, Musaceae, Orchidaceae, Poaceae

Động vật không tổng hợp được flavonoit nhưng trong một loài bướm khi phân tích thấy có flavonoit là do chúng lấy từ thức ăn thực vật

Hàm lượng và cả thành phần flavonoit trong cây phụ thuộc vào nơi mọc Cây mọc ở vùng nhiệt đới và núi cao thì hàm lượng cao hơn ở nơi thiếu ánh sáng

Các dẫn chất anthocyanidin thì màu thay đổi tùy theo độ PH của môi trường Tuy nhiên khi các flavonoit ở trong bộ phận của cây thì còn phụ thuộc vào hỗn hợp với các sắc tố khác

Độ tan không giống nhau, thường flavonoit glycozit và flavonoit sulfat

là những hợp chất phân cực nên không tan hoặc ít tan trong dung môi hữu cơ, tan được trong nước tốt nhất là cồn nước Các dẫn chất flavonoit có nhóm 7-hydroxy thường dễ tan trong dung dịch kiềm loãng

* Một số phản ứng định tính

- Tác dụng với FeCl 3 Tùy theo nhóm của flavonoit là tùy theo số lượng vị trí nhóm OH trong phần tử mà cho màu lục, xanh, nâu

- Tác dụng với kiềm Nếu hơ một tổ chức thực vật như cánh hoa, nhát

cắt của gỗ hoặc tờ giấy thấm cỡ nhỏ, dịch chiết trên miệng lọ amoniac thì có màu vàng tăng lên tùy theo nồng độ flavonoit và tùy theo nhóm flavonoit Flavon và flavonol cho màu vàng sáng, anthocyanidin cho màu xanh dương Chalcon và auron có thể cho màu đỏ và da cam Một số nhóm khác như flavan-3-ol, flavanon, isoflavan màu không thay đổi Tuy nhiên nếu thực hiện trong ống nghiệm với dung dịch alkali thì một số dẫn chất flavan-3-ol lại cho màu xanh vì dễ bị oxi hóa, còn flavonon dễ bị isomer hóa thành chalcon nên nếu để một lúc lại cho màu vàng đậm đến đỏ

- Tác dụng với NaOH đậm đặc và đun nóng (phân hủy kiềm)

Đun nóng flavonoit với dung dịch 30% KOH thì sẽ mở vòng C rồi dẫn đến tạo thành dẫn chất axit thơm và dẫn chất phenol Tùy theo nhóm thế và vị trí thế vào vòng A và B mà có các dẫn chất axit thơm và phenol khác nhau

Có thể xác định các dẫn chất này bằng phương pháp sắc kí đối chiếu với chất mẫu, kết quả thu được dùng để góp phần biện luận cấu trúc Ví dụ, khi phân hủy chất chrysin thì thu được phloroglucin, axit benzoic

- Tác dụng với H 2 SO 4 đậm đặc

Axit sunfuric khi nhỏ lên các dẫn chất flavon, flavonol thì cho màu vàng đậm Đối với chalcon và auron cho màu đỏ, đỏ thắm, đỏ tươi Flavanon cho màu đỏ cam rồi đỏ thắm, có thể do chuyển flavonon thành chalcon

- Tác dụng với antimoin pentacholorid (Phản ứng Martini Bettolo)

Dung dịch SbCl5 trong CCl4 cho màu từ đỏ đến tím với chalcon, vàng đến vàng cam với flavon Dihydrochalcon thì mất màu nối đôi liên hiệp giữa nhóm carbonyl và vòng B nên không cho màu với SbCl5 hoặc H2SO4

- Phản ứng cyanidin (Phản ứng Shinoda hay Willstater)

Đây là phản ứng khử thường được sử dụng để tìm sự có mặt của các dẫn xuất nhóm flavonoit Dung dịch flavonoit trong etanol, thêm bột Mg rồi nhỏ từ từ HCl đậm đặc Sau 1 đến 2 phút sẽ có màu đỏ cam, đỏ thắm hoặc đỏ tươi với các dẫn xuất flavon, flavonol, flavanonol, flavonon Màu sắc đôi khi

có thể bị thay đổi tùy theo loại, số lượng, vị trí nhóm thế; ví dụ, các dẫn chất methoxy flavon (Tangeretin, Nobiletin) thì âm tính Để phân biệt giữa flavonoit glycozit và aglycol của chúng, đem lắc dung dịch có màu với octanol, nếu màu ở lớp dưới lên hết ở lớp octanol, chất thử là aglycol, nếu lớp octanol không màu, chất thử là glycozit Cũng cần lưu ý rằng các dẫn chất xanthon ví dụ mangierin (có trong lá xoài) cũng dương tính với thuốc thử cyanidin

Mangiferin

- Tác dụng với chì acetat trung tính hoặc kiềm

Phản ứng thực hiện trên giấy thấm Nhiều dẫn chất flavonoit tạo thành muối hoặc phức có màu khi nhỏ thêm dung dịch chì axetat trung tính hoặc kiềm Màu phụ thuộc vào các dẫn chất flavonoit

Nếu tiến hành trong ống nghiệm, chì axetat kiềm cho tủa màu với hầu hết các flavonoit phenol còn chì axetat trung tính tạo tủa với những dẫn chất

có nhóm o-dihydroxyphenol

- Phản ứng ghép đôi muối diazoni

Các dẫn chất flavonoit có nhóm OH ở vị trí 7 có thể phản ứng với muối diazoni để tạo thành chất màu azoic vàng cam đến đỏ

1.5.3 Tác dụng sinh học của flavonoit

Các dẫn chất của flavonoit có khả năng dập tắt các gốc tự do như •OH, ROO• Các gốc này sinh ra trong tế bào bởi nhiều nguyên nhân và khi sinh ra cạnh DNA thì sẽ gây ra những ảnh hưởng nguy hại như gây ra biến dị, hủy hoại tế bào, gây ung thư, tăng nhanh sự lão hóa Thí nghiệm cho thấy khả năng dập tắt của một số flavonoit theo thứ tự:

Myricetin > quercetin > morin > diosmetin > naringenin > apigenin > catechin > 5,7 dihydroxyl-3’, 4’, 5’-trimethoxy flavon > robinin > kaempferol

> flavon

Flavonoit tạo được phức với các ion kim loại mà chính các ion kim loại này là xúc tác của nhiều phản ứng oxy hóa Các flavonoit có 3, 5, 3’, 4’-hydroxy có khả năng liên kết tốt với các ion kim loại đó theo phức

oxychromon oxycarbonyl orthodioxyphenol

Thành phần của màng tế bào có các chất lipid dễ bị peroxyt hóa, tạo ra những sản phẩm làm rối loạn sự trao đổi chất cũng dẫn đến sự hủy hoại tế bào Đưa các chất chống oxi hóa như flavonoit vào cơ thể để bảo vệ tế bào thì

có thể ngăn ngừa các nguy cơ như xơ vữa động mạch, tai biến mạch, lão hóa, tổn thương do bức xạ, thoái hóa gan

Flavonoit cùng với axit ascorbic tham gia trong quá trình hoạt động của enzym oxi hóa-khử Flavonoit còn ức chế tác động của hyaluronidazơ Enzym này làm tăng tính thẩm của mao mạch Khi enzym này thừa thì gây hiện tượng xuất huyết dưới da mà y học gọi là bệnh thiếu vitamin P (Pavitaminose) Các chế phẩm chứa flavonoit chiết từ các loài Citrus như

“Cemaflavone”, “Circularine”… Flavonoit từ lá bạc hà (diosmin) như

“Daflon”, “Diosmil”, flavonoit từ hoa hòe (rutin) với nhiều biệt dược khác nhau đã chứng minh tác dụng làm bền thành mạch, làm giảm tính “dòn” và tính thấm của mao mạch Tác dụng này được hợp lực cùng với axit ascorbic Flavonoit được dùng trong các trường hợp rối loạn chức năng tĩnh mạch, tĩnh mạch suy yếu, giãn tĩnh mạch, trĩ, chảy máu do đặt vòng trong phụ khoa, các bệnh trong nhãn khoa như sung huyết kết mạc, rối loạn tuần hoàn võng mạc Các dẫn chất anthocyanozit có tác dụng tái tạo tế bào võng mạc và đã được chứng minh có tác dụng tăng thị lực vào ban đêm

Tác dụng chống độc cua flavonoit thể hiện làm giảm thương tổn gan, bảo vệ được chức năng gan khi một số chất độc được đưa vào cơ thể súc vật

thí nghiệm (CCl4,, benzen, etanol, CHCl3, quinin, novasenol…) Dưới tác dụng của flavonoit ngưỡng ascorbic được ổn định đồng thời lượng glycogen trong gan tăng Sự tích lũy glycogen có ý nghĩa quan trọng trong việc nâng cao chức năng giải độc gan

Việc sử dụng một số dược liệu trong điều trị viêm gan, xơ gan, bảo vệ

tế bào gan rất hiệu quả như : cây actiso, có biệt dược là Chophytol Cây

Silibum marianum Gaertn có biệt dược là Chophytol Cây Silibum marianum Gaertn có biệt dược “Leganlon”; cây bụt dấm-Hibiscus sabdariffa

Tác dụng kích thích tiết mật thể ở các chất thuộc nhóm flavanon, flavon, flavonol và flavan-3-ol

Flavonoit thể hiện tác dụng chống co thắt những tổ chức cơ nhẵn (túi mật, ống dẫn mật, phế quản và một số tổ chức khác) Ví dụ, apigenin có tác dụng làm giảm co thắt phế quản gây ra bởi histamin, axetylcholin, seretonin Trên bộ máy tiết niệu, nhiều flavonoit thuộc nhóm flavon, flavonol thể

hiện tác dụng thông tiểu rõ rệt Scoparosid trong Sarothamnus scoparius, lespecapitosid trong Lespedeza capitata, quercitrin trong lá diếp cá, flavonoit

của cây râu mèo đều có tác dụng thông tiểu

Tác dụng chống loét của flavanon và chalcon glycozit của rễ cam thảo

đã được ứng dụng để chữa đau dạ dầy một số dẫn chất khác như catechin, O-methyl catechin, naringenin cũng đã được thử thấy có tác dụng chống loét Tác dụng chống viêm của nhiều flavonoit thuộc các nhóm flavon, flavanon, dihydroflavonol, anthocyanin, flavan-3-ol, chaleon, isoflavon,

3-Người ta sử dụng rutin, citrin, leucodelphinidin, quercetin, catechin để điều trị ban đỏ, viêm da, tổn thương da và màng nhầy trong trường hợp xạ trị Trên hệ tim mạch , nhiều flavonoit thuộc nhóm flavonol, flavan-3-ol, anthocyanin như quercetin, rutin, myricetin, pelargonin, hỗn hợp catechin của trà có tác dụng làm tăng biên độ co bóp và tăng thể tích phút của tim, thí nghiệm làm hồi phục tim khi bị ngộ độc bởi CHCl3, quinin, metanol, bình thường lại sự rối loạn nhịp

Cao chiết từ lá cây bạch quả, Ginko biloha chứa các dẫn chất

3-rutinosid của kaempferol, quercetin và isorhammetin (trong lá già đã vàng thì chứa ginkgetin và isoginkgetin) đã được một số hãng của Pháp bào chế thành biệt dược; ví dụ, “Ginkogink”, “Tanakan” có tác dụng tăng tuần hoàn máu trong động mạch, tĩnh mạch và mao mạch Thuốc dùng cho những người có biểu hiện lão suy: rối loạn trí nhớ, khả năng làm việc bằng trí óc sút kém, mất tập trung tư tưởng, hay cáu gắt

Trên hệ thần kinh, một số C-flavon glycozit của hạt táo, Ziziphus vulgais var.spinosus (chứa spinosin, swertisin và các dẫn chất acyl của

spinosin) có tác dụng an thần rõ rệt

Một số tài liệu gần đây có nói đến tác dụng chống ung thư của một số chất như leucocyanidin, leucopelargonidin, leucodelphinidin và tác dụng kháng HIV của một số dẫn chất thuộc nhóm flavon như chrysin, acacetin 7-O-β-D-galactopyranosid

Các dẫn chất thuộc nhóm isoflavonoit có tác dụng estrogen ví dụ genistein (=5, 7, 4’ trihydroxyisoflavon) daizein (=7, 4’ dihydroxyisoflavon) Tác dụng này được giải thích do sự gần nhau về cấu trúc với diethylstillboestrol