Nghiên cứu các hợp chất thành phần nhằm góp phần đánh giá tác dụng điều trị tiểu đường của cây Vối (Cleistocalyx operculatus Roxb. Merr. Et Perry)

ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƢỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN - Vũ Thị Thu Phƣơng NGHIÊN CỨU CÁC HỢP CHẤT THÀNH PHẦN NHẰM GÓP PHẦN ĐÁNH GIÁ TÁC DỤNG ĐIỀU TRỊ TIỂU ĐƢỜNG CỦA CÂY VỐI (CLEISTOCALYX OPERCULATUS ROXB MERR ET PERRY) Chuyên ngành: Hóa hữu Mã số: 60440114 TÓM TẮT LUẬN VĂN THẠC SĨ HÓA HỌC Hà Nội – 2016 Luận văn hoàn thành Khoa Hóa học – Trƣờng Đại học khoa học tự nhiên Hà Nội Người hướng dẫn khoa học: 1) PGS TS Phan Minh Giang 2) TS Trƣơng Thị Tố Chinh Phản biện 1: PGS TS Lê Tuấn Anh Phản biện 2: PGS TS Trần Thu Hương Luận văn bảo vệ trước Hội đồng đánh giá luận văn cấp Trường họp khoa Hóa học Đại học Khoa học Tự nhiên-Đại học Quốc gia Hà Nội Vào hồi 14 30, ngày 29 tháng 07 năm 2016 I- GIỚI THIỆU LUẬN VĂN Mở đầu Đái tháo đường bệnh mãn tính nội tiết mức glucose cao máu Chất peptid hocmon insulin thể chuyển hóa đường, tinh bột thực phẩm khác thành lượng, chất không tạo thành sử dụng hợp lý dẫn đến bệnh đái tháo đường dạng I II Ở dạng I thể tạo thành insulin, dạng II kết từ kháng insulin Điều trị bệnh tiểu đường dạng II thường sử dụng thuốc insulin, sulphonyl urea, biguanide, metformin, acarbose, thiazolidinedion, ví dụ acarbose thuốc ức chế enzym thủy phân cacbohydrat αglucosidase, qua làm chậm giảm hấp thu tiêu hóa cacbohydrat Các tài liệu dược lý học dân tộc cho thấy giới có khoảng 800 thuốc ghi nhận có tác dụng điều trị đái tháo đường dạng II, số kiểm chứng qua thử nghiệm sinh học không nhiều, hoạt chất thuộc nhóm flavonoid, terpenoidsteroid, alkaloid, cacbohydrat, amino acid phát qua số mô hình thử nghiệm in vitro in vivo Y học dân gian Việt Nam ghi nhận vài thuốc tác dụng lên bệnh đái tháo đường dạng II Mướp đắng (Momordica charantia L.) thuộc họ Cucurbitaceae, Ổi (Psidium guajava L.), Chuối hột (Musra barjoo Sieb.) thuộc họ Musaceae, Dây thìa canh (Gymnema sylvestre), Xoài (Mangifera indica L.) thuộc họ Anacardiaceae, Quế (Cinnamomum cassia Bl.) thuộc họ Lauraceae, Vối (Cleistocalyx operculatus (Roxb.)Merr & Perry) thuộc họ Sim (Myrtaceae) Vối lớn mọc nhiều vùng nông thôn miền Bắc, có nụ dùng để sắc nước uống Một vài nghiên cứu sàng lọc hoạt tính hạ đường huyết máu cao chiết từ nụ Vối qua tác dụng ức chế enzym α-glucosidase công bố năm gần cho thấy sở khoa học ghi chép dân gian Tuy nhiên cần có thêm chứng cớ khoa học liên kết tác dụng với chất thành phần có hỗn hợp phức tạp cao chiết từ nụ Vối Nếu phát hoạt chất ảnh hưởng đến bệnh đái tháo đường sử dụng hợp lý thuốc đưa ra, dựa phân tích cẩn thận định tính định lượng hoạt chất liều lượng thuốc chứa lượng đủ hoạt chất sử dụng Các nghiên cứu hóa học Vối Việt Nam thực thiếu hệ thống chưa tương quan thành phần hóa học với việc điều trị bệnh đái tháo đường, đó, khuôn khổ luận văn thạc sĩ nghiên cứu thực với mục tiêu góp phần hệ thống hóa thành phần hóa học có Vối liên hệ chúng với tác dụng chữa bệnh đái tháo đường Vối Nhiệm vụ nghiên cứu Hệ thống hóa thành phần hóa học có Vối (Cleistocalyx operculatus (Roxb.) Merr et Perry) qua phân tách sắc ký nghiên cứu cấu trúc liên hệ hợp chất thành phần với tác dụng chữa bệnh đái tháo đường Vối Các nội dung nghiên cứu luận văn là: Thực qui trình chiết etanol etanol-nước để điều chế cao chiết có tác dụng ức chế enzym α-glucosidase từ Vối Phân tách sắc ký phân tích điều chế để phân lập hợp chất thành phần có phần chiết etanol etanol-nước từ Vối Xác định cấu trúc hợp chất phân lập phương pháp phổ đại MS NMR Liên hệ hợp chất phân lập với tác dụng lên bệnh đái tháo đường Vối Ý nghĩa khoa học đóng góp luận văn 3.1 Ý nghĩa khoa học - Luận văn đóng góp hiểu biết thành phần hóa học Vối (Cleistocalyx operculatus (Roxb.) Merr et Perry) - Luận văn ứng dụng phương pháp vật lí đại nghiên cứu cấu trúc hóa học hợp chất phân lập - Luận văn liên hệ hoạt tính ức chế enzym α-glucosidase hợp chất phân lập từ Vối với công dụng dược cổ truyền Vối 3.2 Những đóng góp luận văn - Luận văn xây dựng quy trình chiết với etanol etanol-nước để điều chế phần chiết có hoạt tính ức chế enzym α-glucosidase từ Vối trồng Hưng Yên, từ phân lập sắc ký xác định cấu trúc 10 hợp chất thành phần chính: 1-tetratriacontanol (CO1), 2',4'-dihydroxy-6'-metoxy-3',5'-dimetylchalcon (CO2), β-sitosterol (CO3), betulin (CO4), axit betulinic (CO5), axit oleanolic (CO6), axit maslinic (CO7), kaempferol (CO8), quercetin (CO9), axit arjunolic (CO10) - Luận văn lần phân lập chất 1-tetratriacontanol (CO1), betulin (CO4), axit maslinic (CO7), axit arjunolic (CO10) từ Cleistocalyx operculatus - Trong số chất phân lập 9/10 chất chứng tỏ hoạt tính ức chế tốt enzym α-glucosidase qua góp phần giải thích tác dụng ức chế enzym αglucosidase dịch chiết etanol etanol-nước tác dụng điều trị tiểu đường Vối Y học cổ truyền Bố cục luận văn Luận văn dày 55 trang với bảng số liệu, sơ đồ, hình 49 tài liệu tham khảo trình bày sau: Mục lục, danh mục ký hiệu chữ viết tắt, danh mục sơ đồ, bảng hình, danh mục phụ lục Mở đầu (2 trang) Chương 1: Tổng quan (15 trang) Chương 2: Thực nghiệm (8 trang) Chương 3: Kết thảo luận (19 trang) Kết luận (1 trang) Tài liệu tham khảo phụ lục phổ II- NỘI DUNG LUẬN VĂN MỞ ĐẦU Phần mở đầu đề cập đến ý nghĩa khoa học, tính thực tiễn, đối tượng nhiệm vụ nghiên cứu luận văn CHƢƠNG TỔNG QUAN Giới thiệu chi Cleistocalyx thuộc họ Sim-Myrtaceae Vối (Cleistocalyx operculatus Roxb Merr et Perry) Giới thiệu nghiên cứu thực vật, công dụng dược cổ truyền, hoạt tính sinh học, thành phần hóa học chi Cleistocalyx CHƢƠNG THỰC NGHIỆM 2.1 HÓA CHẤT VÀ THIẾT BỊ 2.2 PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.2.1 Phương pháp xử lý mẫu điều chế phần chiết Mẫu phơi bóng râm đến gần khô sau sấy nhiệt độ 45 oC đến khối lượng không đổi xay thành bột nguyên liệu Bột nguyên liệu khô ngâm chiết lần với etanol 96% etanol/nước 60% nhiệt độ phòng Các dịch chiết gộp lại, cất loại dung môi áp suất giảm thu phần chiết etanol etanol-nước Cao thô sau hòa nước chiết chọn lọc theo độ phân cực dung môi, n-hexan, diclometan etyl axetat để thu phần chiết tương ứng 2.2.2 Các phương pháp phân tích phân lập hợp chất 2.2.2.1 Sắc ký lớp mỏng (TLC) 2.2.2.2 Sắc ký cột (CC, FC Mini-C) 2.2.2.3 Kết tinh lại 2.2.3 Các phương pháp xác định cấu trúc hợp chất Đã sử dụng kết hợp phương pháp phổ khối lượng ion hóa phun bụi điện tử (ESI-MS), phổ hồng ngoại (IR), phổ cộng hưởng từ hạt nhân chiều (1D NMR) phổ cộng hưởng từ hạt nhân chiều (2D NMR) để xác định cấu trúc hợp chất phân lập 2.2.4 Nguyên liệu thực vật Mẫu Vối (Cleistocalyx operculatus Roxb Merr et Perry) thu hái vào tháng năm 2013 Như Quỳnh, Văn Lâm, Hưng Yên Mẫu phơi bóng râm đến gần khô sau sấy nhiệt độ 45 oC đến khối lượng không đổi xay thành bột mịn 2.2.5 Phương pháp điều chế phần chiết 2.2.5.1 Điều chế phần chiết etanol từ vối Ngâm kg mẫu nguyên liệu bột vối khô etanol 96o thu phần chiết etanol thô Phần chiết etanol thô hòa nước chiết với dung môi n-hexan, diclometan etyl axetat để thu phần chiết tương ứng 2.2.5.2 Điều chế phần chiết etanol-nước từ vối Bột Vối khô (160 g) ngâm chiết với hỗn hợp etanol/nước 60% Dịch chiết EtOH/nước cất loại dung môi áp suất giảm, cặn chiết hòa với nước cất chiết với n-hexan, CH2Cl2 EtOAc cho phần chiết tương ứng 2.2.6 Phân tách phần chiết etanol từ vối 2.2.6.1 Phân tách phần chiết n-hexan 2.2.6.2 Phân tách phần chiết diclometan 2.2.6.3 Phân tách phần chiết etyl axetat 2.2.7 Phân tách phần chiết etanol-nước từ vối 2.2.8 Hằng số vật lý liệu phổ chất phân lập Chất CO1 (1-Tetratriacontanol) Bột vô định hình màu trắng Rf = 0,3 (TLC, silica gel, n-hexan-etyl axetat 9:1, v/v) ESI-MS: m/z 493 ([M - H]-) (C34H70O) H-NMR (CDCl3): δ 0,88 (3H, t, J = 7,0 Hz, 34-CH3), 1,26 (62H, s br, 3- CH233-CH2), 1,57 (2H, m, 2-CH2), 3,61 (2H, t, J = 7,0 Hz, 1-CH2) Chất CO2 (2',4'-Dihydroxy-6'-metoxy-3',5'-dimetylchalcon) Tinh thể hình kim màu da cam, đ.n.c 125-126 oC Rf = 0,4 (TLC, silica gel, n-hexan-etyl axetat 7:1, v/v) ESI-MS: m/z 299 ([M + H] +), 297 ([M - H]-) (C18H18O4) H-NMR (CDCl3): δ 2,07 (3H, s, 3-CH3), 2,12 (3H, s, 5-CH3), 3,65 (3H, s, 6- OCH3), 7,39 (3H, m, H-3, H-4, H-5), 7,63 (2H, dd, J = 8,0 Hz, 2,0 Hz, H-2, H-6), 7,83 (1H, d, J = 15,5 Hz, Hα), 7,97 (1H, d, J = 15,5 Hz, Hβ), 13,6 (1H, s, 2'-OH) Chất CO3 (β-Sitosterol) Tinh thể hình que màu trắng, đ.n.c 134-135 oC Rf = 0,34 (TLC, silica gel, n-hexan-etyl axetat 4:1, v/v) Chất CO4 (Betulin) Bột vô định hình màu trắng Rf = 0,32 (TLC, silica gel, n-hexan-etyl axetat 4:1, v/v) ESI-MS: m/z 443 ([M + H] +) (C30H50O2) H-NMR (CDCl3): δ 0,76 (3H, s, 4-CH3), 0,83 (3H, s, 10-CH3), 0,97 (3H, s, 14- CH3), 0,98 (3H, s, 4-CH3), 1,02 (3H, s, 8-CH3), 1,68 (3H, s, 20-CH3), 2,38 (1H, ddd, J = 11,0 Hz, 11,0 Hz, 6,0 Hz, H-19), 3,18 (1H, dd, J = 11,0 Hz, 5,0 Hz, H-3), 3,33 (1H, d, J = 11,0 Hz, H-28a), 3,79 (1H, d, J = 11,0 Hz, H-28b), 4,58 (1H, d, J = 1,5 Hz, H29a), 4,68 (1H, s br, H-29b) Chất CO5 (Axit betulinic) Tinh thể hình que màu trắng, đ.n.c 270-272 oC Rf = 0,43 (TLC, silica gel, diclometan-etyl axetat 15:1, v/v) ESI-MS: m/z 457 ([M + H] +), 455 ([M - H]-) (C30H48O3) H-NMR (CDCl3 + CD3OD):  0,75 (3H, s, 4-CH3), 0,83 (3H, s, 10-CH3), 0,95 (3H, s, 14-CH3), 0,96 (3H, s, 4-CH3), 0,98 (3H, s, 8-CH3), 1,71 (3H, s, 20-CH3), 3,01 (1H, m, H-19), 3,16 (1H, dd, J = 8,5 Hz, 7,5 Hz, H-3), 4,59 (1H, s, H-29a), 4,72 (1H, s, H-29b) Chất CO6 (Axit oleanolic) Tinh thể hình que màu trắng, đ.n.c 264-265 oC Rf = 0,35 (TLC, silica gel, diclometan-etyl axetat 9:1, v/v) ESI-MS: m/z 457 ([M + H] +), 455 ([M - H]-) (C30H48O3) H-NMR (CDCl3):  0,77 (3H, s, 26-CH3), 0,78 (3H, s, 23-CH3), 0,90 (3H, s, 25-CH3), 0,91 (3H, s, 29-CH3), 0,93 (3H, s, 30-CH3), 0,98 (3H, s, 24-CH3), 1,14 (3H, s, 27-CH3), 2,83 (1H, dd, J = 13,5 Hz, 4,0 Hz, H-18), 3,20 (1H, dd, J = 10,0 Hz, 6,0 Hz, H-3), 5,27 (1H, t, J = 3,5 Hz, H-12) 13 C-NMR/DEPT (CDCl 3):  15,2 (q, C-24), 15,4 (q, C-25), 16,8 (q, C-26), 18,2 (t, C-6), 22,9 (t, C-11), 23,3 (t, C-16), 23,4 (q, C-30), 25,7 (q, C-27), 26,8 (t, C-2), 27,6 (t, C-15), 27,9 (q, C-23), 30,6 (s, C-20), 32,4 (t, C-22), 32,6 (t, C-7), 32,9 (q, C29), 33,8 (t, C-21), 36,9 (s, C-10), 38,4 (t, C-1), 38,6 (s, C-4), 39,2 (s, C-8), 41,1 (d, C-18), 41,6 (s, C-14), 45,9 (t, C-19), 46,3 (s, C-17), 47,5 (d, C-9), 55,1 (d, C-5), 78,8 (d, C-3), 122,2 (d, C-12), 143,7 (s, C-13), 181,3 (s, C-28) Chất CO7 (Axit maslinic) Tinh thể hình que màu trắng Rf = 0,48 (TLC, silica gel, diclometan-axeton 4:1, v/v) ESI-MS: m/z 473 ([M + H] +), 471 ([M - H]-) (C30H48O4) H-NMR (CDCl3):  0,79 (3H, s, 26-CH3), 0,81 (3H, s, 24-CH3), 0,91 (3H, s, 29-CH3), 0,93 (3H, s, 30-CH3), 0,98 (3H, s, 25-CH3), 1,02 (3H, s, 23-CH3), 1,15 (3H, s, 27-CH3), 2,83 (1H, dd, J = 13,5 Hz, 4,0 Hz, H-18), 2,95 (1H, d, J = 10,5 Hz, H-2), 3,65 (1H, ddd, J = 11,0 Hz, 10,0 Hz, 4,5 Hz, H-3), 5,28 (1H, s br, H-12) Chất CO8 (Kaempferol) Tinh thể hình que màu vàng, đ.n.c 276-278 oC Rf = 0,67 (TLC, silica gel, diclometan-axeton 4:1, v/v) ESI-MS: m/z 287 ([M + H] +), 285 ([M - H]-) (C15H10O6) H-NMR (CD3OD): δ 6,19 (1H, d, J = 1,0 Hz, H-6), 6,41 (1H, s br, H-8), 6,92 (2H, d, J = 8,5 Hz, H-2, H-6), 8,1 (2H, d, J = 8,5 Hz, H-3, H-5) 13 C-NMR/DEPT (CD3OD): δ 94,5 (d, C-8), 99,3 (d, C-6), 104,6 (s, C-10), 116,3 (d, C-3, C-5), 123,7 (s, C-1), 130,7 (d, C-2, C-6), 137,1 (s, C-3), 148,1 (s, C2), 158,3 (s, C-9), 160,5 (s, C-4), 162,5 (s, C-5), 165,6 (s, C-7), 177,4 (s, C-4) Chất CO9 (Quercetin) Tinh thể hình que màu vàng, đ.n.c 295-297 oC Rf = 0,4 (TLC, silica gel, diclometan-axeton 4:1, v/v) ESI-MS: m/z 303 ([M + H] +), 301 ([M - H]-) (C15H10O7) H-NMR (CD3OD): δ 6,21 (1H, d, J = 2,0 Hz, H-6), 6,41 (1H, d, J = 2,0 Hz, H- 8), 6,9 (1H, d, J = 9,0 Hz, H-5), 7,65 (1H, dd, J = 9,0 Hz, 2,0 Hz, H-6), 7,75 (1H, d, J = 2,0 Hz, H-2) Chất CO10 (Axit arjunolic) Tinh thể hình que màu trắng Rf = 0,5 (TLC, silica gel, diclometan-metanol 9:1, v/v) H-NMR (CDCl3):  0,72 (3H, s, 26-CH3), 0,86 (3H, s, 24-CH3), 0,95 (3H, s, 29- CH3), 0,98 (3H, s, 30-CH3), 1,10 (3H, s, 25-CH3), 1,22 (3H, s, 27-CH3), 2,87 (1H, dd, J = 12,0 Hz, 4,0 Hz, H-18), 3,29 (1H, d, J = 11,0 Hz, H-23a), 3,37 (1H, d, J = 9,5 Hz, H-3), 3,54 (1H, d, J = 11,0 Hz, H-23b), 3,71 (1H, ddd, J = 11,5 Hz, 9,5 Hz, 4,5 Hz, H-2), 5,28 (1H, t, J = 3,5 Hz, H-12) 13 C-NMR/DEPT (CDCl3):  13,9 (q, 24-CH3), 17,5 (q, 26-CH3), 17,8 (q, 25-CH3), 19,1 (t, C-6), 23,9 (t, C-16), 24,0 (t, C-30), 24,6 (t, C-11), 26,5 (q, C-27), 28,8 (t, C-15), 31,6 (s, C-20), 33,3 (t, C-22), 33,4 (s, C-29), 33,8 (t, C-7), 34,8 (t, C-21), 39,0 (s, C-8, C10), 42,7 (d, C-18), 43,0 (s, C-14), 44,1 (s, C-4), 47,2 (t, C-19), 47,6 (s, C-17), 47,8 (t, C1), 48,1 (d, C-9), 48,9 (d, C-5), 66,2 (t, C-23), 69,9 (d, C-2), 78,1 (d, C-3), 123,4 (d, C12), 145,4 (s, C-13), 181,8 (s, C-28) CHƢƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 3.1 NGUYÊN LIỆU THỰC VẬT Mẫu Vối (Cleistocalyx operculatus Roxb Merr et Perry) thu hái vào tháng năm 2013 Như Quỳnh, Văn Lâm, Hưng Yên 3.2 ĐIỀU CHẾ CÁC PHẦN CHIẾT TỪ LÁ VỐI kg mẫu nguyên liệu vối khô ngâm chiết etanol 96 o thu phần chiết etanol (127,5 g; 12,75% so với lượng nguyên liệu khô) phần chiết n- 30 29 20 19 12 25 18 26 22 13 11 21 17 COOH 14 10 16 28 15 27 HO 24 23 Axit oleanolic – CO6 Axit oleanolic phân lập từ nụ Vối Việt Nam Axit oleanolic chứng minh có hoạt tính ức chế enzym α-glucosidase với giá trị IC50 6,1±0,3 µg/ml [10] ♦ Chất CO7 (Axit maslinic) Hợp chất CO7 phân lập từ phần chiết diclometan Vối dạng tinh thể hình que màu trắng, R f = 0,48 (TLC, silica gel, diclometan-axeton 4:1, v/v) 30 29 19 12 13 11 25 26 HO 10 22 17 COOH 16 21 18 14 28 15 HO 20 27 23 24 Axit maslinic – CO7 Chất phân lập từ nụ Vối Việt Nam Axit maslinic chứng minh có hoạt tính ức chế tốt enzym α-glucosidase với giá trị IC50 5,52±0,19 µg/ml [23] ♦ Chất CO8 (Kaempferol) Hợp chất CO8 phân lập từ phần chiết etyl axetat Vối dạng tinh thể hình que màu vàng, đ.n.c 276-278 oC, Rf = 0,67 (TLC, silica gel, diclometanaxeton 4:1, v/v) 3' 4' 2' HO 1' O OH 5' 6' 10 OH OH O Kaempferol – CO8 Kaempferol phân lập từ nụ Vối Việt Nam Kaempferol chứng minh có hoạt tính ức chế enzym α-glucosidase với giá trị IC50 55±5 mM (8,41µg/ml) [10] ♦ Chất CO9 (Quercetin) Hợp chất CO9 phân lập từ phần chiết etyl axetat Vối dạng tinh thể hình que màu vàng, đ.n.c 295-297 oC, Rf = 0,4 (TLC, silica gel, diclometanaxeton 4:1, v/v) OH 3' 2' HO O OH 4' 1' 5' 6' 10 OH OH O Quercetin – CO9 Quercetin phân lập từ nụ Vối Việt Nam Quercetin chứng minh có hoạt tính ức chế enzym α-glucosidase tốt với giá trị IC50 29,4 mM (8,88 µg/ml) [26] ♦ Chất CO10 (Axit arjunolic) Hợp chất CO10 phân lập từ phần chiết etanol-nước Vối dạng tinh thể hình que màu vàng, đ.n.c 295-297 oC, Rf = 0,4 (TLC, silica gel, diclometan-axeton 4:1, v/v) 30 29 19 12 25 HO 11 16 COOH 28 15 22 17 14 HO 18 13 26 21 20 27 23 24 OH Axit arjunolic – CO10 Axit arjunolic ức chế enzym α-glucosidase với giá trị IC50 45,0±3,6 µg/ml [43] Chất chưa phân lập từ Cleistocalyx operculatus 3.5 TỔNG KẾT CÁC HỢP CHẤT ĐƢỢC PHÂN LẬP ♦ Chất CO1 (1-Tetratriacontanol) OH CH3 ♦ Chất CO2 (2',4'-Dihydroxy-6'-metoxy-3',5'-dimetyl-chalcon) OH O 2' 1' H3C 3' 4' HO 5' α β 6' O CH3 CH3 ♦ Chất CO3 (β-Sitosterol) 29 28 21 26 18 24 20 25 12 19 H 17 13 27 10 H H HO ♦ Chất CO4 (Betulin) 29 20 30 12 25 11 HO 24 ♦ Chất CO5 (Axit betulinic) 22 OH 17 28 15 27 23 18 14 10 H 13 21 19 29 30 20 21 19 H 12 22 11 25 26 10 13 14 18 17 COOH 28 16 15 27 HO 24 23 ♦ Chất CO6 (Axit oleanolic) 30 29 19 12 13 11 25 26 10 COOH 16 15 27 23 22 17 24 ♦ Chất CO7 (Axit maslinic) 21 18 14 HO 20 28 30 29 20 19 12 25 18 26 17 COOH 14 HO 22 13 11 16 10 21 28 15 27 HO 24 23 ♦ Chất CO8 (Kaempferol) 3' 4' 2' HO 1' O OH 5' 6' 10 OH OH O ♦ Chất CO9 (Quercetin) OH 3' 2' HO O 4' 1' 5' 6' 10 OH O OH OH ♦ Chất CO10 (Axit arjunolic) 30 29 19 12 11 25 HO 23 16 COOH 28 15 22 17 14 18 26 HO 13 21 20 27 24 OH Bảng 1: Hoạt tính ức chế enzym α-glucosidase hợp chất phân lập từ Vối TT Tên chất 1-Tetratriacontanol (CO1) Ghi Lần Giá trị IC50 (µg/ml) - phân lập 2',4'-Dihydroxy-6'-metoxy-3',5'- 4,3 ± 0,2 [10] dimetylchalcon (CO2) β-Sitosterol (CO3) Betulin (CO4) Axit betulinic (CO5) 3,6 ± 0,5 [10] Axit oleanolic (CO6) 6,1 ± 0,3 [10] Axit maslinic (CO7) Kaempferol (CO8) 8,41 [10] Quercetin (CO9) 8,88 [26] 10 Axit arjunolic (CO10) 283,67 [37] Lần phân lập Lần phân lập Lần phân lập KẾT LUẬN 10,02 ± 1,24 [41] 5,52 ± 0,19 [23] 45,0 ± 3,6 [43] Luận văn “Nghiên cứu hợp chất thành phần nhằm góp phần đánh giá tác dụng điều trị tiểu đường Vối (Cleistocalyx operculatus Roxb Merr et Perry)” thực đầy đủ nhiệm vụ nghiên cứu đặt Trong trình thực đề tài, thu kết nghiên cứu sau: Đã lựa chọn quy trình chiết với etanol etanol-nước để điều chế từ Vối phần chiết có hoạt tính ức chế enzym α-glucosidase phân tách sắc ký để phân lập 10 hợp chất thành phần nhằm đánh giá ảnh hưởng chúng đến tác dụng điều trị tiểu đường Vối Sử dụng phương pháp phổ đại ESI-MS, H-NMR, 13 C-NMR, DEPT xác định cấu trúc chất phân lập 1-tetratriacontanol (CO1), 2',4'-dihydroxy-6'-metoxy-3',5'-dimetylchalcon (CO2), β-sitosterol (CO3), betulin (CO4), axit betulinic (CO5), axit oleanolic (CO6), axit maslinic (CO7), kaempferol (CO8), quercetin (CO9), axit arjunolic (CO10) Trong số chất phân lập có flavonoid: CO2, CO8, CO9; triterpenoid: CO4, CO5, CO6, CO7, CO10; ancol mạch dài: CO1 steroid: CO3 Các chất 1-tetratriacontanol (CO1), betulin (CO4), axit maslinic (CO7), axit arjunolic (CO10) lần phân lập từ Cleistocalyx operculatus Trong số chất phân lập 9/10 chất chứng tỏ hoạt tính ức chế tốt enzym α-glucosidase qua góp phần giải thích tác dụng ức chế enzym αglucosidase dịch chiết etanol etanol-nước tác dụng điều trị tiểu đường Vối Y học cổ truyền Các công trình công bố liên quan đến luận văn Phan Minh Giang, Truong Thi To Chinh, Vu Thi Thu Phuong, A new taraxastane-type triterpenoid from Cleistocalyx operculatus, Natural Product Communications, Vol 29, No 1, 29-30 (2016) TÀI LIỆU THAM KHẢO TIẾNG VIỆT Võ Văn Chi, Vũ Văn Chuyên, Lê Khả Kế (1971),Cây cỏ thường thấy Việt Nam (II), NXB Khoa học Kỹ thuật, Hà Nội Trương Thị Tố Chinh (2014), “ Nghiên cứu quy trình công nghệ chiết tách tạo chế phẩm từ cao chiết chứa hoạt chất có khả ức chế α-glucosidase từ Vối (Cleistocalyx operculatus Roxb Merr.Et Perry) sử dụng hỗ trợ điều trị tiểu đường”, Đề tài nghiên cứu & phát triển, Bộ Công thương, Hà Nội Lê Thị Anh Đào, Nguyễn Xuân Dũng, Hoàng Văn Lựu (1997),“Nghiên cứu thành phần hoá học vối Việt Nam”,Tạp chí Khoa học, 3, 47-51 4.Lê Trần Đức (1997), Cây thuốc Việt Nam,NXB Y học Hà Nội, 514-515 Phạm Hoàng Hộ (1994),Cây cỏ Việt Nam (II),NXB Trẻ, Thành phố Hồ Chí Minh Đào Thị Thanh Hiền, Phạm Thanh Kỳ(2003),“Nghiên cứu số tác dụng sinh học Vối”, Tạp chí Dược học, 3,22-23 7.https://vi.wikipedia.org/wiki/V%E1%BB%91i (truy cập tháng 12/2015) Đỗ Tất Lợi (1999),Những thuốc vị thuốc Việt Nam, NXB Y học, Hà Nội,423 Nguyễn Đức Minh (1972),Tính kháng khuẩn thuốc Việt Nam,NXB Y học, Hà Nội 10 Hà Thị Bích Ngọc (2011), “Điều tra nghiên cứu số thực vật Việt Nam có tác dụng hỗ trợ điều hòa lượng đường máu để ứng dụng cho bệnh nhân đái tháo đường type 2”, Luận án Tiến sĩ Sinh học, Trường Đại học Khoa học Tự nhiên, Đại học Quốc gia Hà nội 11.Viện điều tra quy hoạch (1982), Cây gỗ rừng Việt Nam, NXB Nông nghiệp, Hà Nội TIẾNG ANH 12 Amor E C., Villasenor I M., Yasin A., Choudhary M I (2004), “Prolyl endopeptidase inhibitors from Syzygium samarangense (Blume) Merr & L M Perry”, Z Naturforsch., 59c, 86-92 13 Ayatollahi A M., Ghanadian M., Afsharypour S., Abdella O M., Mirzai M., Askari G (2011), “Pentacyclic triterpenes in Euphorbia microsciadia with their T-cell proliferation activity”, Iranian Journal of Pharmaceutical Research, 10, 287-294 14 Bajpai V K., Dung N T., Suh H I., Kang S C (2010), “Antibacterial Activity of Essential Oil and Extracts of Cleistocalyx operculatus Buds Against the Bacteria of Xanthomonasspp.”, Journal of the American Oil Chemists' Society, 87 (11), 1341-1349 15 Benalla W., Bellahcen S., Bnouham M (2010), “Antidiabetic medicinal plants as a source of alpha glucosidase inhibitors”, Current Diabetes Reviews, (4), 247-254 16 CharoensinS., TayaS., WongpornchaiS., WongpoomchaiR (2012), “Assessment of genotoxicity and antigenotoxicity of an aqueous extract of Cleistocalyx nervosum var paniala in in vitro and in vivo models”, Interdiscip Toxicol.,5(4),201-206 17 Chen L S., OuJ J., LiS Y., LuS G.(2014), “Study on quantitative methods of Cleistocalycis operculatus cortex”,Zhongguo Zhong Yao Za Zhi,39(16), 3128-3130 18.Choi J W., Kim M., Song H., Lee C S., Oh W K., Mook-Jung I., Chung S S., Park K S (2016), “DMC (2',4'-dihydroxy-6'-methoxy-3',5'-dimethylchalcone) improves glucose tolerance as a potent AMPK activator”,Metabolism, 65 (4), 533542 19 Dao T T., Tung B T., Nguyen P H., Thuong P T., Yoo S S., Kim E H (2010), “C-Methylated Flavonoids from Cleistocalyx operculatus and Their Inhibitory Effects on Novel Influenza A (H1N1) Neuraminidase”, J Nat Prod 73, 1636-1642 20 Dung N T., Bajpai V K., Yoon J I., Kang S C (2009), “Anti-inflammatory effects of essential oil isolated from the buds of Cleistocalyx operculatus (Roxb.) Merr and Perry”,Food Chem Toxicol.,47(2), 449-453 21 Dung N T., Kim J M., Kang S C.(2008), “Chemical composition, antimicrobial and antioxidant activities of the essential oil and the ethanol extract ofCleistocalyx operculatus (Roxb.) Merr and Perry buds”,Food Chem Toxicol., 46(12), 3632-3639 22 Guvenalp Z., Ozbe H K., Kuruuzum-Uz A., Kazaz C., Demirezer L O (2009), “Secondary metabolites from Nepeta heliotropifolia”, Turk J Chem., 33, 667-675 23 Hou W., Li Y., Zhang Q., Wei X., Peng A., Chen L., Wei Y (2009), Triterpene acids isolated from Lagerstroemia speciosa leaves as α-glucosidase inhibitors, Phytotherapy Research, 23 (5), 614–618 24.Hu Y C., Hao D M., Zhou L X., Zhang Z., Huang N., Hoptroff M., Lu Y H (2014), “2',4'-Dihydroxy-6'-methoxy-3',5'-dimethylchalcone secretion induced by glucotoxicity in protects pancreatic the impaired β-cells”,J Agric insulin Food Chem.,62(7),1602-1608 25 Huang H Y., Niu J L., Lu Y H (2012), “Multidrug resistance reversal effect of DMC derived from buds of Cleistocalyx operculatus in human hepatocellular tumor xenograft model”,J Sci Food Agric.,92(1), 135-140 26 Kumar S., Narwal S., Kumar V., Prakash O (2011), “α-Glucosidase inhibitor from plants: A natural approach to treat diabetes”, Pharmacognosy Review, (9), 19-29 27.Lu Y H., Du C B., Wu Z B., Ye C L., Liu J W., Wei D Z (2003), “Protective effects of Cleistocalyx operculatus on lipid peroxidation and trauma of neuronal cells” Zhongguo Zhong Yao Za Zhi,28(10), 964-966 28 Luo Y., Lu Y (2012), “2',4'-Dihydroxy-6'-methoxy-3',5'-dimethylchalcone inhibits apoptosis of MIN6 cells via improving mitochondrial function”,Pharmazie, 67(9), 798-803 29 Mai T T., Yamaguchi K., Yamanaka M., Lam N T., Otsuka Y., Chuyen N V (2010), “Protective and anticataract effects of the aqueous extract of Cleistocalyx operculatus flower buds on beta-cells of streptozotocin-diabetic rats”,J Agric Food Chem., 58(7), 4162-4168 30 Mai T T., Chuyen N V (2007), “Anti-hyperglyceamic Activity of an Aqueous Extract from Flower Buds of Cleistocalyx operculatus (Roxb.) Merr.and Perry”, Biosci Biotechnol.Biochem., 71 (1), 69-76 31 Manosroi J., Chankhampan C., Kumguan K., Manosroi W (2015), ”In vitro antiaging activities of extracts from leaves of Ma Kiang (Cleistocalyx nervosum var paniala)”, Pharm Biol.,53(6), 862-869 32 MinB S., ThuC V., DatN T., Dang N H., Jang H S., Hung T M (2008), “Antioxidative Flavonoids from Cleistocalyx operculatus ((Roxb.) Merr and Perry”, Chem Pharm Bull., 56(12), 1725-1728 33 MinB S., Cuong T.D., Lee J S., Shin B S., Woo M H., Hung T M.(2010), “Cholinestearase inhibitor from Cleistocalyx operculatus (Roxb.) Merr and Perry Bubs”, Arch Pharm Res., 33(10), 1665-1670 34 Min B S., Cuong T D., Lee J S., Won M H., Hung T M (2010), “Flavonoids FromCleistocalyx operculatus Buds and their Cytotoxic Activity”, Bull Korean Chem Soc., 31(8), 2392-2394 35 Naidu V S., P Kinthada M M S., Kalyani P., Muralidhar P (2012), “Characterization and biological activities of quercetin thiosemicarbazone derivatives: potential anticancer drugs”, Int J Pharm Biomed Sci., 3, 24-27 36 Poontawee W., Natakankitkul S., Wongmekiat O (2016), “Protective Effect of Cleistocalyx nervosum var paniala Fruit Extract against Oxidative Renal Damage Caused by Cadmium”,Molecules,21 (2), 133 37 Sheng Z., Dai H , Pan S., Wang H., Hu Y., Ma W (2014), “Isolation and characterization of an α-glucosidase inhibitor from Musa spp (Baxijiao) Flowers”, Molecules, 19, 10563-10573 38 Soliman F M., Shehata A H., Khalael A E., Ezzat S M (2002), “An acylated kaempferol glycoside from dulce”, Molecules, 7, 245-251 flowers of Foeniculum vulgare and F 39 Tanaka J C A., Vidotti G J., da Silva C C (2003), “A new tormentic acid derivative from Luchea divaricata Mart (Tuliaceae)”, J Braz Chem Soc., 14, 475478 40 Taya S , Punvittayagul C., Inboot W., Fukushima S., Wongpoomchai R (2014), “Cleistocalyx nervosum extract ameliorates chemical-induced oxidative stress in early stages of rat hepatocarcinogenesis”,Asian Pac J Cancer Prev., 15 (6), 2825-2830 41 Thiantogin P., Sotimuang C., Ovatlarnporn C (2014), “α-Glucosidase and α-amylase inhibitory activities of Thai folk antidiabetes formularies” Proceedings of the 3rd CDD International Conference, Ao Nang, Thailand 42 Tijjani A., Ndukwe I G., Ayo R G (2012), “Isolation and characterization of lup20(29)-ene-3,28-diol (betulin) from the stem-bark of Adenium obesum (Apocynaceae)”, Tropical Journal of Pharmaceutical Research, 11, 159-262 43.Use of arjunolic acid in preparing glycosidase inhibitor (2009),Patent CN101416970A 44 Woo A Y., Waye M M., Kwan H S., Chan M C., Chau C F., Cheng C H (2002), “Inhibition of ATPases by Cleistocalyx operculatus A possible mechanism for the cardiotonic actions of the herb”,Vascul Pharmacol., 38(3), 163-168 45.Ye C L., Lai Y F., Liu X G., Huang Q (2014), “Study on mechanism of inducing apoptosis in human hepatoma SMMC-7721 cells by DMC, a chalcone from buds of Cleistocalyx operculatus”,Zhongguo Zhong Yao Za Zhi, 39(15), 2942-2946 46.Ye C L., Liu J W., Wei D Z., Lu Y H., Qian F (2004), “In vitro anti-tumor activity of 2',4'-dihydroxy-6'-methoxy-3',5'-dimethylchalcone against six established human cancer cell lines”, Pharmacol Res., 50(5), 505-510 47.Ye C L., Lu Y H., Wei D Z.(2004), “Flavonoids from Cleistocalyx operculatus”, Phytochemistry, 65(4),445-447 48.Yu W G., He H., Yao J Y., Zhu Y X., Lu Y H (2015), “Dimethyl Cardamonin Exhibits Anti-inflammatory Effects via Interfering with the PI3K-PDK1-PKCα”, Signaling Pathway, 23(6), 549-556 49 Zhang F.-X., Liu M.-F., Lu R.-R (1990), “Studies on the chemical constituents from the bud of Cleistocalyx operculatus”,Acta Botanica Sinica, 32 (6), 469-472 ... [43] Luận văn Nghiên cứu hợp chất thành phần nhằm góp phần đánh giá tác dụng điều trị tiểu đường Vối (Cleistocalyx operculatus Roxb Merr et Perry) thực đầy đủ nhiệm vụ nghiên cứu đặt Trong trình... phân tách sắc ký nghiên cứu cấu trúc liên hệ hợp chất thành phần với tác dụng chữa bệnh đái tháo đường Vối Các nội dung nghiên cứu luận văn là: Thực qui trình chiết etanol etanol-nước để điều. .. hóa thành phần hóa học có Vối liên hệ chúng với tác dụng chữa bệnh đái tháo đường Vối Nhiệm vụ nghiên cứu Hệ thống hóa thành phần hóa học có Vối (Cleistocalyx operculatus (Roxb.) Merr et Perry)