- Phản ứng ghộp đụi muối diazoni.
PHẦN 4 THỰC NGHIỆM
4.4.3 Sắc kớ lớp mỏng khảo sỏt cặn cloroform
4.4.3.1 Phương phỏp sắc kớ lớp mỏng (SKLM)
* Hoà tan hoàn toàn chất nghiờn cứu với dung mụi dựng để chiết sao cho dung dịch thu được khụng quỏ loóng, khụng quỏ đặc. Dựng capila lấy chất rồi chấm lờn bản mỏng, sao cho vệt chất phải trũn, gọn cỏch mộp bờn của bản mỏng 0,7cm, cỏch chõn bản mỏng 1cm và cỏch nhau 0,5cm, chiều dài bản mỏng là 10cm.
* Tiến hành SKLM.
Pha hệ dung mụi với tỷ lệ thớch hợp cho vào bỡnh sắc kớ cú nắp nhỏm và lắc kỹ. Đặt 1 mảnh giấy lọc vào thành bỡnh để bóo hoà dung mụi. Lượng dung mụi lấy cần được tớnh toỏn sao cho khi triển khai SKLM khụng để cho
cỏch mộp trờn 0,5cm thỡ lấy bản mỏng ra. Làm khụ bản mỏng, sau đú hiện sắc phổ bằng mỏy soi tử ngoại rồi bằng cỏc thuốc hiện.
4.4.3.2 Kết quả khảo sỏt SKLM cặn C
Tiến hành SKLM cặn C theo phương phỏp trờn với cỏc tỷ lệ dung mụi khỏc nhau. Kết quả là tỡm được hệ dung mụi tối ưu là cloroform : ete dầu hoả (30-60o) = 9:1. Sắc đồ hiện lờn cỏc vệt sau : Stt Rf UV 5% Vanilin - H2SO4 đặc 5% FeCl3 1 0,94 tớm 0 0 2 0,85 đỏ tớm 0 3 0,75 sỏng tớm nhạt 0 4 0,65 xỏm đen vàng sẫm Nõu nhạt 5 0,61 hồng 0 0 6 0,56 hồng tớm 0 7 0,49 sỏng tớm sậm 0 8 0,35 nõu sẫm đen 0 9 0,00 hồng sỏng tớm nhạt xanh nhạt 4.4.4 Phõn lập cỏc chất trong cặn C bằng sắc ký lỏng trung ỏp
* Chuẩn bị cột theo phương phỏp nhồi khụ :
Cho silicagel vào cột, tiến hành gừ để silicagen phõn bố đều, dựng bơm nộn để silicagen được nộn chặt.
Cõn 5g cặn C hoà tan hoàn toàn bằng 10ml MeOH trong bỡnh cầu 100ml. Sau đú thờm từ từ, vừa lắc đều đến hết 6g Silicagen, loại hết dung mụi thu bột Silicagen đó tẩm chất.
* Tiến hành SKC :
Cho bột Silicagen đó tẩm chất vào cột, rắc 1 lớp mỏng Silicagen lờn trờn để bảo vệ.
Tiến hành rửa giải bằng hệ dung mụi theo độ phõn cực tăng dần: ete dầu hoả - CHCl3 1:1; 3:7; 2:8; 1:9; 100% CHCl3: CHCl3 - MeOH 9:1; 8:2; 7:3. Kết quả thu được 70 phõn đoạn.
Cỏc phõn đoạn thu được đem tiến hành SKLM với hệ dung mụi ete dầu hoả: CHCl3=2:8. Gộp cỏc phõn đoạn cú sắc đồ giống nhau thành một nhúm đỏnh số từ C0 ữ C8. Cất loại dung mụi dưới ỏp suất giảm thu được cỏc nhúm chất sau :
Nhúm Cỏc phõn đoạn gộp Khối lượng(gam)
Co 7 - 10 0,06 C2 12 - 15 0,08 C3 16 - 21 0,07 C4 23 - 29 0,23 C5 30 - 35 0,56 C6 37 - 47 2,50 C7 49 - 59 2,25