Nghiên cứu một số tác dụng sinh học của lá cây vối ( Cleistocalyx operculatus (Roxb.) Merr. et Perry )

Từ lâu, lá vối được dân gian sử dụng để nấu nước uống có tác dụng giải nhiệt, mùi thơm dễ chịu lại có tác dụng tiêu thực. Ngoài ra nước sắc lá vối còn chữa ghẻ lở, rối loạn tiêu hoá, sát khuẩn vết thương. Ðể có thể sử dụng nguồn nguyên liệu này một cách khoa học và có hiệu quả chúng tôi đã tiến hành nghiên cứu một số tác dụng sinh học của lá vối, gồm các chỉ tiêu: Tác dụng kháng khuẩn, tác dụng lợi mật và khả năng gây độc tế bào.

NGHIÊN CỨU MỘT SỐ TÁC DỤNG SINH HỌC CỦA LÁ CÂY VỐI ( Cleistocalyx operculatus (Roxb.) Merr et Perry ) Ðào Thị Thanh Hiền1 - Phạm Thanh Kỳ1 Trường đại học Dược Hà Nội Viện hoá học, Trung tâm KHTN&CNQG I ĐẶT VẤN ÐỀ Từ lâu, vối dân gian sử dụng để nấu nước uống có tác dụng giải nhiệt, mùi thơm dễ chịu lại có tác dụng tiêu thực Ngoài nước sắc vối cịn chữa ghẻ lở, rối loạn tiêu hố, sát khuẩn vết thương Ðể sử dụng nguồn nguyên liệu cách khoa học có hiệu tiến hành nghiên cứu số tác dụng sinh học vối, gồm tiêu: Tác dụng kháng khuẩn, tác dụng lợi mật khả gây độc tế bào NGUYÊN LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU Nguyên liệu Lá vối sau thu hái, chia làm hai phần Phần 1: thái nhỏ, rửa nhựa, cho vào thùng ủ đen đều, lấy rửa sạch, phơi khô, thu vối ủ khô Phần 2: thái nhỏ, rửa nhựa, phơi khô, thu vối khô Lá vối khô vối ủ khô tiến hành: Cất tinh dầu phương pháp cất kéo nước (thu hai loại tinh dầu vối ủ - TDVU- tinh dầu vối - TDV), chiết dung mơi ethanol 800, sau cất thu hồi dung mơi đến cắn thu cao khô vối ủ (CKVU) cao khô vối (CKV) Phương pháp nghiên cứu - Thử tác dụng kháng khuẩn phiến vi lượng Vanden Bergher Vilietlink (1994) [3] - Thử tác dụng lợi mật chuột nhắt trắng [5] - Thử khả gây độc tế bào theo phương pháp Viện nghiên cứu ung thư quốc gia Mỹ [4] phòng thử tác dụng sinh học TTKHTN & CNQG tiến hành III THỰC NGHIỆM VÀ KẾT QUẢ Tác dụng kháng khuẩn - Chế phẩm thử gồm : TDVU, TDV, CKVU, CKV - Vi khuẩn thử: + Vi khuẩn Gr(-): E coli, Pseudomonas aeruginosa + Vi khuẩn Gr(+): Bacteroides subtilis, Staphylococcus aureus + Nấm mốc: Aspergillus niger, Furanium oxysporum + Nấm men: Candida albicans - Tiến hành: + Bước 1: Thử tác dụng kháng khuẩn theo phương pháp khuyếch tán thạch, sử dụng khoanh giấy lọc tẩm chất thử theo nồng độ tiêu chuẩn (1mg/ml Ethanol 960), mẫu thử có vịng vơ khuẩn từ 20mm trở lên coi dương tính Kết cho thấy mẫu thử dương tính + Bước 2: mẫu thử dương tính tiến hành thử tiếp bước để tính nồng độ ức chế tối thiểu (MIC) theo phương pháp Vanden Bergher Vlietlink (1994) tiến hành phiến vi lượng 96 giếng, kháng sinh kiểm định bao gồm: Ampicillin, Tetracyclin, Amphotericin B Nystatin Kết trình bầy bảng Bảng 1: Kết xác định MIC mẫu TDVU, TDV, CKVU, CKV Nồng độ ức chế tối thiểu MIC (μg/ml) TT Mẫu thử Vi khuẩn Gr(-) E.coli P aeruginosa Vi khuẩn Gr(+) B.subtilis S.aureus Nấm men Nấm mốc Asp.niger F.oxysporum C.albicans TDV 200 200 50 100 200 200 >200 TDVU 200 100 50 200 200 200 >200 CKVU 50 200 50 50 >200 >200 200 CKV 100 100 50 50 200 >200 50 Ghi chú: giá trị MIC < 200 μg/ml : mẫu dương tính Nhận xét: Ðối với E coli mẫu thử cao khơ Vối ủ (CKVU) có tác dụng tốt Ðối với tụ cầu vàng cao Vối (CKVU & CKV) có tác dụng tốt tinh dầu Vối (TDV & TDVU) Thử khả gây độc tế bào: Tiến hành: Tế bào ung thư trì liên tục điều kiện tiêu chuẩn sử dụng thử test với chất thử chuẩn bị sẵn nồng độ khác phiến vi lượng 96 giếng, phiến thử nghiệm bao gồm tế bào + môi trường nuôi cấy + chất thử, ủ 370 C ngày, tế bào lấy cố định, rửa, nhuộm hoà lại dung dịch chuẩn, đọc máy Elisa bước sóng 515-540nm Giá trị IC50 (Ihbitory concen tration of 50% cell growth) tính chương trình “Table curve” với giá trị logarit dựa giá trị mật độ quang thang nồng độ khác chất thử giá trị đo Kết trình bầy bảng Bảng 2: Khả gây độc tế bào mẫu TDVU, TDV, CKVU, CKV TT Mẫu TDV TDVU CKVU CKV HepG.2 14,7 20,5 Dòng tế bào (ED%) RD 0 29,3 19,9 Ghi FL 0 9,7 10,5 Dương tính Dương tính Dương tính Dương tính Hep.G2: dịng tế bào ung thư gan FL: dòng tế bào ung thư màng tử cung RD: dòng tế bào ung thư màng tim * Đối với mẫu thử chất thô giá trị IC50 < 20 μg/ml coi dương tính Nhận xét: Sơ nhận thấy mẫu thử nghiệm có tác dụng ức chế phát triển dòng tế bào ung thư đem thử 3 Thử tác dụng lợi mật: Nguyên liệu thử cao nước (1:1) vối ủ ( nước sắc Vối ủ dạng thường sử dụng nhân dân ) Chuột nhắt trắng trọng lượng 22g ± 2g.Viện vệ sinh dịch tễ cung cấp Tiến hành: Dùng 30 chuột nhắt trắng chia ngẫu nhiên thành lô, lô 10 Lô - lô thử: chuột uống cao nước Vối ủ (1:1) liều 10g/kg thể trọng Lô - lô thử: chuột uống cao nước Vối ủ (1:1) liều 20g/kg thể trọng Lô - lô chứng: chuột uống NaCl 0,9% Chuột lô uống mẫu thử theo liều qui định ngày liên tục, ngày thứ sau uống thuốc 30 phút gây mê ether ethylic mổ bụng để thắt ống dẫn mật khâu thành bụng lại, sau 30 phút bóc tách túi mật, thấm qua giấy lọc, cân m1(mg) Rạch túi mật cho mật chẩy hết thấm vào giấy lọc cân lại m2(mg) Khối lượng mật m = m1- m2 (mg) Lượng sinh mật lô thử tăng so với lơ chứng tính theo cơng thức: L% = mt - mc mc x 100% mt: khối lượng mật lô thử mc: khối lượng mật lô chứng L: lượng mật sinh tăng Kết trình bày bảng TT 10 X P L% Bảng 3: Kết qủa thử tác dụng lợi mật cao nước Vối ủ Lô uống liều 10g/kg Lô uống liều 20g/kg Lô chứng mt(mg) mt(mg) mc(mg) 41,5 33,4 21,1 23,1 34,3 13,7 40,5 29,5 16,5 20,3 25,5 20,3 21,0 48,1 16,6 15,6 31,5 16,3 32,8 42,5 26,0 28,1 30,8 18,4 34,0 35,9 18,7 31,5 46,2 17,1 30,0 ± 2,6 35,8 ± 2,4 18,5 ± 1,1 < 0,001