Chương iii Li trích định lượng và khảo sát cấu trúc hóa học Rotenon

Chương iii Li trích định lượng và khảo sát cấu trúc hóa học Rotenon

Trang 2

3.1 Chuẩn bi mẫu và xác đỉnh ẩm đô mẫu :

a) Chuẩn bì mẫu :

Mẫu cây Derris elliptica Bemh thu hái ở xã Bà Điểm (Ấp Trung Lân)

huyện Hóc Môn TP Hồ Chí Minh Rẽ thân, lá, được sắp riềng trải thoáng ở

nhiệt độ phòng trong nhiều ngày (thường xuyên trở đều mẫu), sau cùng xay

thành bột

Cân các mẫu bột của toàn cây được 316,2 gam mẫu bột rễ, 2529,6 gam mẫu thân và 2424.2 gam mẫu lá Nhu vay, wong mau cay Derris elliptica Benih thì phần rễ chiếm 6 %, phần thân chiếm 48 % và phần lá thì 46 %

b) Xác định ẩm độ mẫu -

Cân hép petri (m’ gam) và cân mẫu chứa trong hộp petri (mạ gam) sấy ở 105 °C mẫu thí nghiệm đến khối lượng không đổi (m; gam) Am độ của mẫu

được tính theo công thức :

H% = maa x 100 m,- m

Két qua thi nghiém :

Trang 3

3.2 Định lượng Rotenon trong rễ, than ki bằng phương pháp AFINOR : a) Nguyên tắc +

Ngâm chiết m gam bột mẫu rễ (thân, lá) có ẩm độ H% với dung môi cloroform trong 24 giờ và lắc tiếp tục 4 giờ nữa trong một bình crlen 2 lút, nút

kín Lọc (loại bã), Thu bồi CHCH ở áp suất kém từ địch cloroform, bòa tan cin với dung môi CCI,, đun sôi và lọc Làm lạnh dịch phức rotenon - CCI¿ (với hỗn

hợp nước đá và NaC]), lọc và rửa tỉnh thể với dung môi CC; lạnh Sấy tính thể

ở 45 °C rỗi kết tỉnh lại trong etanol 95° Lọc, sấy và cân được m` gam Rotenon se Hàm lượng b% rotenon trong mẫu (có độ ẩm H% ) là :

mỉ x 10

m 100 — H b) Kết quả thí nghiệm ;

Thực hiện 3 thí nghiệm cho mỗi mẫu, đối với mẫu rễ dùng 40gam/mau, đối với các mẫu lá và thân dùng 100 gan⁄mẫu Tiến bành định lượng rotenon

theo phương pháp nêu trên, cân sắn phẩm rotenon (m' gam) và thu được kết quả sau đây :

Trang 4

3.3 Lv trích rotenon từ rễ cây Derris elliptica Benth :

a} DO tan cua rotenon trong các dung môi hữu cơ:

Nhằm xác định dung môi tốt nhất cho quá trình ly trích rotenon, chúng tôi tiền bành thử độ tan của rotenon trong các dung niôi hữu cơ ở nhiệt độ phòng thí nghiệm và thu được bảng kết quả như sau :

Bang 11.2: BO TAN CUA ROTENON TRONG DUNG MOI Dung mỗi Bé tan (mg/ml) Dung méi Độ tan ( mø /mi } Míc› CO 80 CHC 330 AcOH 22 E10 5 EtOH 3 MeOH 3 AcOAm 18 iso - PrOH 2 C,H, 88 PhMe 72 CS 16 CGI, 4

Tuy cloroform và aceton cho độ tan cao nhất (330 mg/ml và 30 mg/m)), nhưng lại hòa tan nhựa nhiều gây khó khăn cho quá trình tách rotenon từ cao rong khi đó, toluen và benzen có độ tan tương ứng 72 và 85 ømg/mi nhưng lại khó hòa tan nhựa nên sẽ không gây trở ngại cho quá trình tách rotenon từ cao dịch trích

b) Quy tuy ly trích rotenan ti rễ cây Derris elliptica Benth :

Qua kết quả xác định độ tan của rotenon, chúng tôi chọn dung môi

Trang 5

Lược đồ ly trích Rotenon Mẫu (bột rể) - Trích trong soxhlet với tolten 1 10°C,8 gid Ba - Lọc Dich toluen - Loai toluen ở áp suất kém Can - Hòa tan với CCI, Cặn Rotenoid | - Loc Dịch phức Rotenon — CCl, - Loai CCly - Két tinh - Loc Rotenon thd - Kết tình với EtOH 95” Rotenon tink c) Kết quả ly trich rotenon :

Mẫu bột rễ cây Derris được tiến hành ly trích theo quy trình nêu trên

Với m gam mẫu bột rễ có ẩm độ H% sẽ thu được m' gam sản phẩm rotenon,

hiệu suất trích Iy a% được tính theo công thức : ' to"

a% = m X ——

m 100 — a

Trang 6

-BANG IIL3 : HIEUSUAT TRICH LY ROTENON TU RE

mauré | m(gam) m` ( gam ) a% a % H=5.7% mau Rotenon Trich ly l 50 2.7583 5,85 2 50 2,7347 5,80 3,50 3 50 2/7111 5,75 Như vậy tỷ lệ (%) ly trích ở rẻ cây Derris elliptica Benth la: 38 - 4 = 68 xX {oC = 85,3 % yer S i I » — Q oO I c%

Rotenoii thu được có dạng tinh thể không màu, có dung điểm 163°C

(EtOH), cd wae nghiệm đương tính với cấc phần ứng định tính rotenomr:

1 Phần ứng Đutham Hovard : Dùng 0.5 mg rotenon vừa ly trích để trên mặt Kính thêm 2 giọt HạSO; đẫm đặc xuất hiện màu vàng cam rất rô, Thêm vào một hạt NaNO: : mầu ngã sang đó tim: Kết quả dương tính

2, Phan ting Jones va Smith: Hoa tan 0.5 mg rotenon via ly trich trong

2ml aceton thêm vào 2ml nước và † mi HNO;: đậm đặc Kiểm hoa vdi NH,OH đậm đặc : màu xanh tím đậm xuất hiệ tì và mất ngay : Kết quả dương tính,

Trang 7

Hình 1C : Sắc ký lớp mỏng của rotenon

Với hệ dung ly CạH, : MeOH : HO

Trang 8

Hình ID: Sắc ký lớp mồng của rotenon

Trang 9

118, detector UV/VIS 280 nm, cét Partisil ODS Sum (250 mm x 4.6 mm),

pha động MeOH :H;O (65:35), tốc độ dòng 0.8ml/phút, với chất chuẩn Rotenon của Merck, Kết quả định lượng cho thấy hàm lượng sẵn phẩm Rotenon là : 96.389 +0.054%, 3.4 Khảo sát cấu trúc hóa học của rolenon : a) Dung điểm - Đo điểm tan chảy trên khối maquenne ; lỐ kad & ân ~ tt c" © an — — = = os = = CDs, ~¬ oN bh c Cy >- bì Phân tích C, HH:

Sự phân tích nguyễn tố carbon hydro với máy phân tích ný động cho kết

Trang 11

‘A CHROMATOPAC = CH=1 9 REPORT No.=6 CHEOMATOGRAM=I:4CHBMI.C00 00 00 600 06:14:35

CT0 7 TT 7 7772757 tense ee eet en ee eee eee eee 1,442?s/C ALCLLATION REPORT ¥*# KANG TIME ARES HETGHT Mk TDNO CÔNG NAME ] 10, 287 85120 3338 3.2594 2 12.505 2562362 91525 94.7766 3 13.962 23102 2141 1 964 TOTAL 270358) 97224 100

4 CHROMATOPAC NO, = CHROMATOGR AM=2:ROTEL UO] 00 00 €0 06:39:08

¬ nee et eet te et ee eee cee cence tee eee seen

4 /240na | nc '

" ference eee tect te eee ee neces eet ene eee cone eee nessa

Trang 13

LI-ZI-LI9G LU: ymin = O.974S Ymax = 2.8771 File = 4.000 3,211 (492m) = a N Ce 2.sào | j : ¬ Neve lees \ \ \ 1.000 \ geodon fo fe Re N X XS : | TT, 1 i cD ——————— Zee Bee xo TG a0

EKONTRON INSTRUMENTS UVERKON 9223 5s ee

Can Cad ng wc /ic wat MH ;

Trang 15

d) - ~ «

Phố hồng nưoag! -

trình bay trong bang Hi:

Bảng H4 : Phố hồng ngoại của rotenon với máy BRCKER IS 45 cho các mũi đặc trưng Loại Dao Động V(cm')

Dao động giãn C - H( vòng benzeu ) 3084.0

Dao động giãn C -H(v,CH:,vuCH:› ) 2992.0

Trang 17

©)_Phổ cộng hưởng từ hat nhân :

Phô cộng hưởng từ hạn nhân 'H-NMR và 'C- NMR được thực hiện trên

máy BRUCKER AC 200 ở tần số cộng hưởng 50 MHz đối với phổ 'ẺC-NMR và ở 200 MHz đối với phổ 'H-NMR Mẫu phân tích được pha trong dung môi CDCI; ở nồng độ I0 mg/0,4 ml và ở 30 mg/0.4 mi đối với phổ 'C-NMR và

đựng trong ống có đường kính 5 mm với chất chuẩn nédi la TMS

(Tetrametylsilan) góc xung (P.W.) = 60°, (Xem phổ 'H-NMR và phổ ¥C-

NMR)

Pho °C-NMR két hop voi ky diudt DEPT : Voi ky thuat DEPT, khi thuc

hiện pho °C-NMR 4 uhitng géc xung khác nhau thì chỉ xuất hiện những vạch

cộng hưởng của CH¡ CH¿ hoặc CH (xem phổ DEPT) Kỹ thuật DEPT cho phép

kiểm chứng lại các vị trí cộng hưởng của phố 'ÌC-NMR của rotenon Từ các kết

Trang 30

3.5 Khử hvdro chất rolenon bởi MnO, trong aceton tao thành sản phẩm 6a.12a - dehvdrorotenon :

uá trình khử hydro của rotenon bởi MinO2/aceton được tiến bành như

sau

me

Cho vio binh cdu day bang dung tich 250 ml, 1,60 gam rotenon, 5.00 gam mangan dioxid va 100 mi acetou Bun hoan lve binh cau trên máy khuấy

từ trong § giờ Để nguội lọc lấy dịch trong (aceton} và rửa chất rấn còn lại với

60 mi hén hợp cloroform ; metanol (l : 1) nồng, Dịch rửa được nhập chung với dịch trong đun sôi để loại bớt dung môi rồi để vên 24 giờ Lọc lấy tỉnh thể thd,

dun gần can dịch trong và để yên 12 giờ Lọc lấy thêm tỉnh thể thô Kết tỉnh lại

tinh thé thé trong SỐ mỊ hồn hợp cloroform : metanol (1: 1) thu dude 0.77 gam sản phẩm 6a.12a ~ dehydroratenon điểm tan chảy 224 °C Hiệu suất (0.7

1.60 )x I0Q =48.12%,

Do phé IR phd "H-NMR BC-NMR va DEPT wén dehydrorotenon thu

duoc két qua nhu sau :

Œ® Phé IR do trén may SHIMADZU cho cdc mili dic trung sau :

Trang 31

Bảng IIL6 : Phổ hồng ngoại của DEHYDROROTENON

L Loại dao động v(em') |

Trang 33

Bảng II] 7 : Phổ cộng hưởng từ hạt nhân của Dehydrorotenon

Carbon 6 ( ppm) Proton 6 ( ppni)

Thi nghiém | Tai liéu’ | Thí nghiệm | Tailiéu’ { 31,392 32.5 H-I 3,275 3.30 2 87.925 81.4 H-2 5.245 5.25 3a 168.0 167.9 105.268 104.5 H-4 6.548 6.60 5 130.043 129.5 H-5 7.835 7,33 5a 113.146 114.0 6 191.051 190.2 6a 127.950 128.3 H-6a 6b 109.268 110.5 7 108.723 108.7 H-7 6.9000 7.10 8 1143.911 143.0 9 (48.75 147.0 10 100.994 100.7 H-10 6.482 7.02 10a 146.850 146.8 12 67.509 68.1 H-I12 4.580 3.96 12a 151.0 150.7 H-12a 13a 157,920 158.0 15b 112.675 112.9 I" 111.686 112.5 Hel 4.950 5.25 2 142.801 142.7 3 17.037 17.7 H-3` L.807 1.55 8-OCH,; | 56.395 8-0-CH, 3.722 9-OCH, | 56.231 9-0-CH; 3,813

* Tn số tính theo R.M Silverstein Spectrometric Identification of Organic

Compounds 5" P 165 - 287 John Wiley (1991)

Trang 34

10 6b 9 7 HạCO 5 OCH3 Dehydrorotenon

Nhân xét : Quan sát phổ 'H-NMR thay cdc proton ctia carbon 6a v2 carbon |2a bién mat Trén phé " C-NMR có sự dịch chuyển của carbon 6a từ

42,468 ppm (trong rotenon) đến 127.956 ppm (trong dehydrorotenon) va carbon 12a từ 72.102 ppm (trong rotenon) đến 151,0 ppm (trong dehydrorctenon) Va

trong phổ DEPT thấy mat han mui ctia proton tai carbon 6a va carbon [2a (trong rotenon) do phản ứng khử hydro xảy ra (cho san pham 6a,J2a —

dehydrorotenon