Khái niệm chung về phương pháp xung điện Phương pháp xung điện hay còn gọi là điện biến nạp (electroporation) là phương pháp sử dụng điện trường cường độ cao, ngắn để gây ra tính thấm thuận nghịch qua lớp lipit kép của màng tế bào. Xung điện làm mở rộng lỗ màng và làm mỏng màng sinh chất, từ các lỗ đó cho phép các đại phân tử khác nhau (AND, ARN, kháng thể…) chuyển qua màng.
Trường: ĐH Nông Lâm-Huế Khoa : Cơ Khí Công Nghệ Lớp : BQ41 GVHD : Nguyễn Thị Vân Anh Thành viên thực hiện: 1.Đào Thị Na 2.Lê Thị Minh Lan 3.Nguyễn Thị Tám CÔNG NGHỆ SINH HỌC THỰC PHẨM Khái niệm chung về phương pháp xung điện Phương pháp xung điện hay còn gọi là điện biến nạp (electroporation) là phương pháp sử dụng điện trường cường độ cao, ngắn để gây ra tính thấm thuận nghịch qua lớp lipit kép của màng tế bào. Xung điện làm mở rộng lỗ màng và làm mỏng màng sinh chất, từ các lỗ đó cho phép các đại phân tử khác nhau (AND, ARN, kháng thể…) chuyển qua màng. Tế bào muốn chuyển được đặt trong máy xung điện có hiệu điện thế khoảng 500 V/cm với khoảng thời gian 4-5 phần nghìn giây Các bước chuyển gen bằng xung điện Máy xung điện Một dòng điện cao áp trong khoảnh khắc có khả năng tạo ra các lỗ thủng trên màng tế bào khiến DNA ngoại lai từ môi trường có thể xâm nhập vào trong tế bào. Tiếp đó xung điện làm rối loạn phospholipid kép của màng tế bào và tạo ra các lỗ tạm thời. Sơ đồ plasmid chứa DNA ngoại lai đi qua các lỗ tạm thời trên màng bào chất Thể nguyên sinh(Protoplast) được thêm vào một dung dịch có chứa DNA lạ, huyền phù DNA- Protoplast được đưa vào một dòng điện, sự tạo thành các vi khổng (small spore) ở màng Protoplast cho phép DNA xâm nhập vào tế bào. Sau đó thể nguyên sinh vừa được chuyển nạp gen sẽ tái sinh cho ra cây mới. Sơ đồ chuyển gen bằng phương pháp xung điện: Qúa trình chuyển gen Hiệu quả biến nạp khá cao . Chuyển được cả các gen có kích thước lớn. Có thể dùng một thể tích dịch tế bào nhỏ. Chuẩn bị tế bào biến nạp đơn giản. Tần số biến nạp với AND siêu xoắn vàADN mạch vòng là giống nhau do đó không cần sử dụng vector. Hiệu suất biến nạp phân tử cho AND mạch vòng rất cao đối với các plasmid có kích thước đến 50kb. Ưu Điểm Thiết bị biến nạp đắt tiền Thời gian để tái sinh biến nạp kéo dài. Có những thay đổi lớn không thể điều chỉnh được trong biểu hiện của gen(hiệu ứng vị trí). Trong quá trình chuyển gen đòi hỏi người chuyển phải khéo léo, chính xác tránh xảy ra sai xót Nhược điểm [...]...Ứng dụng: • Bằng kỹ thuật xung điện thì: • Chyển các gen mong muốn trong kỹ thuật di truyền và nuôi trồng thuỷ sản • 1992 Monila đã tạo ra được giống mía chuyển gen • Tạo ra các vacine phòng bệnh hay các loại vitamin Tài liệu tham khảo: 1 Công nghệ sinh học thực vật - Trần Thị Lệ 2 www.google.com.vn . được đặt trong máy xung điện có hiệu điện thế khoảng 500 V/cm với khoảng thời gian 4-5 phần nghìn giây Các bước chuyển gen bằng xung điện Máy xung điện Một dòng điện cao áp trong khoảnh. tái sinh cho ra cây mới. Sơ đồ chuyển gen bằng phương pháp xung điện: Qúa trình chuyển gen Hiệu quả biến nạp khá cao . Chuyển được cả các gen có kích thước lớn. Có thể dùng một. hiện của gen( hiệu ứng vị trí). Trong quá trình chuyển gen đòi hỏi người chuyển phải khéo léo, chính xác tránh xảy ra sai xót Nhược điểm • Bằng kỹ thuật xung điện thì: • Chyển các gen mong