Đang tải... (xem toàn văn)
Hiện nay dứa là một trong 3 loại cây ăn quả hàng đầu của nước ta (chuối, dứa, cam quýt), chiếm vị trí quan trọng trong nền sản xuất rau quả. Cây dứa với ưu thế chống chịu được đều kiện ngoại cảnh, phẩm chất cao, sớm thu hồi vốn nên đang là một trong những chiến lược nhằm nâng cao đời sống cho người lao động và nền kinh tế xã hội.
1 PHẦN I: GIỚI THIỆU 1.1 Đặt vấn đề Hiện dứa loại ăn hàng đầu nước ta (chuối, dứa, cam quýt), chiếm vị trí quan trọng sản xuất rau Cây dứa với ưu chống chịu kiện ngoại cảnh, phẩm chất cao, sớm thu hồi vốn nên chiến lược nhằm nâng cao đời sống cho người lao động kinh tế xã hội Với tiềm kinh tế cao, diện tích dứa mở rộng phạm vi nước (36.541 năm 2002) (Tuấn Tiến, 2002) nhằm tăng sản lượng cho tiêu dùng nguyên liệu cho nhà máy chế biến tỉnh như: Tiền Giang, Kiên Giang, Long An, Hậu Giang, Thành Phố Hồ Chí Minh, Đồng Nai Trước đây, dứa Queen trồng phổ biến nước ta có nhiều nhược điểm khơng phù hợp với công nghệ giới tỉ lệ thành phần chế biến thấp Chính thế, dứa Cayenne giống quan tâm với nhiều đặc điểm tốt diện tích trồng đạt 3600 năm 2002 tỉnh phía Bắc Đơng Nam Bộ (Tuấn Tiến, 2002) Tuy nhiên, diện tích trồng nguồn vật liệu thấp nhu cầu giống chưa đủ phần lớn giống nhập ngoại Vì vậy, trước hết cần phải tìm hiểu tính đa dạng di truyền giống dứa Cayenne, sở để thực có hiệu việc nhân tạo giống đồng thời xây dựng định hướng kiểm tra, quản lý bảo vệ nguồn gen giống trồng sẵn có nước du nhập từ nước ngồi Do đó, chúng tơi tiến hành đề tài “nghiên cứu đa dạng nguồn gen dứa Cayenne phƣơng pháp marker phân tử” Để nghiên cứu đa dạng di truyền người ta sử dụng nhiều phương pháp khác nhau: phương pháp sử dụng thị hình thái, thị isozyme hay thị (marker) DNA (RFLP, RAPD, AFLP, SSR ) Tuỳ vào đối tượng, điều kiện mục đích nghiên cứu mà người ta lựa chọn phương pháp phù hợp Trong đề tài chúng tơi tiến hành nghiên cứu tính đa dạng di truyền dứa Cayenne marker RAPD Hy vọng kết đề tài đóng góp phần định vào tiền đề cơng tác chọn tạo giống dứa Việt Nam 1.2 Mục tiêu yêu cầu 1.2.1 Mục tiêu - Tìm hiểu sưu tầm nguồn gen dứa Cayene phương pháp thị (marker) phân tử - Tìm hiểu đa dạng kiểu hình dòng dứa từ giống Cayenne - Đề xuất vật liệu lai ban đầu cho công tác chọn tạo giống dứa Cayenne 1.2.2 Yêu cầu - Thành thạo thao tác ly trích DNA - Nắm vững kỹ thuật PCR, hạn chế sai sót q trình thực - Nắm vững kỹ thuật sử dụng thị RAPD - Hiểu rõ phần mềm xử lý thống kê sinh học NTSYS-pc, Excel, IRRISTAT PHẦN II: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 Một số khái niệm đa dạng sinh học 2.1.1 Đa dạng sinh học Theo quỹ quốc tế bảo tồn thiên nhiên-WWF (Word Wildlife fund) (1989), đa dạng sinh học định nghĩa sau: “Đa dạng sinh học phồn thịnh sống trái đất, hàng triệu loài thực vật, động vật vi sinh vật, gen chứa đựng loài hệ sinh thái vô phức tạp tồn môi trường” Do đa dạng sinh học xem xét theo mức độ: - Đa dạng sinh học cấp độ loài bao gồm toàn sinh vật sống trái đất, từ vi khuẩn đến loài thực vật, động vật loài nấm - Đa dạng sinh học mức độ gen khác biệt gen loài, quần thể sống cách ly địa lý cá thể chung sống quần thể - Đa dạng sinh học bao gồm khác biệt quần xã mà lồi sinh sống hệ sinh thái, nơi mà loài quần xã sinh vật tồn khác biệt mối tương quan chúng với (Phạm Bình Quyền, 2002) - Ngồi đa dạng sinh học liên quan đến việc phân bố địa lý Đây phân biệt có tầm rộng chiến lược nghiên cứu nhiều nước giới 2.1.2 Đa dạng di truyền Các cá thể quần thể thường có genome khác Sự đa dạng genome biểu qua khác gen cá thể Những alen khác gen làm cho phát triển đặc điểm sinh lý cá thể khác khác Những trồng trồng lai ghép hay động vật lai tạo từ genome khác tạo giống trồng, vật nuôi cho suất cao, khả chống chịu sâu bệnh tốt (Richard B Primack, 1999) Trong trình sinh sản hữu tính, kiểu gen cá thể quần thể tăng lên kết tái tổ hợp đột biến Các gen đa hình nguyên nhân dẫn đến tồn kiểu gen dị hợp quần thể Sự khác biệt kiểu gen cá thể quần thể cho phép quần thể thích nghi với thay đổi môi trường (Richard B Primack, 1999) 2.1.3 Ý nghĩa việc nghiên cứu đa dạng di truyền Đa dạng sinh học cần thiết cho tồn loài, quần xã tự nhiên quan trọng người Sự đa dạng di truyền cần thiết cho tất sinh vật để trì nịi giống, kháng với loại dịch bệnh thích nghi với thay đổi môi trường Sự đa dạng di truyền trồng vật ni có giá trị đặc biệt chọn tạo giống trồng, vật nuôi phục vụ lợi ích người 2.2 Giới thiệu chung dứa Cayene 2.2.1 Nguồn gốc phân loại Cây dứa có tên khoa học Ananas comosus L (Merrill), thuộc họ Bromeliaceae, chi Ananas , chi có lồi, lồi Ananas comosus có giá trị kinh tế Dứa có nguồn gốc từ Nam Mỹ, theo K.F Baker J.L.Collin thấy xuất miền nam Braxin, bắc Achentina Paragoay Theo Hume Miller, giống dứa trồng chia làm nhóm: Cayene, Queen (hay cịn gọi Nữ hồng), Spanish (hay Tây Ban Nha) Trong nhóm Cayene chia làm giống Smooth Cayene, Sarawak (giống có khả chịu ẩm, úng chống bệnh héo), Enville, Baron roth schild, Typhone, Smooth Guatemalan Ở Việt Nam, theo tra nghiên cứu viện nghiên cứu rau tập hợp giống Cayenne trồng nước ta gồm: Cayenne chân mộng trồng Vĩnh Phú, Cayenne Phủ Quỳ trồng Nghĩa Đàn - Nghệ An, Cayenne Đức Trọng trồng Lâm Đồng Nam Bộ chủ yếu Cayenne trơn nguồn gốc từ Pháp Nguồn gốc giống Cayene trồng nước ta thường nhập từ nước qua tiến hành lai tạo (Trần Thế Tục Vũ Mạnh Hải, 2002) 2.2.2 Giá trị kinh tế Về mặt dinh dưỡng, dứa xem “hoàng hậu” loại hương vị thơm ngon giàu chất dinh dưỡng Wooster Blank (1950) phân tích thành phần dinh dưỡng dứa Cayenne Hawaii cho kết sau: - Đường 11 - 15 %, saccharose chiếm 1/3, lại glucose fructose - Acid: 0,6 % gồm 78 % acid citric, lại acid malic acid khác - Hàm lượng loại vitamin: vitamin A - 130 đơn vị quốc tế, vitamin B1 - 0,02 mg, vitamin C - 4,2 mg / 100 g - Các chất khoáng: Ca - 16 mg, P - 11 mg, Fe - 0,3mg, Cu - 0,07 mg - Protein - 0,4 g lipit - 0,2 g - Hydratcacbon - 13,7 g, nước 85,5 g xenlulose - 1,4 g Ngồi dứa cịn có men bromelin giúp cho việc tiêu hố tốt Nó dùng cơng nghiệp thực phẩm, thuộc da, vật liệu làm phim Về hiệu kinh tế: Cayenne cho to, sản lượng cao, đạt diện tích lớn HaWaii 80 – 100 / Aubert cho sản lượng Cayenne gấp đôi dứa Queen Đồng thời, ưu điểm lớn Cayenne vỏ mỏng, nước nhiều, hình ống, loại hình lý tưởng để chế biến đồ hộp, dù dứa khoanh hay nước dứa.Về mặt canh tác, nhờ khơng có gai nên thao tác thuận lợi, hiệu suất lao động tăng lên nhiều Hiện ngành nông nghiệp nước ta có kế hoạch phát triển mở rộng diện tích dứa nhằm tăng sản lượng cho nhà máy chế biến (Vũ Công Hậu, 1999) 2.2.3 Đặc điểm hình thái dứa Cayenne Dứa loại thảo lâu năm: sau thu hoạch mầm nách thân tiếp tục phát triển hình thành giống trước, cho quả; thứ hai thường bé trước Các mầm nách lại cho phát triển cho thứ ba Cây dứa trưởng thành cao 1,0 - 1,2 m có hình dạng cù (cù- thứ đồ chơi trẻ em) có đường kính khoảng từ 1,3 - 1,5 m, có đáy bẹt, tán xoè rộng Cấu tạo dứa (Trần Thế Tục Vũ Mạnh Hải, 2002) gồm có thành phần sau: 2.2.3.1 Rễ Rễ thường bất định mọc ngang mặt đất Dựa vào nguồn gốc phát sinh chia thành dạng: rễ cái, rễ nhánh rễ bất định Rễ dứa thuộc loại ăn nông, phần lớn nhân giống chồi (nhân giống vơ tính) nên mọc từ thân ra, nhỏ phân nhiều nhánh Ở tầng đất dày rễ ăn sâu 0,9 m Nhưng rễ dứa thường tập trung tầng đất 10 - 26 cm phát triển rộng đến m Rễ dứa thuộc loại háo khí ưa xốp thống nên trồng tốt đất đồi feralit đỏ vàng phát triển đất cát, đất sét Đồng thời rễ dứa phát triển tốt đất có hàm lượng nước từ 10 – 20 %, độ pH thích hợp từ 4.0 - 5.5, giới hạn 3.5 - 6.0 Để cho rễ phát triển bình thường cần cung cấp dinh dưỡng N, P, K, Ca, Fe, Mg, S…trong N, P có vai trò quan trọng Thiếu N, P rễ phát triển kém, không Sinh trưởng phát triển rễ bị ảnh hưởng trực tiếp nhiệt độ Trong phạm vi 12 - 300C, nhiệt độ tăng rễ phát triển mạnh ngược lại Nhiệt độ giới hạn - 430C cao hay thấp nhiều ngày rễ chết Theo Mao Tác nghiên cứu giống dứa Cayenne Philippin, Đài Loan Nam Ninh năm 1960 cho biết hoạt động rễ đạt đỉnh cao vào tháng tháng 10 nhiệt độ tháng tăng cao Các nguyên liệu chồi khác đem trồng có ảnh hưởng đến sinh trưởng phát triển rễ dứa 2.2.3.2 Thân Thân dứa chia làm hai phần: phần mặt đất phần đất Hình dạng thân biểu tình trạng thân ngắn, bặm chứng tỏ khỏe, ngược lại thân dài bé yếu Thân dứa trưởng thành dài 20 - 30 cm, đường kính – cm, trọng lượng 200 – 400 g Ở trung tâm thân mô rỗng, mềm, chứa chất dinh dưỡng chứa nhiều tinh bột giữa, nối tiếp lớp bó mạch có nhiều xơ, ngồi bao bọc lớp biểu bì gốc Thân mọc khỏe kiện nhiệt độ 250C trở lên, 50C đỉnh thân gốc bị vết cháy rét Nếu vừa lạnh vừa mưa kéo dài đỉnh thân bị thối Trường hợp ngập nước rễ thân bị thối 2.2.3.3 Lá Lá mọc thân theo hình xoắn ốc Lá thường dày, khơng có cuống, hẹp ngang dài Mặt lưng thường có lớp phấn trắng lớp sáp có tác dụng làm giảm độ bốc nước cho Hình dạng khơng có gai, trừ vài gai ngọn, màu xanh thẩm với đốm nâu đỏ, dài từ 80 – 100 cm, rộng – cm, trưởng thành có khoảng 60 - 80 Hình dạng thay đổi tuỳ theo vị trí, tuổi chúng từ dẫn đến việc xếp chúng thành nhiều loại khác Diện tích lớn thường to ngược lại cần phải tìm cách tác động cho đạt số tối đa Nhiệt độ giới hạn dứa - 400C Trên 400C ngừng hoạt động, 80C ngừng lá, 50C hoạt động ngừng 00C chết rét Sinh trưởng cịn bị ảnh hưởng độ phì đất Bón phân bổ sung cách hợp lý làm cho sinh trưởng khỏe, sum xuê Vì vậy, ta cần phải cung cấp đủ lượng dinh dưỡng cân đối NPK nguyên tố khác để đảm bảo cho sinh trưởng tốt 2.2.3.4 Hoa, quả, hạt Dứa trung bình có 150 hoa ,với bắc hoa gồm có đài, cánh hoa, nhị đực xếp thành vòng, nhị có tâm bì bầu hạ Cánh hoa màu xanh mờ với biến sắc màu đỏ tía, gốc có màu trắng nhạt mặt cánh hoa có vảy Trong năm dứa hoa nhiều vụ thường vào tháng – tháng thu hoạch vào tháng – tháng Cuống dứa có chiều dài so với chiều dài tương đối ngắn, trọng lượng trung bình cao từ - kg / trái, hình trụ, mắt to dẹt, màu đỏ da cam, chín mắt nhơ lên Thịt chín nhiều trong, không xơ, màu vàng nhạt Vị chua, đường kính lõi trung bình khoảng 2,5 cm.Trên dứa chồi thường to đơn độc Theo Cl.Py Tissesau (1960) nhiệt độ thích hợp cho chín 250C cao làm tăng độ chua phẩm chất Dứa khơng có hạt để tự Nếu đem lai giống khác có hạt Hạt dứa bé, có màu tím đen, hình trứng trịn dài độ mm, có vài hạt Hạt dứa nảy mầm yếu cần phải xử lý có tỷ lệ nảy mầm cao 2.2.4 Đặc tính di truyền học Năm 1931, J.L Collins K.R.Kern xác định số nhiễm sắc thể Ananas Comosus loài lân cận 2n = 50 Ở tất lồi A.comosus nhiễm sắc thể nhỏ hình cầu Một đặc trưng di truyền thể dứa hình thái Nó phân biệt thành dạng: - Lá có gai ngọn, đặc trưng cho Smooth Cayenne - Lá hồn tồn có gai, trường hợp xuất hầu hết loài - Lá hoàn toàn khơng gai hay cịn gọi với tên viền Tính trạng có gai gai đơi tính trạng có gai tính trạng trội (S) có gai tính trạng lặn (s) Đều chứng minh Cayenne dị hợp tử tất loại có gai đồng hợp tử với tính (s) Mặt khác, tính trạng viền hay khơng viền cặp tính trạng độc lập (P) cân đối với tính trạng (S) (s) Đồng thời Collins chứng minh tồn gen khác, tất gen đơi tính trạng gen „có gai‟ Số lượng trung bình chồi cuống một đặc trưng di truyền lại ảnh hưởng ngoại cảnh phát triển sinh trưởng dứa phân hoá hoa tự Đây đặc trưng quan trọng cần theo dõi vật liệu tốt để trồng sau dễ xảy nhiều biến dị trình phát triển Một số biến dị di truyền thường xảy dứa ảnh hưởng phương diện kinh tế như: biến dị kéo dài quả, với hình dạng dài đường kính bé; biến dị “quả khơ” tất phận hoa không đậu, trừ bắc, trở thành biến dị “cổ chai” cho phận hoa phần hoa tự không đậu; biến dị biểu sinh sôi nảy nở quanh mắt hay mắt (Claude Py m.A.tisseau, 1993) 2.2.5 Tình hình sản xuất tiêu thụ nƣớc giới 2.2.5.1 Thế giới Theo số liệu thống kê (Anon., 2002) thu thập từ FAO (Food and Agriculture Organisation) Hoa Kỳ, sản lượng dứa giới 1999 - 2001 13.527.149 triệu ước tính ổn định năm Sản lượng giới tăng gấp lần 30 năm qua (3.833.137 năm 1961 đến 13.738.735 năm 2001) Những nước đứng đầu sản lượng năm 2001 bao gồm Thái Lan (2.300.000 tấn), Philippine (1.571.904 tấn), Brazil (1.442.300 tấn), Trung Quốc (1.284.000 tấn) Những nước chiếm ưu thị trường dứa tươi (khoảng 670.000 tấn) Costa Rica, Philippine Cote d‟Ivoire; dứa đông lạnh Thái Lan Philippine (Rohrbach ctv, 2003) Mỹ nước nhập dứa lớn từ năm 1998 - 2000 bình quân 552597 ngàn USD / năm dạng dứa đóng hộp, tươi đặc Theo thống kê, sản lượng giống dứa Smooth Cayene chiếm 70 % sản lượng giới hầu hết dạng đóng hộp (khoảng 95 %) Tuy nhiên giống sản xuất dạng dứa tươi chất lượng chưa tốt nên trở thành áp lực cho nhà đầu tư đòi hỏi phải cải thiện giống Cayenne để cung cấp dạng tươi tốt (Sanewski and Scott, 2000) Hiện nay, số nước cố gắng phát triển giống Cayenne Đài Loan, Malaysia, Cuba, Brazil Pháp 2.2.5.2 Trong nƣớc Theo số liệu điều tra viện quy hoạch thống kê nơng nghiệp, diện tích dứa Cayenne năm 2002 3.641 trồng 18 tỉnh, thành phố số gia tăng năm gần Các tỉnh có diện tích dứa Cayenne nhiều Ninh Bình (700 ha), Nghệ An (695 ha), Hà Tỉnh (438 ha),(Tuấn Tiến, 2002) Sản lượng dứa tươi sản xuất nước theo tổng cục thống kê Nông-Lâm-Ngư dao dộng từ 263 – 316 ngàn / năm Đồng Bằng Sơng Cửu Long chiếm gần 71 % Nguyên liệu cung cấp cho nhà máy chế biến tình trạng cung chưa đủ cầu đời nhiều nhà máy chế biến dứa với công suất cao kỹ thuật đại Đồng Giao Tiền Giang, An Giang hay nhiều nhà máy nhỏ công suất nhỏ Hà Tỉnh, Hồ Chí Minh, Cần Thơ 2.3 Nguyên tắc ứng dụng số phƣơng pháp nghiên cứu đa dạng di truyền nhờ vào thị (marker) 2.3.1 Phƣơng pháp sử dụng thị hình thái Về mặt nguyên tắc, tính trạng hình thái locus kiểm sốt mà biểu khơng bị ảnh hưởng tác động mơi trường, dùng làm thị hình thái trình chọn lọc (Lê Duy Thành, 2000) Chỉ thị hình thái ứng dụng nhiều nghiên cứu đa dạng di truyền nhiều đối tượng khác Trong đó, có nhiều thành cơng thực vật như: 10 dứa, Duval d‟Eeckenbrugge., (1993) phân tích nhóm dứa trồng với 18 tính trạng chất lượng 27 tính trạng số lượng bao gồm đặc tính thực vật, hoa trái Kết cho thấy tương đồng giống Cayenne, Queen Pernambuco, Mordilona Spanish nằm nhóm khác Ngồi lúa, Kato cs., (1928, 1930) thị hình thái chia lúa trồng thành lồi phụ Indica Japonica Sau thị hình thái Morinaga (1954) chia thêm lồi phụ thứ 3, Javanica Mặc dù thị hình thái tiện lợi, dễ xác định đo trực tiếp kiểu hình chúng lại có hạn chế định: ảnh hưởng nhiều tương tác kiểu gen với mơi trường, số lượng marker có giới hạn qui mơ hình thái thể giai đoạn định trình phát triển cá thể (Bùi Chí Bửu Nguyễn Thị Lang, 2004) 2.3.2 Phƣơng pháp sử dụng thị izozyme Isoenzyme hay isozyme nhóm enzyme xúc tác phản ứng, bị ức chế phân tử khác có nhiều dạng hiệu xúc tác khác Isozyme có chất protein chất đa điện ly, nên dung dịch trạng thái phân cực Dưới tác dụng dòng điện chiều, phân tử protein khác kích thước, trọng lượng phân tử, lực tích điện chuyển động với tốc độ khác phân bố vị trí khác gel sau điện di Các phân tử protein enzyme gen quy định Trong q trình tiến hố, tác động mơi trường bên ngồi bên thể, gen biến đổi hình thành allen khác mã hố cho q trình tổng hợp phân tử protein khác lượng, kích thước, lực tích điện Vì vậy, dùng phương pháp điện di tách loại protein khác Trong nghiên cứu đa dạng di truyền khác protein phản ánh khác đặc điểm di truyền cá thể Chính isozyme dùng làm marker phân tích mức độ đa dạng di truyền lồi Phân tích isozyme nhìn chung phương pháp khả thi, đồng tính trội tương đối rẻ tiền Khoảng 90 isozyme sử sụng thực vật, với vị trí (loci) isozyme lập đồ nhiều lĩnh vực (Tanksley ctv, 1991) Tuy 50 PHẦN V: KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 5.1 Kết luận - Dựa vào kiểu hình 50 dịng dứa từ giống Cayenne thuộc nhóm khác nhau, có tương quan giống nhập nội với giống có nguồn gốc nhập ngoại Những dịng có nguồn gốc có đa dạng kiểu hình - Trong tổng số 13 primer tiến hành nghiên cứu đa dạng di truyền có primer cho sản phẩm khuếch đại - Qua phương pháp RAPD cho thấy đa dạng phân nhóm khác tập đồn dứa Cayenne gồm 50 dịng có nguồn gốc khác - Tập đồn dứa Cayenne khảo sát phân thành nhóm thơng qua marker RAPD mức độ tương đồng di truyền 66% Trong đó, dịng dứa nhóm II có khác biệt di truyền cao so với nhóm I nhóm III - Xác định dịng OMK19 khơng phải giống Cayenne mà thuộc giống Queen Một số dòng bị phân ly lai tạp giống Queen Cayenne OMK36, OMK1 - Sử dụng phương pháp marker phân tử dự đốn cá thể có khả tạo ưu lai chọn tạo giống - Phương pháp phân nhóm di truyền dựa marker RAPD tương đối xác kiểu hình Dựa vào marker phân tử đánh giá gián tiếp diện hay không diện gen chọn lọc nhờ marker mà không bị ảnh hưởng môi trường - Ứng dụng phương pháp marker phân tử phân tích đa dạng di truyền địi hỏi có đầu tư lớn trang thiết bị, máy móc kiên trì lâu dài 5.2 Đề nghị - Nghiên cứu phân tích đa dạng nhiều tính trạng hình thái để có phân nhóm xác kiểu hình Từ tìm hiểu tính trạng có đóng góp nhiều khác biệt di truyền để kiểm soát khai thác dễ dàng - Tiếp tục thử nghiệm, phân tích để tìm nhiều primer khác phân biệt dòng dứa từ Cayenne cách chi tiết hơn, tạo sở cho việc xây dựng hoàn chỉnh sơ đồ phân nhóm di truyền dứa - Tiếp tục ứng dụng marker RAPD để tìm liên kết với gen quy định tính trạng hình thái suất, thời gian sinh trưởng, hình dạng trái, hình dạng 51 - Tiếp tục ứng dụng phương pháp marker phân tử nhiều giống khác để nghiên cứu đa dạng di truyền nhận diện giống TÀI LIỆU THAM KHẢO TIẾNG VIỆT Bùi Chí Bửu, Nguyễn Thị Lang, 2004 Di truyền phân tử NXB Nông Nghiệp TP Hồ Chí Minh Bùi Chí Bửu, 2002 Cơ sở di truyền tính kháng sâu bệnh hại trồng Nhà xuất Nơng Nghiệp, Tp.Hồ Chí Minh, trang: 11-53, 89-108, 183-195 Claude Py M A tisseau., 1993 Cây dứa (Ưng Định dịch) Nhà xuất nông thơn Trịnh Đình Đạt, Nguyễn Văn Niệm, Nguyễn Thị Minh Nguyệt, Lê Trung Kiên, 1998 Nghiên cứu số enzyme Ong nội (Apis cerana) bốn địa phương khác Báo Cáo khoa học Nguyễn Thị Thu Đơng, 1998 Khảo sát tính đa dạng di truyền hai tập đoàn giống xoài (Mangifera indica) phương pháp điện di Isozyme Luận án thạc sĩ khoa học nông học, Đại Học Cần Thơ, Tp Cần Thơ, trang 14 - 15 Vũ Công Hậu, 1999 Trồng ăn Việt Nam Nhà xuất Nông Nghiệp, trang 185 – 212 Nguyễn Văn Kế, 2001 Cây ăn nhiệt đới Nhà xuất Nông Nghiệp, Thành Phố Hồ Chí Minh Nguyễn Thị Lang, 1999 Những phương pháp nghiên cứu Công Nghệ Sinh Học Nhà xuất Nơng Nghiệp, Tp.Hồ Chí Minh Nguyễn Thanh Nhàn ctv, 2003 Phân biệt giống phân tích nhóm / lồi thuộc chi Citrus Việt Nam thị RAPD Kết nghiên cứu công nghệ rau quả, 2002-2003, Viện nghiên cứu ăn miền nam Nhà xuất Nơng Nghiệp, Tp.Hồ Chí Minh, trang 48 - 56 10 Phan Lê Diệu Phương, 2003 So sánh đặc điểm nơng học bước đầu tìm hiểu tính đa dạng di truyền số giống dưa leo ưa chuộng Luận văn tốt nghiệp kỹ sư Nơng Học, Đại Học Nơng Lâm Tp Hồ Chí Minh, 55 trang 11 Phạm Bình Quyền, 2002 Đa dạng sinh học Nhà xuất Đại Học Quốc Gia, Hà Nội 52 12 Richard B Primack, 1999 Cơ sở sinh học bảo tồn Nhà xuất Khoa Học Kỹ Thuật 13 Khuất Hữu Thành, 2003 Cơ sở di truyền phân tử kỹ thuật gen Nhà xuất khoa học kỹ thuật, Hà Nội, trang 151 – 157 14 Lê Duy Thành, 2000 Cơ sở di truyền chọn giống thực vật Nhà xuất khoa học kỹ thuật, Hà Nội, trang 139 – 154 15 Hoàng Thị Bích Thuỷ , 2004 Nghiên cứu đa dạng di truyền giống (dòng) dứa thị RAPD Luận văn tốt nghiệp kỹ sư Công Nghệ Sinh Học, Đại Học Khoa Học Tự Nhiên 16 Đoàn Hữu Tuấn Tạ Minh Tiến, 2003 Khảo sát thị trường dứa giới nhu cầu dứa tươi Đồng Bằng Sông Cửu Long Kết nghiên cứu khoa học công nghệ rau 2001-200, Viện Nghiên Cứu Cây Ăn Quả Miền Nam Nhà xuất Nơng nghiệp, Tp Hồ Chí Minh 17 Trần Thế Tục, Vũ Mạnh Hải, 2002 Kỹ thuật trồng dứa Nhà xuất Nông Nghiệp Hà Nội 257 trang 18 Đỗ Đức Tuyến, 2000 Nghiên cứu đa hình di truyền số dịng, giống lúa phục vụ cơng tác chọn giống Khố luận tốt nghiệp hệ đại học quy nghành Sinh Học 19 Trần Thị Oanh Yến, Luro Francosis Nguyễn Ngọc Thi, 2003 Phân tích tính đa dạng di truyền nguồn gen có múi Việt Nam microsattelitte marker Kết nghiên cứu công nghệ rau quả, 2002-2003, Viện nghiên cứu ăn miền nam Nhà xuất Nông Nghiệp, Tp.Hồ Chí Minh, trang 57 - 66 TIẾNG NƢỚC NGỒI 20 Anon, 2002 FAOSTAT Database Food and Agriculture Organisation of the United Nations Rome, Italy 21 Antoni Rafalski, Scott Tingey and Jonhn G.K Williams, 1994 Random amplified polymorphic DNA (RAPD) markers Plant molecular biology manual / H4, p.1 - 22 Aradhya M.K., Zee F and Manshardt R.M 1994 Isozyme variation in cultivated sand wild pineapple Euphytica 79: 87–99 23 Bachmann K., 1992 Phenotypic similarity and genetic relationship among populations of Microseris bigelovi (Aster-aceae: Lactuceae) Bot Acta, 105: 337342 53 24 Boonsermsuk, S., T Anai, K Hasegawa, and S Hisajima, 1997 Variation in Random Amplified Polymorphic DNA of sago palm (Metroxylon Spp.) in ThaiLand Japan J Trop Agr 41 (2): 89 – 92 25 Duval M.F., and d‟Eeckenbrugge G., 1993 Genetic variability in the genus Ananas Acta Hort 334: 27 – 32 26 Duval M-F., J-L Noyer., X Perrier., G Coppens d'Eeckenbrugge and P Hamon., 2001 Molecular diversity in pineapple assessed by RFLP markers Theoretical and Applied Genetics 102: 83 - 90 27 Ellsworth, D.L., D Rittenhouse, and R.L Honeycutt 1993 Artifactual variation in random amplified polymorphic DNA banding patterns Bio Techniques 14: 214 – 217 28 Henry T Nguyen, 1998 Molecular Marker Protocol Section III, Texas Technology University plant molecular genetics laboratory http://www.ogtr.gov.au/pdf/ir/pineapple.pdf 29 Kangle Zheng, Ning Huang, John Bennett and Gurdev S Khush,1995 PCR- bases marker-assisted selection in rice breeding IRRI discation paper series No 12 30 Martínez de Toada, F and Sancha, J.C Ampelographical characterization of red Vitis vinifera L cultivars preserved in Rioja Bulletin de l`OIV, Mars-Avril 1997a, vol 70, no 793 - 794, p 220 – 234 31 Nguyen Thi Lang, 2002 Protocol for molecular biotechnology Ed Nong Nghiep Publisher, Ho Chi Minh City 32 Phạm Thi Be Tu, Nguyen Thi Lang Bui Chi Buu, 2003 Soybean genetic diversity analysis OmonRice 11: 138 - 141 Agricultural Publishing House, Ho Chi Minh City 33 Pham Trung Nghia, JPS Malik, Mp.Paamdeey and NR.Singh, 1999 Genetic distance analysis ò hydrids parental line based on morphological raits and markers OmonRice, Journ Cuu Long Delta Rice Research Insitute Vietnam, p 49 – 59 Agricultural Publishing House, Ho Chi Minh City 34 Rohfl FJ, 1992 NTSYSpc: Numercial taxonomy and multivariate analysis system New York: Exeter Software 35 Rohrbach, KG, Leal, F., and Coppens d‟Eeckenbrugge, G., 2003 History, distribution and world production The Pineapple:Botany, Production and Uses (Eds Bartholomew, DP, Paull, RE and Rohrbach, KG) CABI Publishing, Oxon, UK, p 1- 12 36 Sanewski, G and Scott, C., 2000 The Australian pineapple industry In: Proceedings of the Third International Pineapple Symposium (Eds 54 Subhadrabandhu, Sand Chairidchai P.) International Society for Horticultural Science, Pattaya, Thailand, p 53 - 55 37 Sergio Feuse, Kelin Meler, Marcos Daquinta, Miguel P Guerra and Rubens O Nordari, 2003 Plantcell, Tissue and Organ Culture, 72: 221 - 227) 38 Sneath, P H A and R R Sokal., 1973 Numerical Taxonomy Freeman, San Francisco 573 pages 39 Sun, Samuel S.M., 1994 Methods in plant molecular biology and agricultural biotechnology: a laboratory training manual Asian Vegetable Research and Development Center: Shahua, Tainan, Taiwan (ROC), p – 41 40 Tanksley, S.D., N.Ahn, M.Cause, R.Coffman, T.Fulton, S.R.McCouch, G.Sencond, T.Tai, Z.Wang, K.Wu, Z.Yu 1991 RFLP mapping of rice genome Rice genetics Vol II: 435 - 449 Intenational Rice Research Institute 55 PHỤ LỤC Phụ lục I: Bảng Anova Phân tích Anova chiều cao 50 dòng dứa Cayenne ============================================================ SV DF SS MS F ============================================================= LL (R) 18.490000 18.490000 1.27 ns NT (T) 49 2123.410000 43.334898 2.97 ** ERROR 49 715.010000 14.592041 TOTAL 99 2856.910000 ============================================================= cv = 3.6% ** = significant at 1% level; ns = not significant Phân tích Anova chiều rộng tán 50 dòng dứa Cayenne ============================================================ SV DF SS MS F ============================================================= LL (R) 1.000000 1.000000
