38 3.4. Phương pháp xử lý số liệu Số liệu được xử lý theo phương pháp xác suất thống kê dựa trên cơ sở phân tích dữ liệu khoa học bằng chương trình MS-EXCEL Trung bình mỗi mẫu: Xtb = n Xi Xi: trị số của mẫu N: số lượng mẫu Phương sai của nghiệm thức S 2 S 2 = 2 1 1 )( − − ∑ = n XtbXi n i Độ lệch chuẩn của nghiệm thức: độ lệch chuẩn của mẫu là S. Độ lệch chuẩn nói lên mức độ chêch lệch giữa các số liệu. Số liệu càng rời rạc thì độ lệch chuẩn càng lớn; ngược lại số liệu càng tập trung thì độ lệch chuẩn càng nhỏ. S = 2 S 95% các giá trị thống kê được của các môi trường sẽ nằm trong khoảng: Xtb ± S Tốc độ lan hệ sợi trung bình của mỗi nghiệm thức (N) N = k Xtb k: số ngày tơ lan Phần mềm Statgraphics Vers 7.0 Sử dụng phần mềm này để xác định sự khác biệt giữa các giá trị thu nhận được của các nghiệm thức thí nghiệm ở mức α = 0,05 hay LSD (95%) (Least Significant Difference). 9 Hai nghiệm thức có trung bình cách nhau một khoảng nhỏ hơn LSD (95%) thì xem như không khác nhau ở mức α = 0,05. 9 Ngược lại, nếu trung bình của hai nghiệm thức cách nhau một khoảng lớn hơn LSD (95%) thì xem như hai mẫu khác nhau ở mức α = 0,05. 39 Phần 4. KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 4.1. Quan sát hình thái giải phẫu 4.1.1. Hình thái cấu tạo quả thể Hình 4.1: Quả thể nấm Vân chi đen Trametes versicolor (theo chiều từ trên xuống, trái qua phải: Hình 4.1a, Hình 4.1b, Hình 4.1c, Hình 4.1d ) 9 Hình 4.1a: Mặt trên nấm vân chi với những đường đồng tâm màu xám tro, nâu đen đến đen 9 Hình 4.1b: Quả thể nấm vân chi gồm nhiều lớp đan xen nhau 9 Hình 4.1c: Quả thể nâm vân chi cắt ngang 9 Hình 4.1d: Mặt dưới tai nấm vân chi Quả thể vân chi khi non mọc thành từng u lồi tròn màu trắng, trắng kem hay hơi ngã màu nâu, càng lớn sẽ xuất hiện dạng vành gồm nhiều lớp đan xen chồng chất lên nhau như ngói lợp. Mủ nấm hình quạt, cứng mỏng. Mép mủ mỏng, sắc cạnh, nguyên hay xẻ thuỳ sâu nông không theo quy luật. Mặt trên tai nấm có lớp lông mịn, dày, ngắn khoảng 0,3 – 0,5 mm. Lớp lông mịn này tạo thành nhiều đường đồng tâm có màu sắc thay đổi từ đen, nâu đen, xám tro đến nâu đất. Càng ra phía ngoài mép tán, màu sắc của các đường đồng tâm càng nhạt, càng ngã sang nâu nhiều hơn đen, mép tán có lớp 40 lông mịn màu trắng hay hơi vàng nâu. Tuy nhiên ở những vùng tán nấm nhận ít ánh sáng thì có màu vàng nâu, màu nâu, tương tự những tán nằm phía dưới cũng xuất hiện màu nâu nhiều hơn. Mặt dưới tai nấm là lớp bào tầng màu trắng - trắng kem có nhiều lỗ nhỏ. Miệng lỗ nguyên, có dạng gần tròn hay oval. Phần thịt nấm mỏng, màu trắng, trắng kem, dày 1 – 2 mm. Hệ sợi trong phần thịt nấm rất dai, bện kết chặt với nhau, quan sát thấy có hai loại sợi: 9 Sợi cứng vách dày 1,5 – 2,7 µm, thẳng, trong suốt, không có vách ngăn ngang, đường kính 3 – 6,5 µm, rất ít khi phân nhánh. 9 Sợi bện ngắn, ngoằn ngoèo, phân nhánh rất rõ, đường kính 2 – 4 µm, vách dày 0,7 – 1,7 µm. Hình 4.2: Hệ sợi trích từ quả thể nấm vân chi 4.1.2. Hình thái cấu tạo hệ sợi hệ sợi thứ cấp Nấm Vân chi Trametes versicolor xuất hiện 3 loại hệ sợi. Khi quan sát hiển vi không nhuộm màu, cả 3 loại sợi đều không màu, trong suốt. Sợi dinh dưỡng có vách tế bào dày 0,34 – 0,6 µm, vách ngăn ngang mỏng, đường kính 2,7 – 4,4 µm, không phân nhánh hoặc ít phân nhánh. Sợi bện có vách tế bào dày hơn sợi dinh dưỡng, không có vách ngăn ngang, phân nhánh nhiều, đường kính 2,5 – 4,5 µm. Sợi cứng ở vùng thịt nấm có vách dày chiếm gần 2/3 đường kính, không có vách ngăn ngang, không phân nhánh, có đường kính 3,4 – 6,1 µm. 41 a b c Hình 4.3: Hệ sợi vân chi lấy từ môi trường thạch a: Sợi dinh dưỡng; b: Sợi cứng; c: Sợi bện 4.1.3. Đảm và bào tử đảm Không quan sát được đảm, chỉ quan sát được bào tử đảm. Bào tử đảm trong suốt, nhẵn, thon dài hơi cong giống hình quả dưa gang, vách mỏng, có đường kính 1,7 – 2,4 µm, chiều dài 3,4 – 5,1 µm. 42 Hình 4.4: Bào tử nấm vân chi 4.2. Khảo sát đặc điểm dinh dưỡng, sinh lý của hệ sợi nấm vân chi trên môi trường thạch 4.2.1. Khảo sát đường kính tăng trưởng của hệ sợi trên các môi trường dinh dưỡng khác nhau Kết quả đo đường kính hệ sợi lan trên 5 môi trường thạch dinh dưỡng khác nhau được trình bày ở Bảng 4.1 Bảng 4.1: Đường kính hệ sợi lan trên 5 môi trường theo thời gian Đường kính hệ sợi lan (mm) Thời gian (ngày) MT1 MT2 MT3 MT4 MT5 3 39,82 ± 3,90 27,63 ± 1,19 37,76 ± 0,98 41,31 ± 1,54 39,57 ± 2,51 4 62,15 ± 3,24 45,42 ± 0,58 59,56 ± 3,00 65,58 ± 1,62 60,57 ± 0,33 5 79,24 ± 0,24 60,22 ± 0,67 78,11 ± 3,10 82,81 ± 1,35 78,79 ± 2,75 0 20 40 60 80 100 12345 Môi trường mm 3N 4N 5N Biểu đồ 4.1: Biểu diễn đường kính hệ sợi lan trên 5 môi trường dinh dưỡng theo thời gian 43 Quan sát hệ sợi lan đến ngày thứ 5 nhận thấy: Trên MT2, hệ sợi lan chậm và lan thưa nhất, mức độ tập trung hệ sợi mỏng, đường kính tăng trưởng có sự sai khác đối với tất cả các môi trường còn lại; ở MT4 (môi trường PSA có bổ sung nước dừa), hệ sợi lan nhanh nhất do trong nước dừa có một số khoáng cần thiết và một số loại vitamin có tác dụng kích thích sự tăng trưởng hệ sợi nấm, nhưng so về mặt thống kế không có sự sai khác có ý nghĩa giữa đường kính hệ sợi lan trên MT4 với MT1, MT4 với MT5, nhưng có sự sai khác giữa MT4 với MT3 (môi trường PSA có bổ sung khoáng chất tổng hợp). Tuy nhiên ở MT3, hệ sợi mọc dày nhất, xuất hiện sắc tố sớm hơn các môi trường còn lại. Thời gian hệ sợi bắt đầu xuất hiện sắc tố (màu nâu vàng hay nâu đen) là khoảng 6 – 8 ngày sau khi cấy và càng để lâu hệ sợi càng dai. Như vậy, để nhân giống hiệu quả, MT4 (gồm khoai tây + 10% nước dừa + đường) là môi trường thích hợp nhất và thời gian nhân giống tốt nhất là khoảng 6 – 8 ngày sau khi cấy. Hình 4.5: Đường kính hệ sợi tăng trưởng trên các môi trường dinh dưỡng sau 4 ngày cấy 44 4.2.2. Khảo sát ảnh hưởng của nhiệt độ Kết quả đo đường kính hệ sợi lan trên môi trường BTH ở hai mức nhiệt độ được trình bày ở Bảng 4.2. Bảng 4.2: Đường kính hệ sợi lan trên môi trường BTH ở hai mức nhiệt độ theo thời gian Đường kính hệ sợi lan (mm) Thời gian (ngày) 30 o C 27 o C 3 37,76 ± 2,98 33,46 ± 3,66 4 59,56 ± 3,00 52,18 ± 3,16 5 78,11 ± 3,10 72,26 ± 1,89 0 20 40 60 80 100 30 27 Nhiệt độ (oC) mm 3N 4N 5N Biểu đồ 4.2: Biểu diễn đường kính hệ sợi nấm vân chi lan trên môi trường BTH ở nhiệt độ 27 o C và 30 o C theo thời gian Đường kính hệ sợi lan ở nhiệt độ phòng (30 ± 2 o C) lớn hơn ở nhiệt độ mát (27 ± 2 o C) về mặt thống kê có sự sai khác có ý nghĩa. Vì đây là loài nấm có nguồn gốc từ Trung Quốc nên có thể nhiệt độ thích hợp cho sự hình thành quả thể là thấp, nhưng khi quan sát trên môi trường thạch thì khác, ở nhiệt độ phòng hệ sợi vẫn phát triển tốt. Do đó khi phân lập hay nhân giống chỉ cần để ở nhiệt độ phòng cũng đạt được năng suất mong muốn. 45 Hình 4.6: Đường kính hệ sợi lan trên môi trường BTH ở 27 o C và 30 o C vào ngày thứ 4 4.2.3. Khảo sát ảnh hưởng của pH Số liệu thu thập trong 5 ngày đo đường kính của hệ sợi nấm vân chi lan trên môi trường BTH ở các pH khác nhau được trình bày trong Bảng 4.3. Bảng 4.3: Đường kính hệ sợi lan trên môi trường BTH ở các pH khác nhau theo thời gian Đường kính hệ sợi lan (mm) Thời gian (ngày) pH7 pH6,5 pH6 pH5,5 pH5 3 24,93 ± 2,17 30,60 ± 3,03 33,06 ± 3,59 35,21 ± 3,29 36,15 ± 3,20 4 37,50 ± 2,32 46,88 ± 2,81 53,10 ± 2,64 57,38 ± 4,26 57,61 ± 3,22 5 49,15 ± 2,06 61,18 ± 2,00 70,10 ± 3,71 75,64 ± 3,22 74,38 ± 3,27 0 20 40 60 80 7 6,5 6 5,5 5 pH mm 3N 4N 5N Biểu đồ 4.3: Biểu diễn đường kính hệ sợi lan trên môi trường BTH ở các pH khác nhau theo thời gian 46 Phân tích số liệu nhận xét thấy, ở pH 5,5 hệ sợi nấm vân chi lan nhanh, dày, đều, có đường kính tăng trưởng lớn nhất; tuy nhiên tốc độ lan ở pH 5 và pH 5,5 không có sự khác biệt về mặt thống kê; ở pH 7 hệ sợi lan chậm nhất, khác biệt so với tất cả pH còn lại. pH càng cao khả năng lan của hệ sợi càng chậm, khi vượt quá pH 9 thì hệ sợi có thể chết [3]. Vậy trong nhân giống cấp một cần điều chỉnh pH môi trường nằm trong khoảng 5 – 5,5. Hình 4.7: Đường kính hê sợi lan trên môi trường BTH ở các pH vào ngày thứ 4 4.3. Khảo sát môi trường nhân giống cấp hai (môi trường hạt) Kết quả đo chiều dài hệ sợi lan trên các môi trường nhân giống cấp hai được thể hiện ở Bảng 4.4 Bảng 4.4: Chiều dài hệ sợi lan trên các môi trường nhân giống cấp hai Chiều dài hệ sợi lan (mm) Môi trường Ngày thứ 4 Ngày thứ 6 Ngày thứ 8 Ngày thứ 10 Ngày thứ 12 1 40,33 ± 3,18 57,14 ± 3,20 73,86 ± 3,05 85,28 ± 3,75 92,94 ± 4,07 2 39,61 ± 2,37 57,56 ± 1,90 74,19 ± 2,16 88,42 ± 0,52 102,17±0,44 3 37,08 ± 1,10 52,56 ± 0,77 68,44 ± 0,38 82,33 ± 0,67 94,92 ± 1,37 4 33,61 ± 3,13 47,46 ± 3,50 63,31 ± 2,16 73,11 ± 2,50 82,06 ± 3,00 5 38,08 ± 1,72 55,97 ± 1,89 73,56 ± 1,50 88,36 ± 2,29 100,92±1,91 6 34,92 ± 2,17 50,50 ± 2,68 66,78 ± 1,58 79,42 ± 1,88 94,39 ± 1,64 7 35,11 ± 1,90 47,11 ± 3,36 60,31 ± 4,04 70,31 ± 4,89 77,89 ± 4,01 8 33,50 ± 3,66 45,39 ± 3,62 58,28 ± 2,61 67,67 ± 4,06 75,42 ± 3,64 9 37,92 ± 1,91 53,75 ± 2,27 70,58 ± 2,48 83,39 ± 2,64 92,14 ± 2,66 47 0 20 40 60 80 100 120 123456789 Môi trường mm 4N 6N 8N 10N 12N Biểu đồ 4.4: Biểu diễn chiều dài hệ sợi lan trên các môi trường nhân giống cấp hai Kết quả sau 12 ngày đo cho thấy: hệ sợi lan trên các môi trường lúa, bắp xay có bổ sung dinh dưỡng tốt hơn lan trên các môi trường mùn cưa. Hệ sợi ở các môi trường lúa và trên môi trường bắp xay lan nhanh, dày, màu trắng, bện kết chặt với nhau, còn trên môi trường mùn cưa, hệ sợi lan chậm hơn, mức độ tập trung hệ sợi thưa, khả năng bện kết yếu. Khi phân tích thống kê các số liệu thu thập được, MT8 là môi trường có hệ sợi lan chậm và yếu nhất, MT2 và MT5 là môi trường có hệ sợi lan nhanh, mạnh, dày, có chiều dài hệ sợi lan dài và khác biệt so với các môi trường còn lại. Vậy để đạt được năng suất cao trong nhân giống trung gian có thể chọn MT2 hoặc MT5; nhưng để nhân giống số lượng lớn phục vụ sản xuất, MT2 (Lúa, Mùn cưa, Cám bắp) tối ưu hơn MT5 (Bắp xay, Mùn cưa, Đậu xanh) vì giá thành MT2 kinh tế hơn, mức độ lan của hệ sợi đồng đều hơn và sự chêch lệch giữa các số liệu thu thập từ MT2 thấp hơn MT5. Trên các môi trường, hệ sợi bắt đầu xuất hiện sắc tố từ ngày thứ 15 sau khi cấy. Khi có sự xuất hiện sắc tố (màu vàng hay vàng nâu) thì hệ sợi bện chặt lại với nhau và rất dai . Do từ ngày thứ 15, hệ sợi bắt đầu già và dai, vậy nên tiến hành cấy chuyền hay cấy sang môi trường nuôi trồng tốt nhất là khi hệ sợi được 12 – 15 ngày tuổi. . xám tro, nâu đen đến đen 9 Hình 4.1b: Quả thể nấm vân chi gồm nhiều l p đan xen nhau 9 Hình 4.1c: Quả thể nâm vân chi cắt ngang 9 Hình 4.1d: Mặt dưới tai nấm vân chi Quả thể vân chi khi non. Hình 4. 1: Quả thể nấm Vân chi đen Trametes versicolor (theo chi u từ trên xuống, trái qua phải: Hình 4.1a, Hình 4.1b, Hình 4.1c, Hình 4.1d ) 9 Hình 4.1a: Mặt trên nấm vân chi với những. dày 0 ,7 – 1 ,7 µm. Hình 4. 2: Hệ sợi trích từ quả thể nấm vân chi 4.1.2. Hình thái cấu tạo hệ sợi hệ sợi thứ cấp Nấm Vân chi Trametes versicolor xuất hiện 3 loại hệ sợi. Khi quan sát hiển