Haemophilus influenzae typ b đặc điểm sinh học và tỷ lệ trẻ khỏe mạnh mang vi khuẩn

Chúng không mọc trên các môi trường nuôi cấy thông thường, chỉ mọc khi trong môi trường đã có sẵn cảhai yếu tố X và V.. Yếu tố X có lẽ không phải là một chất thuần tuý mà là hỗnhợp của c

Trang 1

ĐẶT VẤN ĐỀ

H influenzae là thành viên của hệ vi khuẩn ký sinh ở đường hô hấp trên Trong đó, H influenzae typ b (Hib) có ở 1-5% trẻ em khoẻ mạnh vàkhông có biểu hiện bệnh [16] Tỷ lệ mang vi khuẩn thấp nhất ở người lớn vàtrẻ nhỏ, cao nhất ở lứa tuổi mẫu giáo [36], [54], [58] Tuy vậy, trong một sốđiều kiện nhất định như ở các hộ, các trung tâm chăm sóc trẻ ban ngày thì tỷ

lệ trẻ mang vi khuẩn có thể cao hơn một cách đáng kể Mặc dù nhiều nghiên

cứu đã cho thấy tỷ lệ mang vi khuẩn Hib của trẻ nhỏ là dưới 5% Tuy nhiên,

tỷ lệ mang vi khuẩn Hib tại các trung tâm như vậy được báo cáo là 15-25%

[26], [36], [54]

Đường lây truyền của H influenzae từ người này sang người khác

thường thông qua các hạt dịch bắn ra từ đường hô hấp hoặc bởi sự tiếp xúcvới chất tiết của miệng Những yếu tố ảnh hưởng đến hiệu suất lan truyền vàkhả năng vi khuẩn thiết lập sự xâm chiếm còn chưa được hiểu rõ [36]

Hiện nay H influenzae cũng được biết đến là căn nguyên chính gây

viêm màng não mủ và viêm phổi cho trẻ nhỏ Tuy nhiên, tại các phòng xét

nghiệm vi sinh lâm sàng ở trong nước H influenzae vẫn được xếp vào loài vi

khuẩn khó nuôi cấy bởi luôn đòi hỏi môi trường phải có cả hai yếu tố pháttriển (growth factors) là X và V Vì vậy, phần lớn chỉ những phòng xétnghiệm vi sinh tuyến tỉnh và Trung Ương mới có điều kiện để nuôi cấy chẩnđoán vi khuẩn này Thêm vào đó, việc xác định typ huyết thanh và typ sinhhọc hầu như tại các bệnh viện đều ít thực hiện, phần lớn chỉ sử dụng trongnghiên cứu, bởi vậy để xác định được những đặc điểm này đòi hỏi phòng xétnghiệm phải đầu tư thời gian và sinh phẩm đặc thù [3], [16] Cho nên, chẩn

đoán xác định H influenzae thường không được thực hiện một cách hoàn

chỉnh

Trang 2

Xuất phát từ vấn đề trên, chúng tôi thực hiện chuyên đề:

"Haemophilus influenzae typ b: Đặc điểm sinh học và tỷ lệ trẻ khỏe mạnh

mang vi khuẩn" nhằm đưa ra những thông tin cơ bản nhất về vi khuẩn này để

góp phần cho công tác chẩn đoán và phòng bệnh do Haemophilus influenzae

typ b trên lâm sàng Chuyên đề thực hiện với 2 mục tiêu:

1 Tìm hiểu lịch sử phát hiện và đặc điểm sinh học đặc trưng của

Haemophilus influenzae typ b

2 Đánh giá tỷ lệ trẻ khỏe mạnh có mang Haemophilus influenzae typ b và các yếu tố ảnh hưởng

Trang 3

Chương I ĐẶC ĐIỂM SINH HỌC CỦA

HAEMOPHILUS INFLUENZAE TYP B

1.1 Haemophilus influenzae: lịch sử và tên gọi

H influenzae được phân lập lần đầu bởi Richard Pfeiffer từ đờm của

một bệnh nhân bị viêm phổi - cúm trong đại dịch cúm năm 1890 Lúc đó, vikhuẩn này được hiểu lầm là nguyên nhân gây ra bệnh cúm nên được gọi làtrực khuẩn cúm (Influenzae bacteria) Mãi cho đến khi đại dịch cúm xảy ra

trong những năm 1918-1919, người ta mới biết H influenzae chỉ là thành viên

của hệ vi khuẩn ký sinh ở đường hô hấp trên và không phải lúc nào cũng gâybệnh Đến năm 1933, khi phát hiện ra virus cúm là căn nguyên của bệnh cúm,

vai trò của H influenzae mới được làm sáng tỏ: virus cúm gây ra bệnh cúm, còn Haemophilus influenzae chỉ là vi khuẩn “ăn theo” (second invader) sau

khi các tế bào đường hô hấp đã bị tổn thương nặng nề bởi virus cúm [3], [16],

[17] Vì vậy, vi khuẩn này có tên là H influenzae được xuất phát từ nhu cầu

đòi hỏi môi trường giàu chất dinh dưỡng, đó là các yếu tố phát triển có ở máu

(Haemophilus: ưa máu), đặc biệt là yếu tố X (hemin) và yếu tố V (NAD hoặc

NADP) Thêm vào đó, vi khuẩn này lại có mối liên quan lịch sử với bệnh cúm

(Influenzae: bệnh cúm) Cho nên, vi khuẩn được gọi tên là như vậy [3], [16].

1.2 Đặc điểm sinh học đặc trưng của Haemophilus influenzae typ b

1.2.1 Hình thái và cấu trúc [3], [16].

H influenzae là một trong những loài vi khuẩn nhỏ nhất, còn được gọi

là cầu trực khuẩn vì vi khuẩn này có dạng trực khuẩn ngắn (1,0–1,5µm)nhưng uốn cong ở hai đầu trông như hình cầu Tuy nhiên, khi vi khuẩn này ởdịch não tuỷ hình thể có thể kéo dài ra gấp vài lần so với chiều dài thông

thường (Hình 1.1) H influenzae có đặc tính bắt màu Gram âm, không di

động và không hình thành nha bào Thành tế bào vi khuẩn này có cấu trúc bề

Trang 4

mặt lipopolysaccharide–protein tương tự như thành của các vi khuẩn Gram

âm khác Ngoài ra, H influenzae được phân loại thành 2 nhóm: loại không vỏ

polysaccharide (non-typeable không xác định được typ huyết thanh) và loại

có vỏ (typeable xác định được typ huyết thanh) Loài H influenzae (Hi) có vỏ bọc được phân loại tiếp tục theo các typ huyết thanh từ a đến f tuỳ thuộc vào

đặc tính kháng nguyên của vỏ polysaccharide do gen qui định [3][16][17] Vỏbọc typ b là một dạng trùng hợp của ribose, ribitol và phosphate, được gọi làpolyribosyl - ribitol - phosphate (PRP) Polysaccharide bề mặt này liên quan

mạnh mẽ đến tính gây độc của vi khuẩn, đặc biệt là H influenzae typ b (Hib),

là nguyên nhân của nhiều trường hợp nhiễm trùng hệ thống nghiêm trọng bao

gồm cả viêm màng não mủ (trên 90% các ca nhiễm khuẩn lan tràn do Hib).

Hình 1.1 Hình thể của H influenzae typ b trên tiêu bản nhuộm gram

dịch não tuỷ dưới kính hiển vi quang học

Trên thực tế lâm sàng, nếu nhuộm gram bệnh phẩm dịch não tủy từbệnh nhân mà trên vi trường cho thấy nhiều vi khuẩn gram (-) nhỏ, đa hìnhthái thì đây là dấu hiệu rất quan trọng gợi ý cho chẩn đoán sớm viêm màng

não mủ do H influenzae typ b [16].

Trang 5

1.2.2 Sức đề kháng

H influenzae typ b là loại vi khuẩn chịu đựng rất kém với các yếu tố

ngoại cảnh Trong bệnh phẩm, chúng chết nhanh chóng nếu để ánh sáng mặttrời chiếu trực tiếp, để khô hoặc lạnh giá Các chất sát khuẩn thông thườngtiêu diệt vi khuẩn này một cách dễ dàng [61]

Vì vậy, bệnh phẩm để chẩn đoán vi sinh nên được vận chuyển vềphòng thí nghiệm trong vòng 2h, hoặc không quá 6h ở nhiệt độ phòng thínghiệm (24 - 28oC) Nếu là tăm bông phải giữ trong môi trường vận chuyển(bảo quản), có thể giữ ở nhiệt độ 4 - 8oC tối đa 24h trong môi trường vậnchuyển [61]

1.2.3 Đặc điểm nuôi cấy [3]

1.2.3.1 Điều kiện nuôi cấy

H influenzae là loại vi khuẩn khó nuôi cấy Chúng không mọc trên các

môi trường nuôi cấy thông thường, chỉ mọc khi trong môi trường đã có sẵn cảhai yếu tố X và V Yếu tố X có lẽ không phải là một chất thuần tuý mà là hỗnhợp của các chất màu có chứa sắt (như hemin và hematin), khi không có haiyếu tố này trong môi trường nuôi cấy thì chúng không phát triển được

H influenzae dùng yếu tố X để tổng hợp một số enzym như catalase,

peroxidase và các cytochrom của hệ thống vận chuyển điện tử Máu và cácsản phẩm của máu, kể cả hemin là nguồn nguyên liệu truyền thống được sửdụng để sản xuất yếu tố X Thạch máu (5%) có khả năng cung cấp đủ lượng

yếu tố X mà H influenzae cần thiết phát triển Khi dùng hematin tinh chế thì

nồng độ cần thiết là 0,1 – 1,0 µg/ml Yếu tố V là NAD hoặc NADP mặc dù cómặt trong máu, nhưng một phần do chúng nằm bên trong tế bào Mặt khác,trong máu của nhiều loài động vật có NADase, nên trong máu tươi không cóNAD ở dạng tự do Trong thạch chocolate, NAD được giải phóng ra khỏi tế

Trang 6

Hình 1.2 Hiện tượng khuẩn lạc "vệ tinh" của Haemophilus influenzae xung quanh các khuẩn lạc Staphylococcus aureus

bào và NADase bị phá huỷ Khi dùng NAD tinh chế, nồng độ cần thiết là 0,2

máu, người ta thấy các khuẩn lạc H influenzae mọc xung quanh các khuẩn lạc Staphylococcus aureus bội nhiễm thì rất to, trong khi đó ở những vùng xa

thì hoặc là không mọc, hoặc là rất bé Hiện tượng này gọi là hiện tượng “vệtinh” (satellitism), do khả năng tiết ra yếu tố V của vi khuẩn bội nhiễm đã

giúp H influenzae phát triển được thạch máu thông thường.

1.2.3.2 Các môi trường nuôi cấy và đặc điểm khuẩn lạc

Để nuôi cấy H influenzae, có 3 loại môi trường có thể được được sử

dụng [3], [16], [17], [61]:

+ Thạch chocolate có hoặc không có 300µg Bacitracin/ml môi trường

(có tác dụng ức chế các vi khuẩn khác, đặc biệt là liên cầu) để tìm H.

Trang 7

influenzae Đây là loại môi trường thường được sử dụng nhất trong nuôi cấy

và phân lập H influenzae.

+ Thạch máu thỏ tươi 7% :

Sau khi nuôi cấy vi khuẩn vào môi trường phân lập, ủ ấm trong khítrường 5% CO2 (nếu không có tủ ấm CO2, môi trường nuôi cấy được đặt trongmột chuông thủy tinh và đốt 1 cây nến trong quả chuông này Sau khi ngọnnến tắt, khí trường bên trong quả chuông có thể là 3 - 5% CO2) ở 37oC trongthời gian 18 - 24h

Hình 1.3: (1) Khuẩn lạc H influenzae mọc trên môi trường

chocolate ; (2) Khuẩn lạc H influenzae mọc trên môi trường thạch máu thỏ

tươi 7% Sau 18 - 24h, quan sát các khuẩn lạc của H influenzae mọc trên môi

trường với đặc điểm: khuẩn lạc nhỏ kích thước khoảng 1-2 mm, tròn, vồngnhẹ và hơi trong, óng ánh khi chiếu sáng và không gây tan huyết

Sau 16 - 18h nuôi cấy, Haemophilus influenzae phát triển thành những

khuẩn lạc bóng mờ, vồng nhẹ, đường kính từ 1- 2mm và không gây tan huyết

Trang 8

Vi khuẩn Hib luôn có vỏ, khuẩn lạc thường sáng bóng, nhày ướt, óng ánh khi

ánh sáng chiếu vào và có đường kính lớn hơn Ngoài ra, môi trường nuôi cấy

vi khuẩn thuần nhất thường có mùi hăng đặc biệt (hăng indole) Sau 24 - 48h,trạng thái mất vỏ xuất hiện, tính óng ánh biến mất, vi khuẩn tự ly giải và cóthể tính chất bắt màu Gram thay đổi

Trên môi trường lỏng, Haemophilus influenzae thường phát triển làm

đục môi trường Tình trạng mất vỏ xảy ra sớm hơn trên môi trường thạch, vìvậy nếu muốn xác định vỏ cần chọn thời điểm nuôi cấy thích hợp (18h)

Những đặc điểm này cũng cần phân biệt với các loại Heamophilus khác

ở những đặc điểm sau đây:

Bảng 1.1: Những đặc điểm sinh học sinh học để phân biệt H.

influenzae với các Haemophilus khác.

1.2.3.2 Tính chất sinh hóa đặc trưng của H influenzae và phương pháp xác định

Tính chất sinh hóa đặc trưng của H influenzae là nhu cầu đòi hỏi bắt

buộc 2 yếu tố phát triển là X và V trong môi trường nuôi cấy Tính chất này

có thể được xác định bằng một trong các thử nghiệm sau [3], [16], [17], [61]:

- Thử nghiệm với yếu tố X và V:

Trang 9

Sử dụng một đĩa môi trường thạch dinh dưỡng Trypticasein Soya, cấy

vi khuẩn phân lập được nghi ngờ là H influenzae lên một nửa đĩa thạch bằng

cách ria dày theo 3 hướng Sau đó, đặt các khoanh giấy X, V và XV lên vùngnuôi cấy, khoảng cách giữa các khoanh giấy là 1,5 - 2,0 cm Ủ ở 37oC với khítrường 5% CO2 qua đêm rồi đọc kết quả:

+ Nếu vi khuẩn chỉ mọc xung quanh khoanh giấy XV hoặc giữa 2

khoanh giấy X và V thì đó chính là H influenzae, nếu chỉ mọc xung quanh V thì đó là H parainfluenzae.

+ Nếu vi khuẩn chỉ mọc xung quanh khoanh giấy X và XV thì đó là H aphrophilus.

+ Nếu vi khuẩn mọc xung quanh khoanh giấy XV hoặc giữa 2 khoanh

giấy X và V, có gây tan huyết thì đó là H hemolyticus.

Hình 1.4: Thử nghiệm với yếu tố X, V bằng 2 khoanh giấy X, V cho

kết quả là vi khuẩn đòi hỏi bắt buộc phải có cả 2 yếu tố X, V cho sự pháttriển

Trang 10

Hình 1.5: Thử nghiệm với bằng 3 khoanh giấy X, V và XV, cho thấy vi

khuẩn đòi hỏi bắt buộc phải có cả 2 yếu tố X và V cho sự phát triển

Hình 1.6: Vi khuẩn chỉ đòi hỏi bắt buộc phải có cả 1 yếu tố V cho sự

phát triển (H parainfluenzae)

Trang 11

- Thử nghiệm "vệ tinh":

Hình 1.7: Thử nghiệm "vệ tinh" dương tính

Được thực hiện bằng cách cấy vi khuẩn phân lập được nghi ngờ là H influenzae lên cả đĩa thạch hoặc một nửa đĩa thạch máu thỏ (5%) với các

đường ria dày theo 01 hướng Sau đó, bằng kỹ thuật vô trùng, dùng que cấy

lấy khuẩn lạc S aureus chuẩn quốc tế cấy một đường thẳng lên bề mặt đĩa thạch máu vuông góc với các đường đã nuôi cấy vi khuẩn nghi ngờ H influenzae Để đĩa thạch máu đã nuôi cấy vào tủ ấm ở 37oC, 5 - 10% CO2

khoảng 18 - 24 giờ thì đọc kết quả (hình 1.6)

+ Nếu trên đĩa thạch máu chỉ xuất hiện các khuẩn lạc của vi khuẩn thử

nghiệm mọc xung quanh đường cấy của vi khuẩn S aureus thì được chẩn đoán là thử nghiệm "vệ tinh" dương tính (vi khuẩn S aureus có khả năng gây

tan máu, do đó sẽ giải phóng ra yếu tố V từ trong tế bào hồng cầu Kết quảmôi trường thạch máu ban đầu chỉ có yếu tố X, nay có thêm yếu tố V)

Trang 12

+ Nếu trên đĩa thạch máu xuất hiện những khuẩn lạc mọc hầu hết trênmôi trường hoặc không thấy vi khuẩn thử nghiệm mọc, được chẩn đoán là thửnghiệm "vệ tinh" âm tính.

- Xác định nhu cầu đòi hỏi bắt buộc 2 yếu tố phát triển X và V bằng đĩa

thạch Haemophilus Quad ID:

Hình 1.8: Đĩa thạch Haemophilus Quad ID

Đĩa thạch Haemophilus Quad ID được chia ra thành 4 phần (như hình

1.7): 1/4 đĩa thạch với môi trường có chứa haemin (yếu tố X), 1/4 đĩa thạchvới môi trường có chứa NAD (yếu tố V); 1/4 khác của đĩa thạch với môitrường có chứa cả 2 yếu tố X và V; 1/4 đĩa thạch còn lại của với môi trường

thạch máu ngựa 5% dùng để phân biệt giữa H hemolyticus (cũng đòi hỏi bắt

buộc phải có 2 yếu tố phát triển là X và V, nhưng lại có tính chất gây tan

máu) với H influenzae

Tiến hành thử nghiệm:

+ Pha chủng vi khuẩn nghi ngờ H influenzae thuần vào canh thang

Trypticase soy hoặc nước cất để có độ đục tương đương với 0,5 Mc Farland

+ Sử dụng que cấy vô trùng lấy đầy một ăng huyền dịch vi khuẩn cần

xác định cấy zích zắc lên từng 1/4 đĩa thạch Haemophilus Quad ID, bắt đầu từ

Trang 13

Chỉ có yếu tố X

Chỉ có yếu tố V

Gồm có yếu tố X và V

Môi trường thạch máu ngựa (có các khuẩn lạc gây tan máu)

1/4 có chứa yếu tố V và kết thúc ở 1/4 có chứa thạch máu (chú ý: cấy toàn bộmôi trường ở từng 1/4 đĩa thạch, bắt đầu từ phía thành đĩa tới trung tâm củađĩa thạch Chọc que cấy vào phần 1/4 đĩa có chứa thạch máu để xác định tínhchất gây tan máu yếu)

+ Ủ môi trường nuôi cấy ở 37oC với khí trường 5% CO2 qua đêm rồiđọc kết quả bằng cách quan sát vùng thạch máu để xác định tính chất gây tanmáu và các vùng khác để xác định vi khuẩn có mọc hay không

Hình 1.9: Đĩa thạch Haemophilus Quad ID: cho thấy vi khuẩn thử

nghiệm mọc trên cả 2 vùng: vùng 1/4 của đĩa thạch với môi trường có chứa cả

2 yếu tố X và V và 1/4 đĩa thạch lại của với môi trường thạch máu ngựa 5%

và có kèm theo tan máu Vì vậy, vi khuẩn thử nghiệm ở đây là: H hemolyticus.

Trang 14

/ Nếu vi khuẩn thử nghiệm mọc trên cả 2 vùng: vùng 1/4 của đĩa thạchvới môi trường có chứa cả 2 yếu tố X và V và 1/4 đĩa thạch với môi trường

thạch máu ngựa 5% nhưng không có kèm theo tan máu thì đây là H influenzae.

/ Nếu vi khuẩn thử nghiệm mọc trên cả 2 vùng: vùng 1/4 của đĩa thạchvới môi trường có chứa cả 2 yếu tố X và V và 1/4 đĩa thạch chứa môi trường

thạch máu ngựa 5% nhưng có kèm theo tan máu, đây là H hemolyticus (không phải H influenzae).

1.3 Đặc điểm phân loại theo typ huyết thanh, typ sinh học của

Haemophilus influenzae và phương pháp xác định

1.3.1 Đặc điểm phân loại Haemophilus influenzae theo typ huyết thanh

1.3.1.1 Cơ sở phân loại [3], [16], [17]

Năm 1930, H influenzae được xác định thành 2 nhóm chính, đó là loài

không vỏ (không xác được typ huyết thanh - Non typeable) và loài có vỏ (xácđịnh được typ huyết thanh - Typeable) Dựa trên tính đặc hiệu kháng nguyên

của vỏ polysaccharide, H influenzae có vỏ được chia ra thành 6 typ huyết thanh từ a đến f

1.3.1.2 Kỹ thuật xác định typ huyết thanh của Haemophilus influenzae typ b

- Xác định typ huyết thanh của Hi bằng phương pháp ngưng kết với

kháng huyết thanh đặc hiệu đa giá và đơn giá hoặc hoặc chỉ huyết thanh đơngiá typ b [58]

Cách tiến hành:

Cho vào ống nghiệm sạch 0,5ml formalin 0,5% và hoà một ăng vikhuẩn để tạo thành huyền dịch Nhỏ một giọt huyền dịch vi khuẩn lên lamkính và một giọt kháng nguyên Poly, trộn đều bằng cách lắc nhẹ phiến kính,rồi quan sát bằng mắt thường

Trang 15

(+) (-)

/ Nếu phản ứng với huyết thanh Poly dương tính (xuất hiện các hạtngưng kết trong vòng 1 phút): thực hiện phản ứng ngưng kết với các typhuyết thanh b (Chú ý: để xác định những typ còn lại: a, b, c, d, e, f làm tương

tự như trên Nếu chỉ xác định Hib thì chỉ cần làm phản ứng ngưng kết duy

nhất với huyết thanh mẫu typ b và không cần huyết thanh mẫu đa giá)

Hình 1.10: Phản ứng ngưng kết huyết thanh trong định typ H.

influenzae

/ Nếu phản ứng với huyết thanh Poly âm tính (không xuất hiện các hạtngưng kết trong vòng 1 phút), có nghĩa là vi khuẩn thuộc nhóm không xácđịnh được typ huyết thanh, do vậy không cần thực hiện các phản ứng với cáctyp huyết thanh còn lại

- Xác định typ huyết thanh của Hib bằng phương pháp khuếch đại gen

PCR [23]

+ Cặp mồi để xác định đoạn gen đặc hiệu của H influenzae typ b:

Hib-1 (GCG AAA GTG ACC TCT TAT CTC TC)

và Hib-2 (GCT TAC GCT TCT ATC TCG GTG AA)

+ Phản ứng PCR của mỗi mẫu được thực hiện với thể tích cuối cùng là

50 µl, bao gồm: 50 mM KCl, 10 mM Tris-HCl (pH 8.3), 2 mM MgCl2, 200

µM mỗi loại dNTP, 2.5U Taq ADN polymerase và 40 pmol mỗi mồi Quá

trình khuyếch đại gồm các thông số như sau: Giai đoạn 1: Biến tính: 95oCtrong 2 phút; Giai đoạn 2: Gắn mồi: 55oC trong 2 phút; Giai đoạn 3: Kéo dài:

72oC trong 2 phút Quá trình này được thực hiện với 35 chu kỳ, sau đó được ủ

Trang 16

trên 6 phút ở 72 oC và sau đó giữ ở 4oC cho đến khi phân tích Sản phẩm

khuyếch đại là đoạn gen có kích thước là 480 bp

+ Các thành phần tham gia phản ứng ở các mẫu bệnh phẩm được chứatrong ống nghiệm đều giống nhau, chúng chỉ có thể khác nhau về ADN củatừng chủng (luôn có chứng âm và chứng dương đi kèm mẫu khi làm phản ứng

để kiểm tra kết quả)

+ Các sản phẩm sau khi chạy PCR được điện di trên gel agarose 1,5%với dung dịch đệm TAE

+ Điện di với hiệu điện thế 100V, cường độ 80mA trong thời gian 20phút (các mẫu thực nghiệm được điện di song song cùng với chứng âm vàchứng dương) Luôn có thang ADN chuẩn để đối chiếu kết quả khi đọc

+ Bản gel sau khi điện di được ngâm trong dung dịch EthidiumBromide 1% pha loãng trong nước cất (trong 10 phút), sau đó vớt bản gel rangâm vào nước cất 10 phút để khử Ethidium Bromide bám không đặc hiệuvào thạch Sau khi nhuộm, các vạch ADN sẽ phát sáng dưới ánh đèn UV

+ Đọc kết quả bằng mắt hoặc chụp ảnh trong buồng tối dưới tia UV

1.3.2 Đặc điểm phân loại Haemophilus influenzae theo typ sinh học

1.3.2.1 Cơ sở phân loại [17]

Kilian đã đưa ra phương pháp sử dụng các thử nghiệm sinh hoá để xác

định biotype và đặc điểm của các loài Haemophilus Từ kết quả của 3 thử nghiệm sinh hoá là tìm khả năng sinh Indol, hoạt động của hai enzym Urease

và Decarboxylase của vi khuẩn, Kilian trước đây đã chia H influenzae thành

4 biotype từ I đến IV Phân loại theo biotype này độc lập với phân loại theo

typ huyết thanh của H influenzae, bởi vì những chủng vi khuẩn này không có

vỏ cũng cho kết quả tương tự với các phản ứng sinh hoá Cho nên, sau nàycũng với các thử nghiệm tương tự Kilian đã bổ sung thêm 4 biotype từ V đến

Trang 17

CH3C=O COOH

HCl Alcohol