Phân lập các hợp chất Sterol, Flavonoid, Coumarin từ cây lược vàng tỉnh Quảng Nam

Phân lập các hợp chất Sterol, Flavonoid, Coumarin từ cây lược vàng tỉnh Quảng Nam

TẠP CHÍ KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ, ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG - SỐ 3(44).2011 133 PHÂN LẬP CÁC HỢP CHẤT STEROL, FLAVONOID, COUMARIN TỪ CÂY LƯỢC VÀNG TỈNH QUẢNG NAM ISOLATION OF STEROLS, FLAVONOIDS AND COUMARINS FROM THE LUOCVANG PLANT IN QUANGNAM PROVINCE Phạm Văn Hai, Trần Thị Ánh Hồng Đại học Đà Nẵng TÓM TẮT Bài báo này trình bày về kết quả chiết tách và phân lập các hợp chất chính có trong thân lá của cây Lược vàng ở Tỉnh Quảng Nam. Qua thực nghiệm bằng phương pháp chiết soxhlet với các dung môi có độ phân cực khác nhau như n-hexan, ethyl axetat, methanol và bằng các phương pháp sắc ký, các phương pháp phổ hiện đại MS, 13 C-NMR, 1 H-NMR đã phân lập và xác định được cấu trúc các hợp chất có trong thân lá cây Lược vàng là: hợp chất HLVE_1 có tên 3-O-(β-D-glucopyranosyl)-β-sitosterol, hợp chất HLVH_1 có tên (24R- stigmasta-5-en-3-β-ol) còn gọi là β-sitosterol, hợp chất HLVE_2 là (2S, 3S, 4R)-2-(2’R- hydroxyhexacosanoyl)-amino-hexadeca-1,3,4-triol hay là Calliceramide và hợp chất HLVH_2 là stigmasterol . SUMMARY This paper presents a study on the extraction and determination of the chemical composition of the Luocvang plant from Quangnam Province. We first used the soxhlet extraction method with different polarization solvents such as n-hexan, ethyl acetate, methanol and then with Chromatography methods and the model spectro methods such as IR, MS, 13 C- NMR, 1 H-NMR to isolate and determine its chemical structures. Our experimental results show that there are four extracted chemical compounds such as 3-O-(β-D-glucopyranosyl)-β- sitosterol, 24R-stigmasta-5-en-3-β-ol or β-sitosterol, Calliceramide, and stigmasterol. This is the first report on the successful isolation of the compound of (2S, 3S, 4R)-2-(2’R- hydroxyhexacosanoyl)-amino-hexadeca-1,3,4-triol from the Luocvang plant in Quangnam Province. 1. Đặt vấn đề Cây Lược vàng có tên khoa học là Callisia fragrans, họ Thài Lài (Commelinaceace). Gần đây, trên các thông tin đại chúng, cây Lược vàng được xem như một “thần dược” trị bách bệnh. Thực vật Callisia fragrans là một cây cảnh di thực từ Liên bang Nga sang Việt Nam, ban đầu nó được trồng ở Thanh Hóa, giờ đây cây Lược vàng đã nhanh chóng phát triển đến các tỉnh, thành phố khác như Hà Nội, Hải Dương, Bắc Giang, Ninh Bình, Quảng Nam,…[2,3] Cây Lược vàng được sử dụng theo kinh nghiệm dân gian để điều trị rất nhiều bệnh từ những bệnh thông thường như mụn nhọt, dị ứng, đau họng, đau răng, đến những bệnh nan y như ung thư, tiểu đường [2,4] . Trong khi đó, cho đến nay trên thế giới và ở Việt Nam, chưa có công trình nào công bố đầy đủ về thành phần hóa học cũng như tác dụng sinh học của loài cây này. TẠP CHÍ KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ, ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG - SỐ 3(44).2011 134 Nhằm mục đích cung cấp thêm một số thông tin có ý nghĩa khoa học về loài thực vật mà dân gian sử dụng làm thuốc chữa bênh bấy lâu nay, chúng tôi tiến hành nghiên cứu chiết tách, phân lập và xác định cấu trúc hóa học một số hợp chất chính có trong thân lá của cây Lược vàng ở Tỉnh Quảng Nam. 2. Thực nghiệm 2.1. Nguyên liệu Mẫu cây tươi thu hái về được thái thành miếng nhỏ, đưa đi sấy ngay ở nhiệt độ 110 0 C khoảng 10 phút để diệt men. Sau đó phơi và sấy khô ở 50-60 0 C cho tới khi độ ẩm ≤ 10%. Mẫu khô được nghiền nhỏ và được ngâm chiết với các dung môi có độ phân cực khác nhau. Mẫu cây đã được TS Đỗ Hữu Thư – Viện Sinh thái và Tài nguyên Sinh học – Trung tâm Khoa học Tự nhiên và Công nghệ Quốc gia giám định tên khoa học là Callisia fragrans [2]. 2.2. Thiết bị và hóa chất 2.2.1 Thiết bị 1. Sắc ký cột, sử dụng silicagel Merck 60, cỡ hạt 100-400 mesh (0,040 đến 0,063mm hoặc 0,1 đến 0,16mm) và nhôm ôxit (Al 2 O 3 , Aluminiumoxid 150-PF 254+366 - Typ T , Art. 1065 - Merck) với hệ dung môi rửa giải là n- hexan:etylaxetat có độ phân cực tăng dần. 2. Sắc ký bản mỏng: Các tấm sắc ký lớp mỏng đế nhôm DC-Alufolien Kieselgel 60F 254 Art.5554 và đế nhựa (polyme) DC-Plastikfolien Kieselgel 60F 254 Art.5735 tráng sẵn, độ dày 0,2mm cũng đã được sử dụng để xác định một số thành phần có trong các dịch chiết, các phân đoạn chạy cột và kiểm tra sơ bộ độ sạch của sản phẩm thu được. Các tấm SKLM sau khi sấy khô được soi dưới đèn tử ngoại (UV-BIOBLOCK) ở bước sóng λ=254nm (365nm) rồi được phun thuốc thử Vanilin 1% trong metanol H 2 SO 4 10% và sấy trên 100 0 C, đưa vào buồng I 2 để xác định thành phần cấu tử. 3. Các dụng cụ trong phòng thí nghiệm (các loại bình cầu chịu nhiệt thủy tinh, thiết bị cất quay chân không, các thiết bị nghiên cứu thích hợp khác). 2.2.2 Hóa chất - Dung môi: n-hexan, ethyl axetat, methanol, . dạng tinh khiết (P) và phân tích (PA); - Thuốc thử : Dragendoff, Mayer, Wagner, Liebermann–Burchard và các hóa chất: dung dịch H 2 SO 4 đặc, dung dịch H 2 SO 4 5%, dung dịch NaOH 10%, dung dịch CH 3 COOH 5%, dung dịch HCl đặc, dung dịch FeCl 3 ,…; - Thuốc hiện hình: Vanilin trong H 2 SO 4 10%; - Các hệ dung môi triển khai bản mỏng. 2.3. Phân tích thành phần hóa học thân lá Lược vàng Tỉnh Quảng Nam Thành phần hóa học thân lá Lược vàng bằng phương pháp ngâm chiết soxhlet TẠP CHÍ KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ, ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG - SỐ 3(44).2011 135 trong dung môi n- hexan được phân tích bằng các thiết bị phổ khối kết hợp sắc kí khí (GC-MS). 3. Kết quả và thảo luận 3.1 Phân lập các hợp chất hóa học trong thân lá cây Lược vàng Tỉnh Quảng Nam 3.1.1. Hợp chất HLVH_1 ( β -sitosterol) Thân lá cây Lược vàng được ngâm chiết trong dung môi methanol và chuyển lên sắc ký cột để rửa giải cột bằng hệ dung môi n-hexan: ethyl axetat (30:1), thu được chất rắn vô định hình và kết tinh lại trong n-hexan thu được những tinh thể hình kim, không màu, nóng chảy ở 136-138 0 C. Trong phổ EI-MS chất HLVH_1 cho mảnh ion phân tử (m/z) M + = 414, như vậy khối lượng phân tử bằng 414 đvc ứng với công thức phân tử C 29 H 50 O. Trong phổ FT-IR cho biết có dao động của liên kết nhóm OH ở vùng 3430cm -1 , đặc trưng dao động hoá trị của các liên kết đôi (C=C) ở vùng 1640cm -1 và dao động vọng ở 3010cm -1 . Trong phổ 1 H-NMR cho biết: Tín hiệu δ H 3,53 ppm đặc trưng cho proton trong nhóm CH carbinol , tín hiệu δ H 5,36 ppm của H trong liên kết olefin (C=C) với δ C lần lượt là 140,8 ppm và 121,7 ppm. Trong các phổ 1 H-NMR, 13 C-NMR và kết hợp với phổ DEPT đã cho biết trong phân tử của chất HLVH_1 có 29 nguyên tử cacbon trong đó có 3 nguyên tử cacbon bậc 4, có 9 nhóm metin (CH), 11 nhóm metylen ( CH 2 ) và 6 nhóm metyl (CH 3 ). Từ đó có thể quy kết hợp chất HLVH_1 có một nối đôi giữa vị trí C-5 và C-6. Ngoài ra, trong phổ 13 C-NMR còn nhận thấy δ C 71,8 ppm đặc trưng cho cacbon liên kết trực tiếp với oxy của nhóm hydroxyl. So sánh phổ 1 H-NMR và 13 C-NMR kết hợp với phổ DEPT của chất HLVH_1 với phổ β-sitosterol thấy hoàn toàn tương thích ở độ sai số cho phép. Từ các kết quả phân tích thành phần hoá học, tính chất vật lý, tính chất quang phổ và dựa trên cơ sở so sánh các số liệu phổ của chất HLVH_1 với phổ của chất β-sitosterol chuẩn, kết hợp với việc xác định điểm chảy của hỗn hợp của HLVH_1 với β-sitosterol không đổi, có thể cho phép quy kết chất HLVH_1 đã phân lập được từ lá cây Lược vàng là 24R-stigmasta-5-en-3-β-ol hay β-sitosterol, và cấu trúc của HLVH_1 như sau: β-sitosterol TẠP CHÍ KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ, ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG - SỐ 3(44).2011 136 3.1.2 Hợp chất HLVH_2 (Stigmasterol) Rửa giải cột bằng hệ dung môi n-hexan: ethyl axetat 5:1 từ cao hexan thu được chất rắn màu trắng hình kim, tan trong clorofom và methanol. Nhiệt dộ nóng chảy của chất HLVH3 ở 155-157 0 C. Phổ 1 H-NMR có các tín hiệu đặc trưng ở δ H 5. 35 ppm (1H, d, J = 5Hz và 2Hz) là tín hiệu của proton trong liên kết olefin (C=C) trong vòng. Hai tín hiệu δ H 5.14 (1H, dd, J = 5 và 15 Hz) và δ H 5.03 (1H, dd, J = 15 Hz và 5Hz) đặc trưng cho hai proton liên kết với hai cacbon ở liên kết đôi ngoài vòng, điều này chứng tỏ liên kết C=C ngoài vòng có cấu hình trans (E). Tín hiệu δ H 3,49 (1H, m) thuộc proton H-3 ở nhóm carbinol trong vòng. Phổ 13 C-NMR có các tín hiệu đặc trưng ở δ C 138.32, 129.31, 140.71, và 121.67 ppm là các tín hiệu cacbon trong các liên kết đôi C=C, tại δ C 71.8 ppm là tín hiệu phổ của C-3 liên kết với nhóm OH. Ngoài ra, có các tín hiệu phổ khá dày đặc trong vùng trường mạnh nằm trong vùng từ 12.2 - 60 ppm đặc trưng cho tín hiệu của các nhóm metyl (CH 3 ), metylen (CH 2 ) và metin (CH) của HLVH_2. Trong các phổ 1 H-NMR, 13 C-NMR và phổ DEPT cho biết thêm trong phân tử HLVH_2 có 29 nguyên tử cacbon, trong đó có 3 nguyên tử các bon bậc 4, có 11 nhóm nhóm metin (CH), 9 nhóm metylen (CH 2 ) và 6 nhóm CH 3 . Từ các kết quả phân tích thành phần hoá học, tính chất vật lý, tính chất quang phổ nhất là dựa trên cơ sở so sánh các số liệu phổ của chất HLVH_2 với phổ của chất stigmasterol hoàn toàn có thể cho phép quy kết chất HLVH_2 đã phân lập được từ lá cây Lược vàng là stigmasterol và cấu trúc của HLVH_2 là: Stigmasterol 3.1.3. Hợp chất HLVE_2 (Calliceramide) HLVE_2 là chất rắn màu trắng, vô định hình thu được từ dịch chiết ethyl axetat của cây Lược vàng, nóng chảy ở 116-118 0 C, không tan trong nước, tan rất tốt trong hệ dung môi CHCl 3 /MeOH (tỷ lệ 1:1). Phổ HR-MS của nó (Hình 1) cho pic ion giả phân tử với (m/z) 684,6713 [M+H] + , (tính theo công thức: C 42 H 86 NO 5 ), do vậy khối lượng phân Hình 1. Phổ HR-MS của HLVE 2 TẠP CHÍ KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ, ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG - SỐ 3(44).2011 137 tử làm tròn số của HLVE_2 sẽ là M = 683, điều này chứng tỏ chất HLVE_2 có chứa nitơ và công thức nguyên sẽ là C 40 H 85 NO 5 . Phân tích các số liệu phổ 1 H, 13 C-NMR, DEPT-135, DEPT-90, HMQC và HMBC của nó cho thấy, chất HLVE_2 là một amit, có gốc alkyl mạch dài no không phân nhánh (đặc trưng cho các cerebrozit). Các phổ DEPT-90 và DEPT-135 cho biết, phân tử HLVE_2 có 4 nhóm metin (CH), với các độ dịch chuyển hóa học ở: δ C 51,3(C- 2); 70,9(C-4); 71,0(C-2’) và 74,5ppm (C-3). Phổ HMQC cho biết, ở phía trường yếu nhất có 3 nguyên tử C liên kết trực tiếp với ôxi, như vậy trong phân tử của nó có 3 nhóm hydroxyl thuộc 3 nguyên tử C bậc 3, nguyên tử C còn lại δ C-2 51,3 liên kết trực tiếp với nguyên tử nitơ. Phổ 1 H-NMR (hình 2) của nó cho thấy ở δ H 7,3ppm là một dublet (J=8,9Hz), đây là tín hiệu của nguyên tử H thuộc nhóm amit; Ở δ H 3,95ppm (m) là tín hiệu của nguyên tử H-2, các nguyên tử H-2’ và H-4 có cùng độ dịch chuyển hóa học ở 3,42ppm (br, s), còn các nguyên tử H-1 có độ dịch chuyển hóa học ở 3,6 và 3,7 ppm (2H, dd, J=6,1 và 12,5Hz, H-1a và H-1b), H-3 có độ dịch chuyển hóa học ở 3,85ppm (1H, dd, J=4,2 và 4,6Hz, H-3). Các nguyên tử Hω1 và Hω1' có độ dịch chuyển hóa học ở khoảng 0,9ppm (t) và độ dịch chuyển hóa học của các nguyên tử Cω1, Cω1' là 13,2ppm. Các nguyên tử H còn lại trong phân tử thuộc các nhóm CH 2 có độ dịch chuyển hóa học trong khoảng từ 1,2 - 2,0 ppm đối với các nguyên tử H và khoảng 22-35ppm đối với các nguyên tử C. Các phổ 13 C-NMR, DEPT -135, DEPT- 90 (hình 3), và HMQC (hình 4) còn cho biết thêm trong phân tử HLVE_2 có một nhóm CO (cacbonyl) với δ C-1’ =173,2ppm (s), có một nhóm metylen (CH 2 ) liên kết trực tiếp với ôxi có độ dịch chuyển hóa học ở 60,4ppm. Hình 2. Phổ 1 H-NMR của HLVE_2 Hình 3. Phổ 13 C-NMR và DEPT của HLVE_2 Hình 4. Phổ HSQC của HLVE_2 TẠP CHÍ KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ, ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG - SỐ 3(44).2011 138 Do vậy có thể thấy trong HLVE_2 có tổng cộng 4 nhóm hydroxyl (OH). Phổ HMBC (hình 5) có thể quan sát thấy một số tương tác quan trọng C-1 với H-2; C-2 với H-1, H(NH) và H-3; C-3 với H-2, H-3; C-4 với H-3, H-5; C-1' với H(NH), H-2'; C-2' với H-3' v.v. Kết quả phân tích các phổ 1 H, 13 C-NMR, 1D và 2D với các kỹ thuật khác nhau được trình bày trong bảng 3.5. Để xác định phần axít và phần aminoancol, phân tử HLVE_2 đã được acyl hóa nhẹ nhàng với anhydrit axêtic trong piridin ở nhiệt độ phòng qua đêm, thu được peraxetat của HLVE_2. Phổ 1 H-NMR của Peracetyl HLVE_2 (hình 6), cho thấy 4 tín hiệu δ H 2.05, 2.08, 2.16 và 2.18 thuộc về 4 nhóm metoxy (CH 3 CO), đã chứng tỏ 4 nhóm hydroxyl (OH) đã được acyl hóa hoàn toàn. Các số liệu khác hầu như không thay đổi so với của HLVE_2. Sản phẩm thủy phân axít trong metanol của HLVE_2 là metyleste của 2-hydroxyaxít béo (HLVE_2.1) và một aminoancol mạch dài HLVE_2.2 (không thu được có thể là do khối lượng thủy phân ít, và sản phẩm tạo thành đã bị phân huỷ trong quá trình phản ứng vì chứa nhiều nhóm hydroxy). Phổ EI- MS của HLVE_2.1 cho pic ion phân tử m/z: [M] + = 426 tương ứng với công thức phân tử: C 27 H 54 O 3 (hình 7). Phổ 1 H-NMR của HLVE_2.1 (hình 8) cho biết, có một nhóm metoxy (MeO) với δ H 3,8 ppm (s) và có một nhóm hydroxyl liên kết trực tiếp với C-2, và H-2 có δ H ở 4,2 ppm (t). Từ số liệu phổ EI-MS và 1 H-NMR của HLVE_2.1 có thể Hình 5. Phổ HMBC của HLVE 2 Hình 6. Phổ 1 H-NMR của Peraxetyl HLVE_2 Hinh 7. Phổ EI-MS của HLVE_2.1 Hình 8. Phổ 1 H-NMR của HLVE_2.1 TẠP CHÍ KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ, ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG - SỐ 3(44).2011 139 khẳng định HLVE_2.1 là axít 2-hydroxyhexacosanoic, công thức phân tử: C 26 H 52 O 3 khối lượng phân tử M=412. Từ đó thấy rằng 3 nhóm hydroxyl còn lại trong HLVE_2 thuộc phần aminoancol và phân tử lượng của nó sẽ là: M= 683 - 395 + 1 = 289 tương ứng với công thức phân tử: C 16 H 35 NO 3 . Như vậy, qua việc phân tích các số liệu phổ của HLVE_2, các sản phẩm acyl hóa và thủy phân axít trong methanol của nó, kết hợp so sánh các số liệu phổ 1 H và 13 C- NMR của các cerebrozit tương tự [2], đã chứng tỏ rằng chất HLVE_2 là một cerebrosid có công thức phân tử: C 42 H 85 NO 5 (M=683) được hình thành bởi axit 2- hydroxyhexacosanoic và 2-amino-hexadeca-1,3,4-triol với cấu trúc hóa học (2S, 3S, 4R)-2-(2’R-hydroxyhexacosanoyl)-amino-hexadeca-1,3,4-triol và chúng tôi đặt tên là Calliceramide, với công thức cấu tạo như hình 9. Hình 9. Calliceramide [(2S, 3S, 4R)-2-(2’R-hydroxyhexacosanoyl)-amino-hexadeca-1,3,4-triol] Sản phẩm acyl hóa Peracetyl HLVE_2 tạo thành theo phản ứng dưới đây: Peracetyl HLVE_2 Còn các sản phẩm HLVE_2.1 và HLVE_2.2 được hình thành theo phản ứng thủy phân axít trong methanol theo phương trình phản ứng sau: TẠP CHÍ KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ, ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG - SỐ 3(44).2011 140 3.1.4. Hợp chất HLVE_1 (3-O-β-D-glucopyranosyl-β-sitosterol) Rửa giải cột bằng hệ dung môi clorofrom: methanol 7:1 từ cặn ethyl axetat thu được chất rắn vô định (28.6 mg) hình màu trắng, không tan trong clorofrom, dễ tan trong hệ dung môi clorofrom và metanol. Nhiệt dộ nóng chảy của chất HLVE_1 ở 273- 275 0 C. Quan sát trên phổ 13 C-NMR và DEPT thấy có 35 tín hiệu của nguyên tử cacbon, trong đó có 7 nguyên tử cacbon gắn với oxi đặc trưng cho phần đường (nằm trong vùng 62.1 ppm đến 100.5 ppm). Có 2 tín hiệu ở 140.7 và 122.4 ppm thuộc về một liên kết olefin C=C. Trong phổ 1 H-NMR, quan sát thấy proton đường xuất hiện ở dạng doublet tại δ H 4.4ppm, có J = 7.8Hz của δ H-1’ phần đường tương ứng với δ C-1’ 100.5ppm. Số liệu các phổ IR, MS, 1 H-NMR và 13 C-NMR thu được cho phép xác định HLVE_1 có cấu trúc của một hợp chất glucosid với công thức phân tử C 35 H 60 O 6 . Những điểm trình bày ở trên kết hợp với việc đo điểm nóng chảy của hỗn hợp HLVE_1 với β-sitosterol-glucosid chuẩn có nhiệt độ nóng chảy không đổi đã cho phép khẳng định HLVE_1 là 3-O-β-D-glucopyranosyl -β-sitosterol. Do vậy, chất HLVE_1 phân lập được từ cây Lược vàng là 3-O-(β-D- glucopyranosyl)-β-sitosterol với cấu trúc hóa học như sau: 3-O-(β-D-glucopyranosyl)-β-sitosterol TẠP CHÍ KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ, ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG - SỐ 3(44).2011 141 4. Kết luận Lần đầu tiên cây Lược vàng trồng ở Quảng Nam được thu hái, xác định tên khoa học là Callisia fragrans. Đã xác lập được qui trình ngâm chiết thích hợp cho việc phân lập các hợp chất trong cây Lược vàng ở Tỉnh Quảng Nam và đã phân tích định tính các lớp chất có trong cây Lược vàng là: các sterol, coumarin, flavonoid. Đã phân lập, đo các hằng số vật lý, các phổ (IR, MS, 1D và 2D-NMR) cho 6 chất và xác định được cấu trúc hóa học của 4 hợp chất có trong thân lá cây Lược vàng ở Tỉnh Quảng Nam, gồm: β-sitosterol (HLVH_1), stigmasterol (HLVH_2), 3-O-β-D- glucopyranosyl-β-sitosterol (HLVE_1), calliceramide (2S, 3S, 4R)-2-(2’R- hydroxyhexacosanoyl)-amino-hexadeca-1,3,4-triol (HLVE_2). Lần đầu tiên phân lập được một hợp chất hóa học calliceramide (2S, 3S, 4R)-2- (2’R-hydroxyhexacosanoyl)-amino-hexadeca-1,3,4-triol (HLVE_2) từ cây Lược vàng ở Tỉnh Quảng Nam và có thể nói đây là một chất mới được công bố. TÀI LIỆU THAM KHẢO [1] Nguyễn Tiến Bân và các cộng sự (2003), Danh mục các loài thực vật Việt Nam, NXB Nông nghiệp, tập III. [2] Trịnh Thị Điệp, Đỗ Thị Phương, Phương Kim Nguyễn, Nguyễn Minh Khôi (2008), Bước đầu nghiên cứu về thành phần hóa học và tác dụng sinh học của cây Lược Vàng – Callisia fragrans ( Lindl.) Woods, Tạp chí Dược liệu, tập 13, tr.276 – 279. [3] Trần Thu Hương, Lê Huyền Trâm, Trần Thượng Quảng, Trần Thị Minh, Nguyễn Tuấn Anh, Hồ Đức Cường (2009), Ginsenoside RG1 và L-Tryptophan từ cây Lược vàng (Callisia fragrans), Tạp chí KH và CN các trường Đại học Kỹ thuật, Số 74, tr.107-112. [4] Trịnh Tố Long, (2008), Lược vàng - cây thuốc của mọi nhà, Tạp chí Vietnam Time, Tập 14 (9). (BBT nhận bài: 14/04/2011, phản biện xong: 12/05/2011) . việc phân lập các hợp chất trong cây Lược vàng ở Tỉnh Quảng Nam và đã phân tích định tính các lớp chất có trong cây Lược vàng là: các sterol, coumarin, . 3(44).2011 133 PHÂN LẬP CÁC HỢP CHẤT STEROL, FLAVONOID, COUMARIN TỪ CÂY LƯỢC VÀNG TỈNH QUẢNG NAM ISOLATION OF STEROLS, FLAVONOIDS AND COUMARINS FROM