THỰC HÀNH SINH HÓA pdf

THỰC HÀNH SINH HÓA ĐỘNG VẬT• Bài 1: Thực nghiệm các hợp chất glucid • Bài 2: Thực nghiệm các hợp chất lipid và enzyme • Bài 3: Thực nghiệm các hợp chất amno acid và protein • Bài 4: Thực

THỰC HÀNH SINH HÓA

TS ĐỖ HIẾU LIÊM

THỰC HÀNH SINH HÓA ĐỘNG VẬT

• Bài 1: Thực nghiệm các hợp chất glucid

• Bài 2: Thực nghiệm các hợp chất lipid và enzyme

• Bài 3: Thực nghiệm các hợp chất amno acid và protein

• Bài 4: Thực nghiệm các hợp chất vitamin và khoáng chất

• Nhóm thực hành 4 tiểu nhóm

• Mỗi tiểu nhóm thực hành 1 bài

Sinh viên mặc áo blouse và tuân theo nội qui

THỰC NGHIỆM CÁC HỢP

CHẤT GLUCID

1 PHẦN ĐỊNH TÍNH

1.1 Phản ứng Molisch

1.2 Phản ứng Seliwanoff

1.3 Phản ứng Benedict

1.4 Phản ứng định tính amidon

- Phản ứng màu amidon với iod

- Phản ứng phân giải amidon bằng acid vô cơ đậm đặc

2 PHẦN ĐỊNH LƯỢNG

Định hàm lượng glucose trong máu

BÀI 1

1 PHẦN ĐỊNH TÍNH

1.1 Phản ứng Molisch

Polysaccharide

Monosaccharide

Glucose

Ribose

Fructose Hexose

Pentose

H 2 SO 4 đđ α.1, 4 H 2 SO 4 đđ

α.1, 6

Glucose Fructose Ribose

O

CHO Furfural

đặc trưng

Hydroxymethyl

furfural O

CHO

HOH 2 C

Dihydroxymethyl

furfural

CH 2 OH

HOH 2 C

O

GLUCOS

E

H 2 SO 4 đđ

α.Napthol

Hydroxymethyl

furfural Vòng nhẫn màu tím

GLUCOSE

OH

α Napthol

H 2 SO 4 đđ

Vòng nhẫn màu tím

giữa 2 lớp dung dịch

Xác định sự hiện diện hợp chất glucid

1.2 Phản ứng Seliwanoff

FRUCTOS

E

HCl đđ

Resorcinol

Dihydroxymethyl furfural

Dung dịch màu

đỏ

Dung dịch màu

đỏ

Fructose Resorcinol +

HCl đđ

1.3 Phản ứng Benedict

GLUCOSE

TT Benedict Nhiệt độ

Kết tủa vàng cam

Kết tủa đỏ Kết tủa đen

Nhiệt độ Nhiệt độ

Glucose

Sodium Citrate + CuSO 4

CuO

Cu 2 O

Xác định sự hiện diện ketose

Xác định tính khử

1.4 Phản ứng định tính amidon

1.4.1 Phản ứng màu amidon + iod

1.4.2 Phản ứng phân giải amidon bằng

acid vô cơ đậm đặc

AMIDON

AMILOPECTIN

AMILOSE

AMILOSE Na Na 2 2 S S 2 2 O O 3 3 (Lugol) Iod

AMIDON

H 2 SO 4 20%

Phenolphtalein NaOH

Benedict Seliwanoff

2 ĐỊNH HÀM LƯỢNG GLUCOSE TRONG MÁU

(Phương pháp Somogyi-Nelson)

1.Máu + Ba(OH) 2 + ZnSO 4

2.Ly tâm + lấy nước trong

3.DD Somogyi

DD Somogyi (Cu 2 SO 4 )

4.DD Nelson

DD Nelson (Arsenomolybdate)

H 2 O

1

5.QUANG PHỔ KẾ

λ = 520 nm

Cách thủy

70 0 C

A 2 : Độ hấp thu của glucose máu xét nghiệm

A 3 : Độ hấp thu của glucose chuẩn Công thức tính:

0.05

x A

100

x A

x

0.05 (mg%)

máu

Glucose

3

2

=

THỰC NGHIỆM CÁC HỢP CHẤT

LIPID VÀ ENZYME

1.THỰC NGHIỆM CÁC HỢP CHẤT LIPID

1.1 Độ hòa tan và nhũ hóa triacylglycerol

1.2 Khảo sát sắc tố mật

1.3 Khảo sát thể ketone

2.THỰC NGHIỆM CÁC ENZYME

2.1.Khảo sát enzyme catalase trong hồng cầu

2.2.Khảo sát hoạt lực enzyme amylase trong huyết thanh

BÀI 2

1.THỰC NGHIỆM CÁC HỢP CHẤT LIPID

Độ hòa tan

Độ nhũ hóa

Dầu + Xà phòng Dầu + Mật Dầu + Muối kiềm

1.1.Độ hòa tan và nhũ hóa triacylglycerol

1.2 Khảo sát sắc tố mật (Bilirubine và biliverdine)

HNO 3 đđ

1.3 Khảo sát thể ketone

• Acetone

• Acetoacetic acid

• β.Hydroxy butyric acid

• Acetone

• Acetoacetic acid

• β.Hydroxy butyric acid

Ketone Sodium nitroprusside Ketone Sodium nitroprusside NaOH (NH (NH NH NH 4 4 ) ) 4 4 2 2 OH OH SO SO 4 4

Phản ứng Gmelin Phản ứng Smith

Phản ứng Legal Phản ứng Rothera

2 THỰC NGHIỆM CÁC ENZYME

2.1 Khảo sát enzyme catalase trong hồng cầu

1 Hồng cầu

Catalase 2

Hồng cầu NaCN Catalase 3

Hồng cầu (đ)

Catalase

MÁU H 2 O 2 NaCN MÁU H 2 O 2 MÁU H 2 O 2

2.2 Khảo sát hoạt lực enzyme catalase trong huyết thanh

Huyết thanh NaCl 0.9% Amidon Iod

37 0 C

37 0 C

37 0 C

THỰC NGHIỆM CÁC HỢP CHẤT

PROTEIN VÀ AMINO ACID

1 PHẦN ĐỊNH TÍNH

1.1 Phản ứng Ninhydrin

1.2 Phản ứng Xanthoproteic

1.3 Phản ứng Hopkins Cole

1.4 Phản ứng Biurrette

1.5 Phản ứng sa lắng và biến tính của protein

2 PHẦN ĐỊNH LƯỢNG

2.1 Định lượng nitrogen amin

2.2 Định lượng albumin và globulin trong huyết thanh

2.3 Định lượng protein tổng số trong huyết thanh

BÀI 3

Lòng trắng trứng

1 PHẦN ĐỊNH TÍNH

1.1.Phản ứng Ninhydrin

1.2.Phản ứng Xanthoproteic

Xác định Nitrogen (Amino acid, protein…)

Xác định amino acid có vòng

TT Ninhydrin DD Nitrogen

HNO 3

NH 4 OH

Lòng trắng trứng

1.3.Phản ứng Hopkins Cole

1.4.Phản ứng Biurette

Xác định amino acid có vòng

Xác định liên kết peptide

Lòng trắng trứng

Paradimethylamino benzaldehyde

TT Biurette

H 2 SO 4 đđ

1.5.Phản ứng sa lắng và biến tính protein

Lòng trắng trứng

Ammonium sulfate Acetone Acetate chì Trichloroacetic acid

2 PHẦN ĐỊNH LƯỢNG

2.1 Định lượng nitrogen amin (PP Sorenxen)

DD glycine

Formadehyde

Phenolphthalein

A B Nước cất

NaOH

Công thức tính:

X = (A-B) x 2.8 mg/10ml X: Số mg nitrogen trong 10 ml dung dịch glycine A: Số ml NaOH định phân bình A

B: Số ml NaOH định phân bình B

Na 2 SO 4

2.2 Định lượng albumin và globulin huyết thanh (PP Reinhold)

2.3 Định lượng protein tổng số huyết thanh (PP khúc xạ)

SerumNaCl 0.9%

Nước lọc 1

1 2 Nước lọc 2 3 Nước cất 2

Nước cất+NaSO 4

TT Biurette

Cân bằng 0.000

Độ hấp thu A 1 Độ hấp thu A 2

Hàm lượng albumin

và globulin trong huyết thanh được xác định dựa vào hàm lượng protein tổng số

ở nội dung 2.3

Hàm lượng albumin

và globulin trong huyết thanh được xác định dựa vào hàm lượng protein tổng số

ở nội dung 2.3

Huyết thanh

Protein tổng

số trong huyết thanh(g%)

Chỉ số khúc xạ

Ánh sáng

Hàm lượng protein tổng số trong huyết thanh (g%)

Protein tổng số: Độ hấp thu A 2 X (g%)

Albumin : Độ hấp thu A 1 ? Y (g%)

Globulin = Protein tổng số (g%) - Albumin (g%)

= X (g%) - Y (g%)

Protein tổng số: Độ hấp thu A 2 X (g%)

Albumin : Độ hấp thu A 1 ? Y (g%)

Globulin = Protein tổng số (g%) - Albumin (g%)

= X (g%) - Y (g%)

THỰC NGHIỆM CÁC HỢP CHẤT VITAMIN VÀ KHÓANG CHẤT

1.Định lượng vitamin C trong huyết thanh

2.Định lượng calcium trong huyết thanh

3.Định lượng phospho vô cơ trong huyết thanh

BÀI 4

2,6 dichlorophenol indophenol

1 ĐỊNH LƯỢNG VITAMIN C TRONG HUYẾT THANH

(Phương pháp định phân 2,6 dichlorophenol indophenol)

Huyết thanh HPO 3 Nước cất

A: Số ml thuốc thử định chuẩn mẫu huyết thanh

Màu hồng

nhạt bền

1 phút

Màu hồng

nhạt bền

1 phút

B: Số ml thuốc thử định chuẩn nước cất X: Số mg vitamin C trong 100 ml huyết thanh

3

100

x 5

x 0.088

x B)

-(A

O C C-OH C-OH H-C

HO- C-H

CH 2 OH

O C C-OH C-OH H-C

HO- C-H

CH 2 OH

O

Cl

=N-Cl

-OH

O C C=O C=O H-C

HO- C-H

CH 2 OH

O C C=O C=O H-C

HO- C-H

CH 2 OH

O

Cl

-NH-Cl

-OH

KMnO 4

Nước nóng 70 0 C

Ammonium oxalate

Huyết thanh Nước cất

2 ĐỊNH LƯỢNG CALCIUM TRONG HUYẾT THANH

(Phương pháp Clark Colip)

NH H 2 SO 4 OH 4

Rữa cặn 3 lần

Màu hồng

nhạt bền

1 phút

Màu hồng

nhạt bền

1 phút

A: Số ml KMnO 4 định chuẩn mẫu huyết thanh

A: Số ml KMnO 4 định chuẩn mẫu huyết thanh

B: Số ml KMnO 4 định chuẩn mẫu nước cất

B: Số ml KMnO 4 định chuẩn mẫu nước cất

X: Số mg Ca trong 100 ml huyết thanh

50

x 0.02

x B) -(A

3 ĐỊNH LƯỢNG PHOSPHO VÔ CƠ TRONG HUYẾT

THANH

(Phương pháp Urbach và Raabe) 4.Sodium carbonate+Sodium sulfite Huyết thanh 2.Ammonium molybdate 1.Sodium sulfite 3.Hydroquinone Phospho chuẩn

Nước cất

A 1 : Độ hấp thu phospho trong huyết thanh

A 1 : Độ hấp thu phospho trong huyết thanh

A 2 : Độ hấp thu phospho chuẩn

A 2 : Độ hấp thu phospho chuẩn

X: Lượng phospho vô cơ trong huyết thanh (mg%)

0.000

2

1

A

500

x 0.001

x A