Khóa luận tốt nghiệp Sư phạm sinh học: Khảo sát hoạt tính kháng Oxy hoá của nước sắc hoa đu đủ đực (Carica papayal.) trong điều kiện in vitro

NHIỆM VỤ NGHIÊN CỨU Đề đạt được mục tiêu đã dé ra, dé tài sẽ thực hiện các nhiệm vụ nghiên cứu cụ thê như sau: - Tìm kiếm, nghiên cứu và tổng hợp các tài liệu cơ sở khoa học liên quan đế

BỘ GIÁO ĐỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHAM THÀNH PHO HO CHÍ MINH

t9 LL) cs

TRAN BA LOC

KHOA LUAN TOT NGHIEP DAI HOC

NGANH SU PHAM SINH HOC

THANH PHO HO CHi MINH - 2024

BỘ GIÁO ĐỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHAM THÀNH PHO HO CHÍ MINH

t9 LL) cs

TRAN BA LOC

KHOA LUAN TOT NGHIEP DAI HOC

NGÀNH SƯ PHAM SINH HỌC

NGƯỜI HƯỚNG DAN KHOA HỌC

ThS Nguyễn Thị Hằng

CN Hồ Linh Kiều Nhi

THÀNH PHÓ HÒ CHÍ MINH - 2024

CỘNG HOÀ XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM

Độc lập - Tự do - Hạnh phúc

BẢN XÁC NHAN CHINH SỬA KHOA LUẬN TOT NGHIỆP

Họ và tên: Tran Bá Lộc

Sinh viên khoả: 46 Mã số sinh viên: 46.01.301.055

Ngày sinh: 01/12/2002 Nơi sinh: tinh Tiền Giang

Chương trình dao tạo: Sư phạm Sinh học

Người hướng dẫn: ThS Nguyễn Thị Hang, CN Hỗ Linh Kiều Nhi

Cơ quan công tác: Khoa Sinh học, trường Đại học Sư phạm Thành phó Hồ Chí Minh

Địa chỉ liên lạc: 280 An Dương Vương, Phường 4, Quận 5, Thanh phó Hỗ Chi Minh

Điện thoại: 098S2808S] Email: Hangnt@hemue.edu.vn

Tôi đã bảo vệ khoá luận tốt nghiệp với đẻ tài: Khảo sát hoạt tính kháng oxy hoả của nước

sắc hoa Du đủ đực (Carica papaya L.) trong điều kiện in vitro tại Hội đồng chấm khoá luận

ngay § thang 5 năm 2024.

Tôi đã sửa chữa và hoàn chinh khoá luận tốt nghiệp đúng với các góp ý, yêu cầu của Hội

đông và uỷ viên nhận xét, gôm các ý chính như sau:

- Chinh sửa các lỗi chính tả, format, tài liệu tham khảo trong quyền; bỗ sung chú thích

hình ảnh.

- Mô tả hình thái, đặc điểm sinh học của mau hoa Bu đủ đực thu hái tại tinh Lâm Đông

và tỉnh Ba Rịa — Vũng Tàu nham xác định 2 mẫu cùng 1 giống Du đủ.

- Xem xét lược bỏ bảng 2.2; 2.5; 2.7 và 2.8 nếu không can thiết.

- Chỉnh sửa xử lý thông kê các bảng 3.2; 3.3; 3.6 và 3.7.

- Nhận xét kết quả chương 3 nên viết thành đoạn văn.

- Kiến nghị liên quan đến đề tải.

Nay tôi xin báo cáo đã hoàn thành sửa chữa khoá luận như trên và đề nghị Hội đồng chấm

khoá luận, người hướng dẫn khoa học xác nhận.

Thành phố Ho Chí Minh, ngày 17 tháng 5 năm 2024

Xác nhận của Chủ tịch Hội đồng Sinh viên

TS Tran Thị Minh Định Tran Bá Lộc

Xác nhận

của người hướng dẫn khoa học

ThS Nguyễn Thị Hing CN Hồ Linh Kiều Nhi

LỜI CẢM ƠN

Lời dau tiên, tôi xin chân thành cam ơn Thể Nguyên Thị Hang - người đã tận tình

giúp đỡ và hướng dan tôi trong quá trình học tập, nghiên cứu, hoàn thiện

đề tài khoả luận tốt nghiệp nay.

Bên cạnh đó, tôi xin chân thành cảm ơn CN Hồ Linh Kiéu Nhi đã nhiệt tình chỉ

dan, giúp đỡ tôi trong quãng thời gian tôi thực hiện khoá luận tốt nghiệp

Tỏi xin chân thành cảm ơn Trường, Phòng Đào tao, các thay cô trong Khoa Sinhhọc - Trường Dai học Sư phạm Thanh pho Hồ Chi Minh đã tạo điều kiện thuận lợi cho

tôi hoàn thành khoá luận.

Tôi xin chân thành cảm ơn quý Thây/Cô, các nhân viên, anh chị, các bạn sinh viên

thuộc phòng thí nghiệm Di truyền - Tién hoá, Vi sinh - Sinh hoá, phòng Sinh học trung

tâm, phòng Giải phẩu Sinh lý người — động vật, phòng Thực vật học thuộc khoa Sinh

học trường Dai học Sư phạm Thanh phố Hỗ Chí Minh đã hỗ trợ các thiết bị, hoá chất

và dụng cụ cho đề tài khoá luận tốt nghiệp của tôi

Tôi xin chân thành cảm ơn các nhà vườn ở huyện Di Linh, tính Lâm Đồng và huyện

Châu Đức, tính Ba Ria — Vũng Tau đã tạo điều kiện và hỗ trợ tôi trong việc thu mẫu và thực hiện đề tài khoá luận tốt nghiệp.

Lời cuối cùng, tôi xin bày tỏ lòng biết ơn và cam kích đối với gia dinh, bạn bè đã

bên cạnh không ngừng động viên, ting hộ trong suốt quãng thời gian học tập, nghiên

cứu và hoàn thành khoá luận.

Thành pho Hỗ Chi Minh, ngày 02 thang 05 năm 2024

SINH VIEN THUC HIEN KHOA LUAN

MỤC LỤC

TY GHI TS (¿22124202 62122112021002221022212930230653045012321353093430863992241533353895381595156045303350343033398220155 i

MỤC ÍỤC :cciceiicsoieiiiosiisiiosiosg10211225126112051565156315663883528655855583556855335566586585835286556355855865556 ii

Danh mục các chữ viẾt tặt St CS HS SH E119 11111 101111241111 1117 Vv

Danh ñục các DANG siccssscssccssssssscsssssassatsocsssssssasscassaassesssaassasssosasaessassensessessessensasneese V

Daath Cñế HÌHtcogoosnisiisiiiiiii16411211131115518111811551358538858883886385858889896659855588558538 vì

KD ĐH, 2.23250555556655510000221122002211220522124230020232113202210302222132221221122312222G1102330210202333 1

I Lý do chọn đẻ tải 6c 23 21215211211 7211731013 111111112173 11e 11 uy l

TI MUG tiêu nghiên CHU sacecsccsssecssssssessscasnassscassasassascocsscascosiscassosssccsnessonsinecsseciae 2

TIL PGi tugng nehien 0 0177 2

IV Nhiệm vụ nghiên CỨU SH nh TH nhà nh HH hà họ Hư Hàn 2

Vi Pham Vi nghiên CỨU ‹::::::::ccocsicsccoscpisiitsioi2E0250230372601351235304611351535554355315355855855 2

VỊ, Nội dung nghiÊn CỨU HH nà Tnhh TH in 3

ChapneiEETONIGIOTHAN -scecs2 c2 cc220621062550210621021565120212012234223263012320162132201321022302 4

1.1 Khái quát gốc tự đo 5c 6 52 t2 122 122117211 7211721721073107310730725122 12 4

I1: iBBI HIẾP ::iici065200401024013111811331303315833135186538558165385361583536835838331385351953883838 4

1.1.2 NQUOM Ca -(-‹+£‹⁄+:ậ}), HH 5

I5: DAC | Ì:cstiasissictagitäi01231181113310811135158515311883518118ã611313886138ã358813838885188581281888855 6

1.2 Cơ chế kháng oxy hoá - 2-22 22SCzSEzcCExcEkEcrkecrkecrkrcvrrrverrvrrrvree 7

1.2.1 Cơ chế kháng oxy hoá của té bào 6c cv cv cvvccvrcrsrrsrrrsree 71),2:2 Chấtkháng öxy boá tự ABBWH o.cccsscccssssessscsassssscsascssascssscsessvesssnsuseansnsnsn §

I:3.:Giới thiệu (hoa Ðu'đ:ỔỰC:accccoosnosioiioiitooigioiitiiiiiE0010021114612611551115133563565586 9

(3:1 Xij(trÍIDBBBIÍDBH:iii:iicciiiiiiiciiiiiiiitii1444114314641121123116513333123518613533833814 58322588 9

1.3.2 Đặc điểm sinh học - 5< e2 server cv cvErrvkrrerrerkrsersesersee 10

1.3.3 Công dụng trong Đông ÝY ch 10

1.4 Tông quan các phương pháp khảo sát khả năng kháng oxy hoá - 12

1.4.1 Phương pháp khảo sát năng lực khử -5-~s sec 12

1.4.1.1 Năng lực khử sắt (FIR.AP) - 2©cscSsccscvrscrxcrxecxercsrrcee 12

1;4:1.2: Năng lực khử Cũ?" (CUPRAC) isaiissiscasssssissscssassessssssiesssassnecisass 13

1.4.1.3 Nang lực khử Fe?” (reducing power) -. c -e-«ee-e 14

1.4.2 Phương pháp khảo sát khả năng bay gốc tự do .- 15

1.4.2.1 Bay gốc tự do 2,2 — diphenyl — | picrylhydrazyl (DPPH) 15 1.4.2.2 Bay gốc tự do 2,2 — azinobis 3 ethyl benzothiazoline — 6 —

šiflfbriio:a6Tdl(ABTSTHuoaiisaaaaiainiiniiiiiiiittisit14ii46i14111311214154103451533354535435855i ló

1.4.2.3 Phương pháp khảo sát khả năng hap thụ gốc peroxyl (ORAC) 171.5 Tổng quan các công trình nghiên cứu liên quan đến đề tải 18

I,5.1.0NBOÀÏBƯỚẾ::::::::2:2:221222202127263126565631565666316655 9353555 9356833863559338635583586382538 18

D552 THOME MUG iiss siscsssssicassacsissassacisassnsaiansisaciassssnciaasivcaiearsiassaassiasssassvesieass 20

Chương 2 BOI TUGNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 23

2.1 Đối tượng nghiên cứu s- sec trictriertirrtrrterrkerrsrrrsrrrerrei 23

Die TUNG Ue eG NE su piittx:sstt20113001104020)0116036214280301661131140218511130013211500836 25

BD TDMA ficcsccccezsseccceczecsscszccecceanseeencrccasscsnsne-ccosscessarecosssssereczscsssenerorecess 25

222 GACH nrrnnnniihitidiitttiittdtttittiittidittgtiiititititiitti3gtitigittaitit 26

2:3 [Phuong pháp nghiền:cỬI::::::::-::::::::::::::2::22:i:c:2211202122151212223129112235525129355832 27

2.3.1 Phương pháp thu, xử lý và bảo quản MAU, cccesecsescesseessesseessesseeees 28

2.3.2 Phương pháp thu nhận nước sắc hoa Du đủ đực 30

2.3.3 Phương pháp khảo sát khả năng kháng oxy hoá if? vi0 30

2.3.3.1 Phương pháp khảo sat năng lực khử Fe?" 5+ 31

2.3.4.2 Phuong pháp khảo sát kha năng bẫy gốc tự do DPPH 32Z;3:4.Hlai0ng pháp xù số HỆ gaaanaanabnainioniiigiL003011160144016301054813403801 34

Chương 3 KET QUÁ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 35

3.1 Kết quả nghiên cứu về khá năng kháng oxy hoá trong điều kiện in vitro 35

DUD, Năng lực khử Fe coocsioenoioooaaosintisiiieiiisti1011121102563566155518515551865858188858 35

3.1.1.1 Nang lực khử Fe?" ascorbic acid 5-s+c<c+e<xeeexercee 35

3.1.1.2 Nang lực khử Fe?" của nước sắc hoa Du đủ đực tinh Lam Đồng36 3.1.1.3 Năng lực khử Fe** của nước sắc hoa Du du đực tinh Ba Rịa —

Vip TÌU::::sccceiiiiiiitiiiii210121022312555023315355123353510333539133692336236833832582359238523634 88385 3§

3.1.2 Năng lực bẫy gốc tự do DPPH ssisssisssisssssssssssisssseasssssssnsisssseasssosssnsisess 41

3.1.2.1 Ti lệ phần trăm bẫy gốc tự do DPPH của nước sắc hoa Du đủ đực

3.1.2.2 Ti lệ phan trăm bay gốc tự do DPPH của nước sắc HX Du đủ đực

Hoh Baia = VũNg TầU!::::s:co:ccicpisninpiniispiiiiiai1241211124118151231581816855858568158385888 45

3.2 Thảo LAM cece eccceecsescsssesseesseceseceseccesceesesssssecsseeeseceseceseceeeseneesees 48

KET LUẬN VÀ KIEN NGHỊ o.00 cccsssssssseessseesssvesssseessseesssnesenseesssecensnesensesssssess 52

Ao): soiesceneeeesneitreeireei02112211230121216100251027182118230851022400513230185921437153610501671 52

DI -IETNHBHT:s.420215560521221022112211221092111220821333021283%133512551053185103219251623013192339233323311/354 52

1000009179004 0 ÔÖÖÔÖÖÖÖ-Ô $3

DU HD tá212212122122121221221252332513523121414521952133139521433395213335952138353521383515212833352138381521452335 a

DANH MUC CAC CHU VIET TAT

Kí hiệu Viết day đủ Diễn giải

The biochemical half maximal

ECso effective concentration (trong thí

nghiệm bay gác tự do DPPH)

LD

OD Optical Density Giá trị mật độ quang

ROS Reacitive Oxygen Species Các gốc oxygen hoạt động

DANH MỤC CÁC BANG

Trang

Bang 2.1 Danh mục các thiết bị và dụng cụ sử dụng trong để tài - e- 24

Bang 2.2 Danh mục các hoá chất được sử dụng trong đề tải - -.:-: 25

Bảng 2.3 Quy trình thu nước sắc hoa đu đủ đực (Carica papaya L.) 29

Bảng 2.4 Quy trình khảo sát năng lực khử Fe?* - 5c Sccseerrsrres 30

Bang 2.5 Các nồng độ nước sắc được khảo sat trong thử nghiệm năng lực khử Fe?

81181308693813168058331681885388818848888188385881884538818539358958813811586138138868381388853833138128583580839885188488884888 31

Bảng 2.6 Quy trình khảo sat khả năng bay gốc tự do DPPH - 32

Bang 2.7 Các nông độ nước sắc khảo sát trong thử nghiệm bẫy góc tự do DPPH 33

Bang 2.8 Các nồng độ ascorbic acid khảo sát trong phương pháp bay gốc tự do DPPH

Bang 3.2 Giá trị OD của nước sắc HV Du đủ đực tinh Lâm Đồng theo nông độ 36

Bảng 3.3 Giá trị OD của nước sắc HX Du đủ đực tinh Lâm Déng theo nong độ 37

Bang 3.4 Giá tri OD của nước sắc C Du đủ đực tinh Lam Đồng theo nông độ 37

Bang 3.5 Giá trị OD của nước sắc hoa Du du đực tinh Ba Rịa — Vũng Tau 38

Bang 3.6 Giá tri OD của nước sic HV Du đủ đực tinh Bà Ria - Vũng Tàu theo nông độ

Bang 3.12 Tỷ lệ phan tram bay gốc tự do DPPH của nước sắc hoa Du đủ đực tinh

Ba Riya VũHE TỒN |:::s::icciccii:202200022012201201202112110201005116111251282128401825125522511855345ã38813838884 44

Bang 3.13 Phương trình tương quan logarithmic giữa tỉ lệ phần trăm bay gốc DPPH và các nông độ nước sắc hoa Du đủ đực tính Ba Rịa — Vũng Tàảu - 2 46

Bang 3.14 Giá trị ECso của các nghiệm thức nước sắc hoa Du đủ đực tinh Ba Rịa —

VŨ TAD táatisgsig3i15111111011111511131114513101533113518553558153518853855358508853358558859ã5935815583885888513885888 46

Bang 3.15 Giá trị ECso của các nghiệm thức nước sắc hoa Du đủ đực tinh Lâm Đông

Vaitinh Ba Ria = Vũng TÀI ::::::::::::::::::2:22t2202201020102113131132121511333333112336231533552515338525 49

DANH MỤC CÁC HÌNH

Hình 1.1 Nguồn gốc tự do nội sinh và ngoại sinh 6c csSsccscrsersessees §

Hình 1.2 Cau trúc hoá học của các phức chất tham gia phản ứng hoá học và sự thay đôi

mau của phương pháp FRAP:::::::::::::ccccccscccciiiieigistiiE00261312311651265588616651685568355868865 12

Hình 1.3 Cau trúc hoá học của các phức chất tham gia phản ứng hoá học và sự thay đôi

mau của thử nghiệm phương pháp CUPRAC; HA là chat kháng oxy hoá va A+ là chất

kháng oxy hoá đã bị mất electron (a); Sự thay đôi mau sắc của thử nghiệm được thê hiện

Hình 1.4 Cấu trúc hoá học của các phức chất tham gia phản ứng hoá học và sự thay đôi

mau của thir nghiệm phương pháp khảo sát năng lực khứ Fe** (reducing power) 14

Hình 1.5 Câu trúc hoá học của các phức chất tham gia phản ứng hoá học và sự thay đôi

màu của thử nghiệm phương pháp bay gốc tự đo DPPH - :-5c- 555: 15

Hình 1.6 Cau trúc hoá học của các phức chất tham gia phan ứng hoá học và sự thay đôimàu của thử nghiệm phương pháp bẫy gốc ABTS 2-©222©c2zccccsz l6

Hình 2.1 Mau say khô của hoa Du đủ đực được thu tại tinh Lam Đông (A, B, C) và tinh

Ba Ria = Vũng Ta (4; |b; (Ẽ)‹: ::-:::-::-c::cc::z2:ccc22222221222125255222525525651265655558635265655555638655 22

Hình 2.2 Vj trí địa lý nơi thu nhận hoa Du đủ đực tại tinh Lam Đồng, Việt Nam 23

Hình 2.3 Vi trí địa lý nơi thu nhận hoa Du đủ đực tại tinh Bà Rịa - Vũng Tàu, Việt Nam

m5 23

Hình 2.4 Sơ đô bố trí thí nghiệm tông thé - 25 25<©cczcccsrcrseccseeee 27

Hình 2.5 Sơ đồ quy trình thu, xử lý và bảo quản mẫu 2< 5s sz=csz<: 28

Hình 3.1 Đỗ thị thê hiện sự tương quan giữa nông độ va giá trị OD của ascorbic acid

=- """' 34

Hình 3.2 Đồ thị thé hiện ti lệ phần trăm bay gốc tự do DPPH cúa nước sắc hoa Du đủ

ace si Basten Ea ran Re Ns czas c02:592521202351902119363331023180244332323502223822/2225:253222 42

Hình 3.3 Đồ thị thé hiện ti lệ phan trăm bay gốc tự do DPPH của nước sắc hoa Du đủ

đực thu hái tại tinh Bà Rịa — Vũng 'Tàu -Q- -Ă Ăn HH ng 45

MỞ DAU

I LÍ DO CHỌN DE TÀI

Các chất kháng oxy hoá đóng vai trò quan trọng trong việc giảm thiêu hậu quả của

gốc tự do trong cơ thé, từ đó bảo vệ tế bảo va ngăn chặn các ton thương được gây ra bởi chúng Trong tô chức sinh vật hay còn gọi là nội sinh, có hai loại chất kháng oxy hoá

chính: enzyme và không enzyme Các enzyme kháng oxy hoá như superoxide dismutase

(SOD), catalase (CAT), glutathione peroxidase (GPx) va glutathione reductase (GRx).

tham gia trực tiếp vào quá trình trung hoa các gốc tự do Ngoài ra, các chat kháng oxy

hoá không enzyme như lipoic acid, glutathione, L-ariginine, coenzyme Q10, melatonin,

acid uric, bilirubin, được tông hợp trong cơ thé từ quá trình trao đối chất Bên cạnh

đó các chất kháng oxy hoá ngoại sinh như vitamin C, vitamin E, flavonoid,

carotenoid, được cung cap thông qua thực phẩm và được liệu Hàm lượng chat kháng

oxy hoá trong được liệu có thé biến đổi tùy thuộc vào điều kiện địa lý và môi trường

trồng trọt [1] cũng như tùy thuộc vao từng bộ phận khác nhau của cây [2].

Cây Du đủ (Carica papaya L.) thuộc họ Du đủ (Caricaceae), được trồng phỏ biến

ở nhiều nơi Trong y học dân gian, người ta sử dụng các phan của cây Du đủ dé điều trị

nhiều bệnh khác nhau như lá tươi được ding dé rửa vét lở loét; hoa đực có thé chữa ho,

viêm phé quan va khan tiếng; quá xanh thường được áp dụng dé chữa tàn nhang trên da; trong khi quả chín thường được ăn dé hỗ trợ tiêu hoá; ngoài ra, nhựa từ cây Du đủ cũng được sử dụng đẻ chữa chai chân, [3] Các nghiên cứu đã chỉ ra rằng các cao chiết từ hat, quả va lá của cây Du đủ đều có khả năng kháng oxy hoá [4-6] Theo quan điểm của

Đông y, phương pháp được sử dụng dé lấy dược liệu từ cây Du đủ là sắc nước dùng

hảng ngảy.

Nhằm so sánh hoạt tính kháng oxy hoá của hoa Du đủ đực được trồng ở các khu

vực vị trí địa lý khác nhau tại Việt Nam va ở các bộ phận khác nhau của cây Kết quảcủa dé tài có thé cung cấp thông tin khoa học vẻ hoạt tính kháng oxy hoá của nước sắc

hoa Du đủ đực nói chung, từ đó có cơ sở đề ứng dung loải cây này vào thực tiễn phòng

ngừa va điều trị bệnh Đồng thời dé tai nảy có thé góp phan thúc đây việc sử dụng các

sản phẩm từ hoa Du đủ đực trong y học và chăm sóc sức khỏe.

Từ tat cá những lý do trên, dé tai “Khao sát hoạt tinh kháng oxy hoa cúa nước sắc

hoa Du đủ đực (Carica papaya L.) trong điều kiện in vitro” được thực hiện

Il MỤC TIÊU NGHIÊN CỨU

So sánh hoạt tính kháng oxy hoá nước sắc ở các bộ phận khác nhau của hoa Du đủ đực trong điều kiện in vitro thu hái tại các khu vực vị trí địa lý khác nhau.

III DOI TƯỢNG NGHIÊN CỨU

Nước sắc hoa và cuéng Du đủ đực; trong đó, hoa được phân loại thành hoa vàng

và hoa xanh.

IV NHIỆM VỤ NGHIÊN CỨU

Đề đạt được mục tiêu đã dé ra, dé tài sẽ thực hiện các nhiệm vụ nghiên cứu cụ thê

như sau:

- Tìm kiếm, nghiên cứu và tổng hợp các tài liệu cơ sở khoa học liên quan đến gốc

tự do, khả năng kháng oxy hoá, các phương pháp khảo sát hoạt tính khang oxy hoá cũng

như các công trình nghiên cứu tương tự, để hoản thiện đề cương và khoá luận tốt nghiệp;

- Thực hiện các nội dung nghiên cứu cụ thé của dé tài bao gồm: khảo sát khả năngkháng oxy hoá của nước sắc hoa Du đủ đực thông qua phương pháp khảo sắt năng lựckhử Fe?" và phương pháp bẫy gốc tự do DPPH;

- Xử lý số liệu;

- Viết và báo cáo khoá luận tốt nghiệp.

V PHAM VI NGHIÊN CUU

- Đề tài lựa chọn đối tượng hoa Du đủ đực; bộ phận được lựa chọn là hoa và cuồng

hoa, trong đó hoa được phân loại thành hoa vàng và hoa xanh Các vị trí địa lý thu mẫu

mà đề tai lựa chọn khảo sát là tinh Lâm Đồng va tỉnh Ba Rịa — Vũng Tau Dược liệu

được xử lý thành nước sắc dé khảo sát hoạt tính kháng oxy hoá

- Dễ tài sử dụng hai phương pháp đẻ đánh giá hoạt tính kháng oxy hoá của được

liệu bao gồm: phương pháp khảo sát năng lực khử Fe?' và phương pháp bay gốc tự do DPPH Hai phương pháp này được lựa chọn vì tính phù hợp với điều kiện phòng thí

nghiệm quy trình thực hiện đơn giản và có độ tin cậy cao.

VI NỘI DUNG NGHIÊN CỨU

- Nội dung 1: Khảo sát khả nang kháng oxy hoá của nước sắc hoa Du đủ đực theo

phương pháp năng lực khử Fe?’

Chương 1: TONG QUAN

1.1 KHÁI QUAT VE GOC TỰ DO

1.1.1 Khái niệm

Các gốc tự do gôm các loại gốc chứa oxygen (Reactive Oxygen Species — ROS)

và nitrogen (Reactive Nitrogen Species — RNS) Một số gốc tự do phô biến là: hydroxyl

OH'), superoxide O2*>), nitric oxide NO*), nitrogen dioxide NO2"), peroxyl

(-ROO’), lipid peroxyl (-LOO'), hydrogen peroxide (H2O2), ozone (O3), oxygene don

('O2), hypochlorous acid (HOCI), nitrous acid (HNO2), peroxynitrite (-ONOO ),

dinitrogen trioxide (N203), lipid peroxide (LOOH) [7].

O cấp độ tế bao, các gốc tự do ở nông độ thấp có vai trò quan trọng trong nhiềuchức năng sinh học như điều hòa huyết dp [8], chức năng nhận thức [9] và hệ miễn dịch

[10] Ở nông độ thấp hoặc trung bình, ROS và RNS đóng vai trò cần thiết trong quá

trình hình thành các cau trúc tẻ bào và có thé tham gia vào cơ chế phòng chồng vi khuân gây bệnh như một phần của hệ miễn dich, do các tế bảo miễn dịch như bạch cầu trung

tính, đại thực bào và bạch cầu đơn nhân giải phóng các gốc tự do dé tiêu diệt vi khuẩn[ I 1,

12] Tâm quan trọng của việc sản xuất ROS bởi hệ thông miễn dịch được chứng minh

bởi những bệnh nhân mắc bệnh u hạt Những bệnh nhân này thường mắc phải sự khuyết

thiếu liên quan đến hệ thống NADPH oxidase, gây ra sự thiểu hụt trong việc sản xuấtgốc anion superoxide (-O”), dẫn đến nhiều van dé nhiễm trùng tái phát [11, 13]

Một số anh hưởng tích cực của ROS và RNS liên quan đến vai trỏ sinh lý của

chúng trong các hệ thông truyền tin tế bao [14-16] Việc sản xuất chủng thông qua cácđồng phân NADPH oxidase thực bào đóng một vai trò quan trọng trong việc điều hòacác tang tín hiệu nội bao trong một loạt các loại tế bảo khác nhau bao gồm nguyên bảosợi, tế bào nội mô, tế bào cơ trơn mạch máu, tế bào cơ tim và mô tuyến giáp Ví dụ,nitric oxide (NO) đóng vai trỏ là một chất truyền tin giữa các tế bao dé điều hòa lưu

lượng máu, huyết khối và hoạt động thần kinh [14] Một ảnh hưởng tích cực khác của

các gốc tự do là khả năng kích thích nguyên phân [14, 15] Tóm lại, ROS/RNS ở mứcthấp hoặc trung bình rat quan trọng đôi với sức khỏe con người

1.1.2 Nguồn gốc

Về nội sinh, ROS là sản phẩm của quá trình trao đôi chất của ty thể, cụ thể là trong

chuỗi chuyên điện tử Mặc dù chuỗi chuyền điện tử trong ty thé tạo ra nhiều gốc tự do

superoxide nhưng hệ enzyme xúc tác cho các phản ứng oxy hoá-khử (oxidase) như

xanthine oxidase, cytochrome P450, lipoxygenase và nitric oxide synthase cũng góp

phan tao ra chúng Bên cạnh đó, các tình trạng rồi loạn như viêm, stress; bệnh, tat: ung

thư, nhiễm trùng, thiểu máu cục bộ cũng có thé tạo ra ROS.

Về ngoại sinh, ROS/RNS có thé xuất phát từ 6 nhiễm môi trường như không khí

và nước Các tác nhân như: khói thuốc lá rượu kim loại nặng hoặc kim loại chuyên tiếp(Cd, Hg, Pb, Fe, As), các loại thuốc (cyclosporine, tacrolimus, gentamycin, bleomycin),hoa chat công nghiệp hoá chat công nghiệp thức ăn (thịt hun khói, dau đã qua sử dụng,chất béo) bức xa, Sau khi tiếp xúc với cơ thể thông qua các kênh khác nhau, các tácnhân từ môi trường này có thê bị phân hủy hoặc chuyên hoá thành các gốc tự do [17]

Theo hình 1.1 gốc tự do -OH có nguồn gốc từ tia cực tím, 6 nhiễm không khí, bức

xạ ion hoa, khói thuốc lá, ty thé Gốc -NO có trong khói thuốc lá và gốc oxygen đơn có

từ tỉa cực tím và quá trính kháng viêm.

1.1.3 Tác hai

Stress oxy hoá phát sinh do sự mat cân bằng giữa sự tăng nòng độ gốc tự do và

giảm nông độ chất kháng oxy hoá trong cơ thể Khi nồng độ gốc tự do tăng cao, chúng

có kha nang dé dàng nhận electron từ các phân tử khác, dẫn đến quá trình oxy hoá, làm

biến tính các đại phân tử sinh học như protein, lipid va nucleic aicd Sự tích tụ của cácsản phẩm của oxy hoá trong cau trúc tế bao góp phần vào quá trình lão hoá sớm [19].Các ROS và RNS cũng được biết đến là các nhân tô tham gia vào quá trình gây ra cácbệnh suy giảm hệ thần kinh như Alzheimer bệnh Parkinson, bệnh đa xơ cứng, xơ cứngteo cơ bên (ALS), mat trí nhớ, tram cảm [20-23] Trong trường hợp của căn bệnh

Alzheimer, nhiều nghiên cứu thực nghiệm va lâm sàng đã chứng minh rằng tôn thương

oxy hoá đóng một vai trò quan trong trong việc mat tế bao thân kinh và tiến triển thànhchứng mắt trí nhớ [36] Sự sản xuất 8-amyloid, một peptide gây hại thường được tìmthay trong não của bệnh nhân Alzheimer, chủ yếu là do stress oxy hoáhoá và đóng mộtvai trò quan trọng trong các quá trình thoái hoá thần kinh [23]

Trong bối cảnh nay, sự chết của các tế bảo thân kinh thường đi kẻm với hiện tượng phân li tế bào, ma các ROS va RNS chịu trách nhiệm gây ra [19].

Ngoài ra, tác hại của góc tự đo cũng đã được xác định rộng rãi trong nhiều trườnghợp bao gồm bệnh xơ vữa động mach, viêm nhiễm, một số bệnh ung thư va quá trình

lão hoá Stress oxy hoá đã được nhận thức la một yếu tô quan trọng trong nhiều bệnh

viêm nhiễm như viêm khớp viêm mạch viêm cau thận, lupus ban do, hội chứng bệnh

hô hap ở người lớn, cũng như các bệnh thiếu máu cục bộ như bệnh tim, đột quy và thiếumáu cục bộ đường ruột vả nhiều bệnh khác [24] Ngoài ra sự dư thừa của ROS có thé

gây ra quá trình oxy hoá lipid và protein, gây ra những thay đổi trong cấu trúc va chức

năng của chúng.

Bên cạnh đó, các gốc hydroxyl va peroxynitrite ở nồng độ cao cũng có khả năng

tắn công và làm hỏng màng tế bào và lipoprotein thông qua quá trình gọi là peroxid hoá

lipid Kết quả của quá trình này là sự hình thành malondialdehyde (MDA) va các hợp

chat diene liên hợp gây tôn thương tế bảo và gây ra đột biến Quá trình peroxid hoá

lipid có thé diễn ra nhanh chóng và ảnh hưởng đến một số lượng lớn các phan tử lipid

[25] Protein cũng có thé bị tôn thương bởi ROS/RNS, dẫn đến thay đôi cấu trúc và làm bất hoạt enzyme [26, 27] Sự oxy hoá DNA cũng dẫn đến sự hình thành các tôn thương

DNA khác nhau, có thể gây đột biến Cơ thé có một số cơ chế tự bao vệ chong lai cac

tác động của các gốc tự do thông qua các enzyme sửa chữa DNA hoặc các chat kháng oxy hoá [7, 27, 28] Tuy nhiên, nếu không được stra chữa đúng cách, stress oxy hoá có

thê gây ra nhiều loại bệnh mãn tinh và làm tăng quá trình lão hoá cũng như một số bệnh

lý cấp tính

Đề bảo vệ cơ thé khỏi tác động xấu của các ROS va RNS, tế bao được trang bị một

hệ thống bảo vệ bao gồm các chất kháng oxy hoá [20]

1.2 CO CHE KHÁNG OXY HOÁ

Cơ thê có những cơ chế tự nhiên dé đối phó với stress oxy hoá bằng cách sản xuấtcác chất kháng oxy hoá Các chất này có thể được tổng hợp trong cơ thẻ (gọi là chấtkháng oxy hoá nội sinh) hoặc được cung cấp từ bên ngoài thông qua thực pham (gọi làchất kháng oxy hoá ngoại sinh) Chức năng chính của các chất kháng oxy hoá là trunghoà các gốc tự do, bảo vệ tế bảo khỏi tôn thương và giúp ngăn ngừa bệnh, tật Khi một

chất kháng oxy hoá trung hoà một gốc tự do, chính bản thân nó cũng sẽ bị oxy hoá Vì vậy, việc tạo ra các chất kháng oxy hoá phải liên tục được duy trì trong cơ thẻ [30].

1.2.1 Cơ chế kháng oxy hoá của tế bào

Trong tế bảo, các hợp chất kháng oxy hoá nội sinh được phân thành hai loại chính,

enzyme và không enzyme Các enzyme kháng oxy hoá trực tiếp than gia vao việc trung

hòa ROS và RNS bao gồm superoxide dismutase (SOD), catalase (CAT), glutathione peroxidase (GPx) va glutathione reductase (GRx) [27-29] SOD là enzyme dau tiên

chống lại các gốc tự do bằng cách biến đổi gốc anion superoxide (0?) thành hydroperoxide (HạO›) bằng cách khử chúng H2O2 sau đó được chuyên hoá thành nước vàoxygene bởi catalase (CAT) hoặc glutathione peroxidase (GPx) GPx loại bó H202 bing

cách sử dung nó dé oxy hoa glutathione dạng khử (GSH) thành glutathione bị oxy hoá

(GSSG) Glutathione reductase tái tạo GSH từ GSSG, sử dụng NADPH là nguồn giảm

sức mạnh Ngoai hydrogen peroxide, GPx cũng làm giảm lipid hoặc hydroperoxide không lipid trong qua trình oxy hoa glutathione (GSH) [31-33].

Các chat khang oxy hoa không enzyme cũng được chia thành các chất khang oxy

hoá nội sinh (tạo ra từ quá trình trao đôi chất) và chất kháng oxy hoá ngoại sinh (được

bô sung, cung cấp từ các nguồn đỉnh dưỡng, thực phẩm) Các chất kháng oxy hoá không

enzyme nội sinh, được tạo ra bởi quá trình trao đôi chất trong cơ thé, chang hạn như

lipoid acid, glutathione, L-ariginine, coenzyme Q10, melatonin, uric acid, bilirubin,

metal-chelating proteins, transferrin [32-35].

1.2.2 Chat kháng oxy hoá tự nhiên

Chat kháng oxy hoá có nguồn gốc tit thực phẩm đóng vai trỏ quan trọng trong việccung cấp các hợp chất dé trung hòa các gốc tự do Sự thiêu hụt chất kháng oxy hoá trongchế độ đỉnh dưỡng là một trong những nguyên nhân chính của nhiều bệnh lý thoái hoá

và mãn tính Mỗi chất đinh dưỡng mang lại một chức năng kháng oxy hoá riêng biệt

[27, 35].

Các chất kháng oxy hoá từ thực phẩm có thê được chia thành hai loại chính là tựnhiên và tổng hợp bao gồm vitamin E, vitamin C, các carotenoid và các hợp chấtphenolic [36-39] Các chất nảy có nhiều trong rau vả quả Chúng được coi là các chất

kháng oxy hoá tự nhiên An nhiều ra quả là một cách đơn giản và hiệu quả nhất dé hỗ trợ hoạt động cho hệ thông kháng oxy hoá và ngăn ngừa các bệnh có liên quan đến stress

oxy hoá [40].

Chat kháng oxy hoá tổng hợp và tự nhiên được sử đụng rộng rãi trong thực phẩm

và thuốc men, đặc biệt là trong các thực phẩm có chứa dầu và chất béo dé bảo vệ thực

phẩm khỏi quá trình oxy hoá Một số chat kháng oxy hoá tong hợp nỗi bật như butylated

hydroxytoluene (BHT) va butylated hydroxyanisole (BHA) đã được sử dụng rộng rãi

trong ngành công nghiệp thực pham, mỹ phâm và công nghiệp trị liệu Tuy nhiên, do

tính độc hai của chúng đã day sự chú ý của các nhà sản xuất từ tông hợp sang các chat

kháng oxy hoá tự nhiên [41].

Xu hướng toàn cầu dang dich chuyền sang việc sử đụng các chất kháng oxy hoá

tự nhiên có trong cây thuốc và thực phâm làm chất kháng oxy hoá trị liệu [42] Các

nghiên cứu gần đây đã tập trung vào tiềm năng kháng oxy hoá của nhiều loại rau củ và

quả [43] [44] cũng như trả xanh và trà đen chứa nhiều hợp chất phenolic [45] Các nỗ

lực đang được tăng cường đề tìm kiếm các hợp chất tự nhiên hiệu quả và không độc hại

với hoạt tính kháng oxy hoá Bên cạnh việc duy trì các hệ thong kháng oxy hoá nội sinh,

việc tiêu thụ các chất kháng oxy hoá từ thực phẩm và chế độ đỉnh dưỡng có vẻ là một

Loai: Carica papaya Carl Linnaeus [47]

Cây Du du, còn được biết đến dưới nhiều tên gọi khác như phan qua thy, lô hongphlé (Campuchia), mắc hung (Lào), cà lào, phiên mộc, Thù đủ, Mác lầu (Tay) Nguồngốc của cây Du đủ là vùng nhiệt đới châu Mỹ (Nam Mỹ và Trung Mỹ), sau này đượctrong phô biến ở nhiều quốc gia trên thé giới O Việt Nam, cây Du đủ đực thường ítđược trong mà thường mọc tự nhiên ở ven đường, trên các sườn đồi và ít thấy ở vùng

dong bang, Chúng chủ yêu được trong ở các khu vực chuyên canh về dược liệu Cac

bộ phận của cây Du đủ như lá, hoa, cảnh va quả đều được sử dung trong y học Trong

số đó, hoa Du đủ đực được sử dụng phô biến nhất [3 48, 49].

1.3.2 Đặc điểm sinh học

Cây Du đủ có kích thước lớn, cao khoảng 8 - 10m Thân cây có dạng hình trụ

không phân nhánh, mang một bó lá lớn, mọc so le và không có lá kèm, có cuống dai.

Gan lá hình dang giống chân vịt Hoa của cây thường có mau vàng nhạt, nhóm thành

chiy xim mọc ở nách của những lá già nhất Hoa thường khác gốc nhưng cũng có những kiều tạp tính (đực, cái, lưỡng tính), đực cùng gốc (đực lưỡng tính) và cái cùng gốc (cái

lưỡng tính) Cum hoa được phân nhánh nhiều, có các xim cuỗi cùng gồm hoa lưỡng tinhhay hoa cái; các cụm hoa cái chỉ gồm có 2 - 3 hoa

Trong hoa đực, phần đải hợp chia thảnh 5 cánh ngắn có hình tam giác: tràng gồm

5 cánh hoa hợp thành hình phéu Bộ nhị gồm hai vòng nhị đính trên Ống của trang; vòngtrong đặt trước các cánh hoa Bao phan có trung đới kéo dai, mang hai 6 phan mở bằngmột kẽ nứt dọc quay vẻ phía trong Một nhị thô sơ thường chiếm trung tâm hoa đực

[50].

I.3.3 Công dụng trong Đông Y

Trong Đông Y, hoa Du đủ đực được sử dụng dé điều trị nhiều loại bệnh như ho,viêm phế quan, khan tiếng và hỗ trợ trong điều trị ung thư, các van đẻ liên quan đến

đường tiêu hoá, và nhiều hơn nữa [48].

Ngăn ngừa và ức chế quả trình phân bào cua té bảo ung thự: Các chat Phenol,

Beta carotene có trong được liệu hoa Du đủ đóng vai trò tang cường hệ miễn dịch, giúp

cơ thé kháng oxy hoá vượt trội Đối với bệnh ung thư vú và bạch cau: Carotenoids va

isothiocyanates ức chế khôi u ở bệnh nhân ung thư vú rất hiệu qua; bệnh ung thư tuyếntien liệt: Nghiên cứu của các nhà khoa học Mexico cho biết hoa Du đủ đực có tác dụngngăn chặn ung thư tuyển tiền liệt ở nam giới hiệu quả lên tới 82%

Tăng cường chức năng của hệ tiêu hoá: Men papain có trong thành phần hoa Du

du đực giúp tăng cường chức năng hệ tiêu hoá Các biểu hiện như tiêu bón, tiêu chảy,

viêm ruột, khó tiêu thuyên giảm sau khi sử dụng dược liệu rẻ tiền nay Chưa dừng lại

ở đó, các dưỡng chất vi lượng, vitamin thúc đây quá trình tiêu hoá thuận lợi hơn Đồngthời, cơ thê hấp thụ tốt nhất các chất dinh dưỡng sẽ khỏe mạnh, chống suy nhược

Chữa ho, kháng viêm: Hoa hái từ Du da đực chứa hàm lượng cao các chat kháng

viêm có tác dụng sát khuẩn, tiêu sưng viêm ở cô họng Từ xa xưa, hoa đủ đủ đực đã sử dụng làm thuốc chữa ho khan, ho đờm, viêm rát họng vô cùng hiệu nghiệm Bài thuốc

còn được lưu truyền và áp dụng cho tới ngày nay là hoa Du đủ hap mật ong

Khả năng chồng đột quy, bệnh tim mạch: Chat Beta Carotene có trong hoa của cây

Du đủ đực rất phong phú Dùng dược liệu này không chỉ giúp hệ mạch được điều hòa,lưu thông tốt, ngăn chặn tình trạng tắc nghẽn mạch máu, đột quy

Giảm lượng Cholesterol xấu, điều hòa huyết áp ôn định: Nói về thực phẩm giàu

folate không thé không kẻ tới hoa Du đủ đực Bởi vậy mả dược liệu này phát huy hiệu

quả trong trường hợp cao huyết 4p, tăng Cholesterol Mach máu được làm sạch lưu

thông tốt hơn và chồng tích tụ mỡ thừa tại thành mạch.

Hỗ trợ giảm cân hiệu quả: Hàm lượng chất xơ cao cùng các loại vitamin, khoáng

chat đồi đào từ hoa Du đủ đực giúp người ding có thé giám cân an toàn, hiệu qua ma

không cần nhịn ăn Dược liệu tự nhiên rẻ tiền kích thích quá trình trao đôi chất tốt nhất,

chống tích lũy mỡ thừa

Hoa Du đủ được coi là một loại dược liệu an toản và không gây tác dụng phụ dang

kê cho người dùng Tuy nhiên, dé đảm bảo hiệu quả trong điều trị bệnh và tránh các van

dé không mong muốn, người ding cân tuân thủ các hướng dan sau đây:

Không nên sử dụng cho trẻ em dưới 3 tuôi.

Tránh sử dụng nêu có các triệu chứng như lạnh chân tay hoặc tiêu chảy

Người bệnh nên hạn chế ăn đậu xanh và rau muống khi sử dụng hoa Du đủ dé điều

trị bệnh.

Uống trà hoa Du đủ sau bữa ăn được coi là phương pháp tốt nhất

Dé bài thuốc phát huy hiệu qua, người bệnh cần duy trì việc sử dung ít nhất trong

khoảng 6 thắng trở lên.

Hạn chế tiêu thụ chất kích thích, rượu bia, thuốc lá và duy trì chế độ luyện tập

nghi ngơi phù hợp [51].

1.4 TONG QUAN CÁC PHƯƠNG PHÁP KHAO SÁT KHẢ NANG KHANG OXY

HOÁ

1.4.1 Phương pháp khảo sát nang lực khử

1.4.1.1 Năng lực khử sat (FRAP)

Phương pháp FRAP (Ferric Reducing Antioxidant Power) dựa trên khả năng khử

ion sắt III (Fe**) trong phức hợp Fe**-tripyridyltriazine (TPTZ) không màu thành ion sắt

II (Fe*) tạo phức hợp Fe?*-TPTZ màu xanh lam đậm bởi các chất kháng oxy hoá trong môi trường acid (pH 3.6) Hoạt tính kháng oxy hoá của mẫu thử được đo băng giá trị hap thụ quang phô (OD) ở bước sóng 593 nm và so sánh với axit ascorbic được ding

làm chất chuan FRAP được sử dụng pho biến trong nghiên cứu dinh dưỡng và sinh hoá

vì đơn giản, nhanh chóng, chi phí thấp và không yêu cau quá nhiều về các thiết bị chuyêndung [52] Bên cạnh đó, nhược điểm của FRAP là khả năng hình thành kết tủa màu xanhđậm trong dung dich, do đó có thé anh hưởng đến độ chính xác của kết quá thí nghiệmkhi tiền hành đo giá trị OD Điều này xuất phát từ sự biến đổi trong thời gian bé sungdung dich mang ion Fe** (FeCls), một yếu tố quan trọng trong quá trình phan ứng, cóthé ảnh hưởng đến dién giải kết quả thi nghiệm cuối cùng [53] Nghiên cứu của R Pulido

và cộng sự đã chứng minh rằng kết quả của thí nghiệm FRAP có thé thay đôi tuỳ vàothời gian phản ứng giữa ion Fe** và chat kháng oxy hoa, dao động từ vai phút cho đến

vài giờ đồng hồ [54] Vì các chất kháng oxy hoá thường có thời gian phản ứng không đồng đều, kết qua của thí nghiệm có thé không phan ánh một phan ứng đã hoàn toàn cân

bằng

Hình 1.2 Cau trúc hod học của các phức chất tham gia phản ứng hoá học và sự

thay doi màu của phương pháp FRAP [53]

1.4.1.2 Năng lực khử Cu?* (CUPRAC)

Phương pháp CUPRAC (Cupric Reducing Antioxidant Capacity) dựa trên nguyên

tắc chuyên electron (Electron transfer — ET) dé đánh giá kha nang khang oxy hoá của các hợp chat va mau sinh học Phương pháp này được thực hiện bằng cách khử ion Cu’

- neocuproine (Ne; 2,9 - dimethyl - 1,10 - phenanthroline) từ màu xanh da trời nhạt

thành ion Cu” - Ne có màu vàng cam trong dung dich của clorua đồng (II) và đệm acetate

ở pH 7,0 Đánh giá kết quả thường được thực hiện thông qua sự biến đồi mau sắc của

dung địch và đo lường mật độ quang (OD) tại bước sóng 450 nm sau khi phan ứng diễn

ra trong điều kiện nhiệt độ 50°C trong 30 phút Trolox được sử dụng như mẫu thử dương

kiêm đề đánh giá quy trình thí nghiệm [55] Ưu điểm của phương pháp này là thuốc thử

có tính chon lọc, ôn định, nhạy cảm với các chất oxy hoá dang thiol và pH của dungđịch đệm rat gan với nông độ pH sinh ly của cơ thé người là 7,35 — 7,45, giúp đảm baorằng điều kiện thí nghiệm sẽ tương tự với môi trường sinh học tự nhiên, làm cho kết quả

đo lường trở nên có ý nghĩa hơn va dé so sánh hơn với điều kiện thực tế [56] Ngoài ra,

đề tài [57] đã nghiên cứu và chứng minh được các chất kháng oxy hoá khi sử dụng

CUPRAC đề đo lường, không có phản ứng hoá học giữa chúng xảy ra trong quá trình

thí nghiệm Điều nay làm cho kết qua của thí nghiệm không bị ảnh hưởng bởi các tương

tác hoá học giữa các chất này, giúp đảm bảo tính chính xác và độ tin cậy của dữ liệu thu

được từ phương pháp CUPRAC Phương trình phản ứng thé hiện như hình 1.3.

Hình 1.3 Cau trúc hoá học của các phức chất tham gia phản ứng hoá học và

sự thay đổi màu của thử nghiệm phương pháp CUPRAC

HA là chất kháng oxy hoá và A+ là chất kháng oxy hoá đã bị mat electron (a);

Sự thay déi màu sắc của thử nghiệm được thé hiện qua (b) [55]

1.4.1.3 Nang lực khử Fe?’ (reducing power)

Vào năm 1986, phương pháp khảo sát năng lực khử Fe?" lần đầu tiên được đè xuất

boi Makoto Oyaizu và sau nảy được cải biên bởi tác giả Beyhan và công sự với công

trình nghiên cứu năm 2010 [58, 59] Khả năng kháng oxy hoá của mẫu thử được đánh

giá tương quan với khả năng chất kháng oxy hoá có trong mẫu thử phản ứng với

potassium ferricyanide (K:[Fe(CN)]) tạo thành phức potassium ferrocyanide

(Ka[Fe(CN}]) Phan ứng tạo màu xanh lam giữa ferric choride (FeCl:) và phức

K.[Fe(CN)o] phan ánh mức độ khang oxy hoa của mẫu thử và nó có độ hấp thụ cực đại

ở bước sóng 700 nm [60] Giá trị hấp thụ mật độ quang ở bước sóng 700 nm của mẫuthử được đối chiếu với giá trị của chứng dương (thường là Trolox, BHT hoặc ascorbicaicd) nhằm kết luận về khả năng kháng oxy hoá của mẫu thử Ưu điểm của phương pháp

nảy la chi phí thắp, đơn giản vả có sự tin cậy cao [61].

Yellow Dark bhee

Hình 1.4 Cau trúc hod học của các phức chất tham gia phản ứng hod học và sựthay doi màu của thử nghiệm phương pháp kháo sát năng lực khử Fe** (reducing

power) [61]

1.4.2 Phương pháp khảo sát kha năng bay gốc tự do

1.4.2.1 Bay gốc tự do 2,2-diphenyl-1 picrythydrazyl (DPPH)

Phuong pháp khảo sát kha năng bay góc tự do DPPH được xem là một trong những

phương pháp phô biến dé đánh giá khả năng bay góc tự do của các chất kháng oxy hoá

vì sự nhanh chóng, đơn giản, chính xác và ít tốn kém [62] Ban đầu được phát triển bởi Blois vào năm 1958, phương pháp đã được sửa đôi và bô sung bởi Brand — Williams và cộng sự vào năm 1995 Nguyên tắc của phương pháp này dựa trên khả năng chuyên electron của các chất kháng oxy hoá cho gốc DPPH - là một gốc tự do bèn, mau tím và

có độ hap thụ cực đại ở bước sóng 517 nm Khi có mặt chất kháng oxy hoá, DPPH sé bi

khử thành DPPH-H có màu vàng Độ giảm cường độ mau được phan ánh thông qua độ

giảm giá trị mật độ hap thụ quang OD được đo ở bước sóng 517 nm Vì vậy, giả trị OD càng thấp so với chứng âm, khả năng kháng oxy hoá của mẫu thử càng mạnh [63, 64].

Phương pháp khảo sát khả năng bẫy gốc tự do DPPH có những ưu điểm nỗi bật như chỉphí thấp dé thực hiện, có thé thực hiện ở nhiệt độ phòng trong phòng thí nghiệm va có

độ nhạy cao [65].

Deep purple Pale yellow

Hình 1.5 Cau trúc hoá học của các phức chat tham gia phản ứng hoá học và sự

thay đối màu của thứ nghiệm phương pháp bẫy gốc tự do DPPH [66]

1.4.2.2 Bay gốc tự do 2,2 — azinobis 3 ethyl benzothiazoline — 6 — sulfonic acid

(4BTS)

Phương pháp đánh giá khả năng kháng oxy hoá dựa trên việc sử dụng ABTS - là

một phương pháp pho biến trong nghiên cứu về oxy hoá và kháng oxy hoá [67] Khi bị

oxy hoá, ABTS sẽ mat đi một electron và hình thành gốc tự do ABTS" Electron độc

thân trên gốc tự do tạo thành một hệ liên hợp electron, làm cho dung dich chuyên từ

không màu sang màu xanh lam, với độ hap thụ cực đại ở bước sóng 734 nm Nếu chất

kháng oxy hoá tác động lên, ABTS"' sẽ được khử trở lại thành dang ban dau ABTS, khiến dung dich mat mau Kha năng khử ABTS*TM của một chất kháng oxy hoá thé hiện

ở mức độ làm giảm màu xanh lam của dung dịch ABTS Butylated hydroxytoluene

(BHT) được sử dụng làm chứng dương trong thí nghiệm [68] Phương pháp ABTS” có

ưu điểm là cho phép xác định nhiều loại chat kháng oxy hoá do gốc ABTS" phản ứng

nhanh chóng với cả các chat kháng oxy hoá tông hợp va tự nhiên (ví dụ: amino acids, peptides, vitamin E và vitamin C) trong mẫu thử [69] Tuy nhiên, phương pháp ABTS'

đối mặt với thách thức là thiếu sự tương quan sinh học vì ABTS* là gốc nhân tạo và

không tồn tại trong cơ thê người [70]

ABTS radical cation (ox)

Dose-grews coder)

Hình 1.6 Cấu trúc hoá học của các phức chất tham gia phản ứng hoá học và sự

thay đổi màu của thử nghiệm phương pháp bẫy gốc ABTS" [67]

1.4.2.3 Phương pháp khảo sát kha năng hap thụ gốc peroxyl (ORAC)

Chi số Oxygen Radical Absorbance Capacity (ORAC) là chi số đo khả nang khangoxy hoá của các hợp chat hoặc chat có trong mẫu thử [71] Phương pháp ORAC dựatrên khả năng kháng lại gốc tự do peroxyl (-ROO*) — các gốc tự do chiếm ưu thế trong

quá trình oxy hoá lipid do 2,2’ — azobis (2-amidino-propane) dihydrochloride (AAPH)

tạo thành Trong phương pháp này, fluorescein được sử dụng làm thuốc nhuộm huỳnh

quang va đầu dò huỳnh quang dé đo lường phản ứng với gốc peroxyl Bước sóng kích

thích và bước sóng phát quang được lựa chọn đê phù hợp với tính chất phát huyền phân

của fluorescein (FL) là 485 + 20 nm và 528 + 20 nm tương ứng Hoạt tính kháng oxy

hoá được đánh giá bằng cách đo thời gian phát huỳnh quang và diện tích dưới đườngcong (Area Under the Curve - AUC) của mẫu thử so với mẫu chứng Chỉ số ORAC của

mẫu thử được so sánh với chỉ số ORAC của chất chuẩn (thường là Trolox — vitamin E), mẫu thir có chỉ số ORAC càng cao sẽ cho thấy khả nang kháng oxy hoá của nó càng

mạnh [72, 73].

Sau khi đã tham khảo và phân tích sơ lược qua nhiều phương pháp khảo sát khả

năng kháng oxy hoá, dé tài chọn lựa phương pháp khảo sát năng lực khử Fe' va phươngpháp bay gốc tự do DPPH làm hai phương tiện chính dé thực hiện dé tài nay Sự kết hợp

giữa hai phương pháp nay không chỉ đảm bảo tinh chính xác va độ tin cậy của kết quả

mà còn cung cấp cái nhìn toàn điện va đa chiều về khả năng kháng oxy hoá của các mau

thử trong điều kiện của phòng thí nghiệm.

1.5 TONG QUAN CÁC CONG TRÌNH NGHIÊN CỨU LIEN QUAN DEN ĐÈ

như tannin, saponin, flavonoid va steroid [74].

Nam 2015, M Nainggolan và Kasmirul sử dung phương pháp định tính xác định

hợp chất hoá học đơn giản các cao chiết ethanol và cao phân đoạn (n-hexane,

cthylacctate và nước) từ hoa Du đủ đực đã xác định được trong cao phan đoạn —-hexane

có sự hiện điện của hợp chat triterpenoid/steroid; ở cao phân đoạn ethylacetate cho thay

sự hiện điện của flavonoid, tannin, hợp chất nhóm glycoside va ở cao nước cho thay sự

xuất hiện của hợp chất nhóm glycoside [75]

Năm 2016, nhóm nghiên cứu của tác giả Nazia Asghar tiễn hành khảo sát hoạt tinh kháng oxy hoá của cá bộ phận khác nhau của cây Du đủ Phương pháp bay góc tự do DPPH được nhóm tác giả lựa chon dé thực hiện dé tài, kết quả cho thay tại nồng độ 25

g/mL cao chiết cthanol lá có khả năng bay gốc DPPH tốt nhất (75,05%) tiếp đến là vỏ

cây (68,07%) sau đó là rễ, hat [76].

Năm 2018, M P Sianipar và cộng sự thực hiện một nghiên cứu nhằm khảo sát khảnang kháng oxy hoá va khang ung thư của cao chiết ethanol phân đoạn n-hexane từ hoađực của cây Du đủ (Carica papaya L.) bằng phương pháp DPPH và thử nghiệm MTT

Nghiên cứu này cũng xác định được hợp chất hoá học có trong cao chiết là

triterpenoid/steroids Theo phương pháp DPPH, giá trị ECso của cao chiết được xác định

là 100,81 + 1,180 pg/mL, thấp hon so với giá trị ECso của ascorbic acid là 5,173 + 0,382 ug/mL Trong thử nghiệm MTT, các tác giả khảo sát khả năng gây độc tế bảo ung thư ruột kết (WiDr) và tế bào bình thường (Vero), kết quả cho thấy cao chiết có khả năng

ngăn chặn sự phát triển tế bao ung thư WiDr với giá trị ECso là 64,105 pg/mL [77]

Khả năng kháng oxy hoá và kháng khuân của hoa Du đủ đực cũng được chứng

minh [78] Nhóm tac giả đã sử dụng phương pháp DPPH và thực hiện khảo sát trên các

cao chiết phân đoạn methanol, chloroform, n-hexane và nước Kết quả cho thấy hiệuqua kháng oxy hoá của các cao phân đoạn lần lượt là 64,07% (n-hexane), 26,2% (nước),17.5% (methanol), vả 7,9% (chloroform) Dựa trên kết quả này, nhóm tác giả kết luậnrằng cao phân đoạn n-hexane có hiệu quả kháng oxy hoá tốt nhất trong số các cao chiếtđược nghiên cứu Các hợp chất được phân lập từ các cao chiết hoa Du đủ đực bao gồm

alkaloids, flavonoids, saponins va tannins Sử dụng phương pháp khuếch tán giếng đôi với chủng vi khuẩn Gram âm Escherichia coli va vi khuẩn Gram dương Bacillus subtilis, kết qua cho thay các cao phân đoạn methanol có hiệu quả ức chế mạnh mẽ nhất,

tiếp theo là cao nước, chloroform và cao phân đoạn n-hexane không thẻ hiện kha năngchống lại sự sinh trưởng của 2 chủng vi khuẩn nảy

Tháng 03 năm 2022, Ruining Zhang và các cộng sự của ông tiền hành phân tích

chat kháng oxy hoá của các bộ phận khác nhau của một số giống Du đủ (Carica papayaL.) Dé tài tiền hành nghiên cứu khả năng kháng oxy hoá bằng phương pháp DPPH với

9 bộ phận của cây bao gồm nước ép quả chín, nước ép quả xanh, vỏ quá chín, vỏ quả

xanh, hạt, hoa, lá, rễ và thân; kết quả ghi nhận được dao động tir 1,98 đến 17,8 mmol/LTrolox/g DW và thứ tự kha năng bay gốc tự do DPPH từ cao đến thấp là: lá > rễ > hoa

> vỏ quả xanh > vo qua chín = than > nước ép quả chín = nước ép quả xanh = hạt Ngoài

ra, dé tài tiến hành khảo sát cao chiết hoa và lá các giỗng Du đủ từ Tam A và Vịnh Qizithuộc Hải Nam, Trung Quốc; cho thay khả năng bẫy gốc tự do DPPH của cao chiết lá

Du đủ được thu mẫu tại Vịnh Qizi (15,93 mmol/L Trolox/ g DW) tốt hon so với cao chiết

các mẫu tại Tam A (9,84 mmol/L Trolox/g DW) và cao chiết hoa không có sự khác biệt

có ý nghĩa thống kê giữa 2 khu vực vị trí địa lý [79]

Cùng vào năm 2022, dé tài của nhóm nghiên cứu đứng đầu là Muhammad Alfarabi

hoạt tinh sinh học của cao chiết ethanol hat Du đủ thu nhận từ 2 vị trí địa lý khác nhau

là tiêu bang California, Hoa Kỳ và Bangkok, Thái Lan Nhóm nghiên cứu thực hiện

khảo sát khả năng kháng oxy hoá bing phương pháp bay gốc tự do DPPH, kết quả cho

thay ECso của cao chiết hat Du đủ thu mẫu tai California va Bangkok có sự khác biệt

tương ứng là 24,4 ppm va 22,2 ppm Khi so sánh với ECsa chứng đương — ascorbic acid

là 6.73 ppm thì có thé thay rằng tỷ lệ phần tram bay góc DPPH của cao chiết hat Du đủ

& 2 vị trí địa lý dat 50% thấp [80]

Vao năm 2022, nhóm nghiên cứu của tác giả S Halder lại lần nữa chứng minhrằng cao chiết methanol từ hoa Du đủ có khả năng kháng oxy hoá Bằng phương phápđịnh tính các hợp chất hữu cơ được xác định có sự hiện điện trong cao chiết bao gồm:

Phenol, flavonoids, saponins, tannins, glycosides, alkaloids Sử dụng phương pháp bay

gốc tự do DPPH, giá trị ECso được xác định là 995.86 + 0.34 pg/mL trong khoảng nồng

độ tir 100 đến 500 ug/mL Đồng thời, tại cùng khoảng nông độ nhom tác giả đã sử dụng

phương pháp đo năng lực khử Fe*’, và giá trị ECso thu được là 480 + 0.23 pg/mL [81].

Gan đây vào năm 2023, nhóm nghiên cứu đứng dau là Sergey Goriainov tiến hành

nghiên cứu vẻ thành phan hoá học và hoạt tinh sinh học của dầu hat Du đủ được thu thập & 6 quốc gia trên thé giới là Kenya, Cộng hoà Dominica, Angola, Ghana, Brazil và

Nga Bằng phương pháp sắc ký khí — quang phô khối (Gas Chromatography — Mass

Spectrometry) đê tài xác định được sự khác biệt vé hàm lượng chất béo trong dau hạt

Du đủ ở các vị trí địa lý khác nhau như mẫu Brazil có ham lượng campestanol cao nhất

(16,9 + 0,9 mg/100g) trong 6 quốc gia và hàm lượng f-sitosterol có giá trị tương đồng

ở các mẫu nhưng thấp ở mẫu Angola (314,1 + 11,2 mg/100g) và Brazil (309,8 + 9,9

mg/100g) [82].

1.5.2 Trong nước

Một công trình trong nước [83] đã xác nhận rằng cao chiết từ hoa Du đủ đực théhiện một số hoạt tính sinh học có tác dụng kháng oxy hoá, được phân lập bằng phương

pháp sắc ký khí ghép nỗi khối phỏ (GC-MS) Cụ thé, kết quả phân tích cho thấy trong

cao chiết hexane, n-Hexadecanoic acid (10,38%): 9.12-octadecadienoic acid (Z Z)

- (26,00%); stigmasterol (2/44); øamma-sitosterol (7,95%); fucosterol (2,00%) là

những hợp chất có hàm lượng lớn nhất trong khi các hợp chất còn lại chiếm tỉ lệ dưới

2% Trong cao chiết ethylacetate, các hợp chất với hàm lượng cụ thẻ là

1,2,3-propanetriol,l-acetate (15.38%); n-hexadecanoic acid (2,72%); hexanedioic acid bis

(2-ethylhexyl); ester (4,62%); heptadecane (3,25%); gamma-sitosterol (6,18%).

Ngoài ra sử dụng phương pháp định tính với thuốc thir Mayer va Wagner, kết qua chothấy sự hiện diện của alkaloid trong cao chiết

Năm 2019, tác giả N T K Ánh đã sử dụng phương pháp định tính dé xác định cácnhóm hợp chất tự nhiên có khả năng kháng oxy hoá trong các cao chiết phân đoạn

chloroform từ cao tông ethanol, nước và methanol của hoa Du đủ đực Kết quả đã cho thay sự hiện điện của nhiều hợp chất như alkaloid, flavonoid, saponin, steroid, polyphenol Sau đó tác giả tiền hành chứng minh hoạt tính ức chế sự tăng sinh tế bao

trên ba dong tế bao ung thư: ung thư phối (A549), gan (Hep3B) và vú (MCF-7) Kếtquả cho thay ở nồng độ 100 pg/mL, cao methanol đã thê hiện hoạt tinh ức chế tốt hơn

so với hai loại cao còn lại đối với ba dòng tế bảo ung thư, với tỷ lệ phần trăm tế bàosống sót tương ứng là 35,76%: 46,81% va 38,24% [84]

Vào năm 2020, nhóm nghiên cứu của Đỗ Thị Thuy Vân vào năm 2020 đã tiền hành nghiên cứu về một số hợp chất hoá học từ cao chiết methanol phân đoạn n-hexane,

chloroform, dichloromethane và ethyl acetate của hoa Du đủ đực Sử dụng các phương

pháp sắc ký lớp mỏng vả phé cộng hưởng từ hạt nhân (NMR), phố khối (MS), nhóm tác

giả đã phân lập và xác định cấu trúc của ba hợp chất hoá học có khả năng kháng oxyhoá, bao gồm rutin, acid gallic và daucosterol [85]

Năm 2020, Nguyễn Thị Huynh Như và cộng sự tiễn hành khảo sát một số thành

phan hoá học và hoạt tính kháng oxy hoá của cao chiết ethanol hạt Du đủ [86] Phương

pháp khảo sát hoạt tính kháng oxy hoá được sử dụng trong dé tai là năng lực khử và bẫygóc tự do DPPH, kết quả ghi nhận được tại nồng độ 80 mg/mL giá trị OD là 0,36 đối

với phương pháp năng lực khử và với phương pháp DPPH đè tài xác định được giá trị

ECso là 19,7 mg/mL Bên cạnh đó, nghiên cứu tiền hành phân tích so sánh với các nghiên

cứu trước dé, chỉ ra rằng hoạt tính kháng oxy hoá của cao chiết hạt Du đủ từ các vị trí

địa lý khác nhau thé hiện sự biến đổi về giá trị ECso khi sử dụng phương pháp DPPH.

Cụ thé, ECso tại Nigeria [87] là 17,9 mg/mL; tại Malaysia [88] là 0,1 mg/mL; va tai

Trung Quốc [4] là 0,25 mg/mL Điều đó cho thay kha năng bẩy gốc tự do DPPH hay nói cách khác là hoạt tính sinh học của cao chiết hạt Du đủ ở các vị trí địa lý khác nhau trên Thế giới sẽ khác nhau.

Chương 2 ĐÓI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU

2.1 ĐÓI TƯỢNG NGHIÊN CỨU

Đối tượng nghiên cứu được đề tài sử dụng là nước sắc hoa Du đủ đực Hoa Du đủ đực (Carica papaya L.) được thu tại hai địa điểm khác nhau: xã Tân Châu huyện Di Linh, tỉnh Lâm Đồng (LD) (vị trí địa lí được minh hoa theo hình 2.2) và xã Xuân Sơn,

huyện Châu Đức, tỉnh Ba Rịa — Vũng Tau (BR — VT) (vị trí địa lí được minh hoạ theo

hình 2.3) Sau khi thu hoạch hoa được định danh bởi ThS Nguyễn Thị Thanh Tâm

-giảng viên - Bộ môn Phân loại học Thực vật - trưởng Đại học Sư phạm Thành phó Hồ

Chí Minh; sau đó hoa được tiến hành phân loại thành ba nhóm: hoa vàng (HY), hoa

xanh (HX) và cuống hoa (C); tiếp theo, mẫu được phơi và say khô tại phòng Thực vật

học trường Đại học Sư phạm Thành phố Hồ Chí Minh; sau đó, mẫu hoa khô được bảo

quản ở điều kiện phòng thí nghiệm (Hình 2.1) và được sử dụng đề thu nước sắc tại phòng

Di truyền — Tiền hoá, Khoa Sinh học, trường Dai học Sư phạm Thành phố Hồ Chí Minh.

Hoa vàng Hoa xanh Cuống

A B C

Hình 2.1 Mẫu sấy khô của hoa Du đủ đực được thu tại tinh Lâm Đồng (A, B,

C)

Viet Nam

2.2 THIẾT BỊ VÀ HOÁ CHÁT

2.2.1 Thiết bị

Một số thiết bi và dụng cụ được sử dụng trong quá trình tiễn hành thực hiện dé tài

được trình bay trong Bang 2.1.

Bảng 2.1 Danh mục các thiết bị và dụng cụ sử dụng trong đề tài

5 _ Máy lắc Vortex MS 3 Basic

1Ú Pipetman 20-2004,

11 Pipetman 100-1000 Thermo Scientific

l2 Pipetman 500-5000pL

2.2.2 Hóa chất

Một số hoá chất được sử dụng trong quá trình thực hiện đề tài được trình bày trong

Bảng 2.2.

Bảng 2.2 Danh mục các hoá chất được sứ dụng trong đề tài

_ 1, Hoá chất được sử dụng trong thử nghiệm khảo sát năng lực khửFc'

-Can 0,0016g ascorbic acid và bô sung 10 Bảo quản ở điều

¬ mL nước cat, được dung dịch gốc có kiện lạnh, tránh

+ Cân 0,717g Na2HPOs, bô sung vừa đủ

Đệm phosphate, 0,2 | 10 mL nước cat.

M, pH = 6,6 + Tron 12,5 mL dung dich NaH:PO; với

Trichloroacetic acid | Cân 4g TCA , bô sung vừa đủ 40 mL Hoá chat bảo

(TCA) 10% nước cắt quản ở điều kiện

Ferric chloride (FeCl›) | Cân 0,0166g FeCls , bô sung vừa đủ 10 lạnh và không

0,1% mL nước cat có ánh sáng.

2 Hoá chất được sử dung trong thử nghiệm khảo sát kha năng bẫy gốc DPPH

Can 0,0033g DPPH bô sung vừa đủ 100

mL methanol tuyệt đối tao thành dungdịch có nông độ 0,08 mM

DPPH

(Sigma-Aldrich) 0,08 mM

Các hoá chất

Cách pha ascorbic acid được trình bảy

; ; duge bao quan

như hoa chat trong thử nghiệm nang lực

trong điều kiện

khử.

lạnh và không Ascorbic acid

(Scharlau)

R tẾp xúc trực

20, 25 pe/mL đê dựng đường tương quan | "¬

tiếp với ánh

và xác định giá trị ECso làm chứng dương |.

cho thí nghiệm Theo đó, giá trị ECso

được xác định là 13,72 pg/mL (kết quả

đường chuẩn được trình bày ở phụ lục).

2.3 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CUU

Dé tài tiến hành khảo sát hoạt tính sinh học, cụ thé là khả năng kháng oxy hoá củanước sắc hoa Du du đực theo từng bộ phan của hoa la HV, HX va C Toan bộ thi nghiệmđược bố trí theo sơ đồ Hình 2.4

Ba Ria - Vang Tàu

1 1

Khao sat hoạt tính kháng oxy hoá in vitro

hts os » wait Khao sat kha nang

Khao sit năng lực khử Fe? bẫy gốc tự do DPPH

2023 và ở tinh LD là thang 7 năm 2023 Quy trình thu, xử lý va bảo quản mẫu hoa Du

đủ được mô tả theo sơ dé Hình 2.5.

Bà Ria ~ Vang Tàu

Cho mẫu vào Bao quan ở nơi khô ráo,

túi giấy thoáng mát

Can và ghi chit :

khỏi lượng |

r6 na

Hình 2.5 Sơ đồ quy trình thu, xử lý và bảo quản mẫu

- Mau hoa Du đủ đực tươi sau khi thu hoạch, được định danh bởi ThS Nguyễn Thị

Thanh Tâm - giảng viên - Bộ môn Phân loại học Thực vật - trường Đại học Sư phạm

Thành phố Hỗ Chí Minh.

- Hoa Du đủ đực tươi được phân loại thành hoa vàng (HV), hoa xanh (HX) và

cuống (C) Cụ thể, những hoa to, có màu trắng sáng, hoa nở có nhị vàng, 5 cánh, hìnhloa kèn hoặc còn là nụ hoa nhưng nụ to, trắng vàng được phân loại thành HV; các hoa

nhỏ có màu xanh, khi ngắt hoa ra khỏi cuồng hoa có nhiều nhựa trắng chảy ra được xếp

vao phân loại HX; € là phan gan liên với hoa, nhỏ, xoăn.

2.3.2 Phương pháp thu nhận nước sắc hoa Du đủ đực

Quy trình thu nhận nước sắc hoa Du đủ đực trong đề tài được thực hiện theo [89]

và được thé hiện trong Bảng 2.3.

Bảng 2.3 Quy trình thu nước sắc hoa Du đủ đực (Carica papaya L.)

Bước 1 — Cân và ngâm mẫu với nước cat trong 15 phút

Bước 2 Loại nước, thêm 300 mL nước cất và nau trong 90 phút ở 70 — 80°C

Bước 3 Thu nước sắc lần một

Bước 4 Thêm 200 mL nước cat và nau trong 90 phút ở 70 — 80°C

Bước 5 Thu nước sac lân hai

Bước 6 Hòa nước sac lân một và hai

Bước 7 Ly tâm loại cặn với tốc độ 3000 vòng/phút trong 10 phút

Cô đặc nước sắc trong bẻ ôn nhiệt (50-60°C) tới khi dat tỉ lệ giữa mẫu

Bước 8 và thê tích là 1:1 (g/mL), được xem la có nòng độ 100% và sử dụng

trong ngảy

Nước sắc thành phâm được pha loãng thành các nông độ khác nhau đề tiễn hành khảo

sát kha nang kháng oxi hoa in vitro

2.3.3 Phuong pháp khảo sát kha năng khang oxy hoá in vitro

Có nhiều phương pháp được sử dung dé đánh giá hoạt tinh khang oxy hoá của các

mẫu thứ, bao gồm năng lực khử sắt (FRAP), khả năng khử Cu?" (CUPRAC), bay gốc tự

do ATBS, phương pháp DPPH, hay ORAC và HORAC Trong ngữ cảnh của dé tai,

phương pháp khảo sát năng lực khử Fe?’ va phương pháp bay gốc tự do DPPH đã được lựa chọn đề khảo sát hoạt tính kháng oxy hoá của nước sắc hoa Du đủ đực được thu

nhận tai hai địa điểm LD và BR — VT,