Luận văn thạc sĩ Thú y: Sự hiện diện của PCV3 cùng một số mầm bệnh liên quan trong ca bệnh rối loạn sinh sản ở các trại heo

Nghiên cứu đã xác định được các mam bệnh hiện diện ở các ca roi loạn sinh sản và đặc diém kiêu gen PCV3 trên đàn heo giông nhiễm... Rối loạn sinh sản trên heo thường xảy ra do các tác nh

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠOTRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM TP HCM

DANG HOANG KIM

SU HIEN DIEN CUA PCV3 CUNG MOT SO MAM BENH

LIEN QUAN TRONG CA BENH ROI LOAN

SINH SAN O CAC TRAI HEO

LUAN VAN THAC Si KHOA HOC NONG NGHIEP

Tp Hồ Chi Minh — Tháng 12/2023

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠOTRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM TP HCM

ĐẶNG HOÀNG KIM

SỰ HIỆN DIEN CUA PCV3 CUNG MOT SO MAM BỆNH

LIEN QUAN TRONG CA BENH ROI LOAN

SINH SAN O CAC TRAI HEO

SỰ HIỆN DIỆN CỦA PCV3 CÙNG MỘT SÓ MÀM BỆNH

LIÊN QUAN TRONG CA BỆNH ROI LOẠN

SINH SAN Ở CÁC TRẠI HEO

DANG HOANG KIM

Hội dong cham luận văn:

GS.TS DƯƠNG NGUYÊN KHANG

Trường Đại học Nông Lâm TP HCM

TS HOÀNG THANH HẢI

Trường Đại học Nông Lâm TP HCM

LÝ LỊCH CÁ NHÂN

Tôi tên là Đặng Hoàng Kim, sinh ngày 01 tháng 09 năm 1995 tại huyện Tuy Phước, tỉnh Bình Định.

Tốt nghiệp THPT tại trường THPT số 2 Tuy Phước, huyện Tuy Phước, tỉnh

Bình Định, năm 2013 Tốt nghiệp Đại học ngành Bác sĩ Thú Y hệ chính quy tại Đại

học Nông Lâm Tp.HCM năm 2018.

Tháng 9 năm 2020 theo học Cao học ngành Thú Y tại Đại học Nông Lâm TP.

LỜI CAM ĐOAN

Tôi cam đoan đây là công trình nghiên cứu của tôi, nhờ sự hỗ trợ của Thầy Cô

và các ban tại Phòng Thí nghiệm Nghiên cứu, Khoa Chăn nuôi Thú y, Truong Dai

học Nông Lâm; dưới sự hướng dẫn của PGS TS Đỗ Tiến Duy Các số liệu, kết quảnêu trong luận văn là trung thực và chưa từng được ai công bồ trong bắt kỳ công trình

nào khác.

Tp Hồ Chí Minh ngày 1 tháng 12 năm 2023

Dang Hoàng Kim

ill

LỜI CẢM ƠN

Trong quá trình nghiên cứu và hoàn thành luận văn này, tôi đã nhận được sự

động viên, ủng hộ và giúp đỡ hết sức chân thành, quý báu của nhiều cá nhân và cơquan Tôi bày tỏ lòng cảm ơn sâu sắc tới:

PGS.TS Đỗ Tiến Duy, đã tận tình hướng dẫn, giúp đỡ, khích lệ, hỗ trợ và cho

tôi nhiều lời khuyên trong suốt quá trình nghiên cứu và hoàn thành luận văn

Tôi xin chân thành cảm ơn sự hỗ trợ của các bạn trong Nhóm Nghiên cứuVietnamse Swine Research Team đã hỗ trợ quá trình thực hiện đề tài nghiên cứu

Ban Giám hiệu, Quý Thầy Cô và cán bộ phòng Đào tạo sau đại học Trường Đạihọc Nông Lâm Thanh pho Hồ Chí Minh đã nhiệt tình giúp đỡ, hướng dan tôi trongsuốt khoá học

Ban chủ nhiệm và toàn thể quý thầy cô Khoa Chăn Nuôi Thú Y, Trường Đạihọc Nông Lâm Thành phó Hồ Chí Minh đã tận tình truyền đạt kiến thức cho tôi trong

suốt thời gian học tập tại trường

Quý anh chị, bạn bè trong và ngoài lớp Cao học

1V

với tỷ lệ cao nhất (64,0%), tiếp theo là máu heo nái (40,26%), thai chết lưu (21,43%)

và cuối cùng là thai khô (8,33%) Các mầm bệnh vi-rút gây rối loạn sinh sản khác

như Classical swine fever virus (CSFV), Porcine parvovirus (PPV) va Porcine

pseudorabies virus (PRV) không được tìm thấy trong nghiên cứu nay Bộ gen PCV3hoàn chỉnh trong ca rồi loạn sinh sản thuộc nhóm PCV3b và độ tương đồng cao (97,24

— 09,7%) với các chủng tham khảo Nghiên cứu đã xác định được các mam bệnh hiện

diện ở các ca roi loạn sinh sản và đặc diém kiêu gen PCV3 trên đàn heo giông nhiễm.

The study "Porcine circovirus type 3 and important pathogens in reproductive disorders cases in breeding pig farms" was conducted to evaluate the presence of PCV3 along with other pathogens in reproductive disorders cases in breeding pig farms Samples were collected from sows, aborted fetuses (mummified, stillborn), and weak-born piglets from 77 cases of 7 reproductive disorders farms with

a total of 154 samples These types of samples were extracted DNA/RNA used for the PCR/RT-PCR method to identify each pathogen present in the reproductive- disorder cases The PCV3 — positive samples will be amplified and sequenced whole

— genome Porcine circovirus type 3 and three pathogens Mycoplasma suis (M suis), Porcine circovirus type 2 (PCV2), and Porcine reproductive and respiratory syndrome virus (PRRSV) were detected in reproductive disorders, co-infection mainly Among them, PCV3 was detected in these cases with a high rate (64,94%) The high prevalence of M suis was also recorded (92,91%) This study found that MZ suis and PCV3 were present in the whole blood of sows, aborted fetuses (mummified, stillborn), and weak-born piglets, with the highest prevalence in weak-born piglets (64,0%), followed by the whole blood of sows (40,26%), stillborn (21,43%) and

finally mummified (8,33%) Other reproductive-disorder viral pathogens such as

Classical swine fever virus (CSFV), Porcine parvovirus (PPV), and Porcine pseudorabies virus (PRV) were not found in this study The whole-genome of PCV3 detected in reproductive-disorder cases were found in reproductive-disorder cases related to PCV3b and had high nucleotide sequence similarity level with other

reference strains (97,24 — 99,7%) This study has identified important pathogens

present in reproductive disorders in breeding pigs and the genetic characterization of

PCV3 in infected breeding herds.

Vi

MỤC LỤC

Trang tựa

T#earoy lui TT boanontabpkteototdlkctotitÐG0yENEVEIHESRGiSHNGGISLĐSGSIESEĐEI-NNZGkitdoigtiprgusg i

Ly lịch: Gá: 1h ait wesesseseesnseseonancenensneseounm eran nennnmnen memes 1 IEUNv 00 1H

TOIL c2nnfe,PP he ố.ố.ốốẽốốốốẽ ốc 1V

ho TH —Ằ—ẴẶGTẴẶẶẼẶẶằẶẰẶẰằẽẰẽắằẽẰŸẽẼẽẶẰằẰẰÏằẰẽằẰằẽằẽ VSVS trate yysssosgtoxesssstes:soiEO|84S:GSSSIBGRSSIESB-SSE-NELBBISESGLERE2MOSBSfD4EĐ+ERHGSEstssff3BioieEsubElsrGE52s0338I vi IMG [TE sreesssosnoosnetetioittiDEDAHUBHSSERSUĐSESEISSGBEEIHIUEDSSBIE-GSIHGHHHHHGBESESEGEENEOHESS-ONEISSSEQDHSGEHIGIIGGSGEUBEHB VilDanh sách chữ viết tat ccccccccccccccssessessessessessessessessessessessessessesstssessessessesaceseseeeaeeeee 1XDanh sach 0v T1 Ố.Ố XI I3anh: SãCh,6ä6;HÌTÍ Do szxtesasssgittdsiinbdntitGB0aGisi280288080098i0ixl029pSlSitadilissitosgiiqgsalisieose xH

LA Miễn HIẾN daxeenaagrisididnhittttiibigddthbiAiG0gag140ã0g00335Is636480046161400i63005616.0010gãã8603G888 10

1.5 Sinh bệnh học của một số bệnh liên quan In PO PẼN" lãi

9000 7n 13 16

Chương 2 NOI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 18

2.1 Thời gian, địa điểm và đối tượng nghiên cứu -2- 2z52z22zz2zzzz+z=+2 182a bo, ¢ | HƠI S180 sĩsie56451655660618840001355E8SEERSS)SWERXG-SB.SEESGBERSGLXEQMGRSSEIGSEDESASESSPVSASIGUESSEMXSSEEHUESE 18

A ON RE Gheseeesrendrrnstrrironntottpttt9G30g0000100000000n30890000x0jk-s0finilGH3:gn80800đ00010009 18

Vii

AE go, a 185:0, NOL GUI TiBHIGH: COU escasssessessessassaen vawsaasesaanwessesiwn SUEE812091GSA3SSgi3801890G08:303883337858448005355E 18

2.3 Vật liệu, hóa chất - 2-22 ©2++22++2E+22E122E12211223122112211221121112211221 22122 tre 182.3.1 Thiết bị và đụng Messi 2Ÿ 12 ng 1g 10014441611141620011480000104110064605000110850601.6/0g 18

5,3,5 Ha Chất sử ỦNH es 192.4 Phuong phap nghién 0 192.4.1 BG tri mghim COU cece ecsessessessessesseesessessessessessessessesiessessessessessesseeseess 19

Chương 3 KET QUÁ VÀ THẢO LUẬN << << ©s<©se+sesecsses 273.1 Đánh giá lâm sàng và tỷ lệ nhiễm PCV3 của các trường hợp rối loạn sinh

SAN O 9 210ig:il 3i1s1 0.7 27

3.2 Tỷ lệ đồng nhiễm giữa PCV3 với một số mầm bệnh liên quan ở các trường

hợp rôi loạn ginh.săn:Ø các tral KHẨO BÊ sscccncinannnnnannnocammmmmanwmunn 303.3 Phân tích sự da dang gen của các chủng PCV3 thu thập từ các ca rối loạn

sinh sản ở các trại khảo sắt - 2 21112222211 111 1128211111182 1 111221 re 33KET LUẬN VÀ DE NGHỊ 5-2 << £s++eeExsererrerrxerxerrerserrsrrsrre 37TTTII TH TH Ea eeeeeeeeeeeeneessreoserroenreeonnoornosernuene 38PHU LUC 1 52

vill

DANH SÁCH CHỮ VIET TAT

aa : Acid amin

APC : Antigen presenting cell — Tế bao trình diện kháng nguyên

APPV : Atypical Porcine Pestivirus

Cap: : Capsid protein

CSFV : Classical swine fever virus — Virus dich ta heo cô điển

DNA : Deoxyribonucleic acid

dNTP : Deoxyribonucleotide triphosphate

ELISA : Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay

EMCV - Encephalomyocarditis virus — Virus viêm não viêm co tim

IFN : Interferon

IL : Interleukin

JEV : Japanese encephalitis virus — Virus viém nao Nhat Ban

mAbs : Monoclonal antibodies — Khang thé don dòng

MRD : Mild respiratory disease — R6i loan hé hap nhe

nt : Nucleotide

ORF : Open reading frame — Khung đọc mở

PAMP : Pathogen associated molecular patterns — Phân tử kiêu mẫu

PCR : Polymerase Chain Reaction

PCV1-2-3-4 : Porcine circovirus type 1-2-3-4

PCV2-LD : PCV2-lung disease — PCV2 - viêm phổi và rối loạn hô hap

PCV2-ED : PCV2-enteric disease — PCV2 - viêm ruột tiêu chảy

PCV2-PDNS_ : PCV2-porcine dermatitis and nephropathy syndrome — PCV2 - hội

chứng viêm da thận

PCV2-RD : PCV2-reproductive disease — PCV2 - rồi loạn sinh sản

PCV2-SD : PCV2-systemic disease — PCV2 - bệnh toàn thân

PCV2-SI : PCV2 subclinical infection — PCV2 - nhiễm cận lâm sang

1X

: Pseudorabies virus — Virus giả dai : Replicase protein

: Ribonucleic acid : Reverse Transcription Polymerase Chain Reaction: Severe respiratory disease — Rối loan hô hap nặng: Single-stranded DNA

: Signal transducer and activator of transcription 1, 2 : Tumor necrosis factor-alpha

: Torque teno sus virus : Microliter

Tần suất phát hiện PCV3 trên các loại mẫu khác nhau 6 các quốc gia 5

Tỷ lệ PCV3 đồng nhiễm với các các tác nhân khác - - 7Dau hiệu lâm sàng ở heo đương tính với PCV3 theo độ tuổi khác nhau 17Danh sách số lượng trại, ca bệnh và sé lượng mau khảo sat 21Cặp môi giải trình tự gen PCVV3 -2 2¿©2¿22+2E2E22E2E2E2EzEzxce 24

Danh sách chủng PCV3 tham KHẢO: scsecesscsssescsssessessssssosvevesesneseneeensass 25

Dau hiệu lâm sàng và kết qua xét nghiệm theo trai va theo ca bénh 27

Kết quả xét nghiệm theo ca bệnh và theo mẫu khảo sat 28

Tỷ lệ đồng nhiễm PCV3 và một số mầm bệnh theo trại và theo ca bệnh 30

XI

DANH SÁCH CÁC HÌNH

Hình 1.1 Sự xuất hiện trên toàn thế giới của PCV3 -¿222+22+22z22zz2zzze 3Tùrh 1,5, Eêu tru hộ ren ĐỀ eeepc dhBEE0G0100/00n0009080g0x2sg2øesrsoomend 9Hình 1.3 Giả thuyết về các cơ chế gây bệnh có thé có của nhiễm trùng PCV3 12Hình 2.1 Hình dạng, kích thước và trọng lượng của các dạng thai chết, thai khô,

010801007 20Hình 2.2 Sơ đồ bố trí nghiên cứu -2-©22222222222EE22EE22EE22EE+2EEzExrerrrrrev 23Hình 3.1 Hình ảnh sản phâm PCR dương tính PCV3 -2 2- 552525552 29Hinh 3.2 Tỷ lệ nhiễm đơn và đồng nhiễm các mầm bệnh theo các đối tượng ở

các ca rối loạn sinh sản - + 2222 SEE SE 3221221 E121212121 1112111 cre 31Hình 3.3 Cây phát sinh loài các chủng PCV3 thu thập từ khảo sát và các chủng

PXS THaffi ieee eee et et ee ee 34

xI

MỞ ĐẦU

Đặt vấn đề

PCV3 được phát hiện lần đầu tiên vào năm 2015 ở Mỹ, tại một trang trại có

lâm sảng viêm da thận (Porcine Dermatitis and Nephropathy Syndrome, PNDS) vàsảy thai trên heo nái (Palinski và ctv, 2017) Sau đó, nhiều nghiên cứu đã ghi nhậncác tình trang lâm sàng/ bệnh lý khác nhau, phố biến như rối loạn hô hap, sinh sản,tiêu hóa và thần kinh (Sirisereewan và ctv, 2022) Các khảo sát cho thấy bộ gen PCV3được phát hiện nhiễm ở nhiều đối tượng heo như heo nái, hậu bị, heo thịt và heo con,

kể cả trên các thai sảy, thai chết khô, thai chết lưu (Klaumamn và ctv, 2018)

Rối loạn sinh sản trên heo thường xảy ra do các tác nhân truyền nhiễm vàkhông truyền nhiễm, nhưng thông thường phần lớn các hội chứng rối loạn sinh sản

xảy ra trong trang trại do các bệnh truyền nhiễm gây ra; trong đó các mầm bệnh phố

biến được báo cáo là các virus như Porcine reproductive and respiratory syndromevirus (PRRSV), Classical swine fever virus (CSFV), PCV2, Porcine pseudorabies virus (PRV), Porcine parvovirus (PPV) va Japanese encephalitis virus (JEV); bén

cạnh đó, một số mầm bệnh virus mới được ghi nhận ở các nước chăn nuôi heo phát

triển trên các ca bệnh rối loạn sinh sản bất thường như PCV3, African swine fevervirus (ASFV) (King và ctv, 2003), Mycoplasma suis (M suis) (Stadler và ctv, 2019).Trong những năm gan đây, M swis hiện diện trên dan heo ở nhiều khu vực trên thế

giới, trong đó có Việt Nam Stadler (2019) đã ghi nhận tỷ lệ heo nái dương tính với

M suis lên đến 31,25% và tỷ lệ heo con so sinh trước bú dương tính với M suis là14,35% Một nghiên cứu khác ở Brazil ghi nhận có 40,7% trại nhiễm M suis với

18,7% heo nái dương tính (Bordin và ctv, 2021) Ở nước ta, theo báo cáo kỹ thuật nội

bộ của các trang trại heo ở các tỉnh thành, sự xuất hiện nhiều ca bệnh rối loạn sinhsản bất thường (tăng hơn 5% sảy thai, thai chết lưu, thai khô, heo con sơ sinh yếu,

run bâm sinh, chât lượng heo con giông kém ) chưa rõ nguyên nhân mặc dù đã có

các nỗ lực chân đoán loại trừ mầm bệnh thông thường như PRRSV, CSFV, PCV2,

PRV va PPV có kết quả âm tính ở nhiều trường hợp

Mặc dù nhiều công trình nghiên cứu về sự lưu hành và bệnh lý của PRRSV,CSFV và PCV2 đã được báo cáo ở Việt Nam, nhưng thông tin khoa học kỹ thuật về

PCV3 còn khá khiêm tốn Phạm Hồng Quân (2017) đã ghi nhận sự hiện diện của

PCV3 trên đàn heo ở miền Bắc (Việt Nam), khảo sát sự đồng nhiễm của PCV3 và

các các virus (PCV2, PPV, TTV, PRRS) cho thấy tỷ lệ nhiễm PCV3 là 4,17% và

chủng nhiễm thực địa thuộc nhóm di truyền PCV3a Năm 2019, Đỗ Tiến Duy đã công

bố sự hiện diện PCV3 cùng một số mầm bệnh khác trong các ca bệnh hô hấp phứchợp trên đàn heo ở phía Nam, với tỷ lệ tương đối thấp là 6,67% (4/60) nhưng thuộckiểu gen PCV3b Đặc trưng và sự đa dạng kiểu gen (PCV3a và b) của các chủngPCV3 thu thập từ thực địa heo thịt mắc hô hấp và heo nái sảy thai cũng được báo cáo(Nguyen và ctv, 2021); tuy nhiên, chưa có công bố khoa học chứng minh khả năng

gây bệnh của PCV3 ở đàn heo nước ta.

Chính vi thé, nghiên cứu “SỰ HIỆN DIỆN CUA PCV3 CÙNG MOT SOMAM BỆNH LIÊN QUAN TRONG CA BỆNH ROI LOẠN SINH SAN Ở CÁCTRẠI HEO” như mô tả ở trên có ý nghĩa quan trọng dé định hướng chủ động kiểmsoát và phòng tri bệnh kip thời ở các đàn heo.

Mục tiêu và yêu câu

Mục tiêu

Xác định tỷ lệ nhiễm PCV3 cùng một số mầm bệnh liên quan khác trên ca rỗi

loạn sinh sản ở các trại khảo sát.

Chương 1

TỎNG QUAN

1.1 Lịch sử phát hiện

PCV3 được phát hiện lần đầu tiên ở Bắc Carolina vào năm 2015, trên đàn heo

nái mắc hội chứng viêm da thận (Porcine dermatitis and nephropathy syndrome,

PNDS) và say thai (Palinski va ctv, 2017) Sau đó, virus cũng đã được báo cáo ở một

số quốc gia khác như Brazil (Tochetto và ctv, 2018), Anh (Collins và ctv, 2017), Đan

Mạch (Franzo và ctv, 2018), Ireland (Collins và ctv, 2017), Tây Ban Nha (Klaumann,Franzo, và ctv, 2018), Thụy Điển (Ye và ctv, 2018), Y (Faccini và ctv, 2017), Ba Lan(Stadejek và ctv, 2017), Trung Quốc (Chen và ctv, 2017), Hàn Quốc (Kwon và ctv,2017), Thái Lan (Kedkovid vả ctv, 2018) và Việt Nam (Quân và ctv, 2017) TheoChen (2021), nhiều báo cáo chỉ ra rằng nhiễm PCV3 có thé dẫn đến các thé bệnh từnhẹ đến nặng trên đàn heo, hơn nữa PCV3 ton tại ở các dạng điều kiện khác nhau vàtrên các loài thú khác nhau, bao gôm heo rừng, heo nhà và các loài thú khác.

Hình 1.1 Sự xuất hiện trên toàn thé giới của PCV3

(Turlewicz-Podbielska và ctv, 2022)

1.2 Dịch té học

1.2.1 Vật chủ

Mặc dù PCV3 được phát hiện lần đầu tiên ở Mỹ vào năm 2015, nhưng cácnghiên cứu hồi cứu đã chỉ ra rằng PCV3 có liên quan với Circovirus trên doi, vàPCV3 cũng đã được phát hiện trên các mẫu bệnh phẩm vào những năm 1950 hoặcsớm hơn Heo nhà được xem là vật chủ nhiễm tự nhiên của virus PCV3, virus còn

được tìm thấy trên một số loại thú nuôi nhà khác và các loài động vật hoang dã, baogồm gia súc, chó, chuột, sơn dương, hươu sao, heo rừng, ve và muỗi Ở thú nuôi nhà,

virus PCV3 được phát hiện trên gia súc và chó nhưng không ghi nhận được các biểuhiện lâm sàng (Kroeger và ctv, 2022) Heo rừng được xem là một nguồn truyền lâymầm bệnh quan trọng, một sé nghiên cứu cho thấy tỉ lệ lưu hành virus PCV3 trênquan thé heo rừng cao hơn so với heo nhà (Franzo và ctv, 2018; Klaumann và ctv,2018; Dei Giudici va ctv, 2020) Các kết quả nghiên cứu phát hiện virus trên heo nhà,

gia súc, chuột, ve, heo rừng và thú hoang dã khác đã cho thấy PCV3 có khả năng

truyền lây chéo giữa các loài và phạm vi lây truyền rộng trong tự nhiên; động vậthoang dã có thé trở thành nguồn lây lan mầm bệnh tiềm ấn, có nguy cơ gây ảnh hưởng

đến nền công nghiệp chăn nuôi heo (Ouyang và ctv, 2019)

1.2.2 Vòng truyền lây

Nhiều nghiên cứu trước đây đã ghi nhận PCV3 được phát hiện ở hầu hết các

loại mô cơ quan và dịch, bao gồm tim, gan, lách, phối, thận, não, hạch bạch huyết,

hạch amidal, huyết thanh, phân và dịch nước bọt; trong đó, nồng độ virus trong mô

tim, phổi và hạch bạch huyết cao hon so với các mô cơ quan khác (Jiang va ctv, 2019;

Ouyang và ctv, 2019; Wang va ctv, 2021; Wozniak va ctv, 2020) Theo khảo sát củaWozniak (2020), ty lệ dương tính PCV3 trong mẫu nước bot (37,3%) cao hơn khi sosánh đồng thời với mẫu huyết thanh (9,7%) hay mẫu phân (15,0%) với hàm lượngvirus từ 10? đến 107? bản sao/ml Hau hết các thú bị nhiễm virus PCV3 gồm cả heonhà và các loại vật nuôi khác đều có biểu hiện nhẹ hoặc không có triệu chứng, đây cóthể thành nguồn lây hoặc vật chủ trung gian truyền lây mầm bệnh (Chen và ctv, 2021)

PCV3 cũng được phát hiện trên heo nái đẻ và mẫu sữa non (44,77% mẫu sữanon dương tính PCV3) Theo Kedkovid (2018) sự hiện diện của virus trong mẫu sữa

non có thé liên quan đến sự hiện diện của PCV3 trong mẫu huyết thanh của heo nai,

vì những con nái có nồng độ virus huyết cao có tỷ lệ mẫu sữa non dương tính vớiPCV3 cao hơn đáng ké (100%) và nồng độ PCV3 dao động từ 10*°! đến 10733 bản

sao/ml Một nghiên cứu khác của Vargas-Bermúdez (2021) ghi nhận sự hiện diện của

PCV3 trong mẫu nhau thai của heo nai hậu bị và heo con của những con nai nay,nồng độ virus huyết trên mẫu heo con theo mẹ giảm dan từ 10° xuống còn 10° trongvòng 6 tuần; PCV3 còn được phát hiện trong mau tinh dịch (8,5%), mẫu nước bot(56,9%) va mẫu phôi thai (57,1%) (Ku va ctv, 2017; Wang va ctv, 2020; Vargas-Bermudez, 2021) Kết quả này chi ra rang PCV3 có thể truyền ngang giữa các vậtchủ hay trung gian khác nhau và có thé truyền dọc qua tinh dịch, nhau thai và sữađầu Tỷ lệ phát hiện dương tính PCV3 ở các loại mẫu khác nhau được tổng hợp trongBang 1.1.

Bảng 1.1 Tan suất phát hiện PCV3 trên các loại mẫu khác nhau ở các quốc gia

4 44.74 Thái Lan Sữa non 17 38 Kedkovid và ctv, 2018

$ 4a? MHuỢmỂu Pein 159 360 Kwon va ctv,2017

Thai Lan

My Trung Quốc

Ba Lan Thụy Điền Hàn Quốc

Ireland

Trung Quéc

Ba Lan Tay Ban Nha

Trung Quốc

Tây Ban Nha

Ba Lan Nhật Bản

Hàn Quốc Trung Quốc

Mô, thai, tinh dịch và huyết thanh

Huyết thanh

Mô Huyết thanh

37

52

84

217 14

40

75 141

1451 73

296 200

Zhai, 2017

Wozniak va ctv, 2020

Franzo va ctv, 2018

Zhao va ctv, 2018 Klaumann va ctv, 2018

Wozniak va ctv, 2020

Hayashi va ctv, 2018 Kim va ctv, 2018

Sun va ctv, 2018

(Klaumann va ctv, 2018)

1.2.3 Đồng nhiễm

Sự kết hợp nhiều mầm bệnh hoặc đồng nhiễm các tác nhân gây bệnh khácnhau thường xảy ra phô biến trong trang trại, và yêu tô này làm cho diễn biến bệnhtrong trang trại trở nên phức tạp hơn Các nghiên cứu trước đây ghi nhận sự đồng

nhiễm của PCV3 và các mầm bệnh như PRRSV, PCV2, CSFV, TTSuV,

Actinobacillus pleuropneumonia (APP), Pasteurella multocida (P multocida), trong

các ca rối loạn hô hap Ngoài ra, có nhiều nghiên cứu ghi nhận các ca bệnh đồng

nhiễm của PCV3 và các mầm bệnh khác như PRV, PPV (Kroeger và ctv, 2022).Khảo sát về tỷ lệ đồng nhiễm của PCV3 và một số mầm bệnh khác được trình bày ởBảng 1.2.

Bảng 1.2 Tỷ lệ PCV3 đồng nhiễm với các các tác nhân khác

Tác nhân Tỉ lệ đồng nhiễm (%) Tham khảo

PCV2 — PCV3 39/198 (19,7%) Xu, 2021

33/205 (16,1%) Wang va ctv, 2020 13/46 (28,3%) Kim va ctv, 2017 PRRSV 1/8 (12,5%) Kedkovid va ctv, 2018

25/57 (43,86%) Kim va ctv, 2018 CSFV — PCV3 108/200 (54%) Sun va ctv, 2018

Virus teno sus Torque 66/132 (50%) Sun va ctv, 2018

(Klaumann và cv, 2018)1.3 Cấu trúc gen

PCV3 có kích thước khoảng 2000 nucleotide (nt), PCV3 có ba khung đọc mở

chính bao gồm ORF1 đài 891 nt nằm trên chuỗi dương, mã hoá cho protein Rep

(replicase protein) chứa 297 aa, ORF2 dài 645 nt nằm trên chuỗi bổ sung mã hoá cho

capsid protein (Cap) chứa 214 aa, và ORF3 mã hoá cho một protein giả định chứa

231 aa với chức năng chưa được làm rõ Trong khi PCVI và PCV2 có gần 80% độ

tương đồng, PCV3 có ít nucleotide tương đồng với các thành viên khác trong họ PCV,lần lượt là 45,5%, 46,8% và 43,2% với PCV1, PCV2 và PCV4 Ngoài ra, tỷ lệ tương

đồng acid amin tương đồng của protein Cap của PCV3 lần lượt là 24%, 26 — 36% và24,5% đôi với PCV1, PCV2 và PCV4 Protein Rep-PCV3 chứa 3 motifs PCR FTINN,HLQG và YCKK ORF2 của PCV3 có hướng mã hóa protein ngược lại so với ORF 1(Fux, 2018), tương đồng 97,36 — 98,91% va 97,20 — 98,60% nucleotide và acid amin

so với các genome tham chiếu Việc thay thế codon mở đầu TCG ở ORF3 ở vị trí

1900 — 1902 cho kết quả mã hóa protein với 231 aa (ORF3231), trong khi codonmethionine (ATG) ở vị trí nu 62 — 64 cho chuỗi acid amin với kích thước 177 aa(ORF3177) (Phan va ctv, 2016; Palinski va ctv, 2017; Fux, 2018) PCV3 duoc chiathành 3 serotype PCV3a, PCV3b, PCV3c, trong đó, PCV3a có thé duoc chia thanh 2

nhóm phụ độc lập (PCV3a-1 va PCV3a-2) và một nhóm trung gian (PCV3a-IM), dựa

trên trình tự mã hóa hoàn chỉnh (ORF1 + ORF2) (Deng va ctv, 2018; Fu và ctv, 2018;

Qi và ctv, 2019) Việc phân nhóm PCV3a, PCV3b, PCV3c được dựa trên chiều đàigenome và sự đột biến 2 acid amin (A24V và R27K) trên protein Cap PCV3 So sánhtrình tự cho thay các đột biến của PCV3 chủ yêu nằm ở protein Cap, đặc biệt là ở các

vị trí 8-10, 24, 27, 77, 137 và 150 Các kết quả này chỉ ra rằng PCV3 tương đối ôn

định về mặt di truyền và không có mối liên hệ nguồn gốc địa lý giữa các chủng virus

(Deng va ctv, 2018; Qi va ctv, 2019).

===: ORF1 — mã hoá cho protein Rep

=) - ORF2 — mã hoá cho protein Cap

==: ORF 3 — mã hoá cho một protein giả định với chức năng chưa được làm

ro

Bộ gen PCV3 là bộ gen DNA tròn sợi đơn 2000 nt chứa ba ORF được dự đoán khác

với bộ gen của PCV1 và PCV2 Vòng lặp gốc của PCV3 chứa một chuỗi bao ton

(TAGTATTAC) nằm trong vùng liên gen 235-nt 5' giữa ORF1 và ORF2, đóng vaitrò là nguồn gốc của sự sao chép (ori) trong quá trình sao chép vòng tròn lăn (RCR).Một codon bắt đầu GTC nằm ở đầu 5 'của gen Rep và gen Rep chứa ba mô típ RCR,FTINN, HLQG và YCKK

1.4 Miễn dịch

Đáp ứng miễn dịch bẩm sinh được biết đến là hàng rào đầu tiên đáp ứng chốnglại sự xâm nhiễm của virus Trong quá trình xâm nhập bởi virus (invasion), thụ thểnhận diện kiểu loại (Pattern Recognition receptor — PRRs) nhận diện các phân tử kiểumẫu (PAMP — Pathogens associated molecular patterns) chang hạn như DNA/RNA

của virus và sản xuất các interferon (IFN) Ngoài tình trạng viêm da hệ thông, nhiễm

virus huyết, phản ứng IgG và sự phát triển của virus kéo dai ở động vật nhiễm PCV3(Temeeyasen và ctv, 2020) Ở nghiên cứu của Shen (2020), con đường tín hiệu của

IFN-1 là con đường tín hiệu quan trọng cho việc chống lại sự xâm nhập của virus;

nghiên cứu này đã chứng minh được Protein Capsid PCV3 (Cap) ức chế yêu tố đápứng điều hòa tín hiệu IFN-1 Tuy nhiên protein Cap không ảnh hưởng đến mức độbiểu hiện và phosphoryl hóa của STAT1 và STAT2 và không làm gián đoạn đến quátrình di hóa của pSTAT1 và pSTAT2 Ngoài ra nghiên cứu cũng cho thấy sự ức chếhoạt hóa promoter cảm ứng bởi IRF9 — S2C, protein Cap liên kết với ISRE và ngănchặn liên kết của IRF9 — S2C Hơn nữa, kết quả in vitro đã chứng minh rang protein

PCV3 Cap có thé kích hoạt các cytokine tiền viêm IL6 và tín hiệu TNFa và NF-«B

thông qua các thụ thé RIG-like hoặc TLRs (Liu và ctv, 2021) Đánh giá đáp ứng miễndich bam sinh trong các mô hình in vivo đã chứng minh rằng nhiễm PCV3 có tác

dụng điều tiết đối với IL-8, tương tự như nhiễm PCV2 Tuy nhiên, IL-10 và hầu hếtcác cytokine tiền viêm - bao gồm TNF-a, IL-1B, IL-2 va IL-4 rat cần thiết trong sinh

bệnh học của PCV2 dường như không bị ảnh hưởng trong quá trình nhiễm PCV3trong thí nghiệm in vivo (Temeeyasen và va ctv, 2020) Protein Cap của virus ức chế

đáng kế hoạt động của các yếu tố đáp ứng do IFN-B (ISRE) kích thích bằng cách

tương tác với các vùng chuyên đổi tín hiệu và yếu tố hoạt hoá phiên mã (STAT2)(Yue và ctv, 2021) Zhang (2020) phát hiện protein Cap PCV3 cũng có thể tương tácvới protein liên kết 1 (miền SH3), protein hoạt hóa GTPase (G3BP1), do đó ngăn cản

sự liên kết chuỗi tổng hợp GMP-AMP (cGAMP) (cGAS) và DNA kích thíchinterferon (ISD) dẫn đến cảm ứng interferon loại 1 (IFN1) bi ức ché Theo nghiéncứu của Jiang (2020), mức độ cytokine tiền viêm va chemokine ở heo con bi nhiễm

10

PCV3 đã tăng lên đáng ké bao gồm interleukin IL-1B, IL-6, IL-23a, Interferon gamma

(IFN-y), yếu tổ hoại tử khối u — alpha (Tumor necrosis factor-alpha: TNF-a), và

chemokine ligand 5 (CCL5) Do đó, một số báo cáo cho rằng PCV3 ức chế tín hiệu

IFN và kích hoạt tín hiệu NF-KB dé điều chỉnh khả năng miễn dich bam sinh của vậtchủ và phản ứng viêm Từ đó cơ chế sinh bệnh chính xác của PCV3, cũng như khảnăng có thể gây ức chế miễn dịch có thể được nghiên cứu thêm (Turlewicz-Podbielska

và ctv, 2022).

1.5 Sinh bệnh học của một số bệnh liên quan đến PCV3

Nhiễm virus có thé gây viêm và ton thương mô thông qua các cơ chế khácnhau Có ít nhất 3 cơ chế chính đã được xác định, bao gồm (1) gây ra bởi virus, ví dụ:

chết tế bào theo chương trình (apoptosis); (2) phan ứng miễn dịch trung gian tế bào,

ví dụ, hệ thống miễn dịch phản ứng để loại bỏ các tế bào bị nhiễm bệnh; và (3) cơchế qua trung gian phức hợp miễn dịch, ví du: quá man loại 3 Viêm và tôn thương

mô sau nhiễm PCV3 có thé là do các cơ chế này (Hình 1.3)

Theo Sirisereewan (2022), quá trình nhân lên và gây viêm do nhiễm PCV3 khi

thực hiện in vitro và in vivo đều giống nhau ở các mô cơ quan, các phản ứng viêm dovirus, phản ứng miễn dịch qua trung gian tế bao hay ton thương mô đều có thé xuấthiện Tuy nhiên, trong một số trường hợp, không phát hiện thấy virus trong các mô

ton thương Vi vậy, cơ chế sinh bệnh trong các ca nhiễm PCV3 van cần được nghiên

cứu thêm.

11

1 Viêm mạch nguyên phát?

+ Sự sao chép của PCV3 bên trong tế bào nội mô

và mô cơ trơn của động mạch ở nhiều cơ quan

1 Kích thích quá trình apotosis nội mô

2 Gia tăng các tế bào gây viêm dẫn đến tổn

thương mạch máu.

3 Đáp ứng miễn dịch qua trung gian tế bào thông

qua phản ứng quá mẫn loại IV bằng cách gia

tăng các tế bào miễn dịch tiết ra các cytokine

tiền viêm, dẫn đến viêm mạch và tổn thương mô

2 Viêm mạch thứ phát?

+ Lắng đọng phức hợp miễn dịch ở thành mạch

dẫn đến phản ứng quá mẫn loại III

1 Các rồi loạn hô hap liên

quan đến điều hoà cytokine?

+ Kéo dài các cytokine và

chemokine (e.g TNF-a, IL-1/Ø,

IFN-y, IL-6, and CCL-5)

* Kích hoạt các phản ứng miễn

dịch

+ Phá hủy mô phổi

1 Tiêu chảy do virus?

+ PCV3 nhiễm vào các tế bào biểu mô ruột,

các tế bào gây viêm tập trung ở lớp đệm

niêm mạc và mảng Peyer

+ _ Thoái hoá và hoại tử biểu mô

+ _ Rối loạn chức năng ruột non dẫn đến tiêu

PCV3 gây tiêu chảy

Viêm cơ tim 'Viêm mạch và viêm quanh mach

as mau

+ Sw sao chép của PCV3 ở tế bào cơ tim và các tế bào nội

mô của động mạch tim Kích thích phản ứng apoptosis

2 Viêm cơ tim do đáp ứng miễn dịch qua trung gian tế bào? + Tăng tiết các cytokine va chemokine tiền viêm (Ví dụ: TNF-

a, IL-1/, IFN-y, IL-6, and CCL-5)

+ Tập trung các tế bào gây viêm và tế bào miễn dich tai vị trí

ee sinh dục

PCV3 gây sảy thai

1 Say thai gây ra bởi thú mẹ?

* PCV3 nhiễm vào tế bào nguyên bào nuôi,

2 PCV3 gây rồi loạn hệ vi sinh đường ruột?

* _ Tăng nhiễm trùng cơ hội

dịch?

Gây viêm mạch dưới da và hoại tử biểu bì

2 Tăng tiết các cytokine tiền viêm?

Liên quan đến viêm mạch thứ phát gây ra các tổn

thương da

1 Phản ứng quá mẫn loại Ill với các phức hợp miễn

nhau thai, dây rốn + Nhau thai rối loạn chức năng và bị tach rời, dẫn đến sảy thai

2 Say thai gây ra bởi phôi thai?

+ Virus tắn công trực tiếp vào các bào thai, đặc biệt là tim và tế bào nội mô + _ Chết thai, dẫn đến say thai

Hình 1.3 Giả thuyết về các cơ chế gây bệnh có thé có của nhiễm trùng PCV3

Viêm da hệ thong và các phan ứng miê

liên quan đên viêm quanh mạch bạch huyệt ở các co quan, viêm cơ tim, viêm mang

não bạch cầu lympho và hoặc PDNS (Temeeyasen và ctv, 2020; Mora-Diaz và ctv,

2020; Alomar và ctv, 2021) Trong các nghiên cứu khảo sát in vivo hay in vitro, đều

ghi nhận được các bệnh tích phô biên như viêm cơ tim, viêm thận và viêm mạch;

ngoài ra, các tốn thương này còn được phát hiện thây ở các ca nhiễm thể cận lâmsang Phan ứng viêm cơ tim, viêm thận và viêm mạch có thê xảy ra thông qua các cơ chê do virus hoặc do phản ứng miền dich qua trung gian, vì sự hiện diện và/hoặc sao

chép PCV3 đã được quan sát thấy trong các mô này (Sirisereewan và ctv, 2022)

12

Ở thận, kháng nguyên PCV3 hoặc sự sao chép virus được tìm thấy trong kẽthận, tế bào biểu mô ống thận, tế bào nội mô, cơ trơn của động mạch thận; thấm nhiễm

các tế bao viêm với sự xuất hiện của viêm cau thận kẽ và/ hoặc viêm thận kẽ (Arruda

và ctv, 2019; Jiang va ctv, 2019; Mora-Diaz va ctv, 2020) Viêm mạch trên heo nhiễm

PCV3 xảy ra từ viêm quanh mạch tại chỗ đến viêm hệ thống: viêm mạch đã được tìm

thay ở tim, thận và ruột ở những con heo gây bệnh thí nghiệm (Temeeyasen va ctv,

2020; Mora-Díaz và ctv, 2020) Phân tích Reactome pathway đã chỉ ra rằng sau khinhiễm PCV3, các protein liên quan đến sự bám dính và liên kết tế bào đã được biểuhiện Hơn nữa, việc điều hòa các cytokine tiền viêm (ví dụ: TNF-a, IL-1, IL-6 và

IFN-y) trong huyết thanh cũng được quan sát thay ở heo nhiễm PCV3 (Jiang va ctv,2019) Do đó, phản ứng miễn dịch của vật chủ chống lại nhiễm PCV3 cũng có thể là

nguyên nhân gây ra các ton thương quan sát được

Cùng với tình trạng viêm, apoptosis do PCV3 gây ra cũng có thé là nguyênnhân gây ton thương các mô tim, thận và mach máu ở heo bi nhiễm bệnh ProteinORF3 thuộc họ Circoviridae cũng có thé gây ra apoptosis, tuy nhiên, các chức năng

của protein ORF3 chưa được mô tả đầy đủ Viêm cầu thận do phức hợp miễn dịch đã

được báo cáo trong các bệnh nhiễm virus heo khác bao gồm virus Dịch tả heo cô điển(CSFV) và PCV2 Phát hiện các phức hợp miễn dịch trong cầu thận đối với heo bị

nhiễm CSFV hoặc PCV2 cho thấy sự tích tụ IgG, IgM và các yếu tố bồ thé (C1q hoặc

C3), nhưng không có kháng nguyên virus Tuy nhiên, cơ chế gây viêm cầu thận dolắng đọng phức hợp miễn dịch trên heo nhiễm PCV3 vẫn chưa được làm rõ(Sirisereewan va ctv, 2022).

Hội chứng viêm da thận (PDNS), gây ra bởi phan ứng quá man loại III, được

xác định do viêm mạch hệ thống với tính hướng mô da và thận đặc trưng Viêm mạch

hệ thống với hoại tử đa và biéu bì; hoại tử và viêm cầu thận xơ hóa là những ton

thuong dac trung cua PDNS (Wellenberg va ctv, 2004; Opriessnig va ctv, 2007) Hién

tai, thé bệnh PDNS có thé được cho là dang bệnh nặng nhất sau khi nhiễm PCV3 ở

cả trong in vitro và in vivo (Jiang và ctv, 2019; Bera va ctv, 2020; Jiang va ctv, 2020).

13

Tuy nhiên, sự phát triển của bệnh vẫn chưa được làm sáng tỏ rõ ràng Trong mộtnghiên cứu trước đây, đã ghi nhận sự điều hòa các cytokine và chemokine tiền viêm,chang hạn như TNF-a, IL-1, IFN-y, IL-6 và CCL-5 Tuy nhiên, sự lắng đọng phứchợp miễn dịch không được đo lường trong nghiên cứu đó Ngược lại, kết quả của mộtnghiên cứu gây nhiễm PCV3 khác ghi nhận nhiễm trùng thé cận lâm sàng, trong đó

heo nhiễm PCV3 có mức cytokine tiền viêm trung bình hoặc thấp hơn mức giới hạn

Tham nhiễm bạch cau ái toan đã được tìm thay ở các hạch bạch huyết khí quan, màng

treo ruột và hạch ben của heo cho thấy các thé bệnh PDNS sau khi gây nhiễm PCV3

(Sirisereewan va ctv, 2022).

Rỗi loan hô hap, rỗi loạn tiêu hoá

Theo các nghiên cứu trước đây, nhiễm PCV3 có liên quan chặt chẽ với cácbệnh rồi loạn đường hô hap và tiêu hoá, những dau hiệu lâm sàng phô biến trên heo,

đặc biệt trên nhóm heo cai sữa (Palinski va ctv, 2017; Zhai, 2017; Qi và ctv, 2019).

Zhai va ctv đã chỉ ra rằng ty lệ đương tính PCV3 trên nhóm heo cai sữa với triệu

chứng rối loạn hô hấp nặng (SRD - severe respiratory disease) đặc biệt cao hơn(63,75% - 51/80) so với nhóm heo cai sữa mắc rỗi loạn hô hấp nhẹ (MRD — mildrespiratory disease) (13,14% - 23/175) và nhóm không có triệu chứng (1,85% -4/216) Đồng thời, tỷ lệ đương tính PCV3 trên nhóm heo cai sữa tiêu chảy cao hơn

rõ rệt (17,14%, 6/35) so với nhóm cai sữa không tiêu chảy (2,86%, 1/35) (Zhai va

ctv, 2017) Theo một khảo sát của Qi va ctv, tỷ lệ dương tính PCV3 trên nhóm heo

mắc các bệnh tiêu hoá và hô hap lần lượt là 10,4% (50/480) và 26,6% (25/94) Thêm

vào đó, khi so sánh với nhóm heo không có lâm sàng, vẫn phát hiện thấy virus trên

những con heo cai sữa và heo choai không có triệu chứng (Zhai và ctv, 2017)

Trong một nghiên cứu của Jiang (2019) trên những con heo được gây nhiễm,

có xuất hiện các dấu hiệu lâm sàng khác nhau như ho, hắt hơi và suy hô hấp, đồngthời phát hiện sự hiện diện của kháng nguyên PCV3 trong mô phổi Tuy nhiên, nhómtác giả cũng đã chỉ ra rằng các tốn thương không chỉ giới hạn ở đường hô hấp, cáctốn thương nghiêm trọng của PDNS đã được quan sát thấy, bệnh tích xuất hiện ở

14

nhiều mô cơ quan khác nhau Đánh giá mô bệnh học cho thấy viêm phế quản phôi

nội mô và bạch cầu lympho, tăng tập trung bạch cầu trung tính cũng được quan sát

thấy (Jiang va ctv, 2019) Trên thực tế, heo chỉ biểu hiện triệu chứng cận lâm sảng

Hiện tại, các yếu tố liên quan đến tính hướng mô phổi của PCV3 và cơ chế sinh bệnhtrên đường hô hấp vẫn chưa được biết đến Đánh giá mô bệnh học trên đường tiêu

hoá ở những con heo có các triệu chứng rối loạn tiêu hoá phát hiện teo nhung mao và

khe ruột, và thay đôi hệ vi sinh vật đường ruột Zhang và ctv đã phát hiện ra rằng

27,28% và 14,29% heo con bú sữa mẹ và cai sữa dương tính với PCV3 có liên quan

đến tiêu chảy Các nhung mao trên đoạn ruột non bị teo từ mức độ trung bình đếnnghiêm trọng, chiều cao trung bình của nhung mao và độ sâu của khe ruột giảm đángkể

Rỗi loạn sinh sản

Mặc dù rối loạn sinh sản do PCV3 chưa được nghiên cứu trên các thí nghiệmgây nhiễm thực nghiệm, tuy nhiên theo các báo cáo từ các ca bệnh thực địa đã phát

hiện PCV3 từ mẫu huyết thanh hay mẫu mô của heo con chết lưu, thai khô, màng nhau thai, mẫu sữa đầu thu từ những con heo hậu bị và heo nái đẻ; mẫu huyết thanh

của heo con trước khi bú sữa đầu, điều này cho thấy PCV3 có liên quan đến các rối

loạn sinh san (Dal Santo va ctv, 2020; Mora-Diaz và ctv, 2020; Saporiti va ctv, 2020;

Saporiti va ctv, 2021; Vargas-Bermúdez, 2021) Nhiều báo cáo khảo sát từ các quốcgia đã chi ra tỷ lệ nhiễm PCV3 trên những con nai có lâm sàng rối loạn sinh sản cao

hơn so với những con nái khoẻ mạnh, đồng thời, PCV3 còn được phát hiện trên các

mẫu thai khô (270 trong 276 mẫu thai khô) (Dal Santo và ctv, 2020); ngoài ra, trongcác ca rồi loạn sinh sản mãn tính PCV3 đồng nhiễm với các mầm bệnh gây rối loạnsinh sản khác như PPV, PCV2, Leptospira Đồng nhiễm PCV3 với các mầm bệnhkhác cũng có thể dẫn đến suy sinh sản hoặc thậm chí làm tăng mức độ nghiêm trọngcủa bệnh (Dal Santo và ctv, 2020; Mai và ctv, 2021; Serena và ctv, 2021) Saporiti

và ctv đã đánh giá tỷ lệ dương tính PCV3 dựa trên lứa tuôi heo nai và phôi thai của

chúng, PCV3 được phát hiện trên mẫu huyết thanh thu từ nái đẻ lứa 1 (33,3%) và âm

tính trên mẫu huyết thanh của nai đẻ nhiều lứa Đồng thời, 86 trong tông số 255 mau

l5

phôi thai thu được dương tính với PCV3, tỷ lệ phát hiện dương tính PCV3 trên mẫuphôi thai của những con nái lứa 1 cao hơn rõ rệt so với mẫu phôi thai của nái đẻ nhiều

lứa (Saporiti và ctv, 2020).

Hiện nay, nhiễm trùng phôi thai được cho là cơ chế chính làm cơ sở cho rối

loạn sinh sản do PCV3 gây ra Hơn nữa, khả năng truyền dọc qua phôi thai có thể

được đánh giá dé dùng làm cơ sở chứng minh cho PCV3 gây rối loạn sinh sản, bởi

nồng độ virus ở mức cao và các thay đôi bệnh lý ở nhiều mô cơ quan trên thai sayhoặc thai chết lưu Nguyên nhân gây rối loạn sinh sản có thê được chia thành nguyên

nhân do mẹ và sảy thai đo phôi thai Nồng độ PCV3 cao ở thai sảy (Bera và ctv, 2020)

và sự nhân lên của PCV3 được quan sát thấy ở tim, nhau thai và tế bào nội mô củathai có thể được xác nhận bằng phương pháp lai tại chỗ (ISH) (Arruda và ctv, 2019),

điều này có thể chỉ ra rằng PCV3 có thể ảnh hưởng trực tiếp đến phôi thai Thai khô

có nhiều kích thước khác nhau đã được quan sát, cho thấy sự lây truyền giữa các bàothai Sự nhân lên của PCV3 trong tim, nhau thai và tế bào nội mô của bào thai có thể

là nguyên nhân gây ra sự lây lan virus đến các cơ quan khác dẫn đến tôn thương vi

mô và gây chết thai

1.6 Dấu hiệu lâm sàng

PCV3 được phát hiện lần đầu trên những con nái có bệnh tích trên da giống

thể viêm da thận — PDNS, tăng tỷ lệ chết trên heo nái, rối loạn sinh sản bao gồm: sảy

thai, tăng tỷ lệ thai khô và heo chết lưu, giảm tỷ lệ đậu thai (Palinski và ctv, 2017).Ngoài ra, PCV3 được phát hiện trên những cá thé heo bệnh có các triệu chứng lâmsàng khác nhau như: rối loạn tiêu hoá, hô hấp phức hợp (PRDC), rối loạn thần kinh,

viêm đa hệ thống (Kroeger và ctv, 2022) Các triệu chứng lâm sàng của các trường

hợp dương tính với PCV3 được tông hợp ở Bảng 1.3

16

Bảng 1.3 Dấu hiệu lâm sàng ở heo dương tính với PCV3 theo độ tuổi khác nhau

Rốiloạn Độ tuổi Dấu hiệu lâm sàng Tham khảo

Sinhsản Heonái e Tăng tỉ lệ chết của heo nai; Faccini va ctv, 2017

giảm tỉ lệ thụ thai; thai chết Ku và ctv, 2017

e Thay sảy, thai chết lưu Palinski va ctv, 2017

HO hap Heo cho e Khó thở Phan va ctv, 2016

con ĐÚ s Chan ăn, sốt, vàng da, thở Shen va ctv, 2018

sữa

Bệnh hệ Heocal se Sut cân Stadejek và ctv, 2017thống sữa e PFTS (Periweaning failure-to- Franzo va ctv, 2018

thrive syndrome)Than kinh Heocho e Dấu hiệu thần kinh Phan và ctv, 2016

conbÚ s Run bẩm sinh Chen và ctv, 2017

Chương 2

NOI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU

2.1 Thời gian, địa điểm và đối tượng nghiên cứu

Ca bệnh rối loạn sinh sản và một số mầm bệnh liên quan

2.2 Nội dung nghiên cứu

- _ Đánh giá lâm sang và tỷ lệ nhiễm PCV3 của các trường hợp rối loạn sinh sản

ở các trại khảo sát

- Xac định tỷ lệ đồng nhiễm giữa PCV3 với một số mầm bệnh liên quan ở cáctrường hợp rôi loạn sinh sản ở các trại khảo sát

- Phan tích sự da dạng di truyén dựa trên trình tự toàn bộ bộ gen của các chủng

PCV3 thu thập từ các ca rối loạn sinh sản ở các trại khảo sát

2.3 Vật liệu, hóa chất

2.3.1 Thiết bị và dụng cụ

Dụng cụ lay mẫu: Găng tay, kéo, dao và cán dao dùng dé mô khám, túi zip, đá

18

khô, thùng xốp, xylanh, lọ formalin 10%.

Dụng cụ PCR: Micropipet (các loại gồm 10ul, 10041, 10001), các loại dau tip

(gồm 10ul, 10041, 100041), eppendorf (1,5ml), cối, chày, nhíp, kéo cắt mô Máy lytâm, máy vortex, lò vi sóng, máy luân nhiệt PCR, máy điện di, buồng chiếu tia UV,máy realtime — PCR, tủ cấy vô trùng, tủ lạnh, khuôn đồ gel, autoclave, máy ủ nhiệt

độ.

2.3.2 Hóa chất sử dụng

Quy trình tách chiết DNA/RNA được thực hiện theo hướng dẫn của bộ kitthương mại (GeneJET Genomic DNA/RNA Purification của Thermo Scientific,Lithuania) bao gom Lysis solution, Wash Buffer 1, Wash Buffer 2, Eluent, Proteinase

K, Carrier RNA San pham RNA sau khi tach chiét sé chuyén sang cDNA theo quytrình bộ kit RevertAid First Strand cDNA Synthesis (Thermo Scientific, Lithuania) cho các phan ứng RT-PCR.

Hoá chất sử dụng cho phan ứng PCR: Green master mix 2X, nước khử ion,MgCh Hoá chất dùng trong điện di: agarose, TBE 1X (Tris borate EDTA, pH = 8,3),nước cất hai lần, thang chuẩn cho điện di 1000 bp, thuốc nhuộm gelred

2.4 Phương pháp nghiên cứu

2.4.1 Bố trí nghiên cứu

Trại khảo sát

Các trang trại được đưa vào nghiên cứu này khi có xuất hiện các ca bệnh lâmsảng rối loạn sinh sản dựa theo biểu hiện sảy thai, thai khô, thai chết lưu, heo con sơ

sinh yếu chết sau sinh Các dấu hiệu lâm sảng được ghi nhận theo số nái có biểu hiện

lâm sàng trên tổng đàn nái sinh sản hiện diện trong trại Heo nái ở các trại khảo sát

đã được tiêm vắc-xin phòng bệnh PRRSV, CSFV, PPV, PRV, FMD, PCV2 Ở mỗiheo nái chọn khảo sát, mẫu được thu thập trên cả cá thê nái (máu kháng đông) và thaichêt hoặc con của chúng (mô cơ quan).

19

Theo William (1992), các dạng thai chết lưu và thai khô được phân loại như

sau:

Thai chết: là thai được sinh ra đã chết nhưng hoàn toàn bình thường khi sinh.Phối của heo con chết không phông lên (phôi của chúng không nổi khi được đặt trongnước) Các loại thai chết khác nhau được xác định khi heo con chết trước khi đẻ hoặc

chết trong quá trình đẻ

Thai khô: là những bào thai đã chết trong tử cung và đã bắt đầu phân hủy Thai

chết sau 35 ngày mang thai trải qua quá trình tự phân giải Khi đó, phôi thai bắt đầu

thoái hoá, tích dịch, và thai bắt đầu sưng và phù Dịch lỏng được tử cung hấp thụ, chỉ

dé lại phần còn lại của thai bị mat nước, không thé hap thụ Ngoài ra, thai khô mat

nước bị teo lại, thường có màu nâu, xám hoặc đen.

20

Thu thập mẫu

Theo dõi, ghi nhận các dấu hiệu lâm sảng và thu thập mẫu từ các ca bệnh cóliên quan đến rối loạn sinh sản trên heo nái ở trại khảo sát (số heo con dé ra trên 6,sảy thai, thai khô, heo con sơ sinh yếu chết sau sinh ), ngoài ra theo dõi heo con củanhững con nai có lâm sàng rối loạn sinh sản có các biểu hiện bat thường hay không(còi cọc, viêm da, run bam sinh, chét ).

Mẫu khảo sát được thu thập ở những con heo nái có lâm sàng rồi loan sinh sản

và heo con của chúng Trên heo nai, lay 3 — 5 ml máu ở tĩnh mạch chủ trước cho vàoống kháng đông, đậy kín nắp, nhẹ nhàng đảo đều ống, ký hiệu mẫu theo thẻ tai heonái Trên thai sảy, thai khô và heo con sơ sinh yêu chết sau sinh thu thập mẫu mô cơ

quan, các loại mô cơ quan được thu thập bao gồm: phối, tim, gan, lách, thận, hạch

bẹn; các mô cơ quan của từng mẫu thai sảy/heo con chết được thu thập (tối đa 5g/

loại mô cơ quan) và bảo quản riêng từng túi, đánh mã số mẫu dựa trên “thé tai nái —loại heo lay mẫu ” Mau máu kháng đông và mẫu mô cơ quan sau khi thu thập sẽ được

bảo quản lạnh và chuyền về Phòng Thí Nghiệm

Bảng 2.1 Danh sách số lượng trại, ca bệnh và sé lượng mau khảo sát

: Loại heo

Trại Tong “ Heo con chết

l đàn bệnh Heonái Thai chết Thai khô