Phân lập và khảo sát hoạt tính sinh học của cao chiết methanol từ nấm cộng sinh Địa y graphis cf persicina Được nuôi Ở môi trường khác nhau

Tuy nhiên, những hợp chất này có thể mang lại những tác dụng không mong muỗn và có ý kiến cho rằng những hợp ch éu này có Khả năng gây ung thư và có thể gây đột biển cho người sử dụng n

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO

TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM THÀNH PHÓ HỖ CHÍ MINH KHOA SINH HỌC

wiles

PHAM TRUONG PHU VAN TAL

PHÂN LẬP VÀ KHẢO SÁT HOẠT TÍNH SINH HỌC CUA CAO CHIET METHANOL TU NAM CỘNG SINH DIA Y Graphis ef persicina DUQC NUOL

Ở MÔI TRƯỜNG KHÁC NHAU

KHÓA LUẬN TÓT NGHIỆP ĐẠI HỌC NGÀNH SƯ PHẠM SINH HỌC

TP HÒ CHÍ MINH - 2024

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO

TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM THÀNH PHÓ HỖ CHÍ MINH KHOA SINH HỌC

wiles

PHAM TRUONG PHU VAN TAL

PHÂN LẬP VÀ KHẢO SÁT HOẠT TÍNH SINH HỌC CUA CAO CHIET METHANOL TU NAM CỘNG SINH DIA Y Graphis ef persicina DUQC NUOL

Ở MÔI TRƯỜNG KHÁC NHAU KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC NGÀNH SƯ PHẠM SINH HỌC

NGƯỜI HƯỚNG DẢN KHOA HOC 'TS Trần Thị Minh Định

TP HÒ CHÍ MINH - 2024

LỜI CẢM ƠN

Tôi sin bày tỏ lời cảm ơn chân thành đến T3 Trần Thị Minh Định - người luôn quan tam giấp đồ, hướng dẫn tận tình và tạo mới điẫu kiện tt nhảt cho tôi trong quá trình học tập, nghiên cứu và hoàn thiện khóa hưện này

Tôi xin chân thành cảm ơn cô Trần Thị Hiểu ~ Chuyên viên phòng thực hành Sinh

khóa ~ Visinh, Trường Đại học Su phạm Thành phổ Hồ Chí Minh đã tận tình giúp đỡ và tạo điều kiện thuận lợi cho tôi thực hiện khóa luận tắt nghiệp này: Tôi sin chân thành căm ơn các thầy, cô ở khoa Sinh lọc, Trường Đại học Sự phạm

Thành phố Hỗ Chỉ Minh đã truyền đạt những kiến thức khoa học và những kinh nghiệm

quý báu cho tôi

Tôi xin chân thành cảm em khoa Hóa học, Trường Đại học Sự phạm Thành phổ Hỗ

Chí Minh và Trung tâm Khoa học và Công nghệ Sinh học Trường Đại học Khoa học Tự

nhiên, Đại học Quắc gia Thành phố

thie “Chí Minh đã to điều kiện cho tôi tp cận trang

ất bị hiện đại, hỗ tợ tôi hoàn thành khóa luận tắt nghiệp này: Tôi xin chân thành gửi lời căm ơn đến bạn Nguyễn Trần Bảo Ngọc, Phạm Ngọc Bảo Ngân, Lâm Mỹ Quê Nhỉ ~ Sinh viên khóa 46, khoa Sinh học, Trường Đại học Se

phạm Thành phổ Hồ Chí Mình đã hỗ trợ tôi trong quá trình thực hiện khóa luận tốt

nghiệp này

Qua day, tôi cũng xin bày tỏ lòng cảm ơn đối đến gia đình, bạn bè và người thân

“4Ä giúp đỡ tôi trong thời gian thục hiện khóa luận này:

TP Hồ Chí Minh, ngày 26 thông 04 năm 2024

SINH VIÊN

Phạm Trương Phú Vạn Tài

"Từ viết đầy đã butylated hydroxyltoluene

DANH MỤC CÁC BẰNG

Bảng 2.1 Các thiết bị sử dụng trong để tài

Bảng 3.1 Hiệu suất tạo cao methanol từ nắm cộng sinh địa y Graphis cf persicina 31 Bảng 32 Tỉ lệ bẫy gốc tr đo DPPH của cao methanol ở nông độ 1000 ml 3 Bảng 3.3 Tỉ lệ năng lực khử của cao chiết methanol ning d@ 1000 pg/ml 35 Bang 3.3.6 te ché enzyme @-glucosidase cia cao methanol va acarbose ndng 46 200

DANH MUC CAC HINH

Hình 1.1 Coenzyme Q10

Hinh 2.1 Miu dia y Graphis ef, persicina

Hình 3,1 Nắm địa y trên môi trường MY10 sau I thing nudi cy Hình 3.3 Nắm địa y nh trên mỗi rường MY10 sau 4 tháng môi cấy Hình 34 Nắm địa y trên môi trường MY 10 sau 5 tháng mui cấy Hình 3 5 Nắm địa y trên môi trường PDA thai gian 3 tháng

Hình 36 Nắm cộng địa y trên mỗi trường PDA thời gi 4 tháng Hình 37 Nắm địa y trên mỗi trường PDA thồi gian 5 thing

Hình 38 Nắm dịa y nuôi trên môi tường S4 thời gian 3 thing Hình 39 Nắm địa y rên môi trường S4 thời gian 4 tháng

Hình 3.10 Nắm địa y rên mỗi trường S4 tồi gian 5 thúng

Hình 3.11, Kết quả khảo sát năng lực khử của cao chiết methanol ning d 1000 jig/ml

34 Hình 3.13 Kết quả thí nghiệm ie ché enzyme a-glucosidase eta eao methanol từ nắm

MỤC LỤC

LỠI CẢM ƠN

DANH MỤC CHỮ VIỆT TAT

DANH MUC CAC BANG

DANH MỤC CÁC HÌNH

MỤC LỤC

MG DAU

LL{DO CHON DE TAL

IL MYC DICH NGHIEN COU

Il, B61 TƯỢNG NGHIÊN CỨU

UL NHIỆM VỤ NGHIÊN CỨU

V.PHAM VI NGHIÊN CỨU

“Chương 1 TONG QUAN

1.2.2 Kha ning ngăn chặn sinh ra gốc tự do của chất kháng oxy hóa 1.23, Cie chit phan huy Or

1.2.3.1 Enzyme superoxide dismutase

1.2.3.2 Các ubiquinon va hydroquinon

1.2.3.3 Cée chat phan huy H:02 va các peroxide

1.2.34, Loại bò oxy đơn bội, cốc hydroxyl gốc th 1.2.3.5, Sự cân bằng giữa gốc ự do và chất chống oxy héa trong co thé

1.3 Bệnh đái tháo đường

1.5.1 Đặc trưng sinh học của địa y

1.5.2 Vai td cin dia y

1.5.3 Nắm cộng sinh với địa y

1.6 Tổng quan tình hình nghiên cứu liên quan đến lĩnh vực đ tài Chương 2, VẶT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 THÔI GIAN VẢ ĐỊA DIEM NGHIEN CUU 2.2 VAT LIEU

2.2.2 Thiết bị

223 Hóa c

2.3 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU

2.3.1 Phương pháp thu mẫu địa y

2.3.2 Phương pháp phân lập nắm công sinh

2.3.3, Phương pháp nuôi nắm cộng sinh địa y

2.3.4, Phuong phip tao cao methanol

2.3.5 Phường pháp tính hiệu suất cao

3.16, Phương pháp Khảo sắt hoạt tính kháng oxy hóa

2.3.7 Phuong pháp khảo sát năng lực khử theo Oyaizu

2.3.8, Phuong pháp khảo sắt hoại tính ức chế cnzyme G-glueosidnsc 2.3.9, Phuong pháp xử ý số liệu

“Chương 3 KÉT QUÁ NGHIÊN CỨU

3.1 Kết quả phân lập nắm cộng inh địa y

3.2 Hiệu suất tạo cao

32 Kết quả khảo s

của nắm cộng sinh địa y Graphis cf, persicina

3.3 Kết quả khảo sát năng lực khử

3.4 Kết quả ức chế enzyme a ~ glucosidase

KẾT LUẬN VÀ KIÊN NGHỊ

‘TAI LIEU THAM KHAO

PHY LUC

30 hoạttính kháng oxy hóa bằng phương pháp bẫy gốc tự do DPPH

Phụ lục 2: Phụ lục 3 Phụ lục 4:

L.LiDO CHON DE TAL

"Ngày nay, các bệnh không truyễn nhiễm có xu hướng tăng nhanh Theo nghiên cứu thực tế các bệnh không lây nhiễm có thể dược hình thành từ stress oxy hóa Tình trạng mắt cân bằng giữa gốc tự do hay gốc có oxy hoạt động và chất chống oxy hóa được gọi

là sưess oxy hóa Trong cơ thể con người, sưess oxy hóa được xem là vẫn đ phát sinh

lão hóa [1] Ng ai ra, nó còn ánh hưởng đến chức năng sinh sản ở nam giới |2] Phương pháp có thể làm chậm hoặc ức chế stress oxy hóa được áp dụng đến hiện nay là

sử dụng các chất chẳng oxy hóa [1] Chất chống oxy hóa hiện nay (hường được sử dụng

là buylated hydroxyHoluene (BHT), butylated hydroxyanisole (BHA), tert butylhydroquinone (TBHQ) và propyl gallate (PG) [3] Tuy nhiên, những hợp chất này

có thể mang lại những tác dụng không mong muỗn và có ý kiến cho rằng những hợp ch

éu này có Khả năng gây ung thư và có thể gây đột biển cho người sử dụng nếu dùng ở lượng cao l3]

'Việt Nam là một trong những quốc gia có sự đa dạng sinh học cao trên thể giới

Dựa trên điều kiện thuận lợi đó, các nghiên cứu tìm kiếm các hợp chất có hoạt tính chống

oxy hóa có trong tự nhiên đã được tiễn hình và đại đa số các nghiên cứu hiện nay tập phậm có sự kết hợp giữa thực vật và vỉ sinh vật nhằm tăng khả năng chống oxy hồn cũng được để cập đến [3], Địa y đang trở thành đối tượng được khai thác với ắt nhiều tiềm xinh học có trong nấm cộng sinh của địa y [9], [10], [11] Đến thời điểm hiện tại một số

nghiên cứu xác địnhđiỄu kiện môi trường nuôi cấy có ảnh hưởng đến hại tính sinh học của nắm cộng sinh địa y[12l 13] Tuy một số nghiền cứu về hoạt tính sinh học cửa địa

y đã được tiến hành nhưng chưa có các nghiên cứu vẻ ảnh hưởng của điều kiện môi

trường nuôi y lên hoạttính sinh học của ao chiết nắm cộng inh với địay Gruplis cE persicina Vì những lí do trên nên đề tài "Phân lập và khảo sát hoạt tính sinh học của cao

chiết methanol từ nắm cộng sinh địa y Graphis ef, persicina được nuôi ở môi trường Khác nhau” được tiền hành

1 MUC DICH NGHIÊN CỨU

Phân lập nắm cộng sinh địa y Graphis ef persicina va bude dau Khao sit anh huang

của môi trường nuôi cấy đến hoạt tính kháng oxy hóa và ức ché enzyme a-glucosidase

ét nim Graphis ef persicina

ƯỢNG NGHIÊN COU

Nắm cộng sinh Graphis cf persicina được phân

lập từ mẫu địa y thu tạ huyện Kiến Tường, tình Long An vào tháng 10 năm 2033

TH NHIỆM VỤ NGHIÊN CỨU

- Phân lập nắm cộng sinh dia y Graphs ef persicina

- Nuôi nim Graphis cf persicina đẻ trên 3 môi trường MY 10, PDA, S4 và thu sinh khối ở 3 thời điểm

3 tháng, 4 tháng, 5 tháng,

~ Tạo cao methanol từ các mẫu sinh khối nắm và xác định hiệu suất cao chiết

~ Khảo sát hoạttính kháng oxy hồa riro của cao methanol chiết xuất từ Graphis sf.persicina theo phương pháp bẫy gốc tự do DPPH

- Khảo sit năng lực khử r viø của cao methanol chiết xuit tir Graphis cf persicina theo phuong phip cia Oysiz

~ Khảo sất hoạt tính ức chế enzyme oeglucosidase của cao methanol chiết xuất từ Graphis cf persicina

V PHAM VINGHIEN COU

Để là chỉ ến hành phân lập nắm cộng sinh địa y Graphis ef persicina tir 1 miu địa y được thủ tạ thị xã Kiến Tường, tỉnh Long An (10766815, 105 940536) Nắm

ở 3,4, 5 thắng ĐỀ ài chỉ sử dụng dung môi methanol để tạo cao chiết từ sinh khối nắm

‘Céc mau cao methanol thu được chỉ được khảo sát hoạt tính kháng oxy hoá bằng phương

pháp bẫy gốc tr do DPPH, phương pháp khảo sắt năng lực khử và khảo sắt hoạt tính ức

cché enzyme a-glucosidase

1.1 Gốc tự do

1.1.1 Khái niệm

Gốc tự do là những nguyên tử, phân tử, ion có thể tổn tại trong trạng thái độc lập

và có sự hiện diện của một electron don độc trong quỹ đạo nguyên tử [I4] Ví dụ: HC H,, Cr, (du dai dign cho electron chua ghép cap ở nguyên tử) Các gốc tự do có thể mang điện tích âm, điện tích đương hoặc trung hòa về điện [15] 1.1.2 Đặc trưng cơ bản của gắc tự đo

Gốc tự do có electron chưa ghép đôi vì vậy đặc trưng cơ bản của chúng được xác định là khả năng phản ứng cao Phương pháp cộng hướng từ hạt nhân thường được sử gian tôn tại (độ bên) của chúng [15]

1.13 Độ bên của gốc tự do

Độ bến của một gốc tự do phụ thuộc vào khả năng liên kết giữa nhóm thể với

nguyện tử chữa lecron đơn độc, các nhóm thể có khả năng bổ sung điện từ ho gốc tự

carbon, độ bền xếp theo diy

do s Lim ting độ bền của chúng [16] Ví dụ, gốc có ta

bậc 2 > gốc bậc I Độ

gốc phenoxyl Những gốc 'OH, O¿', có độ bền kém [15]

1-1-4 Sự hình thành gắc tự do

Cốc tự do có thể hình thành theo các cách sau:

"Phân tách đồng l¡ ở một liên kết đồng hoá trị - đôi electron dùng chung được chia

đều cho hi nguyêntửiên kết quá tình này cần phải cung cấp năng lượng có th tử nhiệt

độ cao ta tử ngoại

c-a—a+a

Phân từ trùng hòa được bổ sung mộtelecron đơn độc Trường hợp này thường xây

ra trong các hệ sinh học

A+e—A

Phân từ oxy phân bổ theo cách có hai điện tử đơn độc được gọi là lưỡng gốc Dựa

ào đặc điểm khiển cho khả năng phản ứng giữa oxy và các gốc tự do khác dễ dàng hơn

Gốc superoxide là nguồn sinh ra H:O;, Đây là gốc tự do hông gây ra tổn thương:

Tiêng biệt Chúng có vai trò quan trọng về mặt sinh lý khi phản ứng với NO ~ chất được xinh ra từ màng trong của mạch máu Gốc O:ˆ điều kiện pH thấp sẽ bị proton hóa thành HO;

Gốc hydroperoxide (H:O:) có khả năng tạo ra gốc HO: khi trong điều kiện có mặt

on kim loại xúc tác, dễ đàng bị loại bỏ khi không có kim loại xúc tác Nhìn chung đây

là một

Gi hydroxyde có tính oxy hóa ắt mạnh, đa số các phân tử inh học đều có th tạo nhân oxy hóa nhưng không có khả năng phản ứng đặc biệt

ra phản ứng với nó, Khả năng khuếch tần hạn chễ nên thời gian ổn tại rất ngắn ty n

khả năng tổn thương gây ra ắt lớn với phạm vi bán kính nhỏ

Oxy đơn bội (!O;) có khả năng phản ứng cao tuy nhiên đây là dạng oxy phân tử

không phải là gốc tự do Nó luôn tổn tại rong gốc tự do của oxy và có khả năng tác động với tất cả chất bữu cơ nào cổ thể tạo ra các peroxide [I5]

1.15.2 Méi quan hệ giữa gốc tự do với quá trình viêm, bệnh tậ và sự lão hóa

4 Đối với một số quá tình viêm

Hiện tượng viêm là một đáp ứng của hệ miỄn dịch cơ thể khi cơ th chịu sự lẫn

công của các tác nhân như vi khuẩn, hóa chất, bức xạ, chắn thương, Trong quá trình này, các dạng oxy hoạt động được tạo ra bởi bạch cầu hoạt hóa nhằm mục đích loại bỏ các nhân tổ gây viêm Trong nhiều trường hợp bạch cần mắt kiểm soát cc dạng oxy hoạt

động do nó sản inh và chúng xâm nhập vào các tẾ bào xung quanh gây tổn thương màng tế bào Màng tế bào bị tổn thương được xác định là bước đầu tiên của quá trình viêm, Từ đó, thuốc chống viêm thường sẽ có ác đụng ức chế các dạng oxy hoạt động này [Il.[I5l-

‘én hg thin kioh (Alzheimer, tek đau đầu, Parkingsor), cá

hoàn (cao huyết áp, bệnh mạch vành tìm, xơ héa mach, ), bénh lign quan đến hệ cơ,

xương (loăng xương, viêm khớp dạng thấp, viêm xương khớp), các bệnh liên quan đến

rối loạn chuyển hóa (DTD tuýp 2, béo phì, bệnh gan nhiễm mỡ, suy thận) viêm nhiễm

ih, vigm ruột mạn tính, bệnh tự mi n, viêm tụy mạn tính (bệnh phổi tắc nghén men

mạn tính), bệnh về da (da lão hóa bỏng da do nắng, bệnh vày ní viém da, melanoma), bệnh liên quan đến mắt (thoái hóa đốm, thoái hóa võng mạc, đục thủy tỉnh th), Ngoài

ra trong nhỉ khoa, gốc tự do có liên quan đến một số bệnh như đậy thì sớm, suy hô hắp cấp, bệnh gan [17], hen [18], rối loạn phổ tự kỉ [I9]

-# Đối với quá trình ung thự

(Qua trình ung thư gồm nhi giai đoạn phổi hợp gồm: đột biển gene và biển đổi

biểu hiện gene Những thay đổi này sẽ dẫn đến sự bắt thường trong các quá trình điều

hòa biễu hiện của gene và các quá trình khác như chủ kỷ tế bào, sửa chữa DNA, tăng bởi vì khi có các tác nhân vật lý, hóa học, sinh học xâm nhập vào cơ thể và sáu khỉ chuyễn hóa sẽ làm gia tăng các dạng oxy hoạt động Sự gia tăng nảy khiến cho các gốc

OF tần công tạo ra các tổn thương cầu trúc các DNA Nếu quá ình này diễn ra kéo dài

sẽ khiến cho các tế bào trở nên bắt thường và phát tiễn thành các khối u lành tính hoặc

ác tính [15], [20]

4 Đối với quá tình lão hóa

Sự lão hỗa là quá trình giả đi của cơ thể và là điều phải xảy ra trong đồi sống của con người Nhiễu ý kiến cho rằng sự lão hóa có liên quan đến các gốc tự do của oxy Nim 1956, Hannan đã nhắc đến lý thuyết của gốc tự do về sự lão hóa nhưng vào thời điểm ấy những bằng chứng chúng mình sự tổn tại của gốc t do trong cơ thể chưa được phát hiện Sau năm 1968, enzyme superoxide dismutase (SOD) duge phát hiện bởi

LW idovich có đặc điểm là có thể phân hùy gốc O¿ trong tế bảo động vậu đến đây

đề sốc tự do có lên quan đến qu tình lấo hóa mới được chấp nhận Xăng tế bào bị phá hùy bởi ốc tự do tế bào không thể sinh trường được do chất dinh đường thất thoát ra ngoài cuối cùng tế bào chết đi tạo ra lipofusein ~ được xem là

một trong những sắc tổ gây ra hiện tượng lão hóa, những sắc ổ hình thành các nỗt đồi tuổi thọ và nếu nổ tổn tại rong sinh vật càng nhiễ thì mỗi thọ của inh vật càng thấp

sửa sinh vit (DNA

NA, nhiễm sắc th), gây mắttính đản hỗ ct collagen, elastin, khiến cho da mắt đi độ

Gốc tự ảo được nghiên cửu cho thẤy gây đột biển vật chất di truy

căng và khớp giảm đi sự linh động Gốc tự do luôn tăng sinh trong cơ thể tác động đến

hệ thống phòng vệ của cơ thể, dẫn đến tính trạng hệ thông bị suy yếu dẫn, đẻ chống lại

điều này cần phải hạn chế các tác nhân gây nên sự tăng gốc tự do trong cơ thẻ [15] Tóm

lại, sốc tự do khi ở nông độ hợp lí sẽ mang đến lợi ích cho cơ thể inh vật nêu nồng độ

tăng cao sẽ gây ảnh hưởng xấu đến cơ thẻ sinh vật [22]

1.2.2 Khả năng ngăn chặn sinh ra gốc tự do cũa chất kháng oxy hóa

- Hạn chế đến mức tối đa khả năng vận chuyén electron cia oxy

~ Tạo ra một dạng phức đặc biệt với các protein, các ion kim loại chuyển tiếp sẽ:

được cố định trong đó [15]

4 Phòng vệ và loại bỏ các gốc tự do đã sinh ra

TẾ bào có các quá tình nhằm loại bò các gốc tự do đã sinh ra, cụ thể trong quá tình sữa chữa và loại bổ các phn tử sinh học bị tổn thương có ảnh hướng đến sự xông

của tế bào có vai trò quan trọng trong phòng vệ và loại bỏ các gốc tự do Ngoài ra

vệ và loại bỏ các gốc tự do đã sinh ra Ở màng tế bào có sự hiện diện của các chất có

tr giống các cht chống ovy hóa như v:amln E, vitamin C,J-cardtene và ubiquinon

U5)

1.2.3, Ce chit phn hus 0»

1231.6 me superoxide dismutase

Enzyme SOD hiện diện ở tắt cả các tế bào của sinh vật hiểu khí Trọng lượng phân

tử của chúng rắt lớn và người ta thấy enzyme SOD có 2 dạng đồng phân ở động vật bậc cao (MnSOD và CuMnSOD), 1 đồng phân ở động vật bậc thấp (FeSOD)

Cả 3 dạng trên đều có khả năng

xúc tác đặc hiệu để phân huỷ các gốc O+ sop

2H SH:O;+!O; Phản ứng này có hằng số tốc độ K= 2.109 MS" [15] Or+

1.2.3.2 Cée ubiquinon va hydroquinon

Ubiguinon, hydroquinon fa eée ắc tổ và đã được phát hiện có Khả năng bẫy những sốc tự do Oz, những

ất này có mặt ở hầu hết cá

& bio Dai điện cho ubiquinon là

sosnzyme Q10, nó có nhiều loi và Q1 đến Q10 có căng cấu tạo nhưng khác gốc R (n

từ 1 đến 10) tương ứng với Ì gốc R là I Topi coenzyme Q [IS]

roy

“`

Hình 1.1 Coenzyme Q10

2.3.3 Các chất phân huỷ va ede peroxide

HO; tổn tại trong chất tế bio, nó được sản sinh ra sau khi có dạng oxy hoạt động Nang độ trong chit té bio khodng 10M Khi H-O; ở nông độ thấp sẽ bị phân hủy ở tế

o bởi cic enzyme như glutathion peroxidase (GSPPO), chúng sẽ tham gia vào qué trình phan hay HO; với mục tiêu xúc tác cho phán ứng Theo phương trình: 2GSH + LOOH — GSSG + LOH + H:O

108 mol

L gốc lipid hose 6 thể là H

GSH: Glutathione dang kit

GSSG: Glutathione dang oxy hóa

Enzyme GSHPO e6 2 dạng là có chứa len và khong chia Se (GSHPO-Se

GSHPO) Trong đó dạng có chứa Se được xác định có ở gan và ở trong, ngoài tỉ thể có

e LOO' và LOOH hi guả Đối với địng không có Se, nó chỉ tổn ti

khả năng chống

ngoài ỉ thể và có chức năng phân giải H;O› [15], [23]

; thành Ó; và 0 Khindng dd #202 c20, enzyme catalase host dng phn gi

6 ith (microsome) Mot số emzgme peroxidnse khác, ngoi 2 enzyme duge nhc dén trên, cũng có khả năng xúc tác cho phán ứng phân hủy H-O ở ti thé nhu cytochrome peroxidase theo phin tg

HàO› + 3 eytochrome Fe“? "> 2H:0 +2 cytochrome Fe* [15] 1.234, Loai bi oxy dam bei, ade hydroxyl, gée thứ cấp Các oxy đơn bội, gốc hydroxyl có thể dễ tác động nhanh với một chất hữu cơ gần

nó ngay khi nó được sinh ra bởi vì Khả năng phản ứng của nó rt lớn tạo ra các chất peroxide hit cơ Tuy nhiên, những gốc này thường rắt hiểm khi sinh ra trong cơ thể

LH+'0 + LOOH

LH+.OH 3 HO +

L-+0;>LOO

những chất peroxide hữu cơ được sản sinh ra Ở cơ thể, các tổ chức bên trong thường dạng màng là chủ yếu vì vậy hầu hết là pcroxide hữu cơ và các ai béo hữu cơ được tạo

ra, Tom hạ, nếu có sự xuất hiện của 'O; hoặc "OH thì sẽ xuất hiện nhiễu gốc tự do thứ

ho các cấp và cần phải ngăn chặn những gốc này hình thành để ngăn chặn tự do thứ

# Loại bỏ oxy đơn bội

Vitamin E và J-ewvotene được xác định là có khả năng loi bỏ được oxy đơn bội theo cơ chế oxy đơn bội sẽ tác dụng với vitamin E hoặc -carotene, kết quả sẽ tạo rà øXy

và vitamin E hoặc J-carotene dưới dạng giá bÈn (vitamin E*, J-earoten"), Những chất gia bền này sẽ được chuyển vỀ trạng thái cơ bản như ban dầu

1O; + Vitamin E — O; + Vitamin E*

ViLB(OH); +200 > VitEO: +2 LOOK

Phin img vitamin E loại bỏ gốc LOO' được xem là một trong những phản ứng rất

“quan trọng trong loại bỏ gốc tự do Bởi vì đặc trưng củ: ốc này à khả năng phần ứng mạnh nêu như vĩ một lý do bất kì gốc LOO: được sinh m nhưng không được loại bỏ hay động của vitamin E các gốc này sẽ được chuyển hóa thành LOOH, nhờ vào điều này chúng sẽ được các chất phân git peroxide gid chuyển hóa trở vỀ đạng acid béo ban

đầu, màng tế ào trở về mạng thi ban đầu, Dựa vào điều này có thể thầy vitamin E được nhận định là chất chồng oxy hóa tuyệt vời nhất là có cơ sở và hợp lí Ngoài vitamin E, những chất có cầu tạo tương tr cũng được xác định rằng có Khả năng đập tắt gốc tự do, những chất có cấu tạo tương tự vitamin E có trong cơ thể người đăng được nhắc đến là biquinon vitamin C Ngoài ra, không thể không nhắc đến khả năng loại bỏ gố tự do của gốc semiquinon bin Gốc semiquinon bền được biết R

‘dang trang gian giữa trạng thái khử và trạng thái oxy hóa, nhờ vào đặc điểm quan trọng sốc semiquinon chủ yếu trong cơ thể là: toeofaryl (gốc của vitamin E), aseobyl (gốc của vitamin C), coenzyme Q10 (gốc của ubiquinol)

'Vitamine E ở dạng oxy hóa (ViLLEO2) có khả năng chuyển hóa về dạng khử in vitro Khi phản ứng với vitamin C như phường trình hóa học dưới đây: ViUBO; + VitC khử — ViLE(OH):+ ViLC oxy hóa

K = 1.55x106 MS"

“Có quan điểm cho rằng ở người bên trong cơ thể cũng có phản ứng chuyển hóa vitamin E dạng oxy hóa về dạng khử xây ra vì vậy nên mới ít có hiện tượng thiểu hụt viatmin E ở người [I5]

1.2.3.5 Sự cân bằng giữa gốc tự do và chắt chồng oxy hóa trong co thé Hiện nay, người ta đã khẳng định sự sản sinh ra các dang oxy hoạt động hay gốc

tự do của oxy được thực hiện ở t bảo thông qua các phản ứng truyễn điện tử Một số của chúng Các gốc tự do cũng được tạo ra trong quá trình phagocytosis (thực bảo) để tiêu diệt vi khuẩn Tuy nhiên, nguồn chính của các gốc tự do là từ quá trình tách điện tử

sào vả lưới nội chất, dẫn đến sự hình thành

trong chuỗi vận chuyển điện tử của hô hip

cia Ox

Trong cơ thể, các gốc tự do thường có xu hướng liên tục hình thành và bị loại bỏ

bởi các chất chống oxy hóa Tuy nhiên, khả năng của các chất chống oxy hỗa trong việc

loại bo cde gốc tự do cũng có giới hạn và giới hạn này thể hiện ở sự hiện điện của các dạng hoạt động của oxy hay gốc tư do của oxy ở tế bo

Ở mỗi tẾ bảo sự cân bằng giữa gốc tự do hay các dạng hoạt động của oxy nổi chung luôn luôn hiện hữu Sự cân bằng này sẽ mắt đã khi có một hoặc một số tắc nhân ảnh

tỉa phóng xạ, bức xạ, hóa chất độc hại

từ môi trường, các tắc nhân gây

ching oxy hóa sẽ giảm Sự tăng lên nhiều hayí của sốc tự dø của oxy ủy thuộc vào khả năng tác động của các yếu tổ và hộ thẳng khng oxy hồn của mỗi sơ th [15] 1.4 Bệnh đái tháo đường

chia thành các loại sau [25];

DTD trp 1: côn được gọi là bệnh đái tháo đường phụ thuộc insuin hay đãi tháo

đường ở người trẻ, được gây ra bởi sự phá hủy tế bảo đảo tuy, thường dẫn đến thiếu

imsulin tuyệt đối

ĐTD tuýp 2: Nguyên nhân do giảm chức năng của tẾ bào beẹa ty tiến triển trên nền tảng đề khang insulin

DTD thai kj: được chin đoán vào giai đoạn thứ hai hoặc thứ ba của tha trước thời kỳ mang thai không có dấu hiệu rõ rằng của bệnh đái tháo đường

DTD do các nguyên nhân khác: các nguyên nhân khác gồm hội chứng đái tho đường đơn gene, bệnh của tuyến tuy ngoại tiết, bệnh nội tt, hoặc do thuốc, hoá chất

như sử đụng glueocoricoid, trong điều tị HIV/AIDS hoặc sau khí cấy ghép nội tạng

Đổi với DTD tuýp 2 cơ chế bệnh là sự đẻ kháng insul

có dược lực khác nhau, điều này đã giúp cho việc lựa chọn thuốc điều trị cho bệnh nhân trở nên thuận tiện hơn Nhìn chung các loại thuốc điểu trị DTD tuýp 2 được chia thành

3 nhóm chính là nhóm kích thích bài tiết insulin, nhóm lảm tăng tác dụng của in vn ti

cơ quan đích và chống lại nh trạng kháng insul, cuối cùng là nhóm ức chế hắp thu

glucose tại ruột [27]

Ngoài ra, bệnh nhân DTD tuýp 2 cồn được chỉ định sử dụng insulin trong các

trường hợp như cắp cứu, st cân nhiễu, suy dịnh dưỡng, chuỗn bị can thiệp phẫu thut, tong thời gian phẫu thuật, hậu phẫu, có các biển chứng nặng của đái thảo đường, khỉ đăng thuốc uống liễu tối đa nhưng không tác dụng [27]

14, Enzyme a-glacosidase va chit ie ché enzyme a-glucosidase

1.4.1 Enzyme a-glucosidase

Enzyme a-glucosidase có bản chất là một nhóm các enzyme như maltase,

glueoinvertase, glucosidosucrase, maltase-glucoamylase, N6 có khả năng xúc tác cho

«qu trinh thiy phn lén két a glycoside & du tin cing khing khircta carbohydrate nhằm mục đích giải phóng phan tir a-D-glucose [28] Enzyme a-glucosidase tn tai trong rất nhiều loài sinh vật [29] Trong cơ thể con người, nó được iết ra tại diém bn chi tế bào ruột non Khi thức ăn vào cơ thể carbohydrate sẽ được thủy phân béi enzyme a-

amylase 6 tuy tạo thành các dạng đường đơn giản hơn va enzyme œ-glucosidase sẽ tiếp

tue thủy phân chúng thành các phân tử glueos rồi thắm vào máu [2S], Vì thể dựa vào

ức chế hoạt động cia enzyme a-glucosidase cố thể hạn chế được tốc độ thủy phân carbohydrate nén the d@ thim thấu glucose vio mau cũng được làm châm:

1.4.2 Chit tre ché enzyme alpha-glucosidase

enzyme d-glucosiase Id nhing chit c6 khi ning lim chm qua tinh

hấp thụ carbohydrate tir rugt non vi vay e6 thể làm giảm đường huyết sau bữa ăn [30],

Những chất này đa phần sẽ hoạt động theo cơ chế gắn vào vị trí liên kết giữa phân tử

earbohydrate với enzyme nhờ vào ái lực mạnh hơn nên những chất ức chế này có thể chiếm vị trí đó và hình thành ức cỉ cho hoạt động của enzyme a-

glucosidase tai ruột non bị ức chế Hiện nay, các thuốc được sử dụng để ức chế cnzyme glucosidase phé b ến là migliol và acarbose Aeatbose ức chế cạnh tranh với enzyme

e=glucosidase ở ruột non, giúp cho đường huyết sau ăn được kiềm hãm Mặc dù có hoạt

tính tốt, aearbose vẫn mang đến những tác dụng phụ không mong muốn như đầy bụng

tiêu chảy, buồn nôn [31]

Vi thé vige nghién cứu tim ra céc hop chit thay thể có thể giáp quá trình điễu tỉ

DTD tuýp 2 được hiệu quả hơn Tính đến thời điểm hiện tại, các chất ức ché enzyme a-

glueosidnse được phát hiện có ở nhiề loài nh vật, trong đồ có địa

1.5 Địa y

15.1 Đặc trưng sinh học của địa ý

Địa y là đạng sống cộng sin giữa nắm (mmyeobionÐ) và một hay nhiều inh vật có khả năng quang hợp thường là tảo lục hoặc vi khuẩn lam Trong mối quan hệ ng sinh này, áo có vai trò cung cắp năng lượng cho nắm phát triển thông qua quá tình quang

hợp và nắm có vai trò bảo vệ tảo cung cắp một số muối khoáng và nước cho tảo phát triển Nhờ vào sự cộng sinh này, địa y có thể tồn tại ở nhiễu môi trường khác nhau kể cả mỗi trường khắc nghiệt như nú: cao, nhiệt đối hay vùng băng giá Chúng có thể sống trên nhiều giá thể khác nhau như võ ly, phiến đá, kim loại, bê tông, Dạng sống của địa y đa dạng và được phân thành 3 dạng th phát triển gồm dang khám (crustose), dạng phiến (foliose), dang soi (fruticose)

ia y dạng khảm còn gọi là địa y lớp vỏ, bám rất chặt vào chất nền mà chúng mọc

trên đó Chúng thường phát triển theo hình tròn và không quá dày, Hầu hết các địa y lớp

bên dưới nên gần như không thể tách tản địa y còn nguyên vẹn ra khỏi chất nền

Địa y dạng phiến hay dạng lá có hình thái giống như chiếc ki Dang dia y này có

đặc điểm phát triển theo hướng tăng trưởng ở rÌa ngoải vả thường theo hình tròn, những

vi tí phát tiễn nhanh hơn tạ thình các thủy tủy vào loài mà thầy này có kích thước to hoặc nhỏ Khó khăn khi thu mẫu đối với dạng địa này là có một số địay dạng lá Khác

loài phát iển cùng nhau tạo thành một mảng địa y lớn hoặc đại y dạng lá nằm phia dưới những phần phát triển của địa y khác có thể phát triển phía trên bÈ mặt của địa y dang nhin

Địa y dạng sợi nhìn gằn giống như những cái vây nhỏ hay một bụi rim ching moc thẳng đứng hoặc có thể rũ xuống như một cây nho thu nhỏ

Địa y sống lâu năm, sự sinh trưởng của địa y tương đối chậm tùy thuộc vào kiện mỗi trường mà thời gian sinh trưởng của chúng có sự khác biệt, thường các loài địa

y ở khu vực có khí hậu âm sẽ sinh trưởng nhanh hơn so với những vùng có khi hậu khô,

LỞ những vùng có khí hậu khô, địa y thường phải mắt hàng thể kỹ để có thể đạt được kích thước lớn [32] Mỗi loài địa y có màu sắc đặc trưng [33]

15.2 Vai trò của địa y

Địt y có vai trd quan rộng đối với con người và hệ sinh thải Địa y được xem là sinh vật chỉ thị chất lượng môi trường Nguồn nước địa y sử dụng chủ yếu là sương,

trong sương ở các khu vực ð nhiễm sẽ có khả năng cao mang trong chúng những chất có hại cho địa y Ngoài ra ở một số loài địa y, cấu tạo không có lớp biểu bì nên khi những dia y này gặp phải những chất ô nhiễm sẽ ắt dễ bị những chất này xâm nhập vào bên trong [32]

"Ngoài ra, địa y còn được sử dụng là thuốc, gia vị, nguyên liệu nhuộm mu và thực

phẩm cho con người từ xa xưa Người Ai Cập xa xưa đã biết dùng địa y Limus để làm được sử dụng để làm nước hoa [32]

Một tron những công dụng mà giới khoa học đang hướng đến chính là lâm dược

liệu Từ xưa, ở khu vực Châu Á, Châu Phi và Châu Âu người dân ở khu những khu vực này đã sử dụng địa y dễ chữa trị một số triệu chứng như hạ sốt, giảm đau [34] Ngày nay kháng khuẩn, kháng oxy hóa, ức chế một số loại enzyme (35)

1.5.3 Nắm cộng sinh với địa y

Nắm cộng sinh với địa y (mycobion\) là một trong hai thành phần quan trọng cấu

tạo nên địa y VỀ mặt phân loại học, nắm địa y bầu hết thuộc ngành Ascomycota va con lại là Basidiormycota chiếm khoảng 2% - 3% [38] Mycobiont có thể được tách ra khỏi

địa y và có khả năng sinh trưởng ở trạng thái bắt cộng sinh hay sống tự do trong điều, kiện nuôi cấy Tuy vậy những nắm cộng sỉnh được tìm thấy tỉnh đến thời điểm hiện tại hầu ht là dạng cộng sinh trên địa y 32] Những nghiên cứu có sử dụng phương pháp

hân lập nắm cộng inh với địa y cũng được thực hiện nhiề ở các phòng th nghiệm ti một số trường đại học tại một số quốc gia lớn như Hoa Kỳ, Đức, Nhật Bản [39] Vấn

để tách thành công nắm cộng sinh ra khỏi địa y đã mở m cơ hội cho các nhà khoa học tìm kiếm những hợp chất mới đến từ nguồn tài nguyên này

"Nghiên cứu gẵn đầy cho thấy hoạt chất của địa y có thể được tạo rủ bởi nắm cộng:

xinh của chúng |40| Hầu như những hợp chất mà địa y có như alkaloid, quinone benzopyranoid, steroid, pyrone, xanhthone, đều là sản phẩm chuyển hóa thứ cấp được

tiết m bởi nắm cộng sinh với địa y Ngoài ra, những hợp chất thử cấp được m thấy ở

Một số hoạt chất của myeobiont sẽ bị ức chế khi ở dạng cộng sinh bởi vì những,

tủa nắm hay tảo cộng sinh là một vấn dé phi

hợp chất này sẽ ảnh hưởng đến sự phát triển của phycobiontví dụ như những hợp chắt anthraquinone, dibenzofuran va vulpinic acid [42] Do d6, điểm đặc biệt ở nắm cộng xinh với địa y khi được nuôi không cộng s là chúng có thể sinh khác các chất mồi so với diay,

1.6 Téng quan tình hình nghiên cứu liên quan đến lĩnh vực để tài Nam 2012, Yunhee Jang vi công sự đã nghiên cứu trên nắm phân lập từ địa y Ranalina tercbrata ở Nam Cực đã được chimg mình là có hoạt động chẳng oxy hóa

mạnh và ức chế sự hình thành hắc sắc tổ [43],

[Nam 2008, Thiago Inicio Barros LOPES, Roberta Gomes Coelho, Niia Cristiane Yoshida, and Neli Kika Honda đã công bổ nghiên cia vé lecanorie acid phan lip tie địa

yy Parmotrema tinctorum và orsellinate thu được thông qua phản ứng cia acid niy voi

rượu đã được đánh giá chống lại Artemia salina và vì sinh vật [44]

Nam 2011, Nedeljko T Mancjlote và cộng sự đã nghiên cứu chiết xuất methanol

và chloroform cia Umbilicaria cylindrica duge xác định bằng phương pháp HPLC-

UV Hop chit phenolic chiém ara thé trong cd hai dich chit la depsidone, salazine acid [Ngo salazinic acid, cde chit chiết nuit duge thir nghigm cia U cylindrica cdn chia norsietic acid, methyl-J-oreinol carboxylate, ethyl haematommate, atranorin va usnie acid với lượng khác nhau Các chất chỉ tử ay cho thấy hoạt tính chẳng oxy hóa mạnh mẽ và có thể so sánh được, thể hiện khả năng loại bỏ gốc DPPH và hydroxyl cao

hơn, hoạt ính chelate hóa kim loại via hoat dng ie ché qua trin peroxide héa lipid Dich chiết địa y thể hiện hoạt tính kháng khuẩn quan trọng chống lại 8 chung e6 gid tr] MIC

từ 15,62 đến 62,50 ug/mL [45]

Alejandra vi cng sur đã công bỗ nghiên cứu cho thấy các chất chuyển hóa thứ cắp

in gc từ bào tử của Teloschides

từ địa y và mycobiont được nuôi cấy có nại

chrasphrhalus và Ramalina celastzi có hoạt tính kháng virus [46] Nghiên cứu được công bổ vào năm 2021 của nhóm tác giả Bùi Văn Mười và cộng

xã xác định được 2 hợp chất mới bao gồm dibenzofuran, o6 ten wsneacerain A, vt

một phenolic cid, có tên usneaceratin B, cing v6i một dibenzoftran đã biẾt, isousnic acid và hai hợp chất phenolie đã bit, orselinie acid và methyl orselinate được chiết xuit tr dia y Usnea ceratina bing nhitu phương pháp sắc kí khác nhau Trong những

hợp chất được phân lập, usneaceratin B được khẳng định có khả năng ức chế enzyme a-

giá ICo là 41,8 uM tốt hơn so với đối chúng acarbose(IC« là 214.50

Năm 2024, Trần Thị Minh Định và cộng sự đã phân lập và khảo sát hoạt tính ức

ché enzyme a glucosidase từ cao th của nắm cộng inh địa y Graphis handel v6i gid

trường nuôi cẤy đến hoạt tính sinh học của nắm cộng sinh địa y cũng như không có

nghiên cứu nào khảo sát ảnh hưởng của điều kiện nuôi cấy đến hoạt tính sinh học của

nắm cộng sinh địa y Graphis cf persicina

“Chương 3 VẶT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CÚU 2.1 THOI GIAN VA DIA DIEM NGHIEN COU

Đề ti được tiến hành từ thing 10/2023 - 3/2024 tai Phòng thí nghiệm Vi Sinh ~ Sinh hóa, Khoa Sinh học, Trường Đại học Sư phạm Thành phố Hồ Chí Minh

2.2 VAT LIEU

2.21 Vie ligu

Nim cng sinh Graphis ef persicina được phân lập tờ mẫu dia y thu tai huyện

Kiến Tường, tỉnh Long An vào tháng 10 năm 2023 Mẫu địa y được định danh bởi TS

`Võ Thị Phí Giao công tác tạ Khoa Sinh học, Trường Đại học Khoa học Tự nhiền, Dại học Quốc gia Thành phố Hỗ Chí Minh