Nghiên cứu khả năng nảy mầm và tạo sẹo từ khúc cắt trụ hạ diệp in vitro của cây cóc Đỏ lumnitzera littorea jack voigt

NÀA và2,-Dđ nguá tình Lo si a thân cấy Các đ nghhit nhiền 4, Ý ngha khoa h cvàth củ ne ađ tài Ý ngha khoa h c Nghiên cu nhh ngc smôi ngớns nymm cah tCốcd va ahh mạc am ngd cácch tKTSTkhá

TROOHG NAT HOb SO PHAM TP HOM

BAO CAOT NGK Tp TÀI

KHOAH CCƠNGNGH C PTR NG

NGHIENC UKH NANGN YM MVAT OS O

T KHUCC TTR H DI PIN-VITROC ACAY

COCD (LUMNITZERA LITTOREA (JACK) VOIGT)

MAGOACS.2015.19.40

'CHUỦ\HIEĐ!: THS QUÁH VA§ TOAW EM

TP HOXPHÍ MINH, 1/2017

24D Dichlorophenoxy-acetic acid

BA NỔ —benzyladenin GA3 Giberlic acid

Ms Murashige va Skoog NAA acid —naphtalen acetic

WPM Woody plant medium

Bng21 ohh ngc aNAA, BA riêng 1 lềnkh năngn ym mẹ äh t Bng22 nhh ngc aNAA, BA riêng! lênkh năng ym mẹ ah L Bng23 nhh ngc a24DvàNAA lênkh năngLos oe aláte Lm ngư

d ilám m

B ng2.4.Kh o sát nhh ngc aNAA "

B ng25.Kh osấ nhh nge aBAléns phát neasot trd ilám m

B ng 2.6 Céc nghỉ mth ckh o sát nhh nge aNAAK th pv iBAléns phittrine asot © d ikimm

Bng37 nhh ngc ath igianx HỊ

ht Coed HgCh I%elén nhỉ mvàs nge ä

B ng38 Kh osátkh năng kh trùng alavenlênh tCóc đ Bng39, nhh ngc an ngd vàth |

m me ah tCóc d gianx líJavenlềnt 1 hi mvan y Bong310 ohh nge amie ngdinhd ngiềnkh năngn ym m Bog3il nhh ngc aÌ ngagar/)c amôit ngMSlênkh năngn y

mm

Bng312 nhh nge ath igianchi w

BngÄlâ nhh nge aNAAléns

B ng 3.14, Sinhkh it ic acdy cond

sáng lên kh năngn ym m

ym me ah tCéed

ce yurenméitr ng MSc6b sung NAA sau 2 un, 4 tun ya6tu n

Bong3.15 ahh ngc aBAIênkh năngn ym mc ah L 'B ng 3.16 Sinh kh ít íc aci conđ e

4tun € y trên môi tr ng b sung BA sau

B ng 3.18 Sinh kh it ic acdycontrénméitr ngb sung NÀA và BA sau 4

wa,

B ng 3.19 Sinh kh ¡4 ïc ä cây con trên các môitr ngb sung NAA, BA riêng

I vak th p sau 4 tụ n nuôi c y

B ng320 nhh age aGA; lênkh năngn ym mẹ ah t

Hình 3.11 Cây con trong môi nge6b sung BA 035 mời

Hình 3.12.§ phái ne acây con trong môitr ngb sung NAA vaBA sau

wn

Hình 3.13 § phit tri ne aeay consau4tu nnudic y

Hình 3.14.Sot tứ d ¡lấm mưếnmôitr ngb sungNAA sau 4 a Hình 3.15.C ut otr đ ikim me acdycon2t ntu ittenmoitr ng MS Hình 3.16.C tt otr d iim muênmôitr ngc6NAA 0,1 me/lsaud tu n Hình 317.C utotr d ¡lầm mưên mbitr ng.e6NAA 20 mgf sau two Hinh 3.48.8 6t tr d ilim mưếnmôit ngb sungBAsau4tun Hình 3.19 o trên môi ngb sungNAAk th p BA sau4tu n 51-3

L.Lydoch nd tai

R ng ng pm n(RNM) là m th sinh thai chuy nư p gi a môi tr ng bi vad (lin; dct ng vinge asOng venbi nnhỉ Lứ ¡vàc nnhỉ tứ í.H sinh thất RNM đồng vai trồ to nđ ¡v ¡ mỗi tr ng vàcu cs ngc ac ngớ nạ.R ngng p malin i mnuôinhỉ uại nghỉs neógiát kinht.RNMđ ©xemnh mít

ct ngxanhb ov c din ving venbi mtr c bio, 1 e xoáy hay sốngth n Ngày nay, d ch v du ch sinh thái RNM e ng g6p phn ¢ ithi nthu nh p choc dans ng

lì u cho công tác nghị

đây RNM còn là ngu nd tr và cung c p ngờ)

khoa h €,b 0+ n và phát trí n đa đ ng sinh h c S]

“Tuy nhiên, th i gian qua, RNM đã b khai thác quá m c nên RNM đã và đang Inchtl ng Tìnhư nhưềndĩdndns suygim

b suygime v di nti

nghiêm tr nge am ts loài cây ng pm n, trong đó đáng quan tâm nh tà loài cây Coed (Lumnitzera lirorea (Jack) Voigt)

Cée 4 (Lumnitzera lintorea (Jack) Voigt) 1a lai cay chinh th © RNM

Vi tNam, Cócd phân _ PhúQu ¢,R ch Gia (Kién Giang), Con D 0, Cam Ranh

yy Coe đ có vai rd quan tr ng d iv i

VAD ng Nainh ng s1 ng không nhĩ u Cả

+ nhiên và con ng ig đàng tong xây đ ng, đóng đ đ , làm than; lá dùng đ chia m Ls b nh; qu nxã Cốc đ có tác d ng ch n sing gi6, b ov dé di u ven

i Khai thác quá me cùng

bí n,€ Ít 6 đ 1 chua mì n |6] Tuy nhiên, vĩ e con ng

n đã khí n cây Cóc d có nguy c tuy teh ng

Y ÍNh năng tất sinh ong E nh

Hi nnay, Coed cótêntong Sách Vì tNam (2007) m ed VU.[1]

Ð gốpph no ngu n cây gỉ ng phe v cho côngtác ph ch ¡ loài cây đăng sốnguy e- tuy Lch ng này, đã có nhỉ u công tình nghiên cu Lo cây con b ng các

ph ngphấp khác nhau, nh ngt Ì n ym mừ th pvàkh mings ng không cao

VI v y, nhân gi ng in vitro Hah ng nghién ¢ we md e quan tâm Đó là Ii do

te h di pinvitroe aay Céed (Lumnitzera litorea (Jack) Voigt)”

=Xéednhph ngphip,ch tkh tring vàth igiankh tng hi uqu ede m wh -Xicdohm ts y ut moi ngvadi uki naubie yihichh pehos a ym m

© ah Lcây Cóc đ

~ Xác đnh môi tr ngthíehh pchos n ym me ah (cấy Cócd cób sung các

ch tdi hòa tăng tư ng khác nhau

Xác dnh mới tr ngón ngử NAA,BAriêng] ho ck th p thính pchos +6s øC tr d ¡lắm mụ qua đồ gốp ph ncunge pd nÌi tho ví enhin gi ng in vitro loai cay Cée d_quy hii m nay

-Kh osát nhh ngc a môi ngưàn ngd NÀA và2,-Dđ nguá tình Lo

si a thân cấy Các đ nghhit nhiền

4, Ý ngha khoa h cvàth củ ne ađ tài

Ý ngha khoa h c Nghiên cu nhh ngc smôi ngớns nymm cah tCốcd va ahh mạc am ngd cácch tKTSTkhác nhaud nv phit sinh hin thi © a cly Coed in vitro sun ym mẹ nệnh + lìnhthànhvà phá ti n

cakhimdsot td ikimminvitro.B cdutoe s chovi choanthi n

uy tinh nubic in vitro edy Cée d

Yngha th efi mT ores 1 ng 1 n cấy con gópph mph ch ivab ov

loài cây quy hi m này

= Kho sé thi nghi mkh tring m wh ts ở ng hóa ch t HgCh va NaOCl

v ieáen ngú vàth í gian Khác nhau

<Kh osdt nbh nge amditr ngnudic ylénn ym me ah tchiml ng agar (v 11 ng 7y/l, 8e/l va 9g/) và môi tr ng MS (MS, 2 MS và ⁄4 MS), môi

4

Ch ngl.T NG QUAN

11D it ng nghiéne u

Dit ngnghiéne u: cay Coe d

Tenkhoah €: Lumnitcera ltorea (Sack) Voigt

€ m hoa hình chim đnh cành, đài I5 - 3 em, Hoa có cu ng ng n, đài 1,5 ~ 2

mm Đài hình ng othành đa ch am t Tràng 5 thùy, hình b u d c thuôn, dài $—6 mm, màu đ Nh 5—10,ch nh đài g p đôi cánh hoa Nh yh ¡ nhô ra khi hoàn „ vòi nh y dài

và đài bn.B u 1 ô, Š lá noãn h p, noãn nh_ 3 ~ 5, đính noãn treo, vời hình ch, đ ứnh y tù,Hoath phinnh_ chim hútm tvà nh ng loài ăn m t[I] H5]

Qu heb, hình tr ng đầi 3 ~ 4 cm, vinh usic ngmôc av qu nmri tác, v qu trong ng.Qu noncó màu nâu đ „qu chín có màu xanh đen, Mùa ra hoa vào

tháng 6 8, mùa qu chín vào kho ng tháng 8 ~ 10 3]

1.1⁄2.Đ € đi m sinh thái

Cây m e— RNM ven sông, ven bị n.n Ích ng p tì weaoho cítng pn cm n,

Gt séth ich th ngm el my loài Giá (Etcoecarid agallocha) Dà (Ceriops spp)

có khi m ethành qu nxã wth hoe gnnh thu alo i.(5){1] 1.1.3.Ph m vi phiin b

‘Tren th gi Í, cây Cóc đ phânb + b bỉ n phía Đông chau Phi d n phía Nam

châu Á, châu Úc; th làcácn © oh : Trung Qu c, nD, Xrilanca, Mianma, Thai Lan, Malaixia, Singapo, Indonexia, Philippin, Niu Ghine, Fiji

Vi t Nam, Cóc đ có Phú Qu e,R ch Giá~ Kiên Giang, Côn Ð ø và C n

Gi nh ngs 1 ngkhôngnhỉ u[1].|31]

1.14, Giá tr

Hoad d p.d cding lame nh trang ui, G tt, 6th n mirong bin vin ©

m niu ngay ma khong bm enénd ding trong xiyd ng, dong d dc, lame © hay dang d ch ab ab tigu ch y, loét mỉ ng, viêm ru t[I] [5]

Hình 1.2 Cây Cóc d œr ng thành và cây con tấi sinh trong tnbignt iC n Gi

(Quách Văn Toan Em (2008) v id Wi nghi

divich d muikhánhau giaidonv n omktlunkh ningsinhir nge a loài đ giá tr caonhL môitr ng cng Lvài (L 0%-50% ĐMNT),biênd sinh

tr ngữ tvà sinh tr ngch m khí s ng trong môi tr ng d_ mn cao (75 % - 100 % ĐMNT) [4]

cus sinh ng ä Cây Cócđ

(Quách Văn Toàn Em (2009) có d tài nghiên c uc u trúc và tăng tr nge aqun

th Céed (Lumnitzera littorea (ack) Voigt) khud tr sinhgquy nr ngngpmnCn

cố s khác bí tr rt gi a các khu ve nghiên cu và gi a 2 mba trong nim T © d tăngtr ngớ ngkính thân cây du khu 4 luôn cao nh tứ t 078cmnăm, k đn là

tu khu 14 đt 0/63 cnnăm và _tỉu khu 7 đt0458cmnăm T ed tăngtr ng chỉ u cao cây Cóc đ ú u khu 7 luôn cao nh tứ tg n1 mfnăm,k đ nlà tỉ ukhu l4

4 LÔẠSG nưnấm [5]

Quách Văn Toàn Em, Ph m Văn Nạ LH Thanh Xuân (2009) có đ tài nghiênc u

kh ningn ym me agu Coed (Lumnitzera litorea) di tée d nge aaxite a qu Coc d:T 1 qu cheth ph ntl qu lép.t 1 qu che chi m41,53# 1,96 % trong đốt | qu [6p chi m $847 41,98 %.T 1h tch € chỉ m68,67 % £2,94% cao hn so Vit 1 qu Kp 31,33 £ 2.94% Kh ning s ng © a phôi đ 833 % Do đó, L1 tái sinh Lí đa (heo lý thuy t) ¢ a Céc d ch dt 23,7 %, ty nbién kh nắng này còn ph thu er tnbi uvaodi wkim ago ie nh

~V qu có nhh ngớ nh igiann ym mvàt | nym mirungbinhe aqu

Cốc đ Nhì tứ và GÀ đ u làm tăngtÍ n ym me ah L Cốc đ., nh ng GÀ có tác

đ ng caoh nso v Ì nhỉ tớ,

-Qu Céed d ebéc ciel py qu c ngcét] nymmeaoh nsov idi

ch ng Diviqu Cit 1 nym meaonh (dt 20£2,04% khix lý ví GA0/08 ppm,t I niye ng thichh p cho qu Cócd nguyênn ym mnh ngt Ì n ym mch đ1125%.§ ngàyqu Cócđ tíb tổ un ym mẹ ngng nh nsov gu nguyên, do

© vapHe ad t Ngotira,kh ning tai sinht nhiénb ngh tvat 1s nge aciy Cée

4 tái sinh có s khác bì Lrõr tại a mia m a và mùa khô [6] Quách Văn Toàn Em (2010) có đ tài nghiên cu đ c đi m sinh thấi va sinh te ng

€ a loài Cóc đ (Lumnitzera linorea) ti snht nhiên khud ứ sinhquy nr nghg p mìnC nGi -Táegi ktlu nt Í táisinht ¡ đa theo lý thuy te a du Cócđ làlà237 ' kh ning til sinh nhiên có s Khác bỉ Lrõ r Lại ä các mùa va gi a ede khu v nghiên cu

Ð ng Văn Danh (2012) v id tài nghiên cu nhân gi ng cây Cóc tr ng và Cóc đ

b ngph ng phấp giảm cành tác gỉ k tu n: cành giâm Cócđ tÌ rar caonh t(§6.67 Xích thích ra r tong th ¡ gian nhanh h n, trong 4 tu nd u thí nghỉ m IBA không kích thích hình thành ch i

Kh u Minh Hoàng (2006), C6 d tài nuôi ¢ y mô cây trai Nam B (Fagraca cochinchinensis A Chev), tée gi k tu n: Mu trải th e sinh d © v6 tring t th ¢ trong dung d ch Natrihypochlorit 25 % trong 20 - 30 phút k th p v ¡ HẸCI 0.05 %

trong 15 phút, nuôi e y md cy Trai in vitro trong môi tr ng WPMb sung BA cée nong

41 khác nhau kích thich t och i,e meh ir

Phan Nguyên H ng (2005), có đ tài vai rồc ah sinh thấir ng ng pm n var a san hô trong ví e gỉ mình tácd nge ađid ngưimôiŒr ng,tée gi nh ndnh Lm quantr nge ah sinh théir ngng pm nvàr nsanhôđỉđ ngd iv ivi cgi mah

nh nge abi nd ikbih wlén cde khu v ¢ ven bi a

Lê Công Khanh (1986), có d tầir ng ng pm n và r ng abi Cd itén d tchua phền tác gỉ đc 1 ev đ cái mb bi n,céclo id tm n.d chua phòn, khíh uw Vi t gốpe ar ngeâyn cmnđivin nkinht qu cdân vàch tr ngẻm cách ng rng

Nguy nMinh Qu (2009), ¢6 4 tai dénh gié m iquanh dituy ne amts mu

4 Vanghiéne us botnngu nd Tring Khinh~ Cao B ng b ng K thủ t nuôi c y

mô —L bào th ev, ie gi đ ara quy trình nhân gỉ ng d b ng nudi c y in vitro tong

môi tr ngb_ sung BAP, NAA, WPM [trích dn, Xuân 2014] [18]

Md Tình hình nghiên ¢ ungodin ¢

Kathiresan và c ngs (2001) v ¡đ tài nghiên c uđ đi m sinh h ¢ vàh sinh thấi r ng ng pm n, tác gì k tu n loài Cée d (Lumnitzera littorea (Jack) Voigt) phan

b nhìu Nam A, Tay llaysia [24]

Guoha Su, Yelin Huang, Fengxiao Tan, Xiaowei Ni, Tian Tang, Suhua Shi (2007) sóđ tài nghiênc uy s botn ngụ ngene alodi Coed (Lumnitzeralitorea (ack) Voigt) phíatâyc a ving bi n Indonesia 21)

Tan Kim Hool và e ng s (2007) có d thi nghién c wtiah dad nge ar ngr ng

i dik thin

ng pm a Béng—Nam va Đông Châu Á, trong d tài nghiêne w này íc

Cốc đ là loài cây chínhth cc ar ngng pm n[29]

1.2.8 1 ev tinh hinh nudic y mé in vitro 1.2.4 Trén th gi i

Nuk

© ymôt bào th ev thay còn g ¡là nuôi c y im viưø là công e c nthỉ Lương nhỉ ulnhv cnghiêne uc b nvà ngd ngc angành công ngh sinhh c.Nh ápd ng

vit oi Do d6t ora hing lo ted th m igi nguyên tính tr ng dituy ne ac th

m „làm rút ng nth i gian ohn gi ngm ¡ vào s nxu LH nn ad ä vào k thu tnudic y môcóth duy tỉ vàb oqu nnhỉ ugi ng cây tr ng quý hỉ m đ ph c trắng gỉ ng cây tr ng H0]

Hi nhay, cácc s nghiên uv gì ngcấytrênh gì ¡(v nông lâm, cây ăn trái, hoa kí ng, cây! ng th e, cây công nghỉ p )h unh —n ¡nào c ng có phòng thí nghỉ m nuôi cây mô the v L vì đây làm tÍ (th r t1 nd các nhà khoah e ngd ng và nghiên

© ueác k thu tm i, ede gi ng cây m ¡ có năng su tvàch tÌ ng caoh n, cung c pd s

1 ng] ngi ng cay wong th ¡gian ng nnh L

Cây thântholàd it ngd utiênd cs đ ng trong nghiên c u vỉ nhân gỉ ng Saud th pk phét tri ne ak thu tnudic ymdt bioth c v 1k thú t nuôi c y mô cây thin th od c hoàn thí n khá đ y d Trong th p niên 90, cây thân g (cay dn tai va cy rng)d có chỉ chú ý,nh mm ctiêu ngỏ ngnh ngk thu thi nd ic acéngngh sinh h eth ev Lvào € ¡ thì n và nhân nhanh các loài cây ăn trấi thân g_ và cây tr ngr ng

cố giá tr kinht cao nh chủ ¡ mía, cà phê, c d u, khoái tây, cây ấn quằ „cây có múi, và

m ts loài câyr ngnh thông (Pius radia), cây b ch din, cay h ng, cây d u rái M L

sn enghiéne uv hin ging tinh in vitro ely thin g nh

Bene nh cae nghiénc uy cay thin th o vacy thing ede edy z mựng pm m

© ng 4c quan tâm nghiền c wđ_b of n và khôi ph c các ngu n gen quy dang có nguy ¢ tuy fch ng Các nghiên c u đ u tiên v nuôi c y mô câyr ng ng pm nh a

Onizuka di cg ng tầm ra ph ng phap t 0 m6 s 0 c a các cây V t dù Bruguiera không tÌ nh công

- Năm 1996, Akatsu etal digi đ cmôs oc acâyB nữ ng §ømcrutia diöa trên mỗitr ngMSb sungm tl ngeh tkich thich sinhir ng va34%d_ ngsuerose, nh ng

vi cnghÊnc uc ngch d ngÌỉ đó

-Tih ingh qu ct v sinh v tvà sinh thấih cr ngng pm nt ch et iKuwait năm 1998, Sudhersan et al đã đồng phôi c aciyM-m i Avicennia marina dm ym m thành cây con trên môi tr ng MSM ho e to thành mô ø r ¡ dùng ch kích thích sinh

tr ng o ra nhỉ uch ¡non sau thí gian 3 tháng, tuy nhiễn không có chỉ te th nào

Ti ptheocéekh id ud6,céenghiéne uy nbn gi ng cdyr agng pm nin virro ngày càng equan tim vad td em ts thành vụ:

= J cousins, P Saenger có d tài nghiên c uv cây Mm i Avicennia marina, Kt

gu choth ymoitr ng 12MSvamditr ngBsthichh pehos phatti meh icdyM m

js d ngkinetin vANAA thich h pchos phéti n in vitro câyr ngng pm n Ngoài

tạ, ví cb_ sung thém 150 ho © 400mV/L.n cd a gitp choch i phat tri nt thn

~ A.Manickam, U Ramachandra, P.rajaram có đ tài nghiên c uy nuôic y mô cây giá Excoecaria agallocha L.,k tqu cho th ych Ì cây có th phát tí nt tiưên môi tr ng MSM (Modified Murashige and Skoog), b sung NAA 541uM có 89% ch i phat tri nt t

b sungIBA 2.85ho ¢5.7IyMt I ch iphétiri nl nl t1a 86% va 86.5%

= V Vartak, M Shindikar ¢6 4 tinghiéne wv ph ng php nhan ging in vitro cây V Cir Bruguiera cylindrica L k t qu cho th y uén moi ng MSM (Modified

“Murashige and Skoog) ch i phit i nt th n mdi tr ng MS (Murashige and Skoog) ¢ i 87%

122, Vi tNam

K thu tnudic yinvitrot bioth ev tdi.d cại (thí uyàon ctat nim 1960

mi nNamvad woh ngnim 1970 mi mB enh ngth es phittsi nt nim 1980 K thu tmiyd es đ ngr ng i cho m cdich nhin gi ng,b ogu angu n gen cây ng

Hi n nay, Vit Nam đã mudi y thinh eéng m Lx lo Ì cây thâng ø m có: cây ăn trấ nh : cam, quýt, nhân, mãng L và m L loài câyr ng nhị b ch đần, các loài keo, giát „c mlai, do b u,anh đào, cây hông, cây d đái Ngành nuôi c y mô Vi Nam hỉ n

44 thoát kh Ì giải đo n phôi hai © ä nó và đang chu nb nh ng dóng góp tích © e vào lý

lu ninh € vàth ett ncay te ng Nong Lam Nghi p 19]

Céenghiéne uy music ymin virob ed ud td enbi wthinhe u,gidpcung

© pngu ngi ngeaytr ng,botnd c uw ngenguye am ts loài có nguyc tuy t

ch ng Tr n Văn Minh đã kh o sắt s 1 occh ¡trên cây thông đ 7axug wallichiana Zuce hpnh Ls chítora3ch Ưm uc y, góp ph nb ot angu ngen quy cay thong d đang có nguy c tuy tái t

Kh u Minh Hoàng dã kh o sắt thành công st och Í và nhân chỉ cây Thi Nam

b Fagraeacochinchinensis A.Chev ten moitr ngWPMb sung BA 0.5mg/L và mg/L, góp ph nb o1 n loài cây g đang có nguy © ty tch ng nay [8] Nguy n Th Xuan Tho tod cchi

nách tên mỗi tr ng MSe bab sung-4mg/l ‘ay Bao bp Adansonia grandidieri L ch ¡ đ nh và đo n thân mang ch i KIN +0,1mg/L NAA, g6p ph n nhân nhanh

gi ng Bao bép—m tlodicdy quyhim n cta

Ngoài ra, còn có r tnhì nd tài nghiên c 0v nuôic y mô úr viø thành công trên các loài cây thân g khác

13.8 nym minvitro

§ nym mlàtoànb cécquétinh btdut s tihpthun ce ahtehoti

s lir mmrakh ibt DO Tho td gti ptesinh tr ng ¢ aphoi khiv ht thoái hóa và cây con nhú lên H tdang ng chuy n sang tr ngthái n ym mle m t qué

trình bị n đ ¡ sâu s e nh ngnhanh chống v_ thành ph n sinh hóa và sinh lý X y ra tong

h tháo g mị

Sw bind i sink héa: I$ ting d tng tho td ng th y phan x y ra trong ht Céch pch td tr oh tinhb t, protein, lipid, b phan gi i thanhd ng dn, acid amin, aeid béo đấp ngchos n ym m

cSự bí m 4 Í sinh lý: Bì n đ Ì sinh lý đ € ng nh tương quá trình n ym mia

© ngd hôh pe ah tiăng cao

Sự thay di ham 1 nghormen: Khi h tn y mm, š tng h p GÀ tăng đ ng

th ihàml- ng acidabsieie(ABA)gi mứ n[9],[H].[IM]

Htnym mứn vo cóth des dngtrctipd Có cây con ph cv cho nhân gỉ nghocđ cs dngnh làngu nvtliugiánpđ nhân nhanh s1 ng chỉtosot cácb phne acâym mnh lấm m.tr d ¡lắm m § nym mứt

© ah tngoài 4 nhiên Ð ngth i, edy m min wizø e ng làm tngu n nguyên lỉ u s ch thích hp cho nhân ging in vitro,

13, ey ut ohh mgd ns nymmeaht T3L1.Y wt bên ngoài

n eclh ng Binh ng ey th y sinh

Nb nglo ih tkhée nhaw thie6s Ung vat 1 th ma ekhde nhau,T 1 thm nce ngph thu cvionbi td Nhitd cingcaothit] a ym meang g tăng

D mcéth ohh ngtis mymme ahtDuyuid mthichh pehos ny

m mcóth r tkhó khăn Vìs n ym mx yratrên môitr ngth ngxuyêncós giao

đ ng nhỉ tả và m Ngâmh từ c khi gieo dôi khi có tác d ngkh is n ym m và rit ng nth ¡ gian c nhỉ tcho cây m mnhú rakhidCTh ngcóx lý cho nh nghị

e611 nym mth pho cc6 htqué khd, Tuy nhign,n ngâm b trong th i gian i c6th Bmtnth nghtvadnd agi mt ln ym m(lh(13]

* Ánh sáng

Anh sáng có vai rò nh tử nh trọng s nym me ahtMts htnymmd c

e trongt iđ nngoài sáng Nh ngcónh ngh tchn ym m tongt iho © ngoai sing

cu nhh ngc aánhsánglềns nym mth ngápd ngchonh ngh tm ithu

ho chà tong đi uki nthosng khi visaum tth igian] wir kho,h ts bm tho exu t 4hi n tính nh y sáng sov ingu ng ce ah t{9], {14}

13.1.2.¥ wt bên trong

“vane

thmn cvakh6taod i khí V hì Mts h ted ¢ ng diy nênth ng khong

toram ts ce my tlychos tr ngn cc at bào ưong phôi và nó quy tửnhs tăng daic ar m msan đó e ngc av h thayđ ¡tùy théo mùa v vadiuki nchine a

Ð cóth nym m.h tphitíchlyd yđ các ch Le nthỉ tcho s nym mvà

ph itr ngthành v m tsinh lý, có ngh alàh tph ỉ chín hoàn toàn và không qué tu ith

§$ tr nghành e ah Lkhôngd ngthiv is tr nghành aqu nh nge ng cóm (

s loih tehínr ts mvàcókh năngn ym mngay trong qu (h Ð u, mít ).C6 nh ng

tr ngh ph tđãchínnh ngự pdi ukỉ nb tÌ ¡(v quấc ngho c phôi có nhỉ uch te,

ch nym m )thìh ts divào t ngưháth u miền

Ng clinuhtquétu ith this mtkh ningn ymmTu ith cab thiên 4đ ¡ khác nhau nh ng th ng lién quand nb m ch théah ce ach td w [9] 14.8 toso

Mô so là đám t bào không phân hóa, có đ c tính phân chia m nh, th ng d ©

tora đo nh ng xáo tr n trong qué tink toe qu: nh LÍà tong s or Trong nuôi

© yinvioth ew ts xiow no6th x yrad icácdi uki ndcbitnh s tovt

th ng x lý các ch tới u hòa tăng tr ng the V t làm cho các mô hay c quan đã phân hóatr nênph n phân hóa (r cáct bào c a mô phân sinh) vàb tử u phan chia S xáo tr nnàyd x yrah n_ các mô còn non so v i các mô đã già

§ Lo mô s o liên quan đ n ủnh tr ng sinh lý c a mô nuôi c ÿ, liên guan t ivi es

4 ng auxin riéng 1 hay ph ih py icytokinin,b nch tvan ngd e a auxin Trong quá trình to mô s o,mOs oth ngxu tphátt các trfv te td e theoh th ng m ch Cie lo i auxin th ngứ cs dịngđ to môso,c ng có nhìu tr nghịp

ph icés kth pauxin vacytokinin, Khitingn ngớ auxinlàm tăng s to môs 0 Tuy nhiên khi s d ngn ngd caothìmucyth ngeó nhh ngb đc,nh mos os

b hóa nâu, di u này th ngàmgi mkh năng ti sinh ch it mds o M€ đù kh Ì môs ocób ngoài nh m Lkh ¡1 bào ng nh (nh ng trên th c(

©utúce achúngt ngớ ¡ph etpv cấcb nch thình thấi sinh lý và đi tray n Phân chiat bào không x yrav itoanb kh it bào nuôic y màch xyrabandu khít bào sinh tr ongn mtil pt biongoai m t.B_ ph n bên trong € a mô s 0V n duy tì

tư nạ thái không phân chía và duy tì đ e đi m sinh lý, di truy n khác v ¡kh it bào m ¢ Ted phan chia c al pt bio bên ngoài gi m xu ng và trên kh i md s 0 xu t

biob hoch nh ngkhuy et bio nh td nh 13], ngồi

hí neácunh dos phan chia

U7

14.1 Cécy ut môitr ng nhh ngdns toso

* Vô trùng m ue y

Ph ngphấp ph bì n tong vô trùng m uc y hì n nay là s đ ng hóa ch t có

kh năng tiêu di Lvi sinh v 1Ð tăng tính linh đ ng e a các ch tửi tkhu nàng ita fotoflo, teepol ho e e6 th x lý phihp vien 70% NAOCI và Ca(OCD2 hay

de ding vì chúng cóm ed dc tinh th pd iv im u,RhOnge6 bi whim ech sinh ong

* Các thành ph nvôc trongmôitr ng nudic y

Thành ph n vô c bao g mác mu ¡ khoáng (c đai ngvàvi! ng)d cda vào môi tr ng nuôi c y Nhu c uv mu ¡ khoáng e at bào và mô th cv tách r 1À không khác nhỉ u so v ¡ yêu c uc a cây trong đi uki n4 nhiên Trong thành ph n mu i khoáng dai ng, ede nguyént © m ph i cung pla nit , phospho, kali vas L Nit voc ded avào môitr ng hai d ng: nitrat (NO3") va amon (NH4*)

Đa s các môi ngeó ch a d ng niưat nhỉ uh n d ng amôn Tuy nhiên cân

b ng sinh lý € a hai đ ng ni nói trên đív ¡ sinh tr ngưí uc ä các löàith cv t

là khác nhau.Trongs các nguyênt c amôitr ng.nit cóhàml ng] nah t Phosphoth ng đ cđ a vào môitr ng d ng mu ¡ phosphat và hai lo ih p

ch thay đ_ c dùng nh tÌà NaH2PO4 và KH2POA

Kalid ccunge pchomôitr ngd id ng KNO3, KCI va KH2PO4 Yêucuv mu ¡khoángvil _nge amdth cv tương nuôic ykháph ctp và

đ cnghiêne u.Tuy nhiên rong nhỉ ulo ¡môitr nge bndid cxayd ng, cde tic đíhthúcđ ys sinhtr ng va phittri ne amu nudic y

S tla nguyen t vil ngd ed avao moi te ng dng mu i Fe$O47H2O, Fe2(SO4)3 nh ng chúng s b ktta và m u nuôi e yr Lkhóh pth cfc loi mui này Do đó ph ¡ cho thêm vào môi tr ng nuôi c y Na2EDTA (Sodiumethylenediamine nudic yh pth d- ding [9], (13)

* Các thành ph nh uc trong môi tr ng nudic y

Các vitamin I nh ng ch thuc tham gia vào c w trúc enzym và cofactor ¢ a nhỉ ph n_ ng sinh hóa Quantr ngnh t]à các vitamin nhóm B Ngoài ra còn có các thành ph nh ue ph ch pd_ c dùng trong môiŒ ng nuôi

©yd cũng e p thêm nit h wc , amino acid, vitamin và các khoáng ch t Ng Ít

xác đ nh không đ L

deck Cqu mongmu ny sinh tr ng vaphateri ne am unghiênc u Nguahuc phch pth ngd cs daglin cd a Trongmudic ymovat bao th evtth ngs dagn et qu bánht vàqu d a gi Thành phnc an

d a khé phong phú nh c6 ch inositol và các ch t thu © nhém cytokinin nh zeatin Cée thanh ph n nay ¢6 ham 1 ng thay đ ¡, khác nhau gỉ aqu non, qu già, th m chí khác nhau gi anh ng qu cingd ti Viv y,n cd ä làm thành ph nph chỉp không xác đ nh Hàm ngs dnge an ed a: 10-20% (viv) [9], [13]

“Tác nhân t o gel quy tdinh tr ng thai V tý © ä môi tr ng nuôi c y Ch tt 0 gel

4 cs dngph bin I agar (th ch) g mm ts_ polisaccharide có kh il ng phẩnL cao,d- el yt rong bin Trong thinh ph ne aagar e6 ch am ts thành ph nvOe :Cu,

Fe, Mg, Ma, Cl, Zn vim ¢s thanh ph nh we :axith we, axit béo chu i dai, Ham

1 ngs d ngc aagar05- 10% (w/v) ty theo ch tl age aching vilo imditr ng

sd ng (9), (13)

>pHe amôitr ng

pie adas efe moi tr ng nudic yd edi u chnh trong ph mv = 60 pHd i 5,5 làm cho agar khó chuy n sang tr ng thai gel, con pH I nh n 6,0 agar có th rte ng,

“Trong quá trình nuôi ¢ y, pH € a môi tr ng e6th gi mxu ng, dom ts mu

th cv ts msinh racic axith we [9], [13]

* Tính th mth uc amôitr ng

Quá tình h pth n cc at bào và môh cv tương nuôic yb chi ph ib ith năng can cương dch bào và rong môitr ngdĩnh d ng Các thành ph nchínhcó nhh ngớnth năng an cườngmôit ng bao g m

Hàm! ngd ng Hàm! ngủ ng cao môitr ng ykhóhútn © Hàm

| ngd ngquáth plàm tương nh ng nguyên nhân gây ram ngn “ch ytinh th)

© y,đây làtr ng ichinh cho vì cchuy ncâyt ngnghỉ mrav n m Hàm ng agarvàm rà thànhpph nmu ï khoáng

Tính th m thue a môi tr ngớ c bì tguan tr ng ong: Nuôi € y md s 0, nudi

© yL bào đ nvà huy nphù dụng h p và nuôi c yL bào tr n9], [13]

*L ach nm uey

M u ding cho nuôi ym6-( bioth ev te6th Kh uh teéee quan hay

ph ne acdy:ch ing n,ch i bén, phi nl cu ng lá các e utrúc © a phdi (li m m,tr Mim m, sefe ¢ quand t (© , ein hinh ), Cée © wirie th ev Cd © bao kin (a

im m, phoi, mo th trong qu ) th ng không ch aho © 66 f visinhv «Ng el i, ede m6 vie quanth ev ti pxievin edtnh r„e, thânng mth ngói ng vi sinh v Lr teao vàr tkh6 lo ¡b_ chúng hoàn toàn chúng kh ïngu mw (Các © u trúc mô khác nhau trên m t cây có th_ cho các k tạu phát sinh hình thái

khác nhau, v ¡kh năng Lo ch ỉ.r hay mô so Mô nontr mid chình tình có s phn ngvi các dì u kỉ n và môi tr ngnuôi c y nhanh, d tái sinh, đ c bị tà trong nuôi y mô s o, phôi, đ ng th im cứ nhĩ mm mb nhíth n Kíh th cvàv trímue y: mu có kíh th c cà ng nh càng khó nuôi e y,

Th ng uénedy,m uv wieaos e6itm mb ahh n(9}, [13] Trì đ (i6 m m làm tương nh ng loimdd es dng th ng xuyên Hong nuối e y mô Đây là ngủ nv tỉ u cóth đ to ra trong kho ng thí gian ng n thông qua ví e nuôi e yh in vitro D ng th i d@ ikim me ngeéth đ ng nh tcác

đc ứnh sinh lý e ä mô v đ tuicamuey - cây Senna occidentalis, wong môi

đu có kh năng bì thóa to ch ¡ trong khi mô s o hinh thanh t 1 cay in vitro không h

tod echi

* Ánh sing

Các mìu muỗi e yth ng đ cổ tương nh ng phòng nuôi e y n đnh v nh sáng, Ảnh sáng tác đ ng ns tăng tr ng và kh: năng phát sỉnh hình thấie at bào tri neó nhủ c uvành ngdấp ngkhácnhauv it nglo lánh sáng,c ngứ vàth Ì gian

cây là l6 - 18 gi sáng hay ít h n [9], [13], [14] [L7] Tuy nhiên, khi nghiên c u s

nym mténm ts Git ngchoth ychi using 24 gi Iti w cho nudic yin vitro

Jualang, A.G cs (2014), nghiénc us nym mva phattri ne acdycon Lan

Vanda (Vanda dearei), nghign ¢ ud cth chi nd idi wki anh sing 24 gi (23) Pereira, MJ es (2012), nghiéne ws nym min vitroc ab nlodithod © Gch u quad oAzores,k tqu nghiéne uchoth yhtd cchỉ using 24 gi thìth Ì gian h tlúr $ mình t(6/0 #2 ngày), th igiann ym me ngs mah (103+

05 ngày)vàt lnymm ngàyth 35 (73,0+ 5,6%) không có khác bi tý ngh a so

Các loi auxin khác nhau đc tìm th y trong + nhiên là IAA (indole-3-acetic acid), IBA, 4-CLIAA (4-chloroindole-3-acetic acid), PAA (2-phenylacetic acid) và các dng kth pea eée auxin ly Ngoài rà nhỉ u đ ng đ ng hóa h € khác © a auxin

cngd ctaghp Mts dagauxinth ngứ cs d ng tong nuối c y mônh NÀA, 24D (24#dichlorophenoxyacele), 2.45-T (24.5-tichlorophenoxyacetic) dicamba 2-metoxy-3,6-diehlobenzoic) và 4-CPA (4-chlorophenoxy acetic acid) Ausin kích thích s kéodầit bào di ptiêu vat bio vùng kéo đài d ing me a thân § kéo đit bàor c nnh ngn ngd thph nhí ú so v ¡t bào thân Trong bái tr nghịp-hì u ng auxin gì m sau m tn ng đ thích hp và tr nênđ ng

ens tăngtr ngc acács kh inày n ngđ cao.auxinkh iđ ngs hình thành các bên (nhánh) và r ph Cácr bên xu thí n bên trên mi n dân dai và mí n lông hút

và có ngu ng ©L các nhómnh cáct bào trongtr bì Auxin kích thích các L bào tr

bì phân chia, Các t bao dang phan cl nt o nên đnhr vir bin sinh eng xuyén quay va bi ub) Cie r ph (© e6 ngun ge Khng phít môr) cóth xu chỉ n trong r tnhỉ weée V tí môt cáct [pe acéet biot ngthinhy ntdit om ihot tính phân bào e a chúng Các bào dang phân chia y phat tri nthdnh md phan sinh d nh + theocách nào đốt ng tv is hình thànhr bên

Tay theo lo Í auxin, hàm] ngs d ngvàd it ng nuôi c y mà tác đ ng sinh lý © a auxin là kích thích sinh tr ngc a mô,ho thớas hình thànhr hay thúc đys phân chia m nhm e at bào d nở nhình thành mô s o.§ Lo mô oin vitro, oh auxin, thu ev -m (trong ba quá tình

~§ phn phan héae at bionhu md (inhi w siubén trong.e quan): hu m6

m eva libe, nhu m6 v_ hay Id

S phân chia at bàot ngữ ng (t ng phát sinh libe — g )

§ xáotrne acác mô phân sinh kh i(ch ihayr )

Trong quá tình hinh thinh skh ir bt doh, s dng NAA, IAA hay IBA thị ngớ thì uqu caoh n24-D Tuy nhiên, tác d nge a auxin ngo i sinh lén qua tinh

hình thành c_ quan còn ph thu c vào tr ng thi sin Iy va ham 1 ngcác ch tdi u hoa

ting tng ni sinh ong mô e y Đi u này có th gỉ ¡ thích là do trong qué trinh này, chuy nd ¡ thành IAA làm IAA n ¡ sinh tăng cao, kích thích s hình thành rb td nh [9], (1 U8)

Jitendra Gopichand Patil vac ng s (2012) khi nghiéne un ymmeahtea loai Digitalis purpurera L dk Ulu a:b CCL Lom ym meao nh ¢ (81,04 31%) Khi

4 cnuôic yuên môitr ng M§cób sung 1,75 mg/l IAA [22] 1.4.1.2 Cytokinin

Mô phân sinh ng nr làn itnghp ch y wcéecytokinint do choc © th thev ĐT r,eyokinin di "hủy nương m ch m e ti ch i Tuy nbign, ede ch i (ed hua) va phoie ng lan it ng h p cytokinin [11]

Cytokinin e n cho phân bào e a các t bao in vitro Cytokinin lién quan d n s phá ng © a ch Ì vàh L Đã có nhỉ u nghiên uv tác đ nge a cyokinind ïv is n y

¬¬

Ht lan Hoàng long (Coelogyne lawrenceana Rolfe) nym mt th t trên môi

yI5I

n ym m cao (65) khi

tr ngMS+15%(vlv)n củ a+2.0 mg/l BA sau 38 ngày nuôi

~H te ä loài Butea monosperma (Lam,) Tauh đ từ

đ cnuôie yưênmôitr ngeớb sungBAPv in ngd I0mg/l- đây lànghi mth c cốt In ym meao nh tưng các nghỉ mth cd_ ckh o sit (26) Cytokinin kich thích s phân chia bào, s hình thành và sinhtr age a

ch iim vitro (Miller, 1961) Tuy nhiên, m te nghiên uchoth y, đôi khi, cytokinin

tr ngkhông c6 auxin (Nemeth, 1979).G noh trongt te céctr ngh pnghiênc u,

n ngđ cylokininth pđãc6hi uqu trong vi chinh thanhr Vid :Ch iC cid

đã hình thành r_ trên môi tr ng MS ch 0,5 mg/l kinetin (Konwar and Cuotts, 1990): +or cho cây Dâu tây và m tà cây thân g ¡loài

Rosa hybrida di có s c m_ ng và phát tỉ nr trong môi tr ng có b_ sung Ï mg/l BA; cay Linum usitatissimum L tomdso,chivar td ilémme a

cay m min vitro 6 ngay tu id Lt 1 cao nh ¢ (92,6 %) khid © nudi y trên môi tng MS c6b sung 1,0 mg/l BAP Jowita Janowicz & es, 2012) Theo Werner et al, (2001), 8 bi whi nquém ce am ts gen cytokinin oxydase trong cây thu c lá làm,

do gi mthi ut cd tăng sinh ong mô phân sinh đ nh cành Chính s bỉ u hi n quá

m ce acytokinin oxydase trong cay thu clid nt im ts giatngsinhư ngc ar Lis}

‘Skoog va Miller (1965) đã ch ng mình khúc e t lõi hay mô s o thu e lá to r hay chi tay theo t© 1 auximeytokinin trong môi tr ng nuôi cy.T 1 auxin/eytokinin cape m ngs hinh thanhr ;t 1 auxin/eytokininth pe m ng hình thanh ch i vat i các m_e trung gian, mô sinh ong nh là íc mô s o ch a phân hóa

Nh vy.cytokininh tr auxintongs tăngtr ng nhngdngthicngeós đi

hing gia auxin (giúps tor )vàcyokinin (Giúp s toch 0;$ cân ngại ahaiki u homon này làm tương nh ngy ut kỉ msoáts phẩttỉ n[H],[IR] 1.4.13 Gibberellin

Ngoti 2 nhém chinh fi auxin vi cytokinin, rong nuối c y mô vàt bà th cv tng i tacòns d ng thém gibberellin dich thich s kéo dait bdo, qua dé lam ting kíchth ¢

sibberellin, d nh sinh tr ngth hí nm tở ng hình u,t o nên các m tcây [11] Gi

lo igibberellind es ở ngph bị nnh t

Ch ng2.ĐAĐI M-TH IGIAN,V THỊ UVÀPH NGPHÁP

Dadi mth enghi m: Phong thi nghi m Di tuy n—'Th cv 1 phòng thí nghỉ m

Vi sinh — Sinh hóa và phòng thí nghi m Sinh lý th e v thu khoa Sinh h cứ ng Di heS ph mthinh ph H Chi Minh

Khúc c tứ d ilám mịc a cây con 4-7 ngày tú ïn ym m trên moi tr ng

MS +NAA 3,0 mg/l dung d kh o sits phéttrincakhisot wd ilimm

‘rong moi tr_-ng MS e6b sung NAA, BA rigng| ho © k th p

L.2

Mình 2.4 Cây con 4 - 7 ngày tụ ¡trên môi tr ng MS + NÀA 3/0 mg/l Cây con 4 tu nhu n ym m rên môi ng MSđ Lyte di lém m ding trong tht nghi mt os lite t

2222.D nge

ng dong dung tích 25, 100, 250, 500 và 1000 (ml); e ¢ th y tinh dung tích 100,

250 (ml); pipetman: 200, 1000, 5000 (ul) và b du tuýp t ng ng; đền c n: mu ng cân hóach bđ ath y tinh; gỉ y nhôm; gì yÌ e

Kim m i nbn; kim m ¡ mắc; k p g pm u lo ¡ 13 em, 35 em: bút lông; dao phu

thủ t; khăn lau; đ a peti; đa đ ngh ;giád ng ngnghi mạr nh a, 3.2.2.3 Hóa ch thí nghỉ m

€ n700, 96'; dung dich javel; tween 20; acid acetic; carmin — phèn; xanh

Minh 26,Qu Coed that v ns ut pth ev tC nGi

X qu :Qu lyy phikhot nhiên, sau đó đếm bée 1 pv qu (i vay h ch

© ng),téch | yh tvà ch n1 y các h tch e,lo ib eich Clép,h th

Hinh 2.7 Qu Céed dibsel pv qu ngodi

~Kh trùngb m.tv ¡e n70! trong 10 giây, có thêm vài gi (Tween 20d tăng

b mtti pxtice ah ty ihdach t

Rali3inbngn cc Lvôtrùng,

2.4.1.2 Kh trồng h tb ng HạCl:và b ng javen

Thí nghỉ mkh_ trùngh tb ng HgCl;

Minh tđã qua khâu chủ nb đ ckh, trùng b ngHgCL; lo y 1th ¡gian 60 giây,

40 giấy và 20 giây R al ib ngn ec Lvô tùng M ¡ thí nghỉ m tủ n hành 6h t,l pÌ

31 n Theo đõi thí nghỉ m trong 3 tu n, tính 4 Ï h tnhỉ mh tch tvàtÌ n ym m Thí nghí mkh_ trùngh (b ng NaOCl

Muh tdiquakhduchunb d ckh trùng b ng Javenv icácn ngử vàth i gian khác nhau, N ngd Javens dng n1 tÌà 100%, 80%, 60% và 40% Th ¡ gian khosát tgn ngd In1 tlà5,10,15và20phút R alibagn cc tvô trùng Thí nghỉ mg m l6 nghi mth c,m inghi mth c t nhành 6 h 1p] ¡31 n, Theo dõi thí nghĩ m trong 3 tu n, tính LÍ h tnhí mh tch tvềt Ì n ym m

242.Ph ng phapkh osit nhh nge amôitr ngnuôic yiêns ny mme ah tCéed

24.2.1 Méitr ng dink dng khác nhau

HtCécd saukhid cv6tingv inghi mth ckh winge enh ts d ccy vào môi tr ngdinhd ng MS, MSI 9 MS1/4 va WPM Thi nghi m g m4 nghi mth c

mm inghi mth c4i nhinh 10h 1 pl ¡ 31 n, Theo dõi thí nghĩ m tong 310 n, tinh ¢ 1 hin ym myath igiana ym m

2.4.2.2 Ham |g agar khée nhan

HCéed saukhid e vô tùng v i nghỉ mth ckh trừng tnh ty đ ccy

ng agar 7.5 gi, 8 g/l va 8.5 g/l Thinghi mg m3nghi mth c,

m inghi mth c ti mhanb 10h (1 pl i31 n, Theo d6i thi nghi m wong 3 uw n, tinh t 1 btn ym mvath igiann ym m

vào môi tr ng MS v il

24.2.3 nth nge ath igian chi u sang trong nuôi e y HtCốc đ sau khid © vô tùng v ¡ nghỉ mth ¢ kh tằngLtnh tý đ Vào mỗi tr ng MS v il ng agar 8 g/l ong cfc di wki n chi u sing 8h, 12h va 16h trong cey 24h Thí nghỉ mg m3 nghỉ mth c,m inghi mth ti nhanb 10h «1 pl i31 a, Theo đối thí nghỉ m trong 3 tu n ht btn ym myath i giann ym m 243.Ph ng phapkh osit nhh nge am ts ch tkich thich sinh tr

th cy thins nym me ah tCécd

H (Cốc d sau khi d

ng

© vô từng v ¡nghỉ mth ckh wingt tnhts d vào môi tr ng MS + agar 8 g/l (chỉ u sát

Thí nghỉ m g m 23 nghi mth c,m inghi mth ctinhinh 10ht1 plisia

“Theo đõi thí nghĩ m trong 2,4, 6t n, tink 1 h tn ym m vàth igiann ym m 2.444.Kh osátkh ningt os ot lite tmngtr d i Cácm uláue tb nm ngư đ ilimme acéyCéed sau 4tu ntuinym m

Tm-vitro d ec y vào các bình tam giác,m ¡bìnhch aSm uc y,m inghi mth es dng

6 bình nuôi c y Kho sét kh năng Lo so e ä lám m trong môi tr ng MS cób: sung ngl ho ck th ptheo b ng 3 Theo doit 1 (%) so hinh thành

ned a, 24D,NAA ri

vad cdi ms o cic nghi mth esaudu ava Stun,

Bong2.3 nhh nge a24DvaNAAlénkh ningt os oc alite tm ng d ikimm,

MS+lS%n © | 24-D

da

2⁄45.Ph ng php kh oséts phéttrinc akhisot t d ilimm trên môi tr ng MSc6b sung NAA, BA riêng ho ck thp 24.5.1.Kh o sắt nh nge aNAA

Khiicc te d

MS +NAA 30 mg/d © chuy n sang mditr ng MS c6b sungNAA _c ám mẹ acây Cócđ sau4-7 ngàyn ym m trên môi tr ng nngd

khác nhau (B ng 2.2) Thí nghỉ mg m6 nghỉ mh e, m ï nghỉ mìth e dong 1 binh tam giác th tích 100ml, 3m uưbình,l pI ¡31 n

_

Hình 29 Khúc c tư d ¡lầm mẹ acâyCócd con4-7ngàyt Í

B ng2.4.Kh 6 sát nhh age aNAAléns phittine asot wd ilimm Nngd NAA (mgi) | N ngd NAA (mg/h

245.2 Kh osdt nhh nge aBA

Khúc c tứ d ikimme actly Coed sau4-7 ngày ym miưển môi tr ng MS+NAA30my/ld cchuy nsangmôiŒ ngMScób sungBA các ngử khác

th tich 100 mi, 3 m whinh,1 pL i31 n

B ng2.5.Kh osit ohh nge aBAléns phittri neasot tr d ¡lầm m Nngd BA(mg) | Nngd BA (mgf)

0

Di wki mnudic y:Nhi td 25+2°C,e ng d chi using 2000 +200 lux, dm

70 10%, chi u sang 16/24h Theo đối s thay đ ¡v hình đáng, mau s ¢ va sinh kh is o camue ysaudm a

2453.Kh 0 sit nh nge aNAAK th py iBA Khúc ctừư d ilm mẹ acâyCócđ sau4-7 ngàyn ym miưễn môi tr ng MS+NAA3,0mg/ld e chuy ngang môitr ng MScób sung NÀA k thpBA_ các Đình tam giác (b_ ích 100:mi, 3 m u/bình,Ì p1 ¡31m

B ng 2.6 Cicnghi mth ckh osit nhh ngc aNAAkth pv [BAIêns phát wincasot td ilimm,

24.5.Ph ng phép gi iph u hinh thái

Tin hinh gi i ph u,nhu mkép ede m unudie yr i quan std i kinh hi n vi

đ xác đình ngu mg phitsinh més Oc acéem we y Quy tinh nhu mképd c tin hành theo Tr n Công Khánh [13]

2.4.6.Ph ngphấpx lýth ngkệ

Dùng toánth ngkêd x lứcács li uthud cvà ngd ngh ngkêtoánh cương sinh h e,s d ngph nm m Excel 2007 và Siatgraphies plus 30đ x lý các s lí u § khác bị tcó ý ngha m cm c95%c acácgiáu d ch hìnb icácch s (1,2, 34 ) hay ký hị ch khác nhau kèm theo

Ch ng3.K TQU VATH OLU N 3.1 Vô trùng h t Cóc đ

Vô tùng h tCóc đ lầm tb_ € quantr ngử đ mb o ngu n nguyên lì u s ch trong quá trình nuôi e y cây C6ed in vitro

311K tạu v kh trồngh LCócŒ b ngelorua th y ngân Bng37 ohh nge ath igianx IHgCllZelêntl nhỉ mvà s nge ah tCócđ

Quak tqu 6 ng3.7 choth y, khikh tringm wh tb ng HyCl I%e trong 40 và

60 gidy thi m u không b nhị mvàt 1 s nge ah tử ucao.Tuy nhiên, nghĩ mth c3 khi theo đối hình thái cây con sau 3 tú nđ u có nhỉ u d đ ngv lá m m và không phát sinh r.K tạu nghiền c u này phù h p v í nghiền c ue a Xuân (2014) khix lýht Coed b ng HgCh: 1%

3⁄12.K tạn v kh trồngh Cốc đ b ng Javen

Du tên, chúng tôi ú n hành kh o sátkh năng kh tinge aJaven eden ng d

vàth igianx likhéenhau,k tqu thud th hi nquab ng 3.8,

B ng3.8.Kh ositkh nang kh wing c aJaven kn t Coc d

SH Lần, Stim XE yf] Bm XHm sen | ot

K tqu nghine ub ng 3.9 cho choth y,th i gian kh thing 15 và 20 phút tte cécn ngd Javend ckh osét,h td wkhéngb ahi m Bi wnay ch ngt th i gian x lícàng lâu thìkh năng nhỉ me ah tcàngthp NTI (a ngd Javen 100%) tức các NTh Lử u không b nhì m, NT 6(h ng Javen 805), th i gian x lí 10 phút

tả ckh hLc ng không b nhỉ m, di u này cho th y, —n ngử Javen càng cao thi trùng càng L

Ð tmraNTkh trùng thíchh p (ngoài Ì nhỉ mcòn quantâmđ n1 Ì nym m

e ah 9 cho h t Cóc d „chúng tôi tỉ n hành pÌ ¡các nghỉ mth ckh trầngh ts d ng Javen n ngủ 80%,60%,40% trong th i gian 15, 20 phit K tu thud cth hia trong b ng 3.9

ng3.9, nbh nge anngd vath igianx IJavenlént 1 obi mva nym me ah

nl (18.33% vASS56.T 1s nge ab tkhix Mv iJaven 60% 15và20phútcao

h nkhix Iyjaven80%.T efes Ii uténchoth ya ngd vath igianx WJaven nh

ho ngdach tl ngnymme ah (Coed

Qua k qu trên choth y.d iv ih tCéed thin ng d Javen va th i gian kh trùng thích h_p là 60% trong 15 phút Do đó, chúng tôi đã ch n nghỉ m th c KH, tring này d tỉ n hành các thí nghỉ mv nh nẹc amôitr nạ và các ch LKTST4 nh ý imme ah t Các đ