( TẠP CHÍ KHOA HỌC Trường ĐHSP TPHCM ) ( Nguyễn Hoàng Nhật Trinh và tgk ) ISSN 1859 3100 TẠP CHÍ KHOA HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN VÀ CÔNG NGHỆ Tập 16, Số 6 (2019) 151 159 JOURNAL OF SCIENCE NATURAL SCIENCES[.]
TRƯỜNG ĐẠI HỌC HỌC SƯ PHẠM TP HỒ CHÍ MINH TẠP CHÍ KHOA ISSN: 1859-3100 HO CHI MINH JOURNAL CITY UNIVERSITY OFSCIENCE EDUCATION OF KHOA HỌC TỰ NHIÊN VÀ CÔNG NGHỆ Tập NATURAL SCIENCES AND TECHNOLOGY 16, Số (2019): 151-159 Vol 16, No (2019): 151-159 Email: tapchikhoahoc@hcmue.edu.vn; Website: http://tckh.hcmue.edu.vn KHẢO SÁT SỰ ẢNH HƯỞNG CỦA 2,4-D VÀ BA LÊN SỰ TẠO SẸO TỪ LÁ CÂY NHÀU (MORINDA CITRIFOLIA L.) Nguyễn Hoàng Nhật Trinh, Lương Thị Lệ Thơ* * Trường Đại học Sư phạm Thành phố Hồ Chí Minh Tác giả liên hệ: Lương Thị Lệ Thơ – Email: tholtl@hcmue.edu.vn Ngày nhận bài: 17-4-2019; ngày nhận sửa: 28-5-2019; ngày duyệt đăng: 03-6-2019 TÓM TẮT Cây Nhàu (Morinda citrifolia L.) loại dược liệu quý việc nhân giống tạo nguồn cịn hạn chế Mơ sẹo ngun liệu khởi đầu có khả biệt hóa thành rễ, chồi phơi để tạo hoàn chỉnh giúp nhân nhanh giống in vitro Kết nghiên cứu cho thấy, nghiệm thức MS có bổ sung 2,4-D mg/l BA mg/l cho hình thành phát triển sẹo tốt Từ khóa: Nhàu (Morinda citrifolia L.), mơ sẹo, chất điều hòa tăng trưởng thực vật Mở đầu Cây Nhàu (Morinda citrifolia L.) có nguồn gốc từ Đơng Nam Á châu Úc (Scot, 2003) Các phận rễ, thân, lá, sử dụng làm thuốc điều trị nhiều bệnh nhứt mỏi tay, chân, đau lưng, cao huyết áp, ngủ Do đó, Nhàu nguồn dược liệu hữu ích cho ngành y học (Võ Văn Chi, 1997; Phạm Hoàng Hộ, 2003) Hiện nay, nghiên cứu ảnh hưởng chất điều hòa sinh trưởng thực vật đến tạo sẹo từ mơ Nhàu cịn hạn chế Bên cạnh đó, việc nhân giống chủ yếu thực cách gieo hạt với thời gian nảy mầm kéo dài dễ bị sâu bệnh công Mô sẹo đám tế bào khơng phân hóa, có đặc tính phân chia mạnh thường tạo xáo trộn q trình tạo quan Mơ sẹo phát triển khơng theo quy luật có khả biệt hóa thành rễ, chồi phơi để tạo hồn chỉnh Do đó, non hay mảnh thân non trưởng thành dễ cho mô sẹo điều kiện nuôi cấy mô (Bùi Trang Việt, 2000; Vũ Văn Vụ cs., 2012) Trong nghiên cứu này, khảo sát ảnh hưởng 2,4-D BA lên tạo sẹo từ Nhàu (Morinda citrifolia L.) với mong muốn cung cấp nguồn dược liệu với suất cao, bệnh, thời gian thu hoạch ngắn Vật liệu Lá Nhàu non (lá thứ hai thứ ba tính từ ngọn) thu từ Nhàu Kí túc xá Trường Đại học Sư phạm Thành phố Hồ Chí Minh (351 Lạc Long Quân, phường 5, Quận 11, Hồ Chí Minh) có kích thước: chiều dài 15-18 cm, chiều rộng 6-10 cm TẠP CHÍ KHOA HỌC - Trường ĐHSP TPHCM Tập 16, Số (2019): 151159 Phương pháp 3.1 Khử trùng mẫu cấy Lá Nhàu non cắt thành mảnh hình chữ nhật dọc gân chính, rửa vịi nước lắc xà phịng loãng Tiếp tục khử trùng mẫu với cồn 70 kết hợp với dung dịch NaClO dung dịch HgCl2 nồng độ thời gian khác Sau mẫu cấy cắt gọt, tạo vết cắt vng góc với gân cấy vào ống nghiệm chứa môi trường MS Sự nuôi cấy thực điều kiện tối, độ ẩm 60% ± 5%, nhiệt độ 22 oC ± 2oC Mỗi nghiệm thức lặp lại lần, lần 10 mẫu cấy 3.2 Phương pháp khảo sát ảnh hưởng chất điều hòa tăng trưởng thực vật 2,4D riêng lẻ hay 2,4-D phối hợp với BA nồng độ khác đến tạo sẹo từ Nhàu Mẫu cấy sau khử trùng cắt gọt, tạo vết cắt vuông góc với gân cấy vào mơi trường MS có bổ sung 2,4-D (0,5 mg/l; mg/l; mg/l; mg/l) riêng lẻ 2,4-D (1 mg/l; mg/l) phối hợp với BA (0,5 mg/l; mg/l; 1,5 mg/l; mg/l) Mẫu cấy đặt môi trường nuôi cấy cho mặt hướng xuống môi trường nuôi cấy Sự nuôi cấy thực điều kiện tối, độ ẩm 60% ± 5%, nhiệt độ 22 oC ± 2oC Mỗi nghiệm thức lặp lại lần, lần 10 mẫu cấy 3.3 Phương pháp cân mẫu Mẫu cấy nghiệm thức cân sau tuần, tuần, tuần tuần nuôi cấy Mẫu cấy cân cân tiểu li có độ sai số + 0,01g, q trình cân mẫu tiến hành tủ cấy với dụng cụ vô trùng, mẫu cấy sau cân chuyển lại vào môi trường nuôi cấy để tiếp tục theo dõi 3.4 Quan sát hình thái giải phẫu Những biến đổi tế bào học trình cảm ứng tạo sẹo theo dõi sau thực lát cắt tay, nhuộm kép với đỏ carmin xanh metylen quan sát kính hiển vi quang học vào ngày thứ 3, 7, 10, 14 tính từ lúc bắt đầu ni cấy 3.5 Xử lí số liệu Các số liệu xử lí thống kê chương trình Statistical Product and Services Solutions (SPSS), phiên 20 dùng cho Windows Sự khác biệt có ý nghĩa mức xác suất p = 0,05 (p: probability) giá trị biểu mẫu tự khác Kết 4.1 Kết khử trùng mẫu cấy Mẫu Nhàu sau khử trùng với dung dịch cồn 700 kết hợp với dung dịch NaClO dung dịch HgCl2 nuôi cấy môi trường MS sau tuần, kết cho thấy nghiệm thức khử trùng với cồn 700 phút 30 giây kết hợp với HgCl2 nồng độ 0,1% 10 phút cho hiệu khử trùng cao với tỉ lệ mẫu sống đạt 100% (Bảng 2) Kết phù hợp với nghiên cứu Elakkuvan cộng (2015) TẠP CHÍ KHOA HỌC - Trường ĐHSP TPHCM Nguyễn Hoàng Nhật Trinh tgk Bảng Hiệu khử trùng mẫu nhàu dung dịch cồn 700 kết hợp với dung dịch NaClO nồng độ thời gian khác Nghiệm thức ĐC 10 11 12 Thời gian khử trùng với cồn 700 (phút) phút phút Nồng độ NaClO (%) 0,0 0,5 1,0 0,5 phút 1,0 phút 0,5 1,0 Thời gian khử trùng với NaClO (phút) Tỉ lệ mẫu sống (%) 0,00 + 0,00a 10 15 10 15 10 6,67 + 5,77a 6,67 + 5,77a 10,00 + 0,00ab 16,67 + 5,77abc 26,67 + 5,77bcd 15 10 15 10 15 10 15 30,00 + 10,00cd 50,00 + 10,00e 36,67 + 11,55de 6,67 + 5,77a 0,00 + 0,00a 0,00 + 0,00a 0,00 + 0,00a Các số trung bình cột có mẫu tự khác khác biệt có ý nghĩa mức p = 0,05 Bảng Hiệu khử trùng mẫu nhàu dung dịch cồn 700 kết hợp với dung dịch HgCl2 nồng độ thời gian khác Nghiệm thức ĐC 13 14 15 16 17 18 19 20 Thời gian khử trùng với cồn 700 (phút) Nồng độ HgCl2 (%) phút 0,0 0,05 phút 0,1 0,05 phút 30 giây 0,1 Thời gian khử trùng với HgCl2 (phút) Tỉ lệ mẫu sống (%) 0,00 + 0,00a 10 15 10 30,00 + 10,00b 50,00 + 10,00bc 70,00 + 10,00cd 15 10 15 10 15 66,67 + 5,77cd 53,33 + 5,77c 60,00 + 10,00cd 100,00 + 0,00e 76,67 + 5,77d TẠP CHÍ KHOA HỌC - Trường ĐHSP TPHCM Nguyễn Hồng Nhật Trinh tgkkhác biệt có ý nghĩa mức p = 0,05 Các số trung bình cột có mẫu tự khác TẠP CHÍ KHOA HỌC - Trường ĐHSP TPHCM Tập 16, Số (2019): 151159 4.2 Ảnh hưởng 2,4-D riêng lẻ đến trình tạo sẹo từ Nhàu Các mẫu Nhàu nuôi cấy môi trường MS sau tuần dần chuyển sang màu xanh nhạt, phiến cứng hơn, hai bên phiến uốn cong phía gân chính, vết cắt bị hóa nâu, tế bào nhu mơ thịt có tăng sinh (Hình 1a, Bảng 4) Tuy nhiên, mơi trường MS có bổ sung 2,4-D riêng lẻ nồng độ khác (0,5 mg/l; mg/l; mg/l; mg/l), sau tuần nuôi cấy 100% mẫu cấy nghiệm thức tạo sẹo Sẹo bắt đầu hình thành vết cắt phiến lá, tế bào nhu mơ tế bào biểu bì có dấu hiệu cảm ứng tạo sẹo (Hình 1b, c, d e) Trong nghiệm thức MS bổ sung 2,4-D mg/l có q trình cảm ứng tạo sẹo phát triển sẹo nhanh mạnh (Hình 1c), nên khối lượng tươi sẹo cao có khác biệt mặt thống kê so với nghiệm thức lại (Bảng 4) Bảng Ảnh hưởng 2,4-D đến khả tạo mô sẹo từ mẫu Nhàu sau tuần nuôi cấy Tỉ lệ mẫu tạo sẹo (%) Nồng độ 2,4-D (mg/l) Tuần Tuần Tuần Tuần Đối chứng 0,00 + 0,00ax 0,00 + 0,00ax 0,00 + 0,00ax 0,00 + 0,00ax 0,5 0,00 + 0,00ax 46,67 + 5,78by 86,67 + 11,55bz 100,00 + 0,00bz 1,0 0,00 + 0,00ax 96,67 + 5,78dy 100,00 + 0,00by 100,00 + 0,00by 2,0 0,00 + 0,00ax 86,67 + 11,55cdy 100,00 + 0,00by 100,00 + 0,00by 3,0 0,00 + 0,00ax 66,67 + 15,28bcy 100,00 + 0,00bz 100,00 + 0,00bz Các số trung bình cột có mẫu tự khác khác biệt có ý nghĩa mức p = 0,05 Bảng Ảnh hưởng 2,4-D đến khối lượng tươi mô sẹo từ mẫu Nhàu sau tuần nuôi cấy Khối lượng tươi sẹo (g) Nồng độ 2,4-D (mg/l) Tuần Tuần Tuần Tuần Đối chứng 0,00 + 0,00ax 0,00 + 0,00ax 0,0 + 0,00ay 0,01 + 0,00ay 0,5 0,00 + 0,00ax 0,01 + 0,00by 0,04 + 0,02bz 0,09 + 0,01bw 1,0 0,00 + 0,00ax 0,06 + 0,00dy 0,15 + 0,01ez 0,28 + 0,01ew 2,0 0,00 + 0,00ax 0,04 + 0,01cy 0,11 + 0,01dz 0,22 + 0,01dw 3,0 0,00+ 0,00ax 0,03 + 0,01cy 0,09+ 0,01cz 0,17 + 0,01cw Các số trung bình cột có mẫu tự khác khác biệt có ý nghĩa mức p = 0,05 TẠP CHÍ KHOA HỌC - Trường ĐHSP TPHCM Nguyễn Hoàng Nhật Trinh tgk Hình Mẫu cấy mơi trường MS bổ sung 2,4-D nồng độ khác sau tuần (a) Mẫu cấy môi trường MS sau tuần; (b) Mẫu cấy môi trường MS bổ sung 2,4-D 0,5 mg/l sau tuần; (c) Mẫu cấy môi trường MS bổ sung 2,4-D 1,0 mg/l sau tuần; (d) Mẫu cấy môi trường MS bổ sung 2,4-D 1,5 mg/l sau tuần; (e) Mẫu cấy môi trường MS bổ sung 2,4-D mg/l sau tuần 4.3 Ảnh hưởng 2,4-D phối hợp với BA nồng độ khác đến trình tạo sẹo từ Nhàu Các mẫu cấy môi trường MS có bổ sung 2,4-D (1 mg/l; mg/l) phối hợp với BA (0,5 mg/l; mg/l; 1,5 mg/l; mg/l) cảm ứng tạo sẹo tuần ni cấy Bên cạnh đó, sẹo phát triển nhanh nên khối lượng tươi sẹo thu cao nghiệm thức MS bổ sung 2,4-D riêng lẻ (Hình 2, Bảng 6) Đặc biệt nghiệm thức MS có bổ sung 2,4-D mg/l BA mg/l có hiệu tạo sẹo cao Q trình cảm ứng tạo sẹo diễn sớm, phát triển sẹo mạnh nhanh nên khối lượng tươi sẹo thu cao có khác biệt thống kê so với nghiệm thức lại sau tuần ni cấy (Hình 2b, Bảng 6) Bảng Ảnh hưởng 2,4-D phối hợp với BA đến khả tạo mô sẹo từ mẫu Nhàu sau tuần nuôi cấy Nồng độ Nồng độ Tỉ lệ mẫu tạo sẹo (%) TẠP CHÍ KHOA HỌC - Trường ĐHSP TPHCM Nguyễn Hoàng Nhật Trinh tgk 2,4-D (mg/l) BA (mg/l) Tuần Tuần Tuần Tuần 0,0 0,0 0,00 + 0,00ax 0,00 + 0,00ax 0,00 + 0,00ax 0,00 + 0,00ax 1,0 0,5 0,00 + 0,00ax 96,67 + 5,77by 100,00 + 0,00by 100,00 + 0,00by 1,0 1,0 0,00 + 0,00ax 100,00 + 0,00by 100,00 + 0,00by 100,00 + 0,00by 2,0 0,5 0,00 + 0,00ax 96,67 + 5,77by 100,00 + 0,00by 100,00 + 0,00by 2,0 1,0 0,00 + 0,00ax 100,00 + 0,00by 100,00 + 0,00by 100,00 + 0,00by 2,0 1,5 0,00 + 0,00ax 96,67 + 5,77by 100,00 + 0,00by 100,00 + 0,00by 2,0 2,0 0,00 + 0,00ax 90,00 + 10,00by 100,00 + 0,00by 100,00 + 0,00by Các số trung bình cột có mẫu tự khác khác biệt có ý nghĩa mức p = 0,05 TẠP CHÍ KHOA HỌC - Trường ĐHSP TPHCM Tập 16, Số (2019): 151159 Bảng Ảnh hưởng 2,4-D phối hợp với BA đến khối lượng tươi mô sẹo từ mẫu Nhàu sau tuần nuôi cấy Nồng độ 2,4-D Nồng độ BA Khối lượng tươi sẹo (g) Tuần Tuần Tuần 0,00 + 0,00ax 0,00+ 0,00ax 0,00 + 0,00ay 0,01 + 0,00ay 0,5 0,00 + 0,00ax 0,07 + 0,01dy 0,14 + 0,01cz 0,22 + 0,02cw 1,0 1,0 0,00 + 0,00ax 0,10 + 0,00ey 0,22 + 0,02ez 0,35 + 0,02fw 2,0 0,5 0,00 + 0,00ax 0,07 + 0,01dy 0,14 + 0,02cz 0,25 + 0,02dw 2,0 1,0 0,00 + 0,00ax 0,07 + 0,01dy 0,18 + 0,01dz 0,30 + 0,02ew 2,0 1,5 0,00 + 0,00ax 0,05 + 0,01cy 0,14 + 0,01cz 0,20 + 0,01cw 2,0 2,0 0,00 + 0,00ax 0,03 + 0,00by 0,07 + 0,01bz 0,09 + 0,01bw (mg/l) (mg/l) 0,0 0,0 1,0 Tuần Các số trung bình cột có mẫu tự khác khác biệt có ý nghĩa mức p = 0,05 cm cm a cm c b cm cm d e cm f Hình Mẫu cấy môi trường MS bổ sung 2,4-D BA nồng độ khác sau tuần (a) Mẫu cấy môi trường MS bổ sung 2,4-D mg/l BA 0,5 mg/l sau tuần; (b) Mẫu cấy môi trường MS bổ sung 2,4-D mg/l BA mg/l sau tuần; (c) Mẫu cấy môi trường MS bổ sung 2,4-D mg/l BA 0,5 mg/l sau tuần; (d) Mẫu cấy môi trường MS bổ sung 2,4-D mg/l BA mg/l sau tuần; (e) Mẫu cấy môi trường MS bổ sung 2,4-D mg/l BA 1,5 mg/l sau tuần; (f) Mẫu cấy môi trường MS bổ sung 2,4-D mg/l BA mg/l sau tuần TẠP CHÍ KHOA HỌC - Trường ĐHSP TPHCM Nguyễn Hồng Nhật Trinh tgk Chất hịa tăng trưởng thực vật có vai trị quan trọng q trình hình thành mơ sẹo, đặc biệt auxin (Hopkins, 1995) Theo Bùi Trang Việt (2000), số loại auxin sử dụng nuôi cấy in vitro, 2,4-D xem auxin mạnh, có tác động mạnh mẽ lên tăng trưởng tế bào, acid hóa vách tế bào, cảm ứng phân chia tế bào, kích thích hình thành mơ sẹo Mặc khác, hiệu ứng auxin tùy thuộc vào loại auxin, nồng độ diện mô thực vật môi trường nuôi cấy (Taiz & Zeiger, 2002) Vì nồng độ auxin mức q thấp q cao khơng có tác dụng ức chế q trình tạo sẹo Do nghiệm thức MS bổ sung 2,4-D mg/l nồng độ thích hợp kích thích mạnh hình thành phát triển sẹo Cytokinin kích thích phân chia tế bào, thúc đẩy phiên mã tạo mRNA, kích thích tổng hợp protein enzyme đặc hiệu mô xác định để tạo sẹo với điều kiện có auxin (Taiz & Zeiger, 2002) Do nghiệm thức MS bổ sung 2,4-D phối hợp với BA cho hiệu tạo sẹo cao, thể qua trình cảm ứng tạo sẹo diễn sớm, sẹo phát triển mạnh tỉ lệ auxin/cytokinin cao kích thích tạo rễ, tỉ lệ thấp kích thích tạo chồi, mức trung gian kích thích tạo mơ sẹo (Zakizadeh et al,2008) Vì thế, mơi trường MS bổ sung 2,4-D mg/l phối hợp với BA mg/l cho hiệu phát triển sẹo cao tốt nghiệm thức Theo Hopkins (1995), chất hịa tăng trưởng thực vật có nguồn gốc từ sản phẩm trung gian hình thành trình đường phân có ảnh hưởng đến khả tạo sẹo phối hợp với chất hòa tăng trưởng thực vật ngoại sinh Điều giải thích mơi trường MS có bổ sung 2,4-D mg/l phối hợp với BA mg/l cho khối lượng sẹo tương đối cao dù có chênh lệch tỷ lệ cao auxin cytokinin, không nghiệm thức MS bổ sung 2,4-D mg/l phối hợp với BA mg/l Có lẽ lượng cytokinin nội sinh Nhàu cao nên ảnh hưởng đến cân auxin/cytokinin tạo sẹo nghiệm thức 4.4 Quan sát hình thái giải phẫu Mơ sẹo giải phẫu sau tuần nuôi cấy nhuộm kép với dung dịch đỏ carmin xanh metylen Kết giải phẩu cho thấy, nghiệm thức đối chứng, sau đến tuần nuôi cấy tế bào nhu mô thịt (mũi tên xanh dương) bắt đầu có tăng trưởng kích thước, tế bào có kích thước lớn tế bào nhu mơ gân (mũi tên vàng) (Hình 3a) Đối với nghiệm thức có bổ sung chất hòa tăng trưởng thực vật, khối sẹo hình thành nơi gần với bó dẫn, cạnh gân gân bên (mũi tên màu xanh lá) Các tế bào nhu mơ tế bào biểu bì có dấu hiệu cảm ứng tạo sẹo, làm xuất tế bào khơng có hình dạng định, tạo nên xáo trộn vùng mô, khác biệt lớn so với vùng mơ chưa hoạt hóa tạo sẹo (mũi tên màu đỏ) Ngoài phân chia, tế bào cịn có tăng trưởng kích thước (Hình 3b, 3c) TẠP CHÍ KHOA HỌC - Trường ĐHSP TPHCM Tập 16, Số (2019): 151159 Hình Sẹo cắt ngang từ mẫu Nhàu môi trường sau tuần (a) Sẹo cắt ngang từ mẫu Nhàu môi trường MS sau tuần; (b) Sẹo cắt ngang từ mẫu Nhàu môi trường MS bổ sung 2,4-D mg/l sau tuần; (c) Sẹo cắt ngang từ mẫu Nhàu môi trường MS bổ sung 2,4-D mg/l BA mg/l sau tuần Dưới tác động auxin, tạo mô sẹo in vitro thuộc ba trình: phản phân hóa tế bào nhu mơ,sự phân chia tế bào tượng tầng, tế bào biểu bì hay biểu bì phản ứng mạnh với auxin; xáo trộn mô phân sinh sơ khởi (Bùi Trang Việt, 2000) Trong cytokinin tác động lên hai bước phân chia tế bào: phân nhân phân bào Điều thấy rõ hình thái giải phẫu sẹo qua tuần nuôi cấy: tế bào nhu mô mạch gỗ libe gân hay biểu bì cảm ứng tạo sẹo, tế bào phản phân hóa sau tiến hành phân chia nhiều lần, gây xáo trộn mơ, hình thành sẹo Kết luận - Mẫu Nhàu khử trùng với cồn 700 phút 30 giây kết hợp với dung dịch HgCl2 0,1% 10 phút, cho hiệu khử trùng tối ưu, đạt 100% tỉ lệ mẫu sống - Nghiệm thức MS có bổ sung 2,4-D mg/l BA mg/l cho hình thành phát triển sẹo tốt Tỉ lệ mẫu tạo sẹo đạt 100% sau hai tuần nuôi cấy, cảm ứng tạo sẹo xảy nhanh, phát triển sẹo tốt - Các khối sẹo hình thành nơi gần với bó dẫn, cạnh gân gân bên Tuyên bố quyền lợi: Các tác giả xác nhận hồn tồn khơng có xung đột quyền lợi TÀI LIỆU THAM KHẢO Ngơ Xn Bình (2009) Nuôi cấy mô tế bào thực vật – Cơ sở lí luận ứng dụng NXB Khoa học kĩ thuật Võ Văn Chi (1997) Từ điển thuốc Việt Nam NXB Y học Lê Văn Hồng (2008) Cơng nghệ nuôi cấy mô tế bào thực vật NXB Khoa học Kĩ thuật, 67-83 Phạm Hoàng Hộ (2003) Cây cỏ Việt Nam III NXB Trẻ 10 TẠP CHÍ KHOA HỌC - Trường ĐHSP TPHCM Nguyễn Hoàng Nhật Trinh tgk Nguyễn Thị Ngọc Hương, Võ Thị Bạch Mai (2009) Tìm hiểu phát sinh hình thái rễ nuôi cấy in vitro Nhàu (Morinda citrifolia L.), Tạp chí Phát triển Khoa học Cơng nghệ, tập 12, 100-105 Nguyễn Thị Ngọc Hương, Võ Thị Bạch Mai (2010) Tìm hiểu phát sinh hình thái chồi nuôi cấy in vitro Nhàu (Morinda citrifolia L.) Tạp chí Phát triển Khoa học Cơng nghệ, tập 13 Ninh Thị Thảo, Nguyễn Thị Phương Thảo, Nguyễn Thị Thuỳ Linh, Nguyễn Tuấn Minh, Nguyễn Quỳnh Chi, Trần Thị Anh Đào (2016) Nghiên cứu cảm ứng nuôi cấy rễ bất định Ba kích (Morinda officinalis How) Tạp chí Khoa học Nơng nghiệp Việt Nam, 14(6), 921930 Bùi Trang Việt (2000) Sinh lí thực vật đại cương, phần II: Phát triển NXB Đại Quốc gia Thành phố Hồ Chí Minh Vũ Văn Vụ, Vũ Văn Tâm, Hồng Minh Tấn (2012) Sinh lí thực vật NXB Giáo dục Việt Nam, 229-308 Elakkuvan, S., & Manivannan, K (2015) Effect of surface sterilization on in vitro survival of explants of Noni (Morinda citrifolia L.) International Journal of Advance Research in Engineering, Science & Technology, 2, 2394-2444 Hopkins, W G (1995) Introduction to Plant Physiology The University of Westher Ontario, 323350 Scot Nelson, C (2003) “Morinda citrifolia L.: Rubiaceae (Rubioideae) Coffee family” Permanet Agriculture Resources Taiz, L & Zeiger, E (2002) Plant Physiology, 3rd Edition Benjamin Cummings Publishing Company, California Zakizadeh, H., Debener T., Sriskandarajah, S., Frello, S., Serek, M (2008) Regeneration of miniature potted rose (Rosa hybrida L.) via somatic Embryogenesis European Journal of Horticultural Science INVESTIGATING THE EFFECT OF 2,4-D AND BA ON CALLUS FORMATION FROM LEAF OF MORINDA CITRIFOLIA L Nguyen Hoang Nhat Trinh, Luong Thi Le Tho* Department of Biology – Ho Chi Minh City University of Education * Corresponding author: Luong Thi Le Tho – Email: tholtl@hcmue.edu.vn Received: 17/4/2019; Revised: 28/5/2019; Accepted: 03/6/2019 ABSTRACT Morinda citrifolia L is a valuable medicinal plant, however the propagation and development of disease free plants nowadays are still retricted Callus is the starting material capable of differentiating into roots, shoots and embryos to develop complete plants The result of the present study indicates that MS medium supplemented with 1mg/l 2,4-D and mg/l BA is the best for callus formation and growth Keywords: Morinda citrifolia L., callus, plant growth regulators 11 ... khảo sát ảnh hưởng chất điều hòa tăng trưởng thực vật 2, 4D riêng lẻ hay 2,4 -D phối hợp với BA nồng độ khác đến tạo sẹo từ Nhàu Mẫu cấy sau khử trùng cắt gọt, tạo vết cắt vng góc với gân cấy vào... (a) Sẹo cắt ngang từ mẫu Nhàu môi trường MS sau tuần; (b) Sẹo cắt ngang từ mẫu Nhàu môi trường MS bổ sung 2,4 -D mg/l sau tuần; (c) Sẹo cắt ngang từ mẫu Nhàu môi trường MS bổ sung 2,4 -D mg/l BA. .. Bảng Ảnh hưởng 2,4 -D phối hợp với BA đến khả tạo mô sẹo từ mẫu Nhàu sau tuần nuôi cấy Nồng độ Nồng độ Tỉ lệ mẫu tạo sẹo (%) TẠP CHÍ KHOA HỌC - Trường ĐHSP TPHCM Nguyễn Hoàng Nhật Trinh tgk 2,4-D