Sử dụng các trang thiết bị trong phòng xét nghiệm hoá sinh SỬ DỤNG CÁC TRANG THIẾT BỊ TRONG PHÒNG XÉT NGHIỆM HÓA SINH Phòng xét nghiệm hoá sinh được trang bị nhiều dụng cụ, phương tiện,
Trang 1BỘ Y TẾ
DỰ ÁN Y TẾ NÔNG THÔN
BAI GIANG DAO TAO
KY NANG CHUYEN MON
CHO CAN BO TUYEN HUYEN
XET NGHIEM
NHA XUAT BAN Y HOC
Huế, 2005
Trang 2BOY TE
DU AN Y TE NONG THON
BAI GIANG DAO TAO
KY NANG CHUYEN MON
CHO CAN BO TUYEN HUYEN
XET NGHIEM
NHA XUAT BAN Y HOC
Trang 4LOI NOI DAU
Thực hiện Chỉ thị số 06-CT/TƯ ngày 22 thang 1 nim 2002 của Ban Chấp hành
Trung ương Đảng về việc củng có tổ chức, đối mới phương thức hoạt động, nâng cao chất lượng và hiệu quả của mạng lưới y tế cơ sở, Bộ Y tế đã xây dựng nhiều chính sách, chiến lược quốc gia nhằm phát triển hệ thống y tế cũng như các lĩnh vực chuyên môn của ngành
và ban hành các quy chế, quy trình kỹ thuật để thực hiện
Cùng với việc tăng cường cơ sở vật chất, trang bị kỹ thuật của ngành y tế, công tác phát triển nguồn nhân lực y tế cũng được quan tâm Các chương trình đào tạo và đào tạo
lại cán bộ y tế được đổi mới, phát triển và từng bước hoàn thiện Tuy nhiên, do sự tiến bộ
không ngừng của khoa học công nghệ cũng như nhu cầu chăm sóc sức khỏe nhân dân ngày càng cao đòi hỏi cán bộ y tế phải thường xuyên cập nhật những kiến thức mới
Trên tỉnh thần đó, Bộ Y tế chỉ đạo biên soạn bộ tài liệu đào tạo lại cho cán bộ y té các tuyến cơ sở, sử đụng nguồn tài trợ của Dự án Y tế Nông thôn, vay vốn của Ngân hàng Phát triển châu Á Bộ tài liệu được biên soạn lần này thuộc 3 lĩnh vực chuyên môn và quản lý, bao gồm:
- Pao tao lai kỹ năng chuyên môn cho cán bộ y tế tuyến huyện, tuyến xã, tuyến thôn/bản
- - Đào tạo kỹ năng chuyên môn về an toàn vệ sinh thực phẩm cho cán bộ y tế tuyến huyện và tuyến tỉnh
- _ Đào tạo về kế hoạch, quản lý và huy động cộng đồng và chăm sóc sức khỏe cho cán bộ y tế tuyến huyện, tuyến xã
Các lĩnh vực chuyên môn được phân chia thành từng chuyên ngành và mỗi chuyên ngành được biên soạn thành 4 tài liệu: chương trình đào tạo, tài liệu dùng cho học viên (giáo trình), tài liệu dùng cho giáo viên (kế hoạch bài giảng) và tập tài liệu tham khảo
Bộ tài liệu do tập thể các cán bộ chuyên môn có trình độ cao và kinh nghiệm thực
tế của một số trường đại học y khoa và các chuyên gia, các bộ quản lý trong ngành tham gia biên soạn
Tuy nhiên, do bộ tài liệu để dùng chung cho các tỉnh tham gia Dự án y tế Nông thôn ở cả 3 miền Bắc, Trung, Nam nên không thể tránh khỏi thiếu sót Mong các đồng
nghiệp tham gia giảng dạy, các học viên tham dự các lớp học góp ý kiến để bộ tài liệu đào
tạo tiếp tục được hoàn thiện
Bộ Y tế giới thiệu bộ tài liệu nói trên sử dụng trong các lớp tập huấn cho các cán
bộ y tế tuyến cơ sở để đào tạo liên tục cho các tỉnh trong Dự án y tế nông thôn và có thể
áp dụng cho các lớp đào tạo lại bằng các nguồn kinh phí khác
PGS TS TRÀN CHÍ LIÊM THU TRUONG BO Y TE
Trang 5CHU BIEN
TS Trần Chí Liêm, Thứ trưởng Bộ Y tế
BAN BIEN TAP
PGS TS Pham Van Linh
PGS TS Hoang Ngoc Chuong
TS Hoàng Thị Thu Hương
ThS Đỗ Thanh Sửu ThS Nguyễn Thị Diệu Thanh BSCKI Hoàng Cao Thắng
BS Phù Thị Hoa ThS Nguyễn Thị Băng Sương ThS Lê Văn An
ThS Trần Thị Như Hoa
ThS Ngô Viết Quỳnh Trâm
BS Tôn Nữ Phương Anh ©
TS Nguyễn Hữu Toàn
BS Phan Vĩnh Sinh
BAN THƯ KÝ BIÊN SOẠN
TS Lê Đình Khánh
BS Phan Vĩnh Sinh ThS Phan Thị Tế Như
CN Nguyễn Chiến Phương
CN Nguyễn Phạm Thanh Vân
Bài giảng đã được thông qua Hội đồng nghiệm thu theo quyết định số
236I1QĐ-BYT ngày 08 tháng 07 năm 2004 của Bộ trưởng Bộ Y tế.
Trang 6MUC LUC
PHAN I: PHAN HOA SINH
1 Công tác quản lý phòng xét nghiệm sinh hóa lâm sàng tuyến huyện 1
2 Sử dụng các trang thiết bị trong phòng xét nghiệm hoá sinh 5
3 Dung dịch và các cách biểu thị nồng độ của dung dịch trong xét nghiệm hoá sinh 15
4 Bảo quản và kiểm tra chất lượng các hoá chất và sinh vật phẩm trong xét nghiệm
hoá sinh c- co HS HT HH TT HE KH kh ch hen nu nu cà v00 5 Các đơn vị đo lường dùng trong xét nghiệm hoá sinh hiện nay 31
6 Kiểm tra độ tin cậy trong kết quả xét nghiệm sinh hoá 37
7 Cách lấy và bảo quản bệnh phẩm - - -<<5+ 51 8 Xu ly dung cụ thí nghiệm trong phòng xét nghiệm hóa sinh 57
9 Dinh lượng Glucose, Cholesterol, Triglycerin, Bilirubin 6 Í 10 Định lượng Protein, Albumin, Dre, Creatinn, Acid Dric 71
11 Xác định hoạt độ Enxym Got, GPT, Amylase trong huyét thanh 79
12 Xét nghiệm dịch não tuy, dịch chọc dò Ắdđădiẳiẳả -
13 Xét nghiệm hoá sinh nước tiỂu .- - - -<. .-.-.-89
PHAN II: PHAN HUYET HOC 14 Quản lý chuyên môn phòng xét nghiệm tuyến huyện 98
15 Kỹ thuật lấy mẫu nghiệm trong xét nghiệm huyết học LỮ7 16 Kỹ thuật đếm Hồng cầu, Bạch cầu, Tiểu cầu - - - 111
17 Kỹ thuật đo tốc độ máu lắng - .-.- << <5-<<<<<<< xe-s l E9 18 Kỹ thuật nhuộm và đọc tiêu bản tế bào máu -. - -121
19 Kỹ thuật phân loại bạch cầu -.- c.ằ cu nà nọ» HH nH† nh HH 125 20 Kỹ thuật đo Hematocrit -.c cà Sàn Hàn nh nhe 128 21 Kỹ thuật định lượng huyết sắc tố 130
22 Sử dụng và phân tích kết quả xét nghiệm bang máy đếm tế bào tự động 135
23 Kỹ thuật xét nghiệm đông máu cơ bản - -. -.- 141
24 Chọn người cho máu và kỹ thuật lấy máu để truyền - -147
25 Kỹ thuật định nhóm máu ABO, Rh - - - -.« 53
26 Kỹ thuật làm phản ứng chéo - << ĂẰ<cẰcsẶ~ se 58
Trang 7PHAN III: PHAN VI SINH
27 Vai trò của xét nghiệm vi sinh cơ bản tại tuyến huyện L62
28 Các phương pháp tiệt khuẩn và khử khuẩn trong phòng thí nghiệm 164
29 Cách lấy và bảo quản bệnh phẩm xét nghiệm vi sinh vật 170
30 Các phương pháp xét nghiệm kiểm tra không khí, nước, dụng cụ và vô khuẩn
31 Các phương pháp chẩn đoán vi sinh vật, một số bệnh thường gặp 183
32 Làm tiêu bản soi tươi, nhuộm Gram, Test sniff để chẩn đoán bệnh lây lan qua
33 Lấy bệnh phẩm, xử lý bệnh phẩm, nhuộm Ziehl-Neelsen để chấn đoán lao 195
34 Phản ứng ASLO kinh điển và nhanh để chẩn đoán nhiễm liên cầu khuẩn trong
35 Phản ứng Widal để chẩn đoán bệnh thương hàn - - - - - - 2Ó
36 Phản ứng RPR và TPHA để chẩn đoán giang mai - - - ‹ - 210
37 Các phản ứng nhanh để chẩn đoán viêm gan B (HBsAg), sốt xuất huyết Dengue
38 Kỹ thuật xét nghiệm phân tìm ký sinh trùng giun sán và đơn bào 224
39 Kỹ thuật kéo máu và xét nghiệm tìm ký sinh trùng sốt rét 232
Trang 8Công tác quản lý phòng xét nghiệm sinh hóa lâm sang tuyến huyện
CÔNG TÁC QUẢN LÝ PHÒNG XÉT NGHIỆM
SINH HÓA LÂM SÀNG TUYẾN HUYỆN
Mục tiêu học tập
1 Trình bày được vai trò của xét nghiệm sinh hóa ở các cơ sở y tỄ tuyến huyện
2 Trình bày được cơ cấu tô chức và nhân sự của một khoa/phòng(1đơn
vị) đối với xét nghiệm sinh hóa tại tuyến huyện
3 Kẻ được các kỹ thuật xét nghiệm sinh hóa, các trang thiết bị máy móc cần có tại tuyến huyện
4 Trình bày qui định hành chính và trực cấp cứu đối với xét nghiệm sinh hóa tại tuyến huyện
1 VAI TRÒ CỦA XÉT NGHIỆM SINH HÓA Ở TUYẾN HUYỆN
Ngày nay, mô hình bệnh viện tuyến huyện ngày càng được phát triển, song song với việc mở rộng các khoa lâm sàng, vai trò của các khoa xét nghiệm ngày càng được nâng cao, trong đó xét nghiệm sinh hóa chiếm vị trí
đáng kê Cụ thê:
- Xét nghiệm sinh hóa nhằm đáp ứng nhu cầu chẩn đoán, theo dõi và điều tri bệnh ngày càng cao ở tuyến huyện
- Xét nghiệm sinh hóa cần thiết cho việc kiểm tra sức khỏe có tính cách dự
phòng và sàng lọc cho nhân dân ở xã, huyện
- Ngoài ra, xét nghiệm sinh hóa còn góp phần nâng cao chất lượng chân
đoán, theo dõi và điều trị cho các bệnh viện ở tuyến huyện
2 CƠ CÁU TỎ CHỨC VÀ NHÂN SỰ CHO PHÒNG XÉT NGHIỆM SINH HÓA Ở TUYẾN HUYỆN
2.1 Đặc điểm phòng xét nghiệm sinh hóa ở tuyến huyện
- Tại bệnh viện tuyến huyện, thường các xét nghiệm huyết học, sinh hóa, vi
sinh, ký sinh được tập trung trong một khoa, gọi chung là khoa xét nghiệm tông hợp
- Khoa xét nghiệm tổng hợp cần bố trí gần phòng khám bệnh, phòng mổ, khoa gây mê hồi sức và các khoa lâm sàng để thuận tiện trong việc lấy
mẫu, chuyên mẫu và trả kết quả xét nghiệm.
Trang 9Céng tde quan ly phong xét nghiém sinh hóa lâm sàng tuyên huyện
2.2 Cơ cầu nhân sự
- Các cán bộ làm việc trong khoa xét nghiệm thường được đào tạo đa khoa,
bao gồm xét nghiệm huyết học, sinh hóa, vi sinh, ký sinh Sở đĩ như thế vì
số cán bộ biên chế ở bệnh viện tuyến huyện còn ít, phải bố trí khoa xét
nghiệm chung để đảm bảo trong một ca trực, cán bộ trực có thể làm hết được các xét nghiệm trong khoa, ở mọi lĩnh vực như trên
- Số cán bộ trong một khoa xét nghiệm tổng hợp ở tuyến huyện từ 4 đến 6
người, đa số là kỹ thuật viên trung cấp Có thể có một bác sĩ chuyên khoa xét nghiệm làm trưởng khoa, một kỹ thuật viên cao cấp làm trợ lý
3 CÁC KỸ THUẬT XÉT NGHIỆM SINH HÓA VÀ CÁC TRANG THIẾT
BI CAN CÓ Ở BỆNH VIỆN TUYẾN HUYỆN
Hiện nay, do ngân sách Nhà nước còn eo hẹp, kinh phí đầu tư cho trang thiết bị ở các bệnh viện huyện còn khó khăn, phần lớn dựa vào chương trình viện trợ và vay vốn của nước ngoài Do đó, vấn đề cung cấp trang thiết bị và hóa chất cho các xét nghiệm sinh hóa còn kém nên sự phát triển chuyên môn cho các lĩnh vực xét nghiệm ở tuyến huyện còn hạn chế
Tuy nhiên, do trình độ dân trí ngày càng cao, nếu được đầu tư máy móc,
trang thiết bị và có một đội ngũ cán bộ kỹ thuật vững tay nghề, xét nghiệm sinh
hóa vẫn có thể thu hút được bệnh nhân ở huyện đến xét nghiệm theo yêu cầu ngày càng đông Hơn nữa, xét nghiệm sinh hóa rất cần thiết cho các bác sĩ lâm sàng trong việc chan đoán, theo dõi và điều trị bệnh nhân
3.1 Các kỹ thuật xét nghiệm sinh hóa cần triển khai
*# Đối với xét nghiệm trong máu: định lượng Glucose, Cholesterol toàn phần, HDL-Cholesterol, LDL-Cholesterol, Triglycerid, Ure, Creatinin, Protein toan phan, Bilirubin toan phan, truc tiép,
enzym GOT, GPT, Acid uric, nham chẩn đoán một số bệnh
thuong gap nhu tiéu đường, rỗi loạn lipid máu, bệnh về thận, - gan, bệnh Goutte
* Đối với xét nghiệm trong nước tiểu:
- Xét nghiệm bán định lượng 10 thông số nước tiểu: Glucose, protein, Nitrit, sắc tố mật, muối mật, Cetonic, hồng cầu, bạch cau, ty trong,
pH để phát hiện, góp phan chẩn đoán và sàng lọc một số bệnh như tiểu đường, gan mật, bệnh về thận, nhiễm khuẩn đường tiểu,
Trang 10Công tác quản lý phòng xét nghiệm sinh hóa lâm sàng tuyến huyện
- Xét nghiệm phát hiện có thai băng các test nhanh (quick test), phát hiện chất gây nghiện như cocain, heroin bằng que thử theo phương pháp sinh
Một máy xét nghiệm nước tiểu cỡ nhỏ
Một máy xét nghiệm sinh hóa bán tự động
Một tủ lạnh có ngăn đông (<0°C) khá lớn để đựng hóa chất và lưu mẫu Các dụng cụ cần có ở phòng xét nghiệm sinh hóa như: pipet, ống nghiệm, bình nón, cốc mỏ, bình định mức, ống đong, ống hút Pasteur, ống nhỏ
giọt, ống li tâm
Ngoài ra, hiện nay nhờ vào chương trình, dự án, một số bệnh viện hoặc trung tâm y tế tuyến huyện ở nước ta còn được trang bị máy sinh hóa tự động, máy điện di, khí máu, điện giải
Tóm lại, tuy xét nghiệm sinh hóa tại đa số bênh viện hay trung tâm y tế ở tuyến huyện trong nước ta còn hạn chế, nhưng do trình độ và nhu cầu của người dân ngày càng cao, việc đầu tư và phát triển cho xét nghiệm sinh hóa ở các tuyến huyện ngày càng cần được quan tâm và phát triển
4 QUI ĐỊNH HÀNH CHÍNH VÀ TRỰC CÁP CỨU ĐÓI VỚI XÉT NGHIỆM SINH HÓA TẠI TUYẾN HUYỆN
Trang 11Công tác quản lý phòng xét nghiệm sinh hóa lâm sàng tuyên huyện
- Trông coi sô sách: số ghi kết quả bệnh nhân, số họp, số giao ban, số dự trù mua hóa chất-sinh phẩm, dụng cụ tiêu hao, tông kết số bệnh nhân, tong
kết số xét nghiệm của mỗi chuyên khoa hằng ngày, hằng tháng Mỗi
chuyên ngành huyết học, sinh hóa, vi sinh, ký sinh có một số riêng
- Theo dõi ngày công của cán bộ trong khoa
+ Qui định về thời gian lấy mẫu, trả kết quả
+ Qui định về phiếu trả kết quả
+ Phân công kỹ thuật viên phụ trách bảo trì và vận hành một máy (nếu có nhiều máy)
+ Một số qui định về hành chính khác tuân theo qui định chung của bệnh viện
4.2 Vấn đề trực cấp cứu
Do số biên chế còn ít nên mỗi đêm chỉ phân công một cán bộ xét nghiệm trực cấp cứu Thường là trực đa khoa, do đó đòi hôi cán bộ trực phải làm được tất cả các chuyên ngành huyết học, vi sinh - ký sinh, sinh hóa
Các xét nghiệm sinh hóa thường được triển khai để trực cấp cứu là định
lượng amylase, glucose, protein, ure, creatinin
Nếu có trang bị máy đo điện giải thì có thể đo Na”,K", Ca”,
Do dự trữ kiềm bằng phương pháp chuẩn độ
Trang 12Sử dụng các trang thiết bị trong phòng xét nghiệm hoá sinh
SỬ DỤNG CÁC TRANG THIẾT BỊ TRONG PHÒNG XÉT NGHIỆM HÓA SINH
Phòng xét nghiệm hoá sinh được trang bị nhiều dụng cụ, phương tiện, máy móc
rất đa dạng, do đó cần phải nắm vững cách sử dụng các trang thiết bị mới đảm bảo độ
tin cậy của kết quá xét nghiệm và độ bền của chúng
Những dụng cụ phòng thí nghiệm được chia thành những nhóm cơ bản sau:
- Dụng cụ thông thường: ông đong, pipet
- Máy móc dụng cụ cơ bản: máy ly tâm, cân, đồng hà
- Máy đo điện tử: máy quang phổ, máy điện di, máy sinh hóa bán tự động
1 DỤNG CỤ
1.1 Dụng cụ đong thể tích
Những dụng cụ đo thể tích trong phòng xét nghiệm hóa sinh gồm:
1.1.1 Ông đong (éprouvette)
Dụng cụ được dùng để đong những thể tích thay đôi, thường từ 10 ml đến 1 hay nhiều lít Độ chính xác kém, sai số có thể tới 5% nên không dùng để pha dung dịch chuẩn
1.1.2 Bình tam giác, cốc có chân (erlenmeyer)
Những dụng cụ này chỉ có tính cách chứa đựng và ước lượng thể tích, sai số có thể trên 10%
1.1.3 Binh dinh mire (flacon)
Những dụng cụ này dùng để đo thê tích chính xác với sai số <1% nên có thể pha
dung dịch chuẩn độ.
Trang 13Sử dụng các trang thiết bị trong phòng xét nghiệm hoá sinh
Hình 2.1 Các dụng cụ thuỷ tỉnh: A: bình tam giác, B: bình lắng gạn, C: bình cầu, D:cốc mỏ, E:ống đong, F:bình định mức,G,H: phéu loc, I: ống nhỏ giọt, J: bình hút am
Trang 14Sử dụng các trang thiết bị trong phòng xét nghiệm hoá sinh
1.1.4 Ong nhỏ giọt (burette)
Ông nhỏ giọt dùng để đong những thể tích thay đổi với độ chính xác cao nên thường dùng trong các phương pháp chuẩn độ
1.1.5 Ông hút (pipette)
Có hai loại: -
- Ông húi thường:
Có thể bằng thủy tỉnh hay nhựa trong, pipet thường có nhiều loại: loại chia và
loại có bầu chứa một thê tích có định
Tuy nhiên, không nên dùng pipet vạch 10 ml dé hút 0.5 ml
+ Loại thê tích thay đổi: cũng có thể có 1 hay nhiều đầu col tùy công dụng Trên
ống hút có ghi sẵn thể tích tối đa có thể hút như loại cố định, nhưng có thêm chức năng chỉnh thể tích bằng nút vặn hay nút trượt dé có thể dùng hút nhiều
thể tích khác nhỏ hơn Thí đụ: ta có thể dùng ống hút tự động thể tích thay đôi
1000 H1 để chỉnh hút 250 ul Tuy nhiên, cũng không nên dùng ống hút lớn hút thể tích nhỏ sẽ thiểu chính xác
Độ chính xác của loại ống hut thé tích cố định thường cao hơn loại thể tích thay đôi Tuy nhiên, với loại ống hút tự động nào cũng có thể gây sai số hệ thống khi sử đụng lâu mà không phát hiện được: mòn piston, lệch nút bấm, sai vạch điều chỉnh thể tích
- Kiểm định độ tin cậy: Đề kiêm định độ tin cậy của ống hút tự động ta có thể dùng cách sau: lấy nước cất ở nhiệt độ phòng lạnh (25°C), hút một thể tích cố định
nhiều lần (thí dụ 500 HÏ) và cân lượng nước bấm ra trên cân chính xác có độ nhạy 0.1 mg Trị số của các lần cân phải xấp xi 500 mg
1.2 Dụng cụ hoà loãng
Dụng cụ thường được sử dụng trong phòng thí nghiệm để đong cùng một thê tích
thuốc thử hay để hoà loãng dung dịch Có nhiều loại khác nhau nhưng đều bao gồm bộ
phận sau: chai đựng thuốc thử với một hệ thống van, pit-tông kèm nút điều chỉnh thể
tích Hệ thống này có một ống chạm tới đáy chai khi chai và van pit-tông được lắp khít
Trang 15Sử dụng các trang thiết bị trong phòng xét nghiệm hoá sinh
với nhau Khi cần lấy một thể tích nhất định thì điều chinh van đến thể tích theo yêu
cầu, cho dung môi hoà loãng hay thuốc thử muốn phân chia vào chai, vặn nút kín, kéo
rồi đây pit-tông Mỗi lần kéo - đây ta sẽ được cùng một thê tích đã điều chỉnh trước
Sai số của đụng cụ này cho phép là 1% Máy tự động có sai số: 0,5 %
2.1.1 Các loại máy ly tâm
- Máy ly tâm quay tay: hiện nay ít được sử dụng vì chỉ quay tối đa 2000 vòng/phút
- Máy ly tâm thường: có vận tốc quay dưới 10 000 vòng/phút, có thể có hoặc không
có hệ thống lạnh
- Máy ly tâm cao tốc và siêu tốc: vận tốc quay từ vài chục tới vài trăm ngàn vòng/phút
Ngoài ra, dựa vào đặc điểm của giá mang ống ly tâm, người ta chia ra ly tâm
văng ( không có rotor) và ly tâm góc (có rotor)
Đối với một phòng xét nghiệm hoá sinh lâm sàng, máy ly tâm thường đủ cho hầu hết nhu cầu thường xuyên Thường người ta ly tâm với tốc độ 4.000-5000 vòng/phút
2.1.2 Cac bộ phận của máy ly tâm
1 Déng co (motor)
Truc quay
Đầu (hay rôtơ) chứa ống ly tâm
Nút tiếp xúc với nguồn
Đồng hồ đo thời gian
Trang 16Sử dụng các trang thiết bị trong phòng xét nghiệm hod sinh
(3) Cân bằng những ống ly tâm đối xứng nhau
(4) Cho ống ly tâm vào rôtơ hay vào giá
(11) Lau chùi máy
2.1.4 Bảo quản máy ly tâm
- Hằng ngày: chùi mặt trong máy ly tâm với nước tay (Javel) pha loãng 1/10 hay thuốc sát khuẩn (presept, cedex)
- Khi có ống vỡ ở những chỗ tiếp xúc với bệnh phâm (máu) thì cần nhanh chóng
khử khuẩn Đầu rôtơ và giá đựng ống ly tâm phải được tiệt khuẩn Các mảnh vỡ bằng thuỷ tỉnh hay bằng nhựa phải được lấy ra và bỏ ở nơi thích hợp Định kỳ: + Kiểm tra tốc độ, sai số cho phép không quá 5%'
+ Kiểm tra thời gian
- Bảo trì, bôi nhớt, thay thế rôtơ theo hướng dẫn
2.2 Cần cơ
2.2.1 Các loại cân
- Cân thăng bằng với 2 đĩa: hiện nay ít được sử dụng vì mất nhiều thì giờ khi cân
Tuy nhiên, có thể dùng để thăng bằng khi sử dụng máy ly tâm
- Cân điện thông thường hiện số: thường dùng để cân vật có trọng lượng lớn khoảng trên 100 g đến vài kg Sai số khoảng 10 mg (0,01g)
- Cân phân tích: thường dùng để cân vật có trọng lượng nhỏ (dưới 100g) và cần
chính xác với độ sai số từ 1 đến 0,1 mg (0,001 hay 0,0001 g)
2.2.2 Nguyên tắc cơ bản khi cân
- Cần theo đúng quy trình vận hành của cân, quy trình cân nên dán tại chỗ đễ nhìn
thấy nhất Nên xác định đúng loại cân cần dùng với độ chính xác cần thiết
- Sử dụng thanh đặc biệt để lẫy mẫu rắn hay dùng pipette hoặc ống hút Pasteur để
lay mẫu lỏng, không nghiêng lọ đựng mẫu để đỗ trực tiếp lên vật chứa trên đĩa
cân
- Đọc kỹ nhãn trước khi cân đề tránh nhằm lẫn hóa chất này và hóa chất kia
Trang 17Sử dụng các trang thiết bị trong phòng xét nghiệm hoá sinh
2.3 Cân điện tử
2.3.1 Mô tả cân
Cân gồm có các bộ phận chính: đĩa cân, giá, ốc điều chỉnh, bảng hiển thị số,
lồng kính và các bộ phận điện, điện tử Trên cân có những nút điều khiển: chỉnh về
không, chuyển đổi đơn vị, kết quả
2.3.2 Nguyên lý hoạt động
Cân điện tử dùng lực điện từ thay vì dùng quá cân để đặt trên bàn cân Đĩa cân
được nối trực tiếp với cuộn dây quấn xung quanh một nam châm vĩnh cửu Khi đòng
điện đi qua cuộn dây sẽ tạo ra một lực điện trường giữ cho đĩa cân cố định Khi đặt
một vật lên đĩa cân, bộ phận quét thông qua tế bào quang điện sẽ xác định được vị trí
bị chuyên dịch dưới tác dụng của trọng lượng của vật rồi truyền về bộ khuếch đại làm tăng dòng điện qua cuộn dây đề đưa đĩa cân trở lại vị trí ban đầu Dòng điện này tỉ lệ
với trọng lượng của vật và sinh ra một điện thế Với điện thế đo được nhờ bộ vi xử lý
giúp ta đọc được khối lượng của vật hiển thị trên màn hình Một số cân có bộ chống
rung, hay chống dao động Một số cân có thê nối kết với bộ xử lý số liệu giúp ta tính
được trị số trung bình và phân tích thống kê
Chú ý khi sử dụng và bảo quản: Cân phải được đặt trên một nền vững chắc, trong phòng mát có độ âm không cao, tránh ánh nắng trực tiếp Thao tác nhẹ nhàng khi
đặt hay lấy vật ra khỏi đĩa cân Tránh đỗ hoá chất lên cân Hằng ngày, hằng tháng, phải
có chế độ lau chùi và bảo quản thích hợp Cần hiệu chỉnh cân định kỳ
2.4 Máy đo quang
Máy đo quang có khả năng đo chính xác đậm độ của các màu sau phản ứng hóa
sinh để từ đó suy ra nồng độ của chất khi so sánh với ống màu chuẩn đã biết trước nồng độ Đậm độ màu của phản ứng được biểu thị bằng đại lượng mật độ quang (A =
Absorbance) hay độ truyền qua (T = Transmittance)
2.4.1 Sơ đồ khỗi của máy đo quang
Trang 18Sử dụng các trang thiết bị trong phòng xét nghiệm hoá sinh
2.4.2 Các loại máy đo quang thông dụng
Máy đo quang dùng trong phòng xét nghiệm hóa sinh thông thường gồm 2 loại chính:
- Quang ké (photometer, photocolorimeter):
Với máy quang kế, việc tạo ánh sáng màu được thực hiện bằng các kính lọc màu (color filter) có bước sóng chọn lọc Thí dụ:kính lọc màu 500 nm có khả năng cho các bước sóng gần 500 nm (xanh lục) đi qua Thí dụ: từ 450nm (xanh dương) đến
_550nm (vàng) Những ánh sáng màu này sẽ được hap thụ bởi dung dịch cần đo để tính kết quả
- Quang phố kế (spectrophotometer):
Với quang phố kế, việc tạo ánh sáng màu được thực hiện bằng hệ thống quang phô với lăng kính hay cách tử Thí dụ:khi chỉnh máy là 500 nm thì chỉ có tia sáng màu xanh lá đi qua (500 nm) Như vậy, sẽ có bước sóng chính xác hơn và độ nhạy cao hơn
- Nguyên tắc cơ bản khi ẩo quang:
+ Chọn đúng bước sóng, chỉnh máy, đặt cóng đo
+ Đường truyền sáng phải không bị ngăn cán bởi bụi bậm hay nắm mốc
+ Cóng đo phải thật sạch, không có tỉ vết, bọt nước nào
+ Khi đặt cóng đo vào máy phải theo đúng chiều quy định Thường phần cóng có
in chữ để đúng chiều tia sang tdi
+ Ghi kết quả đúng trên máy, đọc chính xác, tránh nhầm lẫn
+ Mỗi lần đo cần có đầy đủ ống trắng, ống chuẩn, ống kiểm tra cần thiết để tính
kết quá cho ống đo
2.4.3 Nguyên ly
Trong xét nghiệm sinh hoá, những phương pháp phân tích định lượng dựa trên
sự hấp thụ ánh sáng được sử dụng rất phổ biến Day là phương pháp hoá lý có nhiều
ưu điểm: nhanh chóng, tiện lợi khi làm xét nghiệm hàng loạt, nồng độ chất phân tích
thấp và không cần phải tách riêng chất cần phân tích
Phương pháp này sử dụng các máy quang kế và quang phổ kế và dựa vào định luat Lambert - Beer:
Trang 19Sử dụng các trang thiết bị trong phòng xét nghiệm hoá sinh
D6 hap thu E ty lệ thuận với nồng độ C
Áp dụng phương trình trên với mẫu chuẩn (Cụ, Ey)va mau thir (Cy, Ep), ta cd:
EM = elCyy va Ey = clCr =
Hay Cr= Ns x độ pha loãng (7)
M
2.4.4 Các giai đoạn của phương pháp ấo quang
(1) Tiến hành phản ứng tạo màu với dung dịch có chứa một chất cần định lượng
với nồng độ biết trước (Cw)
(2) Tiến hành phản ứng tương tự với một mẫu thử có nồng độ chưa biết (C1) (3) Đọc MĐQ của mẫu chuẩn và mau thir (Ey va Ey)
(4) Tính nồng độ của chất cần phân tích trong mẫu thử dựa vào kết quả đo màu
của dung dịch chuẩn và dung dịch thử Nếu có pha loãng thì cần nhân với độ pha loãng
Ngoài ra, nồng độ của mẫu thử Cy được tính dựa vào một biểu đồ mẫu hoặc hệ
số Hệ số này chính là tỷ số Cụ/ Ew
2.5 Máy sinh hóa bán tự động
Máy sinh hóa bán tự động cũng là một máy đo quang có kèm theo bộ nhớ về
các xét nghiệm sinh hóa cùng các bộ phận phụ như: bộ phận hút mẫu, ủ mẫu ở nhiệt
độ cố định, chương trình đặc hiệu cho mỗi loại xét nghiệm Máy cho phép phân tích
các thông số sinh hóa bằng các thuốc thử chế sẵn (kit thuốc thử)
Ưu điểm của máy sinh hóa bán tự động:
- Không cần pha chế thuốc thử như sinh hóa cổ điển mà dùng các bộ kit pha chế
sẵn Các thuốc thử chế sẵn hiện nay thường là loại đơn thuốc thử tức chỉ cần một
loại cho một xét nghiệm như glucose, cholesterol, transaminase
- Có thể dễ đàng tiêu chuẩn hóa các xét nghiệm với độ chính xác và tin cậy cao hơn các phương pháp cô điển
- Tra két quả nhanh chóng hơn vì hiện nay có nhiều máy sinh hóa bán tự động có
hệ thống cài đặt sẵn có thê tính và trả kết quả trên giấy in tương tự máy sinh hóa
tự động
Trang 20Sử dụng các trang thiết bị trong phòng xét nghiệm hoá sinh
Tuy nhiên, máy bán tự động có bất tiện là mỗi lần chỉ đo được một mẫu do đó đòi hỏi phải trang bị nhiều máy nếu yêu cầu làm nhiều xét nghiệm và phải sử dụng
một số lượng lớn thuốc thử để bảo đảm độ tin cậy Mỗi máy cần có một kỹ thuật viên
để thường xuyên làm xét nghiệm liên tiếp nhiều mẫu
2.6 Máy sinh hóa tự động
2.6.1 Khải niệm
Tự động hoá công tác xét nghiệm là một qui trình công nghệ và hiện nay là nhu
cầu cấp thiết Qui trình tự động hoá bắt đầu từ khi có lệnh xét nghiệm và chấm dứt khi máy cho kết quả tự ghi
Trong đây chuyển trên, có những mức độ tự động khác nhau, trong phạm vi của bài này chỉ đề cập đến khái niệm và ưu điểm của nó (xem hình 2.3)
2.6.2 Ưu điểm
Tự động hoá trong phòng xét nghiệm hoá sinh lâm sàng có những ưu điểm: Tăng số lượng các xét nghiệm, thống nhất được các kết quả ở các cơ sở xét nghiệm khác nhau
Tận dụng cơ sở và nhân lực
Giảm thời gian xét nghiệm
Tăng độ chính xác đồng thời giảm sai số kết quả xét nghiệm
Giảm giá thành xét nghiệm
Cải tiên khâu trả kết quả cho bác sĩ
Trang 21Sử dụng các trang thiết bị trong phòng xét nghiệm hoá sinh
ONE Trảkết |&—| Kếtquả |&— Phan tich
.* Nhận và mã hoá Vv Chuẩn bị Chuẩn bị thuốc
phát hiện bởi các thuốc thử đặc biệt
Trong phong xét nghiém hoa sinh, ky thuat dién di trén cellulose va cellulose
acetat được dùng để phân tích protein huyết thanh Điện di trên thạch được ứng dụng
để xác định các thành phần của lipoprotein
2.8 Dụng cụ quang học
Dụng cụ quang học chính sử dụng trong hóa sinh lâm sàng là kính hiển vi thường
với độ phóng đại từ 10 tới 1000 lần
Trang 22Dung dịch và các cách biểu thị nông độ của dung dịch trong xét nghiệm hoá sinh
DUNG DICH VA CAC CACH BIEU THI NONG DO CUA
DUNG DICH TRONG XET NGHIEM HOA SINH
Muc tiéu hoc tap
1 Trình bày được cách pha một dung dịch có nông độ cho trước
2 Chuyển đổi được các nông độ dung dịch
3 Pha chế và sử dụng được các dung dịch trong xét nghiệm hoá sinh
Trong phòng xét nghiệm hoá sinh, dung dịch thường xuyên được sử dụng Do đó, những vấn đề liên quan đến dung dịch là rất cần thiết cho các đối tượng có liên quan
1 KHAI NIEM VE DUNG DICH VA NONG DO
Mot hay nhiều đơn chất được hòa tan trong một dung môi nào đó sẽ tạo
ra một dung dịch
Dung môi là chất lỏng có khả năng hòa tan nhất định, nó có thể là đơn
chất hay một hỗn hợp nhiều chất lỏng hòa tan lẫn nhau Khi cần chú trọng đến thành phần nào ta chọn thành phần đó là chất hòa tan chính tính theo nồng độ
Thí dụ: Khi pha cồn trong nước theo tỉ lệ 70%, ta sẽ thu được một dung dịch cồn có nồng độ 70%; khi pha iođe 1% trong dung dịch cồn đó thì ta sẽ có
dung dịch iode nồng độ 1%, còn cồn 70% là dung môi
1.1 Nồng độ dung dịch
Nông độ là tỉ lệ chất hòa tan trong dung môi, được tính theo hai đơn vị nồng độ khác nhau
1.1.1 Nẵng độ khối lượng (concentration massique)
Nong độ khối lượng được tính theo tỉ lệ của đơn vị khối lượng của chất
hòa tan và đơn vị thể tích dung môi theo quy ước quốc tế SI (Systeme
International) Các đơn vị nồng độ khối lượng/thể tích thường dùng là:
Trang 23Dung dịch và các cách biểu thị nông độ của dung dịch trong xét nghiệm hoá sinh
miligam/kg: mg/kg = ppm (part per million)
Đối với trường hợp chất hòa tan trong nước, vì tỉ trọng của nước xấp xỉ bằng 1 nên với nồng độ mg/l ta cũng có thể coi tương duong mg/kg
1.1.2 Nồng độ phân tử gam (concentration en quantité de matiére)
Nông độ phân tử gam được tính theo số phân tử gam (mol: xem bài đơn
vị hoá sinh lâm sàng) của chất hòa tan trên một thể tích của dung môi
Cac don vi nồng độ lượng chat/thé tich thường dùng là:
- mol / lít mol/l
- milimol/ lit mmol/l milimol/mililit mmol/ml
- micromol/ lit nmol/1 micromol/mililit pmol/ml
1.1.3 Chuyển đổi giữa các đơn vị nồng độ: Việc chuyên đổi giữa các đơn vị
nồng độ được tính theo các công thức sau:
Xg/l/M = Y mol/1
Xmol/lxM= Y g/l
Trong đó ta có:
M: phân tử lượng của chất hòa tan
Don vi nồng độ khối lượng: g/l
Don vi nồng độ lượng chat: mol/l
Thi dy 1: phan tir lugng cua glucose: 180
Với nồng độ glucose huyết 1g/1 ta đổi ra nồng độ lượng chất là:
1/180 = 0.00555 mol/l = 5.5 mmol/l
Thí dụ 2: phân tử lượng của calci là 40
Trang 24Dung dich và các cách biểu thị nồng độ của dung dịch trong xét nghiệm hoá sinh
Với nồng độ calei huyết 2 mmoi/1 ( 0.002 mol/l) đổi ra nồng độ khối lượng:
0.002 x 40 = 1.100 g/l = 80 mg/I
1.1.4 Duong lwgng (equivalent) va mili dwong lượng
Với một số cách tính trong hoá sinh lâm sàng, theo cách tính cũ nhiều người vẫn quen dùng đơn vị đương lượng Eq và mili dong lugng mEq, nhất là với các ion điện giải trong máu Ta có:
Đương lượng = Phân tử lượng/điện tích ion
1 Eq = 1 mol/điện tích ion (hay hóa trị)
Khi điện tích ion là 1 (Na', K” ) thì 1Eq = 1 mol hay 1 mEq = 1 mol Trường hợp điện tích ion là 2 (Ca””, Mg”” ) thì 1 Eq = 1⁄2 mol
Trường hợp điện tích ion là 3 (Al””” ) thì 1 Eq = 1⁄3 mol
Chuyển đổi giữa nồng độ lượng chất và nồng độ đương lượng:
Thí dụ: Calci huyết = 4.5 mEq/1 = 4.5/ 2 = 2.25 mmol/l
Kali huyết = 4.2 mmol/l= 4.2x 1= 4.2 mEq/l
2 CÁC CÁCH BIÊU THỊ NÒNG ĐỘ DUNG DỊCH
2.1 Nồng độ theo khối lượng dung dịch (P/p)
2.2 Nồng độ phần trăm (%)
Nông độ % biểu thị số gam chất tan có trong 100g dung dịch
Ví dụ: CuSO4 5% = có 5g CuSO4 trong 100g dung dịch
Công thức tính:
met dd 100 (1) C% of — Incl 5 x 100 (2)
C%=
Trong đó: mct: khối lượng chất tan (g)
mđd: khối lượng dung dich (g)
Trang 25Dung dich va cac cach biéu thi nong độ của dung dịch trong xét nghiệm hoá sinh
v: thé tich dung dich (ml) d: khdéi hrong dung dich (g/ml)
Vi du: can 1 g glucose pha vao trong nuéc can cho du 100g, thé vao (1),
ta có: C%=1%; cân 1g phenolphtalein pha vào 100ml dung dịch cồn có khối
lượng dung dịch d =1,§, thế vào công thức (2) trên, ta có: C% = 1,25%
2.3 Nồng độ phần nghìn (%a)
Nông độ phần nghìn biểu thị số gam chất tan có trong 1000g dung dịch
m dungdịch = m dung môi + m chất tan
Cách pha: ví dụ: pha 100g dung dịch NaCl 5% Ta cân chính xác 5g NaCl va hoa vao 100g H,O
Khối lượng chất tan cần lấy:
ch.mdd_ 5.100 met=—_—_—_ = ——— =5
100 100
Néu la cac tinh thé ngậm nước, phải trừ lượng nước Vd: CuSO¿ - 5H;O
Tương tự như vậy ta pha nông độ phân ngàn
2.4.3 Nông độ mol/
Nông độ mol/1 (Cu) được tính bằng số mol chất tan trong 1 lít dung dịch
Mol cé thé 1a mol phân tử, có thể là mol ion (ion g/1)
Ví dụ: dung dịch NaOH 0,2M: có 0,2 mol NaOH (= 8gNaOH) tan trong 1
lít dung dịch
Trang 26Dung địch và các cách biểu thị nồng độ của dung dịch trong xét nghiệm hoá sinh
v: thé tich dung dich (lit) mM" M v
m: khối lượng chất tan
M: khối lượng mol chất tan
Cách pha: cần pha Ilít dung dịch NaCl 1M: cần cân trên cân phân tích I mol NaCl (M=58,5g), hoà tan trong nước, chuyên dung dịch vào bình định mức
dung tích Ilít, pha loãng với nước đến vạch 1lít rồi trộn đều Dung dịch như
thế gọi là dung dịch NaCl 1mol/1 hay 1M
Tính theo công thức:
Ví dụ: ta cần pha 0,5lit dung dich NaCl 0,3M
m
Cu “UV >m=Cy MV
Kh6i lugng NaCl can can: m = 0,3 x 58,5 x 0,5 = 8,775g
Cân đúng 8,775g NaCl hoà tan trong nước rồi chuyên vào bình định mức
cỡ 0,5lít (500ml), pha loãng bằng nước đến vạch 0,51 rồi trộn đều
2.4.4 Nông độ đương lugng (equivalent)
Ký hiệu là N hay E: biểu thị số đương lượng gam chất tan có trong 1 lít dung dịch
- Đương lượng gam của một chất (E) là lượng chất đó tính ra gam khi phan ửng tương đương với một nguyên tử gam hydro
- Dung dịch chứa ! đương lượng gam chất trong 1 lít được gọi là dung dịch nguyên chuẩn (1N)
Trang 27Dung dịch và các cách biểu thị nông độ của dung dịch trong xét nghiệm hoá sinh
- Các dung dịch chứa 0,1; 0,01; 0,001 đương lượng gam chất trong 1 lít hay 0,1N; 0,01N; 0,001N được gọi là dung dich deci nguyén chuẩn, centi nguyên chuẩn, mili nguyên chuẩn (equivalent, miliequivalent)
- Vì các chất tương tác với nhau theo các lượng tương đương, nên nồng độ
đương lượng được sử dụng rộng rãi trong định lượng các chat
- Các dung dịch có nồng độ đương lượng bang nhau sẽ phản ứng với những thể tích bằng nhau Do đó, từ nồng độ chất này có thể suy ra nồng độ chất khác
Đương lượng gam N=—
n
n: số điện tử (e) trao đổi hay cho nhận
HạSOa + 2NaOH = Na;SO¿a + 2H;O
Víidu E(HC) = “ = 365
E (H;S5O¿ay = » = 49g
E(NaoH) = “-9z 1 1
2.5 Pha loãng một dung dịch
Dùng phương pháp trộn lẫn, tìm tỷ lệ các cấu tử (qui tắc đường chéo)
Ví dụ: cần pha dung dich 22% tir dung dich 50% của chất đó bằng cách dùng nước để pha loãng 22 _ m(80%)
28 m,(0%)
Theo quy tắc đường chéo ta có tỷ lệ:
NưZ
2N
Hiệu số nồng độ dung dịch đặc và dung dịch cần pha là: 50 - 22 = 28
Hiệu số nồng độ cần pha và dung dịch loãng (trong trường hợp này là nước C%=0) là 22 - 0 = 22
Trang 28Dung dich và các cách biểu thị nông độ của dung dịch trong xét nghiệm hoá sinh
Ta có tỷ lệ là 22/28 nghĩa là lấy 22 phần khối lượng dung địch đặc trộn
với 28 phần khối lượng dung dịch loãng (nước)
- Pha dung dịch có nồng độ trung bình giữa một dung dịch có nồng độ cao
và một dung dịch có nồng độ thấp hơn
Ví dụ: cần pha dung dịch 20% từ dung dịch 42% và dung dịch 16%
Theo quy tắc đường chéo:
Trang 29Bảo quản và kiểm tra chất lượng các hoá chất và sinh vật phẩm trong XNHS
BAO QUAN VA KIEM TRA CHAT LUQNG CAC HOA CHAT VA SINH VAT PHAM TRONG
XET NGHIEM HOA SINH
Muc tiéu hoc tap
1 T rình bày được cách bảo quản các hoá chất và sinh vật phẩm trong xét
nghiệm hoá sinh
2 Trình bày được cách kiểm tra chất lượng hoá chất và sinh vật phẩm trong xét
nghiệm hoá sinh
3 Áp dụng được cách bảo quản hóa chất và sinh vật phẩm trong xét nghiệm hóa Sinh
4 Kiểm tra được chất lượng hóa chat và sinh vật phẩm
Hoá chất và sinh vật phẩm nếu được bảo quản đúng cách và thường xuyên được
kiểm tra sẽ góp phần quan trọng trong chân đoán, điều trị, theo đõi và phòng bệnh
1 BAO QUAN CAC HOA CHAT VA SINH VAT PHAM TRONG XET NGHIEM HOA SINH
1.1 Bảo quản về mặt chất lượng
Đề đảm bảo chất lượng các hoá chất và sinh vật phẩm, cần lưu ý một số van dé
sau:
1.1.1 Nhiệt độ
Mỗi hoá chất và sinh vật phẩm được bảo quản ở nhiệt độ thích hợp
- Một số được bảo quản ở nhiệt độ phòng thí nghiệm Ví dụ: các acid vô cơ, các
chất khoáng, một số acid hữu cơ,
- Một số được đóng kín và bảo quản trong tủ lạnh: 4 đến 8°C Ở điều kiện nay sẽ ức chế được vi khuẩn Ví dụ: các vitamin, một số thuốc thử hữu cơ, các enzym, các
chế phẩm protein đông khô
- Một số được bảo quản ở 0°C, một số khác ở đông lạnh: -17 đến -86°C, hoặc lạnh
sâu hơn Ví dụ: một số sinh vật phẩm như huyết thanh mẫu, kháng nguyên,
khang thé, tế bào
1.1.2 Thời hạn sử dụng
Tuỳ theo nhiệt độ bảo quản, thời hạn sử dụng của mỗi hoá chất sẽ khác nhau
Trang 30Bảo quản và kiểm tra chất lượng các hoá chất và sinh vật phẩm trong XNHS
8°C Trong khi đó kit để định lượng glucose có thê bảo quản một tháng ở nhiệt độ 20-
25°C và 3 tháng ở nhiệt độ 2 - 8°C; kit định lượng cholesterol toàn phần bảo quản được 3 tuần ở 20 - 25°C, va 3 tháng ở nhiệt độ 2 - 8°C
1.1.3 Các dạng hoá chất
Khi hoá chất ở đạng bột hay dạng lỏng chưa pha cũng như ở đạng đóng gói nguyên vẹn đối với các sinh vật phẩm, thời hạn sử dụng kéo dài hơn các hóa chất đã
pha chế
Ví dụ: các dung dịch enzym ở dạng bột hay dạng lỏng trong chai lọ còn nguyên
chưa pha, thời hạn sẽ kéo dài đến vài năm (hạn sử dụng thường ghi ở ngoài hộp)
Trong khi đó dung dịch đã pha rồi, thời hạn sử dụng tối đa chỉ khoảng 3 tháng, thường thì chỉ trong vài tuần phải pha lại đợt hoá chất khác
1.1.4 Tính chất của các hoá chất và sinh vật phẩm
- Khi hoá chất bị đổi màu hoặc tự nhiên bị tủa đục thì phải nghĩ đến hoá chất đã bị
giảm chất lượng, nhất là các hoá chất có protein
- Đối với các sinh vật phẩm, ngoài hiện tượng đôi màu và kết tủa đục, một số sinh vật phẩm như gen còn có thê bị biến dạng
- Một số hoá chất đễ bị oxy hoá bởi ánh sáng, cần để trong những chai lọ có màu
đậm hoặc bọc trong giấy bạc, giấy than hoặc để trong tối
Ví dụ: Hoá chất định lượng Bilirubin cần bảo quán ở trong tối, tránh ánh sáng 1.1.5 Cất giữ hoá chất, sinh vật phẩm
Mọi bình chứa cho dù ở nhiệt độ phòng thí nghiệm, 4°C hay đông lạnh đều phải
được đậy kín một cách thích hợp bằng: nút chai, nút van, nit ban, giấy parafn Để
tránh bị nhiễm khuẩn hoặc nhiễm các chất khí trong phòng thí nghiệm như: CO;, NHạ, HCl
Chai thuốc thử hoá chất nguyên phái được cất riêng, ghi nhãn chai và ghi nhiệt
độ bảo quản: PTN, 0 - 4°C, < 0°C, trong bình hút âm ở 0 - 4°C
Nhiều hoá chất hút âm trong không khí Nếu lượng nước của chúng trong thuốc thử tăng lên, sẽ làm trọng lượng phân tử và độ tinh khiết của chúng có thể bị thay đôi
Trang 31Bảo quản và kiểm tra chất lượng các hoá chất và sinh vật phẩm trong XNHS
Trường hợp này khi cân đong cần phải gia tăng cho thích hợp Phương pháp tốt
nhất là bảo quản thuốc thử trong bình hút ẩm và trong tủ lạnh ở 4C
1.2 Bảo quản về mặt an toàn phòng thí nghiệm
1.2.1 Thiết bị bảo quản hoá chất
- Thiết bị an toàn: tủ Hốt dùng để bảo quản và thao tác các chất hoá học và khí nén
- Các bình an toàn: dùng để vận chuyên các acid, kiềm hoặc các dung môi khác
Các bình có dung tích 500 ml va cac can có thể tích lớn hơn 12 lít được sử dụng
để bảo quản, phân phối
- Các buồng an toàn: dùng để bảo quán các chất lỏng đễ cháy
- Tủ lạnh: đùng để bảo quản các hoá chất dễ bốc hơi và dễ cháy
- Chỉ một số hoá chất cần thiết sử dụng hằng ngày mới được để ngoài thiết bị bảo
quản
1.2.2 Sử dụng hoá chất
- Nhận biỄ! các quy ước về nhãn mác:
Cac dau hiệu dé phân biệt các chất độc hại là điều quan trọng không chỉ để cảnh báo các kỹ thuật viên về các chất độc mà còn để phân biệt với các chất có thể gây nên
tình trạng khân cấp như các chất cháy hoặc nô Người ta đã quy định các kí hiệu màu
sắc ở phía trên của nhãn để dễ phân biệt các loại hoá chất độc hại:
+ Màu xanh da trời là kí hiệu chỉ loại chất có hại cho sức khoẻ, độc với hô hấp,
tiêu hoá, có thể hấp thụ qua đa, cần phải bảo quản ở chỗ chắc chắn
+ Màu đỏ là kí hiệu chỉ loại chất đễ cháy, cần phải bảo quản cách xa các yếu tố
đặc tính của hoá chât Điều này đặc biệt quan trọng đôi với việc vận chuyên và trộn
các hoá chất vì một số có thê gây độc hại, dễ cháy, dé nô
Trang 32Bảo quản và kiêm tra chất lượng các hoá chất và sinh vat phẩm trong XNHS
Vị dụ:
+ Acid acetic không pha voi acid chromic, acid nitric (HNO3)
+ Carbon tetrachlorid không pha với Natri (Na)
+ Chất long dé chay khéng pha véi nuéc oxy gia (H20,), acid nitric (HNO3)
- Cần sắp xếp, bảo quản hoá chất theo số lượng và đặc tính hoá chất đề tránh các sự
cố Các hoá chất thường dùng cần sắp xếp riêng Việc sắp xếp không nên chỉ dựa theo vần A, B, C mà còn cần được sắp xếp theo đặc tính của hoá chất Các loại hoá chất sau cần được sắp xếp riêng:
+ Chất lỏng đễ cháy
+ Chat rắn đễ cháy
+ Acid vô cơ
+ Acid hữu cơ
- Các chất dễ cháy và các chất có khả năng cháy:
Các chất lỏng dễ cháy được sử dụng rất nhiều hằng ngày trong các phòng nghiên cứu hoá sinh là những chất rất nguy hiểm vì chúng dễ cháy hoặc dễ gây nô
Chúng được xếp loại theo điểm bốc cháy (là nhiệt độ mà ở đó hơi của chúng có khả
năng bốc lên để tạo thành một hỗn hợp dễ cháy với không khí)
+ Chất long dé cháy có nhiệt độ bốc cháy < 37,8°C (100°F)
+ Chất lỏng có khả năng cháy có điểm bốc cháy ở nhiệt độ > 37, 8°C (100°F) Một số chất lỏng dễ cháy và có khả năng cháy thường được sử dụng là:
Aceton, Benzen, Ethanol, Heptan, Isopropanol, Methanol, Toluen, Xylen
Chú ý: các chất dễ cháy còn gồm các loại chất khí và chat ran nhw paraffin Trước khi mở nút chai chứa các chất dễ cháy cần tránh xa ngọn lửa từ 2-3 m Không được đun bình chứa các chất dễ cháy trực tiếp trên ngọn lửa mà phải đun cách thuỷ hoặc đun trên bếp điện kín
Trang 33Bảo quản và kiểm tra chất lượng các hoá chất và sinh vật phẩm trong XNHS
- Các chất ăn mòn:
Các acid như: acid sulfuric (HạSO¿), acid nitric (HNO;), actd chlohydric (HCI), acid trichloracetic (TCA), acid percloric, acid orthophosphoric
Các kiềm manh nhu: NH,OH, NaOH va KOH
+ Không được dùng pipet hút trực tiếp bằng miệng các chất ăn mòn
+ Việc đỗ rót các dung dịch ăn mòn phải thận trọng, từ từ, làm thấp đưới mắt và luôn luôn đeo kính bảo vệ
Việc hoà tan các chất ăn mòn ở thể rắn, thể đặc (ví đụ: hoà NaOH vào nước
hoặc hoà loãng các acid đặc) phải hết sức thận trọng vì đây là những phản ứng toả
nhiệt, có thể gây bỏng
Chú ý: Khi hoà loãng acid phải đỗ acid vào nước để lượng acid bao giờ cũng ít
hơn nước và phải đỗ từ từ: Không được đỗ nước vào acid vì điều này sẽ gây toả nhiệt lớn, vỡ bình, bắn acid ra chung quanh và gây nguy hiểm
Xử lý khi hút phải acid: Dùng NaHCO¿ 3% súc miệng, sau đó súc miệng bằng
nước sạch nhiễu lần
- Các hoá chát độc:
Những hoá chất độc là những chất có thể gây chết người hoặc gây bệnh nếu ăn
phải, uống phải, ngửi phải hoặc tiếp xúc trực tiếp qua đa, mắt Những chất phổ biến
- Những chất gây ung thư:
Trong phòng thí nghiệm, một số hoá chất đã được xác định là những chất gây
ung thư Vì vậy, việc hiểu rõ những hoá chất nào là hoá chất có thể gây ung thư là một
điều hết sức quan trọng
Trang 34Bảo quản và kiểm tra chất lượng các hoá chát và sinh vật phẩm trong XNHS
Một số chất nhuộm hoá mô, đặc biệt là các chất nhuộm DNA như rhodamin,
auramin, ponceau MX, xanh trypan, ethidium bromid
Hydrazin và các chất dẫn xuất
Một số kim loại: Berylli, cadmi, thalli, niken và chì
Một số hợp chất của chrom như acid chromic
B- naphthylamin
B- propiolacton
Các dung môi như benzen, 1,4-dioan, chloroform, carbon tetrachlorid, cac
hydrocarbon halogen hoa khac
Amian
Ethylenoxid
Một số loại khang sinh: streptozotocin, actinomycin
- Các chất nghi gây ung thư:
+ Các chất hoá học sinh phóng xạ: uranyl acetat
+ Một số thuốc trừ sâu: DDT, đieldrin
+ Ozon
Trang 35Bảo quản và kiểm tra chất lượng các hoá chất và sinh vật phẩm trong XNHS
1.2.3 Các trang thiết bị bảo vệ cá nhân
Cac phan co thê hay bị tôn thương khi làm việc trong phòng thí nghiệm là mắt,
da, đường hô hấp và tiêu hoá Vì vậy, việc sử dụng các trang thiết bị bảo vệ cá nhân là rất cần thiết Các trang thiết bị gồm các vật dụng sau:
Kính mắt, kính bảo hộ, tấm che mặt là những trang thiết bị giúp bảo vệ mắt và
mặt của người làm xét nghiệm khỏi các chất hoá học bắn ra Các kính áp tròng
không có tác dụng bảo vệ mắt nên không đeo khi làm việc ở phòng thí nghiệm Bắt kỳ một dung địch nào bắn vào mắt đều phải rửa mắt ngay
Găng tay và ống tay bằng cao su cần được sử dụng khi thao tác với các chất ăn da
Các găng tay nhựa latex cần được sử dụng hằng ngày trong phòng thí nghiệm
Tuy nhiên, các găng tay bằng polyvinyl có thể được sử dụng thay thế đối với
những người dị ứng với nhựa latex
Các áo choàng trong phòng thí nghiệm (áo choàng labo) phải có đủ độ dài, đủ khuy
Ủng đạt đúng tiêu chuẩn, các giầy rọ, mỗi giầy hở hoặc dép sandal đều có thể bị tác hại của chất độc trong phòng thí nghiệm
Khau trang được sử đụng trong một số quá trình làm việc trong phòng thí nghiệm Khi sử dụng các chất độc sinh học, hoá học, hoặc các chất độc đặc biệt phải sử dụng khâu trang đặc chủng phù hợp Phải sử dụng khâu trang phòng độc có bộ lọc khí đặc biệt khi làm việc trực tiếp với các bệnh nhân lao, hoặc khi thực hiện
các thao tác có phơi nhiễm với các hạt khí dung từ hơi thở của bệnh nhân lao,
SARS, cum ga
1.2.4 An toàn về sinh học (tránh nhiễm khuẩn trong phòng thí nghiệm)
Tât cả các mẫu máu và dịch cơ thê khác được thu lượm, vận chuyên, cằm bằng tay và sử dụng phải được chú ý một cách chính xác Phải sử dụng các dụng cụ bảo vệ như găng tay, áo choàng, khâu trang nếu mẫu bệnh phẩm có thể rơi vãi hoặc bắn ra
Khi li tâm các mẫu sinh học phải đậy nắp ống nghiệm và đậy nắp máy li tâm để tránh các hạt khí đung mang vi khuẩn lây bệnh phân tán ra môi trường xung quanh
Các bệnh phẩm thông thường như máu, nước tiểu, dịch chọc đò, dịch não tuỷ của bệnh nhân có thê là nguyên nhân truyền bệnh do vi khuẩn, virus Vì vậy, những
người làm xét nghiệm phải:
Mặc áo choàng, đeo các thiết bị bảo vệ thích hợp
Dùng kẹp gắp các mảnh thuỷ tỉnh vỡ và các vật nhọn khác
Trang 36Bảo quản và kiêm tra chất lượng các hoá chất và sinh vật phẩm trong XNHS
Tham cac dịch tràn bằng giấy thắm, giấy ăn rồi để vào túi nylon riêng
Làm sạch vị trí bẩn với các chất tây rửa thích hợp
Khử khuẩn vị trí bắn với các đung dịch chất tây khuẩn
Rửa vị trí nhiễm bần bằng nước máy thông thường
Bỏ tất ca các dụng cụ, vật lây bản vào chỗ riêng
Chỉ đóng nắp máy li tâm khi buồng chứa rotor trong máy đã khô
Với các mẫu bệnh phẩm của các bệnh nhân đặc biệt như bệnh nhân nhiễm HIV,
viêm gan có các quy định đặc biệt riêng về thao tác và xử lý
1.2.5 An toàn về phóng xạ
Nhiều hoá chất sử dụng trong các phòng thí nghiệm có hoạt tính phóng xạ Ví dụ: mononucleotid ghi dấu như: methyl-3H-thymidin, uridin-5-3H, acid amin ghi dấu như C-DI- valin
Khi thao tác với các chất phóng xạ phải đội mũ báo hiểm, mặc áo choàng, đeo
khẩu trang đeo kính, đeo găng tay cao su và phải hết sức cân thận tránh đánh đỗ, rơi vãi
Khi thí nghiệm xong, tất cả các hoá chất phóng xạ phải được lưu trữ và có khu vực sử dụng riêng, có ghi dấu hiệu riêng Các dụng cụ thí nghiệm với chất phóng xạ phải được xử lý và rửa theo một quy trình riêng bảo đảm sạch hoàn toàn chất phóng
xạ
Thường xuyên kiểm tra việc ô nhiễm phóng xạ và khử phóng xạ theo quy định
Số lượng chất phóng xạ nhập, sử dụng và thải phải có số kiểm tra chặt chẽ
Những người làm nghiên cứu với chất phóng xạ phải được kiểm tra sức khoẻ và thử máu 6 tháng 1 lần, nếu bảo đảm sức khoẻ mới được tiếp tục làm việc với chất phóng xạ
Khi có đỗ vỡ dụng cụ chứa chất phóng xạ, phải lập tức thông báo cho cơ quan
chuyên trách xử lý theo quy trình đặc biệt
1.2.6 Đối với các khí nén
Các khí nén thường được sử dụng trong các phòng thí nghiệm như: Ó¿, CO;,
Nz, acetylen, proban, butan để làm thí nghiệm hoặc để đun nấu, có thể gây cháy Do
đó, khi sử dụng các khí nén cần phải thực hiện một số điểm sau:
- Phải biết rõ loại khí ta sẽ sử dụng
- Các bình khí nén phải luôn luôn được đóng kín và đặt thẳng đứng
- Không được đặt chất lỏng dễ cháy và khí nén ở cùng một chỗ
Trang 37Bảo quản và kiểm tra chất lượng các hoá chất và sinh vật phẩm trong XNHS
Phải sử dụng bộ phận điều chỉnh (các van đúng với loại khí được sử dụng)
Không được tuỳ tiện thử điều chỉnh hoặc đóng, mở khí nén bằng bộ phận điều
chỉnh khi không sử dụng khí đó
Không được tháo bỏ nắp bảo vệ của bình khí nén khi chưa sử dụng bình khí
Không được đóng chặt cứng van bình khí
Phải sử dụng xe đây để vận chuyền các bình khí lớn
Phải luôn luôn kiểm tra tình trạng an toàn của bình khí và định kỳ phải xem có sự
rò rỉ khí hay không
2 KIEM TRA CHAT LUQNG CAC HOA CHAT VA SINH VAT PHAM
Để kiểm tra chất lượng các hoá chất và sinh vật phẩm cần lưu ý một số điểm
sau:
- Dung địch hoặc sinh phẩm đã quá hạn sử dụng ghi ngoài hộp
- Hoá chất dạng bột đổi màu và đông vón lại
-_ Hoá chất đạng nước bị đục và có cặn lắng
- Hoá chất đôi màu, thường có khuynh hướng ngả màu xám đen
- Đo trên huyết thanh mẫu (dùng làm chất kiểm chứng hằng ngày) của các hãng quốc tế hoặc một loạt mẫu nghiệm của bệnh nhân có khuynh hướng tăng hoặc
giảm dan
- Các trị số chất kiểm chứng hằng ngày vượt ra ngoài khoảng 2 SD hoặc 3 SD
(xem bài kiểm tra độ tin cậy trong kết quả xét nghiệm sinh hoá) sau khi đã loại trừ các nguyên nhân khác Nếu khi thay chai hoá chất mới mà kết quả xét nghiệm
trở về bình thường thì đúng là do hoá chất bị hỏng
Trang 38Các đơn vị do luong dùng trong XNHS hiện nay
CÁC ĐƠN VỊ ĐO LƯỜNG DÙNG TRONG XÉT NGHIỆM HÓA SINH HIỆN NAY
Mục tiêu học tập
1 Trình bày được hệ thống đơn vị đo lường quốc tế SI (SI: Systéme International
đ*Unilé$s) sử dụng trong hóa sinh lâm sàng
2 Chuyển đồi được đơn vị cũ sang đơn vị SĨ và ngược lại
Hiện nay, theo quy ước quốc tế các đơn vị dùng trong xét nghiệm hóa sinh đều
theo hệ thống đơn vị chuẩn SI và bỏ dần những đơn vị cũ
Ở Việt Nam, đã bắt đầu phố biến đơn vị SI từ 8 năm trở lại đây Điều này có ý nghĩa rất lớn trong việc thống nhất sử dụng đơn vị trong tất cả các phòng thí nghiệm trên thế giới
1 HE THONG DON VI DO LUONG QUOC TE SI SU DUNG TRONG HOA SINH LAM SANG
1.1 Cau tao cia don vi SI
Có 3 đơn vị chính và 2 đơn vị phụ:
Đơn vị chính: Đơn vị cơ sở, đơn vị dẫn xuất, đơn vị phụ
Đơn vị phụ: Tiếp đầu ngữ là những bội số và ước số thập phân của hệ thống SĨ
va đơn vị ngoài SĨ
1.1.1 Đơn vị chính
- Đơn vị cơ sở: Có 7 đơn vị SĨ
+ Lượng chất : mol (mol)
- _ Đơn vị dẫn xuất: từ đơn vị cơ sở, có thể ghép các đơn vị cơ sở với nhau hoặc
bằng nhân hay chia ta có đơn vị dẫn xuất
Trang 39Các don vi do luong ding trong XNHS hién nay
Hecto Deca
Deci Centi Mili Micro
Nano
Pico Femto Atto
- Đơn vị ngoài SI: Có 8 đơn vị không thuộc trong hệ thống SI nhưng được sử dụng
hằng ngày và trong các chuyên khoa được Đại hội toàn thê về trọng lượng và đo lường (CGPM) quyết định bảo lưu và cho sử dụng phố biến
Trang 40Các don vị đo hường dùng trong XNHS hiện nay
1.2 Ap dung SI trong lam sang
1.2.1 Đơn vị nông dé mol
Đối với một số chất mà người ta biết rõ trọng lượng phân tử thì được quy định
dùng đơn vị mol hoặc ước số của mol Nồng độ chất đó được biểu thị bằng số mol hoặc ước số của mol/ 1 lít dung dịch (không dùng trong 1ml hoặc 1 dl dung dich)
Khi dùng mol phải xác định chất đó là: phân tử, nguyên tử hay ion Nếu là ion phải ghi thêm chữ ion trước tên chất
Vi dụ: lon Kali
A A » A A ^ A z ˆ
Đơn vị nông độ mol của một sô thông sô hóa sinh:
- Ion Na” mEq/1 mmol/1
- lon Ca” : mEq/1 mmol/l
1.2.2 Don vi néng dé khdi lugng
Một số chất chưa biết rõ trọng lượng phân tử thì dùng đơn vị khối lượng (g/1
hoặc g/dl hoặc mg/dl)
Apo A;, Apo B : mg/dl