TỔNG QUAN
Tên khoa học và vị trí phân loại
Đẹn ba lá hay Mạn kinh, Quan âm, Từ bi biển, Vạn kim tử, Mác nim (Tày) [3] có tên khoa học là Vitex trifolia L.[1], [2], [3] Đẹn ba lá thuộc chi Bình linh (Vitex L.) Trong một số tài liệu cũ, sách báo Việt Nam cũng như quốc tế, chi Vitex L được phân loại vào họ Cỏ roi ngựa (Verbenaceae)[2]
Theo hệ thống phân loại của nhóm phát sinh chủng loài thực vật hạt kín APG IV 2016 (Angiosperm Phylogeny Group), và các nghiên cứu gần đây trên thế giới vị trí phân loại của chi Vitex L như sau:
Đặc điểm thực vật và vị trí phân bố
1.2.1 Đặc điểm thực vật Đẹn ba lá là cây nhỏ hay cây bụi, mùi thơm, có thể cao tới 3m [1], [3] Cành non có 4 cạnh, có lông mềm, màu xám nhạt; cành già tròn, nhẵn, màu nâu Lá kép mọc đối,
Cây có lá chét hình trứng với 1 hoặc 3 lá chét, phủ lông trắng ở mặt dưới Cụm hoa chùy tận cùng có nhiều xim đối, mỗi xim mang 2-3 hoa tím nhạt hoặc lam nhạt Đài hoa hình chuông có lông trắng và 5 răng nhỏ đều Tràng hoa hình trụ có lông ở mặt ngoài trừ phần gốc, môi trên có 2 thùy ngắn, môi dưới có 3 thùy, thùy giữa lớn hơn Quả hình bầu dục có rãnh, được che kén quá nửa bởi đài phát triển Cây phân cành nhiều, ra hoa quả đều hàng năm, mùa hoa từ tháng 5-7 và mùa quả từ tháng 9-11.
Chi Vitex L là một trong những chi quan trọng và lớn nhất thuộc họ Lamiaceae với khoảng 750 loài [29], [37], phổ biến ở các vùng nhiệt đới và cận nhiệt đới như Châu Á, Mỹ Latinh và Châu Phi [29] Đẹn ba lá có nguồn gốc ở Nam Phi, vùng phân bố từ Madagasca đến Xrilanca, Afghanistan, Ấn Độ, Myanma, Nam Trung Quốc, Nhật Bản xuống các nước vùng Đông
- Nam Á đến các vùng Bắc Australia và phía động Caledonia [1] Ở Việt Nam, Đẹn ba lá phân bố rải rác khắp các tỉnh vùng núi thấp đến trung du và đôi khi gặp ở cả đồng bằng, loại 1 lá chét rất phổ biến ở dọc các bờ biển tỉnh Thanh Hóa, Nghệ An, Hà Tĩnh [1], [3].
Thành phần
Trong Đẹn ba lá bao gồm nhiều thành phần hóa học như terpenoid (labdan diterpenoid), phytosterol, flavonoid, acid béo và các hợp chất khác trong đó terpenoid và flavonoid được xác định là các hợp chất chiếm hàm lượng chính[7], [11], [20]
Các thành phần được tìm thấy trong tinh dầu Đẹn ba lá chủ yếu là các terpenoid chia thành các nhóm: monoterpen, monoterpenoid, sesquiterpen, sesquiterpenoid, diterpen, diterpenoid và các hợp chất khác [17], [30] Năm 2019, tại Ấn Độ, Thomas đã tìm ra 16 hợp chất trong tinh dầu Đẹn ba lá trong đó thành phần chính là caryophyllene (38,36%) và eucalyptol (25,72%) [35] Cũng tại Ấn Độ theo Chadrasekaran và cộng sự thì eucalyptol (16,35%), sabinen (9,44%) và caryophyllen (8,91%) là các thành phần chính của tinh dầu[43] Hay ở Việt Nam tinh dầu Đẹn ba lá chứa các thành phần chính là sabinen (19,4%), eucalyptol (15,7%) và caryophylen (14,5%) [30] Sự khác biệt về thành phần tinh dầu có lẽ đến từ các yếu tố bên trong, bên ngoài và sự tương tác giữa chúng[17]
Có thể thấy, mặc dù hàm lượng và thành phần các hợp chất có trong tinh dầu Đẹn ba lá ở các nghiên cứu là khác nhau nhưng tất cả đều cho thấy thành phần chính trong tinh dầu Đẹn ba lá là caryophyllen, sabinen và eucalyptol
1.3.2 Flavonoid Đẹn ba lá chứa khoảng 57,41 mgQE/g flavonoid trong cao chiết ethanol Trong đó, hàm lượng flavonoid được tính theo microgram quercetin trong 1 mg cao chiết (𝜇gQE/mg)[20] Trên thế giới đã có nhiều hợp chất flavonoid được phân lập từ Đẹn ba
4 lá và được nghiên cứu nhiều tác dụng sinh học[7] Các hợp chất flavonoid đã được nghiên cứu phổ biến như (Bảng 1.1):
Bảng 1.1 Các hợp chất flavonoid được tìm thấy từ Đẹn ba lá
STT Tên hợp chất CTPT Mw TLTK
Theo nghiên cứu của Qian Wang và cộng sự, hợp chất (2) có tác động lên hệ thần kinh bệnh Alzheimer [33] Các hợp chất (3), (4), (5), (6), (7), (8) đã được chứng minh khả năng ức chế sự phát triển của tế bào ung thư động vật có vú ở pha G2/M cũng như gây ra quá trình chết tế bào [47].
Không chỉ tinh dầu Đẹn ba lá mà cả quả và lá của cây cũng được nghiên cứu cho thấy chúng là những nguồn dồi dào các terpenoid đặc biệt là ladbdan diterpenoid[20] Đã có tổng cộng 53 dẫn chất labdan diterpenoid khác nhau được mô tả với mức độ phong phú bậc nhất trong số các loài thực vật Và gần đây nhất, các nhà nghiên cứu khoa học đã xác định ra 4 hợp chất labdan diterpenoid mới từ chiết xuất ethanol của quả cây Đẹn ba lá và đặt tên lần lượt là Vitetrolin A, B, C, D (Bảng 1.2) [22]
Năm 2017, Pan Lou cùng cộng sự đã xác định được từ chiết xuất ethanol của lá loài Đẹn ba lá 4 hợp chất labdan diterpenoid alkaloid chứa dị vòng 2-cyano-pyrrol mới và đặt tên lần lượt là Vitepyrroloid A, B, C, D (Bảng 1.3) [32]
5 Bảng 1.2 Các labdan diterpenoid mới được tìm thấy từ quả Đẹn ba lá
STT Tên hợp chất CTPT Mw TLTK
6 Bảng 1.3 Các labdan diterpenoid alcaloid được tìm thấy từ lá Đẹn ba lá
STT Tên hợp chất CTPT Mw TLTK
16 Vitepyrroloid D C25H38N2O4 430,27 [32] Ở lá của Đẹn ba lá, các triterpenoid (17-22) chủ yếu tồn tại ở các dạng oleanan, ursan, lupan và taraxeran Thêm vào đó ở loài này còn chứa các dẫn xuất sterol (23-29), đặc biệt là các phytosterol (Bảng 1.4) [20]
Bảng 1.4 Một số hợp chất triterpenoid và phytosterol từ lá Đẹn ba lá
STT Tên hợp chất CTPT Mw TLTK
1.3.4 Acid béo và các hợp chất khác
Các anthraquinon, physcion chỉ được hình thành thông qua con đường polyketide (quá trình chuyển hóa xảy ra trong quả Đẹn ba lá) Các dẫn xuất Benzoic acid được phân lập từ các bộ phận khác nhau của cây[21] Các acid béo mạch dài no-không no và các rượu được tìm thấy từ lá và cành cây[20]
Tác dụng sinh học
1.4.1 Tác dụng chống oxy hóa
Hoạt tính chống oxy hóa của loài Đẹn ba lá được thử nghiệm bằng cách sử dụng chiết xuất ethanol từ loài cho tiếp xúc với 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl (DPPH) trong
30 phút Kết quả cho ra phạm vi hoạt động chống oxy hóa của Đẹn ba lá nằm trong khoảng 60,87% đến 89,99% với giá trị IC50 trong khoảng 40,0 đến 226,7 𝜇g/mL[39] Ngoài ra, Đẹn ba lá thể hiện giá trị IC50 bằng 64,5 𝜇g/mL ở khả năng làm sạch gốc tự do DPPH Kết quả này giúp cho Đẹn ba lá như một phương thuốc truyền thống chữa ngộ độc cá biển[36]
1.4.2 Tác dụng bảo vệ gan
Nghiên cứu cho thấy chiết xuất ethanol của Đẹn ba lá với liều dùng 200mg trên mỗi cân nặng cơ thể thể hiện khả năng bảo vệ gan một cách đáng kể chống lại CCl4 gây tổn thương gan ở chuột sau 7 ngày điều trị Quan sát khả năng ở trên được cho là tương đương với tác dụng của một thuốc đạt tiêu chuẩn khác là Silymarin với liều dùng 100mg trên mỗi cân nặng cơ thể cũng trong 7 ngày điều trị Sự tương đồng này thể hiện rõ ở việc làm giảm đáng kể nồng độ của các men gan quan trọng trong huyết thanh, cụ thể như glutamat pyruvat transaminase (SGPT), glutamat oxaloacetat transaminase (SGOT) và phosphat kiềm (ALP) Ngoài ra, sự giảm nồng độ bilirubin toàn phần và 𝛾-glutamyl transpeptidase (GGTP) càng khẳng định thêm tác dụng bảo vệ gan của mẫu[9]
1.4.3 Tác dụng chống co thắt
Nghiên cứu in vivo của các chất chuyển hóa chính trong chiết xuất n-hexane của Đẹn ba lá chỉ ra rằng vitexicarpin(5) là hoạt chất duy nhất có tác dụng co thắt khí quản Đáng chú ý, tác dụng này được quan sát chỉ sau 30 phút với liều thấp nhất 1,3.10-5 M trên khí quản chuột lang kích thích bằng ovalbumin Điều này cho thấy vitexicarpin(5) có khả năng ngăn chặn tác động của histamine do tế bào mast giải phóng bằng cách ổn định chức năng màng của tế bào mast.
1.4.4 Tác dụng chống viêm Đặc tính chống viêm của chiết xuất lá từ Đẹn ba lá đã được phân tích thông qua các nghiên cứu trên động vật Kết quả cho thấy chiết xuất được dùng ở liều 200mg trên mỗi cân nặng cơ thể cho ra tác dụng chống viêm phụ thuộc vào liều lượng Ở liều lượng này, cả chiết xuất nước và ethanol đều cho thấy tác dụng đáng kể (p < 0,0001) chống lại phản ứng viêm cấp tính với mức giảm tương ứng là 46,91% và 60,49% Mặc dù các giá trị này thấp hơn so với giá trị tiêu chuẩn (70,27%) đối với chứng phù tai do xylen gây
Đẹn ba lá có tác dụng chống phù nề đáng kể, ức chế tới 43% phù chân do carrageenan gây ra sau 3 giờ Tác dụng này cũng được chứng minh ở cả chứng phù chân do carrageenan và phù tai do xylene ở chuột Điều này cho thấy tiềm năng của Đẹn ba lá như một chất chống viêm hiệu quả.
1.4.5 Tác dụng chống ung thư và độc tính
Nghiên cứu khảo sát hoạt tính ức chế của Đẹn ba lá với tế bào ung thư vú (T47D) với nồng độ 25 𝜇g/mL và ủ trong 24 giờ, cho thấy kết quả hoạt tính đáng kể là 88,7% Trong đó, epirubicin và doxorubicin được sử dụng làm chứng dương và DMSO là chứng âm[26] Độc tính lên tế bào của các bộ phận trên mặt đất loài Đẹn ba lá đã được đánh giá trong một nghiên cứu in vivo sử dụng ba dung môi chiết xuất khác nhau là: methanol, ethyl acetate và chloroform thông qua phương pháp xét nghiệm trên tôm ngâm nước mặn Kết quả chỉ ra rằng chiết xuất methanol có hoạt tính gây độc tế bào cao nhất, với giá trị LC50 là 140 mg/mL Chiết xuất ethyl acetate cho thấy độc tính tế bào thấp hơn một chút, với giá trị LC50 là 165 mg/mL Cuối cùng, chiết xuất chloroform cho thấy độc tính tế bào ít nhất trong số ba loại, với giá trị LC50 là 180 mg/mL, với potassium dichromate làm chứng dương[12]
1.4.6 Tác dụng chống mất trí nhớ
Trong mô hình thử nghiệm tránh né thụ động và mô hình mê cung chữ T, chiết xuất nước từ lá Đẹn ba lá đã chứng minh hoạt tính chống mất trí nhớ (p < 0,01) một cách đáng kể Mẫu thử cho ra thời gian trốn thoát ngắn hơn đáng kể (12 giây) so với nhóm đối chứng (29 giây) và cho thấy phần trăm thời gian tối đa dành để thăm dò góc phần tư là 60,75% Kết quả này cao gần gấp đôi so với nhóm đối chứng, cho thấy khả năng duy trì trí nhớ được cải thiện[8]
1.4.7 Tác dụng diệt côn trùng Đẹn ba lá đã được chứng minh rằng có khả năng đuổi muỗi hiệu quả với liều lượng nhỏ nhất định Năm 2008, Tandon và cộng sự đã so sánh tinh dầu của Đẹn ba lá (Vitex trifolia L.) với Trinh nữ Châu Âu (Vitex agnus-castus L.) và nhận thấy rằng mặc dù tinh dầu của Trinh nữ Châu Âu kém hiệu quả hơn Đẹn ba lá, cả hai tinh dầu đều làm tăng thời gian ấu trùng, tỷ lệ tử vong của ấu trùng, thời gian nhộng và biến dạng trưởng thành, đồng thời làm giảm sự xuất hiện, khả năng sinh sản và khả năng sinh sản của trứng khi trưởng thành[40]
Nghiên cứu cho thấy Đẹn ba lá có tác dụng kháng khuẩn, khả năng này có thể đến từ Vitrifolin A – một terpenoid[45] Vitrifolin A được cho là đóng một vai trò quan trọng trong việc tăng cường đặc tính kháng khuẩn của chiết xuất Nó có khả năng liên kết với bề mặt của các hạt nano, do đó dẫn đến việc phân phối các chất chống vi khuẩn hiệu quả hơn và có mục tiêu hơn Cơ chế này cho phép vitrifolin A tác động mạnh hơn đến vi sinh vật, góp phần tăng cường tác dụng tổng thể của chiết xuất lá chống lại nhiều loại mầm bệnh[23]
1.4.9 Tác dụng kháng virus Đẹn ba lá đã được xác nhận tác dụng đáng kể kháng virus Molluscum contagiosum và Herpes simplex với nồng độ hiệu quả lần lượt là khoảng 0,25 𝜇g/mL và 0,5 𝜇g/mL Điều quan trọng là tác dụng kháng virus này đạt được mà không gây ra độc tính nào đáng chú ý Những phát hiện này nổi bật tiềm năng của Đẹn ba lá như một nguồn tự nhiên đầy hứa hẹn để phát triển các tác nhân chống vi rút an toàn và hiệu quả Việc nghiên cứu sâu hơn về các hợp chất có hoạt tính sinh học cụ thể và cơ chế hoạt động của chúng, cũng như các ứng dụng rộng hơn trong môi trường lâm sàng, sẽ nâng cao hiểu biết của chúng ta về tiềm năng điều trị của Đẹn ba lá trong các biện pháp chống vi-rút[41]
Trong một nghiên cứu về tác động của chiết xuất của 20 loài thảo dược Thái Lan đối với hoạt động phiên mã ngược của HIV-1, chiết xuất nước của Hedyotis triflora (phần trên mặt đất) cho thấy hiệu quả ức chế rất tốt (>90%) ở nồng độ 200 𝜇g/mL sau 1 giờ ủ, trong khi Doxorubicin hydrochlorid (chứng dương) ức chế hoạt động phiên mã ngược của HIV-1 ở mức 98,3% với nồng độ 1 mM Phát hiện này cho thấy chiết xuất từ Hedyotis triflora có tiềm năng đáng kể trong nghiên cứu phát triển liệu pháp chống HIV.
1.4.11 Tác dụng chống sốt rét
Trong một cuộc điều tra thông tin để thu thập kiến thức về thực vật có liên quan đến bệnh sốt rét và các triệu chứng liên quan, tiềm năng chống sốt rét từ 70 loài thực vật, đại diện cho 62 chi và 34 họ Kết quả nhấn mạnh Solanaceae là họ có tiềm năng nhất với 7 loài cho thấy đặc tính chống sốt rét đầy hứa hẹn Ngoài ra còn có các kết quả khác đáng chú ý xuất hiện ở họ Lamiaceae, đặc biệt là Ngũ trảo (Vitex negundo L.) và Đẹn ba lá (Vitex trifolia L.) được xác định là thuốc chống sốt rét tham khảo từ tài liệu
10 vùng Thung lũng Soon ở Pakistan Những phát hiện này cho thấy tiềm năng nghiên cứu đặc tính chống sốt rét của chúng[5].
Công dụng
Theo tài liệu cổ, quả cây Đẹn ba lá (Mạn kinh tử) vị cay, đắng, tính hơi hàn, vào
Mạn kinh tử là một loại thảo dược gồm 3 kinh can, phế và bàng quang, có tác dụng tán phong nhiệt, chữa các chứng đau nhức đầu, đau mắt Mạn kinh tử có thể được dùng để chữa cảm mạo, sốt, nhức đầu, đau nhức thái dương, đau nhức mắt, mặt mũi tối sầm, đồng thời cũng có tác dụng giảm đau Ngoài ra, Mạn kinh tử còn có tác dụng đuổi côn trùng khi tán nhỏ và cho vào kho thóc gạo hoặc tủ quần áo.
Một số bài thuốc dân gian từ Đẹn ba lá (Mạn kinh)
1.6.1 Chữa đau nhức đầu, mờ mắt
Mạn kinh 10g, cam cúc hoa 8g, tế tân 3g, xuyên khung 4g, cam thảo 4g, bạch chỉ 3g Nước 600ml, sắc còn 200ml, chia làm 3 lần uống trong ngày[1]
Hoặc chỉ dùng một vị Mạn kinh 80g, ngâm trong 1 lít rượu 30-40 0 khoảng 10 ngày trở lên Ngày uống 2 lần, mỗi lần 10-15ml[1], [3]
1.6.2 Chữa đau mắt sưng đỏ, có màng che, chảy dử nhiều, quáng mắt
Mạn kinh, hạt muồng (sao), hạt đuôi mang, hạt mã đề, hạt ích mẫu Các vị lượng bằng nhau, tán bột làm viên uống với nước chè, hoặc dùng mỗi vị 12g, sắc nước uống[1]
1.6.3 Chữa sưng vú giai đoạn đầu
Mạn kinh sao giòn tán nhỏ, mỗi lần dùng 4g hòa với rượu, gạn lấy rượu uống, còn bã đắp lên vú[3], [1]
Mạn kinh, hoàng liên ô rô mỗi vị 15g, thương nhĩ tử 9g Sắc uống trong ngày[1]
Mạn kinh, mỡ gấu, 2 vị lượng bằng nhau, trộn với giấm thanh, bôi vào tóc[1], [3]
ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
Đối tượng, phương tiện nghiên cứu
2.1.1 Đối tượng nghiên cứu Đối tượng nghiên cứu là phần trên mặt đất (thân, lá, quả) của loài Vitex trifolia
L (Đẹn ba lá) được thu hái tại Vườn Quốc gia Xuân Thủy, huyện Giao Thủy, tỉnh Nam Định, tọa độ 20 o 13,702'N; 106 o 33,781'E Tiêu bản thực vật khô của loài nghiên cứu hiện được lưu giữ tại Bảo tàng Thiên nhiên Việt Nam – Viện Hàn lâm Khoa học và Công nghệ Việt Nam với mã số tiêu bản là QTBY - XT16
Hóa chất và dung môi dùng cho nghiên cứu đạt tiêu chuẩn phân tích Dược điển Việt Nam V gồm có:
- Dùng trong thu lấy tinh dầu và cao chiết: Nước cất, methanol
- Dùng trong đánh giá tác dụng kháng S.aureus: Tween 80 4%, Chủng vi sinh vật thí nghiệm: Vi khuẩn Gram (+) Staphylococcus aureus 33591 được cung cấp bởi Viện Kiểm nghiệm vệ sinh an toàn thực phẩm quốc gia
- Dùng trong đánh giá ức chế sản sinh NO:
+ Thioglycollate được cung cấp bởi BD (Franklin Lakes, NJ., USA)
+ LPS và L-NAME được mua từ Sigma Aldrich (St Louis, MO, USA) + Thuốc thử Griess được mua từ Promega (Madison, WI, USA)
+ Môi trường nuôi cấy RPMI 1640 và các yếu tố bổ sung bao gồm huyết thanh thai bò (FBS) và kháng sinh Penicillin/Streptomycin được mua từ Pan-Biotech (Aidenbach, Germany)
+ Dung dịch đệm ly giải hồng cầu (RBC lysis buffer 2X) được mua từ Bio Basic Inc (Markham, Canada)
+ Thuốc thử MTT được mua từ AK Scientific Inc (Union City, CA, USA) + DMSO được mua từ Merck (Rahway, NJ, USA)
2.1.3 Trang thiết bị nghiên cứu
- Dụng cụ thủy tinh: pipet, bình định mức, ống nghiệm, ống đong, phễu, cốc có mỏ, bộ dụng cụ cất tinh dầu theo dược điển Việt Nam, lọ đụng mẫu, ống falcon, bình cầu cổ nhám, đĩa petri, đĩa 96 giếng vô trùng, đũa thủy tinh,…
- Cân phân tích AND GR-200
- Cân kỹ thuật Sartorius TE412
- Bể siêu âm Daihan Scientific
- Hệ thống sắc ký khí kết hợp khối phổ GC-MS model: Trace 1310_ITQ900 thế hệ ISQ/Hãng Thermo Scientific/Mỹ
- Máy cất quay chân không RE301A
- Máy ly tâm lạnh để bàn Model: Rotanda – 460RC
- Động vật thí nghiệm: Chuột nhắt trắng chủng Swiss
Nội dung nghiên cứu
- Thu tinh dầu và cao chiết methanol từ Đẹn ba lá
- Phân tích thành phần tinh dầu Đẹn ba lá bằng phương pháp sắc kí khí kết nối khối phổ (GC-MS)
- Đánh giá tác dụng kháng Tụ cầu vàng (Staphylococcus aureus) của tinh dầu Đẹn ba lá bằng phương pháp vi pha loãng
- Đánh giá tác dụng ức chế sản sinh Nitric oxid của cao chiết Đẹn ba lá trên đại thực bào phúc mạc
- Nghiên cứu docking các thành phần trong tinh dầu và cao chiết Đẹn ba lá với các đích tương ứng.
Phương pháp nghiên cứu
2.3.1 Thu tinh dầu và cao chiết methanol từ Đẹn ba lá
Dược liệu tươi sau khi thu hái sẽ được làm sạch Cân một lượng khoảng 1kg cành mang lá của dược liệu đã làm sạch sau đó cắt nhỏ (khoảng 5-10mm) sau đó được cất kéo hơi nước sử dụng thiết bị chưng cất clevenger theo Dược điển Việt Nam V Đun đến sôi sau đó hạ nhiệt ở khoảng dưới 100 0 C, duy trì đun 2 tiếng đến khi thể tích tinh dầu không thay đổi Tinh dầu thu được có màu vàng đậm, nhẹ hơn nước nên sẽ nổi lên trên Thu lấy tinh dầu, bảo quản trong lọ kín, làm khan bằng Na2SO4 khan và bảo quản ở nhiệt độ -5 0 C trong bóng tối trước khi sử dụng cho các phương pháp nghiên cứu sau
Dược liệu thu hái đem phơi khô hoặc sấy khô bằng tủ sấy, sau đó được xay nhỏ thành bột dược liệu khô Cân khoảng 1g bột dược liệu khô ở trên cho vào ống Falcon 50ml cùng với 20ml methanol (99% v/v) Siêu âm ở 50 0 C trong vòng 15 phút Ly tâm với tốc độ 3500rpm trong 5 phút sau đó gạn lấy phần dịch trong Bã dược liệu còn lại được hòa tan tiếp trong 20ml methanol (99% v/v), lặp lại quy trình trên thêm 2 lần Gộp
13 lấy dịch trong của cả 3 lần sau đó cô quay với áp suất giảm tại 40 0 C Để bay hơi tự nhiên phần dung môi còn lại ở nhiệt độ phòng trong tủ hút
2.3.2 Phân tích thành phần tinh dầu Đẹn ba lá bằng GC-MS
Sắc kí khí kết hợp khối phổ GC-MS (Gas Chromatography – Mass Spectroscopy) bao gồm thiết bị sắc kí khí kết nối với detector khối phổ Mẫu sau khi tách trên cột phân tích của thiết bị sắc kí sẽ được detector khối phổ nhận biết Hiện nay phương pháp này được áp dụng phổ biến với mục đích định tính dựa vào thời gian lưu hay định lượng dựa vào diện tích và chiều cao pic, đối tượng là các hợp chất dễ bay hơi như tinh dầu
Hệ thống sắc kí khí GC-MS gồm thiết bị Thermo Scientific Trace 1310 ghép nối với detector ITQ 900 (Thermo, bẫy ion) Cột phân tích TG-5MS, kích thước 30m x 0,25àm x 0,25mm với khớ mang là Heli
- Cài đặt chương trình: Nhiệt độ buồng bơm mẫu là 260 o C Nhiệt độ Detector là
240 o C Chương trình nhiệt độ 60 o C (2 phút), tăng 4 o C/phút đến 220 o C, giữ ở nhiệt độ này trong 10 phút
- Tiến hành phân tích: Xác định các thành phần trong tinh dầu dựa trên nguyên lý so sánh về độ trùng lặp về khối phổ của các chất có trong thư viện Thêm vào đó, giá trị RI được so sánh với các dữ liệu trong thư viện NIST và cơ sở dữ liệu đã được công bố Giá trị RI được tính theo thời gian lưu thực tế các pic trong mẫu phân tích và thời gian lưu các ankan trong dãy đồng đẳng C9 – C20 tiến hành ở cùng điều kiện sắc ký
RTx: Thời gian lưu của chất phân tích
RTn: Thời gian lưu của ankan liền trước pic của chất phân tích
RTn+1: Thời gian lưu của ankan liền sau pic của chất phân tích n: Số nguyên tử carbon của ankan liền trước pic của chất phân tích
2.3.3 Đánh giá tác dụng kháng Tụ cầu vàng (Staphylococcus aureus) của tinh dầu Đẹn ba lá bằng phương pháp vi pha loãng
Nồng độ ức chế tối thiểu (MIC) của tinh dầu được xác định bằng phương pháp vi pha loãng trong môi trường lỏng trên đĩa 96 giếng, sử dụng các chủng vi khuẩn được chuẩn bị trước Phương pháp này bao gồm quá trình pha loãng kép chuỗi tinh dầu trong môi trường nuôi cấy để tạo ra một loạt nồng độ Các đĩa vi sinh vật sau đó được ủ để vi khuẩn phát triển MIC được xác định là nồng độ thấp nhất của tinh dầu có khả năng ức chế đáng kể sự phát triển của vi khuẩn.
Staphylococcus aureus (Gram+) theo khuyến nghị của Viện Tiêu chuẩn lâm sàng và xét nghiệm Hoa Kỳ.[19]
Tinh dầu được pha trong nước có bổ sung Tween 80 4% Nồng độ tinh dầu ban đầu tính là 1, sau đó tiếp tục được pha loãng đến nồng độ làm việc trong môi trường phù hợp Các mẫu tinh dầu được pha loãng (1:1) trên đĩa 96 giếng, từ các giếng ở cột 1 lần lượt xuống đến các giếng ở cột 10, để thu được dãy nồng độ giảm dần theo cấp số nhân Nồng độ MIC được biểu diễn dưới dạng 1/pha loãng hoặc theo nồng độ (%) Ví dụ 1/1024 tức là MIC ở nồng độ tinh dầu đó pha loãng 1024 lần, tương đương nồng độ khoảng 0,1% hoặc 1ml/L
Hỗn dịch vi khuẩn được pha chế với nồng độ 1,5.106 vi khuẩn/ml, sau đó bổ sung vào các giếng trong đĩa, ngoại trừ giếng ở cột 12 làm chứng âm tính Toàn bộ đĩa được đậy kín và ủ ở nhiệt độ 37 độ C trong vòng 20 giờ Giá trị MIC được xác định dựa trên nồng độ thấp nhất không quan sát thấy sự phát triển của vi sinh vật Tất cả các thí nghiệm đều được tiến hành ít nhất 2 lần độc lập để đảm bảo độ tin cậy của kết quả.
2.3.4 Đánh giá tác dụng ức chế sản sinh Nitric oxid của cao chiết Đẹn ba lá trên đại thực bào phúc mạc
Cao chiết dược liệu được hòa tan trong DMSO với nồng độ gốc 50 mg/mL và bảo quản ở -20 0 C Khi cần ủ với tế bào, cao chiết được pha loãng trông môi trường nuôi cấy đến các nồng độ thích hợp Động vật thí nghiệm
Chuột nhắt trắng chủng Swiss, giống đực, 10-12 tuần tuổi, cân nặng 28 - 30 g, khỏe mạnh do Viện vệ sinh dịch tễ Trung ương cung cấp Động vật được nuôi ổn định với điều kiện phòng thí nghiệm ít nhất 5 ngày trước khi thực hiện nghiên cứu, được cho ăn bằng thức ăn tiêu chuẩn do Viện Vệ sinh Dịch tễ Trung ương cung cấp, uống nước tự do
Phân lập và nuôi cấy đại thực bào sơ cấp phúc mạc chuột nhắt Để huy động đại thực bào phúc mạc, chuột nhắt trắng được tiêm phúc mạc 1 mL dung dịch thioglycollat 4% Sau 3 ngày, chuột nhắt được giết bằng cách kéo giãn đốt sống cổ và cẩn thận bộc lộ khoang màng bụng sử dụng kéo và kẹp phẫu thuật vô trùng Thu đại thực bào phúc mạc bằng cách tiêm 10 mL dung dịch muối cân bằng (HBSS) vào khoang phúc mạc của chuột, sau đó lắc rửa và thu hồi hỗn dịch tế bào vào một ống tube 50 mL trong đá Tiêm HBSS được lặp lại 3 lần và dịch rửa được gom, ly tâm để
15 thu pellet tế bào Tế bào hồng cầu được loại bỏ bằng cách ủ tế bào trong dung dịch ly giải hồng cầu trong 5 phút Sau đó, tế bào được rửa bằng dung dịch PBS sinh lý trước khi được hỗn dịch trong môi trường RPMI 1640 chứa 10% FBS và 1% penicillin/Streptomycin Đo giải phóng Nitric oxide (NO)
Giải phóng NO được đánh giá thông qua định lượng chất chuyển hóa nitrit/nitrat trong môi trường nuôi cấy đại thực bào
Sau khi phân lập, tế bào được cấy trong một đĩa nuôi cấy 96 giếng (Corning) thành trong ở mật độ 1×10 5 tế bào/giếng trong môi trường đầy đủ Sau khi ủ 1 giờ trong tủ nuôi cấy, loại bỏ môi trường và rửa tế bào 3 lần với dung dịch PBS để loại bỏ các tế bào không kết dính Sau đó, môi trường mới được thêm và tế bào được tiếp tục ủ qua đêm Vào ngày tiếp theo, tế bào được ủ với môi trường chứa các chất thử ở nồng độ thích hợp trong 2 giờ, sau đó tiếp tục ủ với môi trường chứa LPS 100 ng/mL thêm 24 giờ nữa Mụi trường trong mỗi giếng (50 àL) được hỳt chuyển sang một đĩa 96 giếng mới Sau đú, thờm 50 àL dung dịch sulfanilamid và ủ ở nhiệt độ phũng, trong búng tối trong 5 phỳt trước khi thờm 50 àL N-1-napthylethylenediamin dihydrochlorid tới hỗn hợp phản ứng Sau khi tiếp tục ủ thêm 5 phút ở nhiệt độ phòng, đo độ hấp thụ của dung dịch tạo thành ở bước sóng 535 nm sử dụng hệ thống máy đọc đĩa Variaskan LUX (Thermo Scientific, Waltham, MA, USA)
Nồng độ NO trong mỗi mẫu được tính toán dựa trên đường chuẩn được xây dựng với chất chuẩn Natri nitrit Tỷ lệ phần trăm ức chế giải phóng NO của mẫu thử được tính theo công thức:
CLPS: Nồng độ NO của tế bào được xử lý với LPS đơn độc
Cthu: Nồng độ NO của tế bào được xử lý với LPS kết hợp mẫu thử
16 Hình 1 Đường chuẩn định lượng NO được xây dựng với chất chuẩn natri nitrite
Giá trị IC50 được tính toán bằng phần mềm Graphpad 8.0.2 sử dụng phương pháp hồi quy phi tuyến
2.3.5 Nghiên cứu docking các thành phần trong tinh dầu và cao chiết Đẹn ba lá với các đích tương ứng
KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN
Kết quả
3.1.1 Kết quả phân tích thành phần tinh dầu
Tổng cộng 49 hợp chất đã được xác định trong tinh dầu lá của loài Đẹn ba lá sử dụng phương pháp sắc kí kết nối khối phổ (Bảng 3.1) Trong các thành phần được xác định, caryophyllen (66,25%) là hợp chất chiếm tỷ lệ cao nhất có trong tinh dầu, tiếp đến là sabinen (10,58%), ngoài ra còn có các hợp chất khác như alloaromadendren (2,04%), rimuen (1,95%), isophyllocladen (1,79%), terpinen-4-ol (1,65%), isoaromadendren epoxid (1,46%), 𝛽-pinen (1,01%) chiếm tỷ lệ phần trăm theo diện tích peak đáng chú ý (>1%)
Bảng 3.1 Kết quả phân tích thành phần tinh dầu Đẹn ba lá bằng GC-MS
STT RT RI a RI b Tên hợp chất CTPT % Diện tích pic
Ghi chú: RT: Thời gian lưu; RI a : Chỉ số lưu giữ tính toán; RI b : Chỉ số lưu giữ tra cứu trên thư viện
Các thành phần được phân thành các nhóm chất cụ thể monoterpen (1-4), (7), (9-
11), (13), (15); monoterpenoid (12), (14), (16), (18-21); sesquiterpen (23-31); sesquiterpenoid (33-39); diterpen (40-44), (47); diterpenoid (45-46), (48-49) và các hợp chất khác như ancol (5), (17); ceton (6); hợp chất thơm (22), (32)
3.1.2 Kết quả đánh giá tác dụng kháng S aureus
Tác dụng kháng Tụ cầu vàng (S aureus) được đánh giá qua nồng độ ức chế tối thiểu (MIC) và nồng độ diệt khuẩn tối thiểu (MBC) của loài Đẹn ba lá được thể hiện ở bảng 3.2
Bảng 3.2 Kết quả kháng S aureus của tinh dầu Đẹn ba lá
3.1.3 Kết quả đánh giá tác dụng ức chế sản sinh Nitric oxid của cao chiết Đẹn ba lá trên đại thực bào phúc mạc
Tác dụng ức chế sản sinh Nitric oxid của cao chiết Đẹn ba lá đánh giá thông qua định lượng chất chuyển hóa nitrit/nitrat trong môi trường nuôi cấy đại thực bào và được tính toán thành giá trị IC50 (Nồng độ tối đa gây ra ức chế 50%) Kết quả được trình bày ở bảng 3.3 so sánh với dữ liệu chất chứng dương (bảng 3.4)
Bảng 3.3 Kết quả đánh giá tác dụng ức chế sản sinh NO của cao chiết Đẹn ba lá trên đại thực bào phúc mạc
Ghi chú: ( * ): Khoảng tin cậy 95% của IC50
Bảng 3.4 Dữ liệu chất chứng dương
Ghi chú: ( * ): Khoảng tin cậy 95% của IC50
3.1.4 Kết quả nghiên cứu docking phân tử các hợp chất trong tinh dầu Đẹn ba lá trên các đích protein của S aureus
Kết quả docking của 49 hợp chất được xác định trong tinh dầu Đẹn ba lá thông qua phương pháp GC-MS cho thấy các giá trị năng lượng liên kết với 4 đích protein của S.aureus (1JIJ, 2W9S, 2ZCQ, 3SRW) nằm trong bảng 3.5 Kết quả này được so sánh với các chất đối chiếu (chất ức chế đồng kết tinh) trên các đích tương ứng trong bảng 3.6.
Bảng 3.5 Giá trị năng lượng liên kết (kcal/mol) của các hợp chất trong tinh dầu Đẹn ba lá trên các đích protein của S.aureus
STT Tên hợp chất Năng lượng liên kết tại đích (kcal/mol)
Bảng 3.6 Giá trị năng lượng liên kết (kcal/mol) của các chất ức chế đồng kết tinh trên các đích protein S,aureus
Năng lượng liên kết tại đích (kcal/mol)
Ghi chú: Các chất đồng kết tinh tương ứng với các đích:
- 3SRW :7-(2-ethoxynaphthalen-1-yl)-6-methylquinazolin-2,4-diamin (C21H20N4O)
23 Hình 2 Vị trí và tư thế của hợp chất gắn vào các trung tâm hoạt động của protein 2W9S lần lượt (A) – Sabinen, (B) – Caryophyllen, (C) – Alloaromadendren
24 Hình 3 Tương tác 2D của các hợp chất với các gốc tại vị trí gắn của 2W9S lần lượt
25 Hình 4 Vị trí và tư thế của hợp chất gắn vào các trung tâm hoạt động của protein 2W9S lần lượt (A) – Sanbinen, (B) – Caryophyllen, (C) – Alloaromadendren
26 Hình 5 Tương tác 2D của các hợp chất với các gốc tại vị trí gắn của 2W9S lần lượt
So sánh giá trị năng lượng của các chất có trong tinh dầu Đẹn ba lá với các chất ức chế đồng kết tinh tương ứng, giá trị càng nhỏ đồng nghĩa với việc khả năng liên kết của hợp chất với đích protein càng bền chặt hay khả năng ức chế càng lớn
Dữ liệu cho thấy tại 2 đích 1JIJ và 2ZCQ, không có hợp chất nào trong tinh dầu Đẹn ba lá cho ra giá trị năng lượng thấp hơn so với các chất ức chế đồng kết tinh tương ứng (Bảng 3.5-3.6) Ngược lại tại đích 2W9S thì có 47 hợp chất thỏa mãn điều kiện trên ngoại trừ 2 hợp chất (5) 1-Octen-3-ol và (6) 3-Octanone Và tại đích 2ZCQ thì tất cả các
27 hợp chất thuộc nhóm sesquiterpen, sesquiterpenoid, diterpen, diterpenoid (23-49) đều có giá trị năng lượng thấp hơn so với chất ức chế đồng kết tinh
Khả năng kháng khuẩn của tinh dầu Đẹn ba lá chống lại S.aureus đã được chứng minh một phần thông qua thử nghiệm in vitro (Mục 3.2) Do đó, việc sử dụng phương pháp docking phân tử nhằm làm sáng tỏ thêm khả năng này với mục đích thể hiện sự tương tác của 3 thành phần chính (≥2%) là (3) sabinen, (26) caryophyllen và (27) alloaromadendren trên các đích 2W9S (Hình 2-3) và 3SRW (Hình 4-5) Năng lượng liên kết giữa các phối tử và vị trí hoạt động tương đối thấp (Bảng 3.5) cho thấy khả năng ức chế enzym tiềm tàng của các hợp chất
Tại đích protein 2W9S, sabinen thể hiện tương tác alkyl và pi-alkyl tại các vị trí hoạt động Ile5, Ala7, Ile31, Ile50, Phe92; caryophyllen chiếm vị trí hoạt động bằng cách liên kết với các gốc acid amin Ile5, Ala7, Leu20, Leu28, Ile31, Ile50, Phe92 cũng bằng các tương tác alkyl, pi-alkyl còn alloaromadendren ngoài các tương tác tương tự với các gốc Ile5, Val6, Ala7, Ile14, Leu20, Ile31, Ile50, Phe92 thì hợp chất còn có thêm tương tác pi-sigma với Phe92 Đối với mục tiêu 3SRW, sabinen thể hiện tương các tương tác yếu với các vị trí hoạt động Val7, Ala8, Ile15, Leu21, Leu29, Val32, Phe99 trong khi caryophyllen và alloaromadendren lại cho thấy khả năng tương tác cực kì tốt tại các gốc Leu6, Val7, Ala8, Ile15, Leu21, Val32, Ile51, Phe93, Phe99 với giá trị năng lượng liên kết xấp xỉ - 7,0 kcal/mol
3.1.5 Kết quả nghiên cứu docking phân tử các hợp chất trong cao chiết Đẹn ba lá trên các đích protein ức chế sản sinh Nitric oxide
Trong phương pháp docking, các hợp chất trong cao chiết Đẹn ba lá được sử dụng bao gồm các thành phần chính có trong cao chiết và được tổng quan từ các nghiên cứu trong và ngoài nước Các hợp chất này được tính toán giá trị năng lượng liên kết (kcal/mol) đối với đích 3E7G, sau đó so sánh với chất ức chế đồng kết tinh AR-C95791 trên cùng đích tác dụng để đánh giá khả năng tương tác của các hợp chất với thụ thể mục tiêu.
28 Bảng 3.7 Giá trị năng lượng liên kết (kcal/mol) của các hợp chất được tổng quan trong cao chiết Đẹn ba lá và chất ức chế đồng kết tinh trên các đích protein ức chế sản sinh NO
STT Tên hợp chất Loại hợp chất
Năng lượng liên kết tại đích (kcal/mol) 3E7G
Dữ liệu cho thấy toàn bộ thành phần được tổng quan trong cao chiết Đẹn ba lá có liên kết tương đối tốt với năng lượng liên kết dao động từ -11,0 đến -7,0 kcal/mol thấp hơn đáng kể so với chất ức chế đồng kết tinh là -6,2 kcal/mol Các hợp chất thuộc nhóm triterpen và steroid cho khả năng liên kết với đích mạnh mẽ hơn so với các hợp chất thuộc nhóm flavonoid
Lupeol (-11,015 kcal/mol), Betulinic acid (-10,473 kcal/mol), β-sitosterol (-11,545 kcal/mol), 6β-hydroxystigmast-4-en-3-on (-10,527 kcal/mol), Stigmasterol (-10,260 kcal/mol), Campesterol (-10,542 kcal/mol) là 6 hợp chất có giá trị năng lượng thấp nhất, tương ứng với khả năng liên kết mạnh nhất Nguyên nhân là do các hợp chất này có các tương tác mạnh mẽ với các vị trí hoạt động của đích như liên kết hydro với
29 Trp372, Tyr489 của Lupeol, Betulinic acid, β-sitoster, 6β-hydroxystigmast-4-en-3-on; tương tác pi-sigma với Trp372 của Stigmasterol; tương tác alkyl và pi-alkyl với Trp194, Ala197, Arg199, Cys200, Ile201, Pro350, Val352, Met355, Phe369, Trp372, Met374, Met434, Trp463 (Hình 6-7)
30 Hình 6 Vị trí và tư thế của hợp chất gắn vào các trung tâm hoạt động của protein 3E7G lần lượt (A) – Lupeol, (B) – Betulinic acid, (C) – β-sitosterol, (D) – 6β- hydroxystigmast-4-en-3-on, (E) – Stigmasterol, (F) – Campesterol
31 Hình 7 Tương tác 2D của các hợp chất với các gốc tại vị trí gắn của 3E7G lần lượt (A) – Lupeol, (B) – Betulinic acid, (C) – β-sitosterol, (D) – 6β-hydroxystigmast-4-en-3-on,
Bàn luận
3.2.1 Kết quả phân tích thành phần tinh dầu
Thành phần tinh dầu Đẹn ba lá trước đó đã được nghiên cứu ở nhiều vị trí địa lý khác nhau, các báo cáo đều cho thấy thành phần chính của tinh dầu là caryophyllen (8,9 – 38,36%), sabinen (9,4 – 19,4%) và eucalyptol (15,7 – 25,7%)[30], [35], [43] So sánh với kết quả trên, hợp chất caryophyllen có trong Đẹn ba lá được nghiên cứu chiếm một tỷ lệ rất cao so với tỷ lệ trung bình từ các kết quả nghiên cứu khác (66,25%), trong khi eucalyptol lại chiếm một tỷ lệ khiêm tốn (0,5%) Sự khác nhau về tỷ lệ phản ánh cho sự khác biệt về thời gian và địa điểm thu hái, nghiên cứu loài Tỷ lệ lớn caryophyllen trong tinh dầu Đẹn ba lá có thể khiến cho loài thực vật này trở thành một nguồn nguyên liệu tiềm năng để khai thác caryophyllen – một chất chủ vận chọn lọc trên thụ thể phytocannabinoid với vô số các tác dụng sinh học[13] như bảo vệ thần kinh[38], suy giảm bệnh lí thần kinh ngoại biên[15], giảm đau, giảm tổn thương não,…
3.2.2 Kết quả đánh giá tác dụng kháng S aureus
Từ bảng 3.2 có thể thấy tinh dầu Đẹn ba lá thể hiện rõ tác dụng kháng Tụ cầu vàng (S aureus) thông qua phương pháp vi pha loãng với các giá trị MIC và MBC được ghi nhận tại nồng độ pha loãng lần lượt là 1/128 và 1/64, tương đương nồng độ 0,8% và 1,6% hay 8ml/L và 16ml/L Đặc tính kháng khuẩn này có thể liên quan đến hàm lượng các hợp chất monoterpen có trong tinh dầu Giá trị MBC > MIC chứng tỏ tinh dầu Đẹn ba lá có đặc tính kìm khuẩn
3.2.3 Kết quả đánh giá tác dụng ức chế sản sinh Nitric oxid của cao chiết Đẹn ba lá trên đại thực bào phúc mạc
Giá trị IC50 của cao chiết Đẹn ba lỏ (4,965 µg/mL) cao hơn nhiều so với giá trị IC50 của chứng dương Khoảng tin cậy 95% của cao chiết Đẹn ba lỏ (3,249 - 7,069 µg/mL) tương đối rộng, cho thấy cao chiết có khả năng ức chế sản sinh Nitric oxid nhưng với nồng độ cao và ít ổn định hơn so với chứng dương.
Như vậy, cao chiết Đẹn ba lá thể hiện khả năng ức chết tổng hợp và giải phóng Nitric oxid hiệu quả với nồng độ cao Kết quả này có thể thành tiền đề cho các nghiên cứu về các thành phần trong cao chiết Đẹn ba lá nhằm ứng dụng khả năng ức chế NO trong các điều trị bệnh lý
3.2.4 Kết quả nghiên cứu docking phân tử
Kết quả nghiên cứu các thành phần hóa học xác định trong tinh dầu Đẹn ba lá trên các đích tác dụng ức chế S aureus đã cho thấy các hợp chất có khả năng ức chế các
33 enzym thông qua sự tương tác với các vị trí hoạt động của protein Các hợp chất chính của tinh dầu như caryophyllen, sabinen và alloaromadendren đều thể hiện các giá trị liên kết thấp, đặc biệt là caryophyllen và alloaromadendren đều có giá trị năng lượng thấp trên cả 2 đích 2W9S và 3SRW Ngoài ra các thành phần khác trong tinh dầu như các sesquiterpen, diterpen với giá trị năng lượng liên kết thấp cũng củng cố thêm khả năng kháng khuẩn S aureus của tinh dầu Đẹn ba lá
Các nhóm chất flavonid, triterpen và steroid là các nhóm chất chính có trong cao chiết Đẹn ba lá đều có giá trị năng lượng liên kết thấp với đích tác dụng (3E7G) Điều này thể hiện cho khả năng ức chế tốt sự tổng hợp và giải phóng nitric oxid của cao chiết
KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT
Sau một thời gian nghiên cứu và thực nghiệm, đề tài đã thu hái được các kết quả sau:
Tinh dầu Đẹn ba lá thể hiện hoạt tính kháng khuẩn đáng kể chống lại vi khuẩn Tụ cầu vàng (S aureus) Phương pháp vi pha loãng đã xác định giá trị nồng độ ức chế tối thiểu (MIC) là 1/128 (0,8%), cho thấy tương tác hiệu quả của tinh dầu với vi khuẩn Ngoài ra, nồng độ diệt khuẩn tối thiểu (MBC) là 1/64 (1,6%), cung cấp bằng chứng cho khả năng tiêu diệt vi khuẩn hoàn toàn của tinh dầu Đẹn ba lá.
- Cao chiết Đẹn ba lá thể hiện khả năng ức chế sản sinh Nitric oxid trên đại thực bào phúc mạc với giá trị IC50 là 4,965 (3,249 – 7,069)
- Nghiên cứu docking phân tử các hợp chất trong tinh dầu và cao chiết Đẹn ba lá trên các đích protein của S.aureus và ức chế sản sinh NO đã biểu diễn được các tương tác của phối tử đến các vị trí hoạt động và giá trị năng lượng liên kết giữa chúng Các thành phần chính của tinh dầu caryophyllen (-7,364/-7,040 kcal/mol), sabinen (-5,628/-5,456 kcal/mol), alloaromadendren (-7,214/-7,042 kcal/mol) so với chất đối chiếu trên 2W9S/3SRW (-5,489/-6,312 kcal/mol) Các thành phần trong cao chiết tiểu biểu lupeol (-11,015 kcal/mol), betulinic acid (-10,473 kcal/mol), β-sitosterol (-11,545 kcal/mol), 6β-hydroxystigmast-4-en-3-one (- 10,527 kcal/mol), stigmasterol (-10,260 kcal/mol), campesterol (-10,542 kcal/mol) so với chất đối chiếu trên 3E7G (-6,166 kcal/mol) Đề xuất
- Tiếp tục nghiên cứu các tác dụng sinh học khác của loài Đẹn ba lá có thể ứng dụng docking phân tử
- Nghiên cứu docking phân tử cần được ứng dụng và mở rộng đối với các nghiên cứu khác tương tự
[1] Đỗ Huy Bích (2006), Cây thuốc và động vật làm thuốc ở Việt Nam, vol Tập 2 NXB Khoa học và Kỹ thuật
[2] Phạm Hoàng Hộ (1999), Cây cỏ Việt Nam, vol Quyển II Nhà xuất bản trẻ
[3] Đỗ Tất Lợi (2006), Những cây thuốc và vị thuốc ở Việt Nam Nhà xuất bản Y học
[4] Vũ Văn Vân, Ngô Nguyên Vũ (2021), Khảo sát hiệu quả quang phân li sắc tố staphyloxanthin từ vi khuẩn Staphylococcus aureus bởi ánh sáng LED bước sóng 460nm, Tạp chí Khoa học & Công nghệ
[5] A Shah and S Rahim (2017), “Ethnomedicinal uses of plants for the treatment of malaria in Soon Valley, Khushab, Pakistan,” J Ethnopharmacol, vol 200, pp 84–
[6] A S Ibrakaw, J S Boatwright, T Lesch, C N Cupido, and A A Hussein (2021),
“Triterpenes and other minor chemical constituents of Boophone haemanthoides F.M Leight (Amaryllidaceae),” South African Journal of Botany, vol 136, pp 35–
[7] A T Ghafari, A H Jahidin, Y Zakaria, and M H Hasan (2021), “Phytochemical Screening and High-performance Thin-layer Chromatography Quantification of Vitex trifolia Leaves Hydro-alcoholic Extract: Potential Anti-inflammatory Properties,” J Pharm Res Int, pp 111–121
[8] A V R Mohanbabu, M K K Kishore, B R Chandrashekar, H D Pradeepa, R Christopher, and P B Nandit (2015), “Evaluation of potential antiamnesic activities of aqueous extract of Vitex trifolia leaves against scopolamine induced amnesia and in normal rats,” J Basic Clin Physiol Pharmacol, vol 26, no 2, pp 201–209
[9] Anandan R, Jayakar B, Karar B, Babuji S, Manavalan R, and Kumar RS (2009),
“Effect of ethanol extract of flowers of Vitex trifolia Linn on CCL4 induced hepatic injury in rats,” Pak J Pharm Sci
[10] C.-I Liu et al (2008), “A Cholesterol Biosynthesis Inhibitor Blocks Staphylococcus aureus Virulence,” Science (1979), vol 319, no 5868, pp 1391–1394
[11] C.-X Yan et al.(2023), “Vitex rotundifolia L f and Vitex trifolia L.: A review on their traditional medicine, phytochemistry, pharmacology,” J Ethnopharmacol, vol
[12] El-Kousy, M S., M., and S Mohamed (2012), “Phenolic and biological activities of Vitex trifolia aerials parts,” Life Sci., Jan
[13] F Francomano et al (2019), “β-Caryophyllene: A Sesquiterpene with Countless Biological Properties,” Applied Sciences, vol 9, no 24, p 5420
[14] G Alam, S Wahyuono, I G Ganjar, L Hakim, H Timmerman, and R Verpoorte (2002), “Tracheospasmolytic Activity of Viteosin-A and Vitexicarpin Isolated from
Vitex trifolia,” Planta Med, vol 68, no 11, pp 1047–1049
[15] G C Segat et al (2017), “Antiallodynic effect of β-caryophyllene on paclitaxel- induced peripheral neuropathy in mice,” Neuropharmacology, vol 125, pp 207–
[16] H Heaslet et al (2009), “Structural comparison of chromosomal and exogenous dihydrofolate reductase from Staphylococcus aureus in complex with the potent inhibitor trimethoprim,” Proteins: Structure, Function, and Bioinformatics, vol 76, no 3, pp 706–717
[17] H Karakoti et al.(2022), “Phytochemical Profile, In Vitro Bioactivity Evaluation, In Silico Molecular Docking and ADMET Study of Essential Oils of Three Vitex Species Grown in Tarai Region of Uttarakhand,” Antioxidants, vol 11, no 10, p
[18] H N Wee et al (2020), “Effects of Vitex trifolia L Leaf extracts and phytoconstituents on cytokine production in human u937 macrophages,” BMC Complement Med Ther, vol 20, no 1
[19] Humphries R, Bobenchik AM, Hindler JA, Schuetz (2021), “Overview of Changes to the Clinical and Laboratory Standards Institute Performance Standards for Antimicrobial Susceptibility Testing, M100,” 31st Edition
[20] J Mottaghipisheh et al (2024), “A comprehensive review of ethnomedicinal approaches, phytochemical analysis, and pharmacological potential of Vitex trifolia L.,” Front Pharmacol, vol 15
[21] K Djimabi et al (2021), “Chemical constituents from the fruits of Vitex trifolia L (Verbenaceae) and their chemotaxonomic significance,” Biochem Syst Ecol, vol 97, p 104305
[22] K Djimabi et al (2022), “Diterpenoids with α-glucosidase inhibitory activities from the fruits of Vitex trifolia Linn,” Fitoterapia, vol 161, p 105248
[23] K Elumalai, S Velmurugan, S Ravi, V Kathiravan, and G Adaikala Raj (2015),
“Bio-approach: Plant mediated synthesis of ZnO nanoparticles and their catalytic reduction of methylene blue and antimicrobial activity,” Advanced Powder Technology, vol 26, no 6, pp 1639–1651
[24] L Kulkarni (2011), “Anti-inflammatory activity of Vitex trifolia Linn.(verbaneaceae) leaves extracts.,” Int J Pharm Sci
[25] L Rajanna (2013), “In-vitro Flowering in Vitex trifolia L IN-VITRO FLOWERING
[26] M Dai et al (2018), “T47D cell-inhibiting indonesian medicinal plants and active constituents of Alpinia galanga rhizome,” Pharmacogn Mag, vol 14, no 56, p 359
[27] M Dinari, F Gharahi, and P Asadi (2018), “Synthesis, spectroscopic characterization, antimicrobial evaluation and molecular docking study of novel triazine-quinazolinone based hybrids,” J Mol Struct, vol 1156, pp 43–50
[28] M Huang, L Zhong, J Xie, F Wang, and Y Zhang (2013), “A New Taraxastane‐ Type Triterpene from Vitex trifolia var simplicifolia,” Helv Chim Acta, vol 96, no
[29] M O Bello et al (2018), “The genus Vitex: An overview of iridoids as chemotaxonomic marker,” Beni Suef Univ J Basic Appl Sci, vol 7, no 4, pp 414–
[30] N Huy Hung et al.(2022), “Supporting Information Investigation of Pesticidal
Activities of Essential Oils Obtained from Vitex Species,”
[31] N K Ban et al (2018), “Chemical Constituents of Vitex trifolia Leaves,” Nat Prod
[32] P Luo et al (2017), “Vitepyrroloids A–D, 2-Cyanopyrrole-Containing Labdane Diterpenoid Alkaloids from the Leaves of Vitex trifolia,” J Nat Prod, vol 80, no 5, pp 1679–1683
[33] Q Wang, H Jiang, L Wang, H Yi, Z Li, and R Liu (2019), “Vitegnoside Mitigates Neuronal Injury, Mitochondrial Apoptosis, and Inflammation in an Alzheimer’s Disease Cell Model via the p38 MAPK/JNK Pathway,” Journal of Alzheimer’s Disease, vol 72, no 1, pp 199–214
[34] R K, J T Kakkassery, V P Raphael, R Johnson, and V T K (2021), “In vitro antibacterial and in silico docking studies of two Schiff bases on Staphylococcus aureus and its target proteins,” Futur J Pharm Sci, vol 7, no 1
[35] R Thomas (2019), “ESSENTIAL OIL STUDIES OF THE GENUS VITEX L (VERBENACEAE).,” Int J Adv Res (Indore), vol 7, no 5, pp 568–574
[36] S Kumar-Roiné et al (2009), “Ability of certain plant extracts traditionally used to treat ciguatera fish poisoning to inhibit nitric oxide production in RAW 264.7 macrophages,” J Ethnopharmacol, vol 123, no 3, pp 369–377
[37] S Md Zin, F Mohamed, and N N Mohd Noor (2022), “Numerical Taxonomic Evaluation of Leaf Architectural Morphology of Vitex L species (Lamiaceae Martinov) in Peninsular Malaysia,” Journal of Science and Mathematics Letters, vol
[38] S Ojha, H Javed, S Azimullah, and M E Haque (2016), “β-Caryophyllene, a phytocannabinoid attenuates oxidative stress, neuroinflammation, glial activation, and salvages dopaminergic neurons in a rat model of Parkinson disease,” Mol Cell
[39] S Saklani et al (2017), “Comparative Evaluation of Polyphenol Contents and Antioxidant Activities between Ethanol Extracts of Vitex negundo and Vitex trifolia
L Leaves by Different Methods,” Plants, vol 6, no 4, p 45
[40] S Tandon, A K Mittal, and A K Pant (2008), “Insect growth regulatory activity of Vitex trifolia and Vitex agnus-castus essential oils against Spilosoma obliqua,”
[41] S Vimalanathan, S Ignacimuthu, and J B Hudson (2009), “Medicinal plants of Tamil Nadu (Southern India) are a rich source of antiviral activities,” Pharm Biol, vol 47, no 5, pp 422–429
[42] T Alberti, W Barbosa, J Vieira, N Raposo, and R Dutra (2017), “(−)-β- Caryophyllene, a CB2 Receptor-Selective Phytocannabinoid, Suppresses Motor Paralysis and Neuroinflammation in a Murine Model of Multiple Sclerosis,” Int J Mol Sci, vol 18, no 4, p 691
[43] T Chandrasekaran, A Thyagarajan, P G Santhakumari, A K B Pillai, and U M Krishnan (2019), “Larvicidal activity of essential oil from Vitex negundo and Vitex trifolia on dengue vector mosquito Aedes aegypti,” Rev Soc Bras Med Trop, vol 52
[44] T.-H Nguyen-Vo et al (2019), “VIETHERB: A Database for Vietnamese Herbal Species,” J Chem Inf Model, vol 59, no 1, pp 1–9.
[45] T Zhang, C X Zhang, W D Xie, and K H Row (2013), “Vitrifolin A: A Norlabdane Diterpenoid from the Fruits of Vitex trifolia Linn var simplicifolia
Cham,” Journal of the Chinese Chemical Society, vol 60, no 5, pp 542–545
[46] W Woradulayapinij, N Soonthornchareonnon, and C Wiwat (2005), “In vitro HIV type 1 reverse transcriptase inhibitory activities of Thai medicinal plants and Canna indica L rhizomes,” J Ethnopharmacol, vol 101, no 1–3, pp 84–89
[47] W.-X Li, C.-B Cui, B Cai, H.-Y Wang, and X.-S Yao (2005), “Flavonoids from
Vitex trifolia L inhibit cell cycle progression at G 2 /M phase and induce apoptosis in mammalian cancer cells,” J Asian Nat Prod Res, vol 7, no 4, pp 615–626
[48] X Qiu et al (2001), “Crystal structure of Staphylococcus aureus tyrosyl‐tRNA synthetase in complex with a class of potent and specific inhibitors,” Protein Science, vol 10, no 10, pp 2008–2016.