nguyễn đức trung đánh giá ảnh hưởng của một số tá dược kiềm đến quá trình bào chế viên nén acid alpha lipoic

Nơi thực hiện:

Viện Công nghệ Dược phẩm Quốc gia

HÀ NỘI - 2024

LỜI CẢM ƠN

Lời đầu tiên, em xin phép được bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc và gửi lời cảm ơn chân

thành đến TS Trần Ngọc Bảo, người trực tiếp dẫn dắt và hướng dẫn em từ những ngày

đầu tiên làm quen với công việc nghiên cứu khoa học Thầy đã truyền đạt những kiến thức quý báu và đồng thời là nguồn động viên lớn lao, luôn tạo điều kiện tốt nhất để em có thể phát huy hết khả năng của mình Sự kiên nhẫn và tận tụy của thầy đã giúp em vượt qua nhiều khó khăn và thử thách, đồng thời phát triển được tư duy nghiên cứu khoa học

Em xin được gửi lời cảm ơn chân thành tới GS.TS Nguyễn Ngọc Chiến, người đã

luôn động viên, giúp đỡ và tạo điều kiện thuận lợi nhất cho em trong suốt quá trình làm thực nghiệm Những lời khuyên và sự hỗ trợ quý báu của thầy đã giúp em hoàn thành khóa luận này một cách tốt nhất

Em xin chân thành cảm ơn PGS.TS Nguyễn Văn Hải đã hỗ trợ nguyên liệu để em có thể hoàn thành khóa luận Em cũng xin cảm ơn HVCH Mai Việt Linh đã giúp đỡ

em trong suốt quá trình nghiên cứu khoa học tại bộ môn Em xin trân trọng cảm ơn Ban Giám hiệu nhà trường, Phòng Đào tạo và các phòng ban khác cùng toàn thể các thầy cô giáo và cán bộ nhân viên Trường Đại học Dược Hà Nội đã chỉ dạy và giúp đỡ em trong suốt 5 năm học tại trường

Em xin chân thành cảm ơn toàn thể các thầy cô giáo, các anh chị kĩ thuật viên, các bạn sinh viên khóa K74 và các em sinh viên khóa K75, K76 trong nhóm nghiên cứu tại Viện Công nghệ Dược phẩm Quốc gia đã luôn đồng hành cùng em trên con đường học tập và nghiên cứu

Cuối cùng, em xin gửi lời cảm ơn sâu sắc nhất đến gia đình và bạn bè em, những người luôn là chỗ dựa tinh thần và nguồn động lực to lớn, đã luôn yêu thương, ủng hộ để em có được như ngày hôm nay Sự động viên và tình yêu thương của gia đình và bạn bè là nguồn sức mạnh to lớn giúp em vượt qua mọi thử thách

Em xin chân thành cảm ơn!

Hà Nội, ngày 02 tháng 06 năm 2024

Sinh viên

Nguyễn Đức Trung

MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN

DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC CÁC BẢNG

1.2 Một số phương pháp định lượng acid alpha lipoic 9

1.3 Một số nghiên cứu cải thiện độ tan và độ ổn định của acid alpha lipoic 9

CHƯƠNG 2: ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 13

2.1 Nguyên vật liệu, thiết bị 13

2.1.1 Nguyên vật liệu 13

2.1.2 Thiết bị 14

2.2 Nội dung nghiên cứu 14

2.2.1 Đánh giá được ảnh hưởng của một số tá dược kiềm đến độ tan và độ hòa tan của ALA 14

2.2.2 Bước đầu xây dựng được công thức bào chế viên nén ALA 200 mg 14

2.3 Phương pháp nghiên cứu 14

2.3.1 Phương pháp bào chế viên nén ALA 200 mg 14

2.3.2 Phương pháp đánh giá một số đặc tính của ALA 15

2.3.3 Xây dựng phương pháp định lượng ALA bằng phương pháp quang phổ hấp thụ tử ngoại UV-Vis 16

2.3.4 Đánh giá chỉ tiêu chất lượng của cốm 16

2.3.5 Đánh giá chỉ tiêu chất lượng viên 18

2.3.6 Đánh giá độ ổn định của viên 20

2.3.7 Phương pháp xử lý số liệu 20

CHƯƠNG 3: THỰC NGHIỆM, KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 21

3.1 Kết quả xây dựng đường chuẩn định lượng ALA bằng phương pháp đo quang 21

3.2 Kết quả đánh giá viên đối chiếu 21

3.3 Kết quả đánh giá một số đặc tính của ALA 22

3.3.1 Kết quả hình thái tiểu phân ALA 22

3.3.2 Kết quả đo nhiệt độ nóng chảy, hàm ẩm của ALA 22

3.3.3 Kết quả độ tan của ALA trong các môi trường 23

3.3.4 Kết quả đánh giá độ trơn chảy của ALA 23

3.4 Kết quả đánh giá ảnh hưởng của chất mang, tá dược kiềm đến độ ổn định và độ hòa tan của ALA 23

3.4.1 Khảo sát ảnh hưởng của chất mang đến độ ổn định của ALA 23

3.4.2 Khảo sát ảnh hưởng của tá dược kiềm đến độ ổn định và độ hòa tan của ALA 25

3.4.3 Khảo sát ảnh hưởng của một số tá dược kiềm đến độ hòa tan của cốm ALA 27

3.4.4 Kết quả đo phổ FT - IR 30

3.5 Kết quả bước đầu xây dựng được công thức bào chế viên nén ALA 200 mg 30

3.5.1 Khảo sát ảnh hưởng tỷ lệ giữa ALA và tổng tá dược 30

3.5.2 Khảo sát ảnh hưởng của tá dược độn và tá dược hấp phụ 32

3.5.3 Khảo sát ảnh hưởng tỷ lệ giữa ALA và tá dược kiềm 33

3.5.4 Khảo sát ảnh hưởng của tá dược rã 35

3.5.5 Khảo sát ảnh hưởng của hai tá dược kiềm khác nhau 36

3.5.6 Đánh giá sơ bộ độ ổn định của viên nén ALA 200 mg 38

3.6 Đề xuất và đánh giá một số chỉ tiêu chất lượng của viên nén ALA 200 mg 40 3.7 Bàn luận 41

KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT 43TÀI LIỆU THAM KHẢO

DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT

ALA Acid alpha lipoic BCS Biopharmaceutical classification system - Hệ thống phân loại sinh

dược học BP British pharmacopoeia - Dược điển AnhCaCO3 Calci carbonat

Ca3(PO4)2 Tricalci phosphatCHP Chinese pharmacopoeia - Dược điển Trung Quốc

DĐVN Dược điển Việt NamEP European pharmacopoeia - Dược điển Châu ÂuFLR Florite

FT - IR Phổ hồng ngoại biến đổi Fourier

HPC Hydroxy propyl celulose HPMC Hydroxy propyl methyl celulose JP Japanese pharmacopoeia - Dược điển Nhật BảnLOD Limit of detection - Giới hạn phát hiện

LOQ Limit of quantitaion - Giới hạn định lượngMCC Microcrystalline cellulose - Celulose vi tinh thể MgSt Magnesi stearat

Na CMC Natri carboxy methyl celuloseNacr Natri croscarmelose

Na2CO3 Natri carbonatNaHCO3 Natri bicarbonatNaOH Natri hydroxyd

PEG Polyethylen glycol PVP Polyvinyl pyrolidon SD Standard deviation - Độ lệch chuẩn

DANH MỤC CÁC BẢNG

Bảng 1.1 Một số chế phẩm thị trường 8

Bảng 2.1 Nguyên vật liệu dùng trong nghiên cứu 13

Bảng 2.2 Thiết bị dùng trong nghiên cứu 14

Bảng 2.3 Thành phần công thức viên nén ALA 200 mg 14

Bảng 3.1 Hình thức, khối lượng, hàm lượng, độ hòa tan theo thời gian của viên đối chiếu Thiogamma® 600 Oral 21

Bảng 3.2 Kết quả đo nhiệt độ nóng chảy và hàm ẩm của ALA 22

Bảng 3.3 Kết quả độ tan của ALA trong các môi trường 23

Bảng 3.4 Kết quả đánh giá độ trơn chảy của ALA 23

Bảng 3.5 Kết quả đánh giá độ ổn định của ALA và hỗn hợp ALA - chất mang ở 100oC/1h 24

Bảng 3.6 Kết quả đánh giá độ ổn định của hỗn hợp ALA - chất mang - tá dược kiềm ở 100oC/1h 25

Bảng 3.7 Độ hòa tan theo thời gian của các mẫu A8, A10 - A13 ban đầu 26

Bảng 3.8 Cảm quan cốm gồm ALA, MCC 101, tá dược kiềm 27

Bảng 3.9 Độ hòa tan theo thời gian của cốm gồm ALA, MCC 101, tá dược kiềm 28

Bảng 3.19 Độ hòa tan theo thời gian của các công thức T19 - T23 37

Bảng 3.20 Độ hòa tan theo thời gian của các công thức T19 - T23 (3 viên/1 cốc) 37

Bảng 3.21 Kết quả theo dõi độ ổn định của các công thức T14, T20 - T23 ở điều kiện thường và lão hóa cấp tốc sau 1 tháng 39

Bảng 3.22 Độ hòa tan theo thời gian của các công thức T14, T20 - T23 ở điều kiện thường và lão hóa cấp tốc sau 1 tháng 39

Bảng 3.23 Kết quả đánh giá và đề xuất một số chỉ tiêu chất lượng cho viên nén ALA 200 mg 40

DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, ĐỒ THỊ

Hình 1.1 Công thức cấu tạo của ALA 2

Hình 1.2 Sơ đồ phản ứng tạo muối giữa ALA với natri hydroxyd 3

Hình 1.3 Sơ đồ phản ứng tạo muối giữa ALA và trometamol 3

Hình 1.4 Sơ đồ phản ứng tạo muối giữa ALA và L-lysin 3

Hình 1.5 Sơ đồ phản ứng tạo muối giữa ALA và meglumin 3

Hình 1.6 Sơ đồ phản ứng tạo ester giữa ALA với ethanol 3

Hình 1.7 Sơ đồ phản ứng tạo amid giữa ALA với ure 3

Hình 1.8 Sơ đồ phản ứng quang phân vòng 1,2-dithiolan của ALA 4

Hình 1.9 Sơ đồ phản ứng trùng hợp vòng 1,2-dithiolan và phản ứng cắt liên kết polyme nhờ tác nhân khử hóa 4

Hình 1.10 Sơ đồ phản ứng oxy hóa vòng 1,2-dithiolan 5

Hình 1.11 Tạp chất của ALA 5

Hình 3.1 Đồ thị biểu diễn mật độ quang và nồng độ dung dịch ALA 21

Hình 3.2 Hình thức viên đối chiếu 22

Hình 3.3 Đồ thị biểu diễn độ hòa tan theo thời gian của viên đối chiếu 22

Hình 3.4 Hình dạng tiểu phân ALA quan sát trên kính hiển vi quang học 22

Hình 3.5 Đồ thị biểu diễn hàm lượng ALA ở các mẫu A0 - A7 24

Hình 3.6 Đồ thị biểu diễn hàm lượng ALA ở các mẫu A8 - A13 26

Hình 3.7 Đồ thị biểu diễn độ hòa tan theo thời gian của các mẫu A8, A10 - A13 ban đầu 26

Hình 3.8 Đồ thị biểu diễn độ hòa tan theo thời gian của mẫu nước, 29

Hình 3.9 Phổ IR của ALA và cốm gồm ALA, MCC 101, một số tá dược kiềm 30

Hình 3.10 Độ hòa tan theo thời gian của các công thức T1 - T4 31

Hình 3.11 Đồ thị biểu diễn độ hòa tan theo thời gian của các công thức T3 - T8 33

Hình 3.12 Đồ thị biểu diễn độ hòa tan theo thời gian của các công thức T3, T4, T9 - T14 34

Hình 3.13 Đồ thị biểu diễn độ hòa tan theo thời gian của các công thức T15 - T18 36

Hình 3.14 Đồ thị biểu diễn độ hòa tan theo thời gian của các công thức T19 - T23 38

Hình 3.15 Đồ thị biểu diễn độ hòa tan theo thời gian của các công thức T19 - T23 (3 viên/1 cốc) 38

Hình 3.16 Đồ thị biểu diễn độ hòa tan theo thời gian của các công thức T14, T20 - T23 ở điều kiện thường và lão hóa cấp tốc sau 1 tháng 40

ĐẶT VẤN ĐỀ

Acid alpha lipoic (ALA) là một acid béo thiết yếu tồn tại tự nhiên trong cơ thể con người Trong tự nhiên, ALA tồn tại dưới dạng liên kết với lysin gọi là lipoyllysin ALA có mặt trong nhiều loại thực phẩm như rau bina, súp lơ xanh, cà chua và trong các cơ quan của động vật như thận, gan, tim [45] ALA trong tổng hợp tồn tại dưới dạng racemic, được sử dụng trong điều trị tổn thương thần kinh do bệnh đái tháo đường gây ra và cũng là một loại thực phẩm bổ sung dinh dưỡng phổ biến ở châu Âu và Hoa Kỳ [38] Tại thị trường Việt Nam, ALA có sẵn dưới nhiều dạng khác nhau như viên nang cứng Acid thioctic 600, viên nang mềm Alfa care, viên nén bao phim Thiogamma 600 Oral, thực phẩm bảo vệ sức khỏe Oxyraze, mỹ phẩm Ordinary

Mặc dù ALA có nhiều ứng dụng hữu ích nhưng ALA cũng gặp phải một số hạn chế như ít tan trong nước, kém ổn định với nhiệt độ và ánh sáng, có nhiệt độ nóng chảy thấp và dễ bị polyme hóa Những hạn chế này gây khó khăn trong quá trình sản xuất và làm giảm sinh khả dụng của thuốc [9] Trong hệ thống phân loại sinh dược học (BCS), ALA được xếp vào nhóm II, tức là có độ tan thấp nhưng tính thấm tốt [41] Thuốc ALA kém ổn định khi tiếp xúc với nhiệt độ cao và ánh sáng trong quá trình bảo quản, điều này có thể làm tăng khả năng phân hủy thuốc Kết quả là viên nén có thể bị biến màu, hàm lượng dược chất giảm đi và tạo ra các chất phân hủy có mùi khó chịu [36] Trên thị trường, nguyên liệu ALA tồn tại các dạng sau: dạng tự do (kém ổn định, dễ bị phân hủy trong quá trình bảo quản và sản xuất, khả năng hòa tan trong nước kém hơn so với dạng muối), dạng muối (thường là muối Natri với tính ổn định cao, dễ tan trong nước và hấp thụ tốt), dạng R-ALA (đắt và khó sản xuất so với dạng racemic) và dạng S-ALA (hoạt tính sinh học thấp, ít hiệu quả so với R-ALA)

Trên thế giới có nhiều nghiên cứu về tổng hợp dạng muối của ALA với các tác nhân kiềm như natri hydroxyd, calci hydroxyd, kali hydroxyd, trometamol và piperazin [14] Những kết quả nghiên cứu này ghi nhận không chỉ cải thiện độ ổn định mà còn làm tăng độ tan của ALA so với nguyên liệu dạng tự do ban đầu Với những ưu điểm của dạng muối ALA, việc ứng dụng kỹ thuật tạo muối với các tác nhân kiềm sẽ cải thiện đáng kể

độ tan, độ ổn định của ALA Do đó, chúng tôi tiến hành đề tài “Đánh giá ảnh hưởng của một số tá dược kiềm đến quá trình bào chế viên nén acid alpha lipoic” với mục

tiêu sau: 1 Đánh giá được ảnh hưởng của một số tá dược kiềm đến độ tan và độ hòa tan của

ALA 2 Bước đầu xây dựng được công thức bào chế viên nén ALA 200 mg

CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN 1.1 Đại cương về acid alpha lipoic

1.1.1 Nguồn gốc

Acid alpha lipoic, còn được gọi là acid 1,2-dithiolan-3-pentanoic hoặc acid thiotic, là một chất tự nhiên được tổng hợp bằng enzym trong ty thể của thực vật và động vật từ acid octanoic và cystein (dưới dạng nguồn lưu huỳnh) [23] Trong tự nhiên, ALA tồn tại dưới dạng liên kết với lysin, được gọi là lipoyllysin Lượng lipoyllysin lớn được tìm thấy trong các quan như thận, gan, tim, cũng như trong các loại rau bina và bông cải xanh (∼1 - 3 μg/g) [45] ALA trong tổng hợp tồn tại dưới dạng racemic (R,S)-ALA, được sử dụng để điều trị tổn thương thần kinh do bệnh đái tháo đường gây ra và cũng được sử dụng như một thực phẩm bổ sung dinh dưỡng phổ biến ở châu Âu và Hoa Kỳ [38]

1.1.2 Công thức cấu tạo

Hình 1.1 Công thức cấu tạo của ALA

Công thức phân tử: C8H14O2S2Khối lượng phân tử: 206,32 g/mol [29] Tên khoa học: Acid (R)-5-(1,2-dithiolan-3-yl)pentanoic [40] Tên gọi khác: Acid alpha lipoic (ALA), acid lipoic, acid thioctic [30]

1.1.3 Tính chất lý hóa

1.1.3.1 Tính chất vật lý

Về cảm quan, ALA dạng bột hoặc tinh thể hình kim màu vàng [40] Trong hệ thống phân loại sinh dược học (BCS), ALA thuộc nhóm II (độ tan kém, tính thấm tốt) [41] Về độ tan, ALA rất khó tan trong nước (0,13 mg/ml ở 25oC), tan tốt trong methanol, ethanol, dimethyl formamid [40]

Trong phân tử ALA có carbon bất đối ở vị trí số 3 của vòng dithiolan nên sẽ có đồng phân (S), (R) và dạng racemic Nhiệt độ nóng chảy của dạng racemic và đồng phân (S) là 60oC còn dạng đồng phân (R) là 50,6oC [30]

1.1.3.2 Tính chất hóa học

Phân tử ALA có chứa nhóm acid carboxylic nên có thể phản ứng tạo muối với kim loại kiềm, base amin, acid amin và có khả năng phản ứng với alcol, amin tạo dẫn xuất ester, amid (minh họa ở hình 1.2, 1.3, 1.4, 1.5, 1.6, 1.7) [11], [13]

Hình 1.2 Sơ đồ phản ứng tạo muối giữa ALA với natri hydroxyd

Hình 1.3 Sơ đồ phản ứng tạo muối giữa ALA và trometamol

Hình 1.4 Sơ đồ phản ứng tạo muối giữa ALA và L-lysin

Hình 1.5 Sơ đồ phản ứng tạo muối giữa ALA và meglumin

Hình 1.6 Sơ đồ phản ứng tạo ester giữa ALA với ethanol

Hình 1.7 Sơ đồ phản ứng tạo amid giữa ALA với ure

Vòng 1,2-dithiolan của ALA trong dung dịch trung tính, ethanol dưới tác động tia sáng cực tím sẽ bị phá hủy thành chất (1) do quá trình quang phân phản ứng với dung môi, sau đó chất 1 biến đổi thành các sản phẩm khác (minh họa ở hình 1.8) [42]

Hình 1.8 Sơ đồ phản ứng quang phân vòng 1,2-dithiolan của ALA

Khi ALA đạt điểm nóng chảy (60 - 62oC) hoặc tiếp xúc lâu với ánh sáng, ALA mở vòng 1,2-dithiolan và các gốc thiyl bắt đầu liên kết với nhau tạo nên polyme với mức độ trùng hợp khác nhau do cơ chế hình thành gốc tự do dưới sự ảnh hưởng của photon ánh sáng hoặc nhiệt độ Sau đó liên kết này có thể bị đứt và giải phóng monome nhờ tác nhân kẽm trong acid hydroclorid hoặc natri borohydrid do cơ chế phản ứng chuyển vị nucleophin và ion mercaptid (minh họa ở hình 1.9) [42]

Hình 1.9 Sơ đồ phản ứng trùng hợp vòng 1,2-dithiolan và phản ứng cắt liên kết

polyme nhờ tác nhân khử hóa

Vòng 1,2-dithiolan dễ bị oxy hóa khi gặp tác nhân như không khí, các chất oxy hóa Với tác nhân amoni persulfat, vòng 1,2-dithiolan rất nhanh bị oxy hóa thành mono-sulfoxid nguyên nhân có thể do nguyên tử lưu huỳnh gắn với C-8 của khung acid octanoic bị oxy hóa (minh họa ở hình 1.10) [42]

(1)1

Hình 1.10 Sơ đồ phản ứng oxy hóa vòng 1,2-dithiolan

ALA là một dẫn xuất disulfid của acid octanoic, có trong phân tử chứa liên kết disulfid, đặc trưng bởi mật độ điện tử cao trên hai nguyên tử lưu huỳnh Điều này giúp ALA có hoạt tính chống oxy hóa mạnh mẽ, thể hiện qua thế oxy hóa thấp (-0,29V), biểu thị tính khử Với mật độ điện tử cao, ALA có khả năng chuyển electron cho các chất oxy hóa và làm trung hòa gốc tự do Liên kết disulfid linh hoạt dễ tạo polyme gần nhiệt độ nóng chảy [38]

Phân tử ALA có cấu trúc vòng năm cạnh nên rất dễ bị ảnh hưởng trước bức xạ tử ngoại ALA dễ bị phân hủy bởi quá trình chiếu xạ quang dẫn đến mất dải hấp phụ đặc trưng ở bước sóng 333 nm [49]

1.1.4 Độ ổn định

ALA không ổn định dưới ánh sáng hoặc nhiệt độ, quá trình trùng hợp xảy ra dễ dàng ở nhiệt độ gần hoặc cao hơn điểm nóng chảy, một mùi khó chịu đi kèm với sự phân hủy đó, được minh họa bằng những sơ đồ phản ứng ở hình 1.8 và 1.9 Tạp chất sinh ra trong quá trình sản xuất và bảo quản ảnh hưởng lớn đến chất lượng và độ an toàn của thuốc, một số tạp chủ yếu gặp sẽ được minh họa ở hình 1.11 [9]

Hình 1.11 Tạp chất của ALA

ALA có nhiệt độ nóng chảy thấp (60oC), ở giai đoạn dập viên ALA dễ bị chảy lỏng, dẻo dính, dính vào nhau hoặc dính vào thiết bị trong quá trình dập viên Do đó làm kéo dài thời gian giải phóng hoạt chất ra khỏi viên, làm ảnh hưởng đến hiệu quả điều trị của thuốc [36]

ALA ở dạng dung dịch ổn định rõ rệt ở pH 7,5 - 9,0 [18]

1.1.5 Tác dụng sinh học

ALA được coi là một coenzym, tham gia vào các phản ứng khử hydro của acid pyruvic và một số phản ứng tương tự ALA gắn chặt vào phân tử enzym thông qua liên kết amid giữa nhóm carboxyl của ALA và nhóm amin tận cùng của lysin trong enzym Phần hoạt động của coenzym này là một liên kết disulfide (-S.S-) Liên kết này có thể

Hỗn hợp polyme của ALA

mở ra hoặc kết hợp với các phân tử hữu cơ, với một nguyên tử lưu huỳnh thứ hai liên kết với carbon Trong phức hợp multienzym của quá trình khử carboxyl oxy hóa acid pyruvic, ALA đóng vai trò phối hợp chặt chẽ với coenzym thiamin pyrophosphat (TPP) Nhóm adehyde hoạt động (được tạo thành sau khi tách CO2 ra khỏi acid pyruvic) được chuyển từ TPP đến coenzym lipoic Một nguyên tử lưu huỳnh mang hydro và một nguyên tử lưu huỳnh thứ hai mang nhóm acetyl Do đó acid lipoic vừa đóng vai trò là coenzym vận chuyển nhóm, vừa là coenzym trong các phản ứng oxy hóa khử [4]

1.1.6 Tác dụng dược lý

1.1.6.1 Tác dụng chống oxy hóa

ALA có khả năng chống oxy hóa mạnh hơn vitamin C và vitamin E nhờ khả năng hòa tan cả trong nước và chất béo Điều này cho phép ALA loại bỏ nhiều gốc tự do trong mô mỡ, máu và dịch cơ thể một cách hiệu quả Ngoài ra ALA còn có khả năng tái lập hoạt động chống oxy hóa của vitamin C, vitamin E và glutathion, từ đó tăng cường hiệu quả chống oxy hóa tổng thể [43]

1.1.6.2 Tác dụng trên bệnh ung thư

ALA có tác dụng chống khối u bằng cách ngăn chặn chu kỳ tế bào ở pha G1 thông qua việc tăng protein p53 [8], [20], [21], [31] p53 là yếu tố ức chế khối u có vai trò quan trọng trong việc điều chỉnh các điểm kiểm tra chu trình tế bào, sửa chữa DNA và apoptosis Ngoài ra, p53 còn liên quan đến việc tạo ra các gốc oxy hóa hoạt động và tình trạng stress oxy hóa do các gốc oxy hóa hoạt động gây ra [12], [44] ALA đã được chứng minh làm tăng có chọn lọc biểu hiện gen p53 trong tế bào khối u so với các tế bào bình thường lân cận, do các tế bào khối u thường bị điều hòa giảm và thiếu p53 [34], [50] Trong các phương pháp điều trị sử dụng ALA cho thấy biểu hiện Ki-67 giảm đáng kể trong tế bào ung thư vú so với các trường hợp không được điều trị [19], [46] Ki-67 là dấu hiệu của sự tăng sinh khối u, xuất hiện ở các giai đoạn khác nhau của chu kỳ tế bào trong nhân tế bào và được sử dụng như một yếu tố tiên lượng trong bệnh ung thư vú [28], [39] Các đặc tính ức chế tăng sinh và thúc đẩy apoptosis của ALA là kết quả của các cơ chế hoạt động đa dạng

1.1.6.3 Tác dụng trên bệnh Alzheimer

ALA có tác dụng khóa các ion kim loại xúc tác cho phản ứng tạo gốc tự do, loại bỏ các gốc oxy hóa hoạt động và tăng nồng độ glutathion Ngoài ra ALA còn tăng cường sản xuất acetylcholin trong tế bào, làm giảm stress oxy hóa và giảm thoái hóa thần kinh Những tác động này giúp giảm các yếu tố căng thẳng, từ đó cải thiện tình trạng suy giảm trí nhớ ở bệnh nhân Alzheimer [47]

1.1.7 Dược động học

Hấp thu: Các nghiên cứu đã báo cáo rằng sự hấp thu của ALA tăng khoảng 40%

khi uống hỗn hợp cả hai đồng phân R, S- ALA khi đói, nhưng con số đó giảm 20% khi

dùng qua nguồn thực phẩm [43] Sinh khả dụng của ALA giảm đáng kể sau khi ăn, do đó, khuyến nghị dùng ALA ít nhất 2 giờ sau khi ăn hoặc ít nhất 30 phút trước khi ăn [22] Có nhiều nguyên nhân dẫn đến sự giảm sinh khả dụng của ALA sau khi ăn, bao gồm khả năng tạo phức với protein và các chất dinh dưỡng khác trong thức ăn, sự thay đổi pH của dạ dày và ruột non do thức ăn, cạnh tranh với các chất dinh dưỡng khác và ảnh hưởng của thức ăn đối với hệ vi sinh vật đường ruột, dẫn đến giảm độ hòa tan và hấp thu của ALA Do đó, việc dùng ALA khi đói có thể tối ưu cho pH acid của dạ dày và giảm sự cạnh tranh với các chất dinh dưỡng khác trong quá trình hấp thu [17] ALA được hấp thu nhanh chóng sau khi uống 50 - 600 mg ALA và đạt nồng độ tối đa trong huyết tương sau khoảng 0,5 - 1 giờ Nồng độ tối đa trong huyết tương của đồng phân R-ALA cao hơn 40 - 50% so với đồng phân S-ALA [15] Đồng phân R-ALA được hấp thu nhanh hơn qua ruột khi được dùng dưới dạng phức hợp với -cyclodextrins Hơn nữa diện tích dưới đường cong nồng độ huyết tương theo thời gian (AUC) cao hơn 2,2 lần so với dạng R-ALA chưa tạo phức khi uống và cao hơn 5,1 lần khi tiêm trực tiếp vào tá tràng [48] Sinh khả dụng của ALA tăng rõ rệt khi được dùng dưới dạng viên nén so với dạng dung dịch [16] Tuổi tác có ảnh hưởng lớn đến sinh khả dụng và nồng độ tối đa trong huyết tương của ALA Sinh khả dụng và nồng độ đỉnh trong huyết tương của ALA cao hơn đáng kể ở người trưởng thành có độ tuổi trung bình trên 75 tuổi so với người trong độ tuổi 18 - 45 tuổi Tuy nhiên, không có sự khác biệt đáng kể về sinh khả dụng của ALA giữa nam và nữ Một nghiên cứu khác về viên nén ALA 600mg cho thấy nồng độ trong huyết tương của hai đồng phân R, S-ALA ở nữ cao hơn so với nam giới nhưng ở nồng độ thấp, không có sự khác biệt đáng kể nào [33]

Phân bố: ALA được phân bố rộng rãi vào các mô và dịch cơ thể, qua được hàng

rào máu não, nhau thai và được bài tiết qua sữa mẹ [2], [3] Trong huyết tương, ALA tồn tại dưới dạng tự do và liên kết với protein huyết tương Tỷ lệ gắn kết với protein huyết tương của ALA khá cao, dao động từ 93 - 97% [33]

Chuyển hóa: ALA được chuyển hóa lần đầu ở gan thông qua quá trình -oxy hóa

và S-methyl hóa [3] Các chất chuyển hóa chính của ALA bao gồm bisnorlipoic và bismethylthioethanol, là các chất ít hoạt tính hoặc không hoạt tính [33]

m-Thải trừ: ALA và các chất chuyển hóa của nó chủ yếu được thải trừ qua nước tiểu

Thời gian bán thải của ALA trong huyết tương ngắn, khoảng 30 phút đến 1 giờ dẫn đến phải uống nhiều lần trong ngày để duy trì nồng độ ổn định trong huyết tương Độ thanh thải của ALA dao động từ 10 - 15 mL/phút/kg Nghiên cứu trên động vật đã chỉ ra rằng ALA được bài tiết dưới dạng chất chuyển hóa ở thận với tỷ lệ lên đến 80 - 90% [33]

1.1.8 Chỉ định, chống chỉ định, cách dùng, tác dụng không mong muốn

ALA được dùng hỗ trợ và điều trị các bệnh sau: ung thư, các biến chứng thần kinh của đái tháo đường: nhiễm trùng, đục thủy tinh thể, thoái hóa võng mạc, bệnh gan cấp

và mãn tính, hạ men gan, viêm gan siêu vi, giải độc rượu, bia, các thuốc gây độc, kim loại nặng, xơ vữa động mạch vành và động mạch não, huyết áp cao, bệnh não hoại tử cấp, bệnh viêm não tủy tự miễn, bệnh đa xơ cứng, Alzheimer, bệnh nhân HIV/AIDS, ngăn cản hình thành vết nhăn trên da, vết nám, đồi mồi [3]

Chống chỉ định với bệnh nhân có tiền sử dị ứng với hoạt chất cũng như bất kỳ thành phần nào có trong thuốc [3]

Cách dùng: uống nguyên viên với một cốc nước đầy [3] Tác dụng không mong muốn: trên hệ tiêu hóa (biểu hiện: buồn nôn, nôn, tiêu chảy, đau dạ dày-ruột), phản ứng mẫn cảm (biểu hiện: dị ứng, nổi mẩn, ngứa, phát ban, mày đay), trên hệ thần kinh (biểu hiện: rối loạn vị giác), hạ đường huyết với các biểu hiện chóng mặt, toát mồ hôi, đau đầu, rối loạn thị giác [3]

Hàm lượng Tá dược Hãng sản xuất

1 Bivantox

300 tab

Viên nén bao phim 300mg

Nacr, talc, opardy, màu vàng quinolin, dicalci phosphat,

avicel PH102, PVP K30, maltodextrin,

aerosil, MgS

Công ty cổ phần dược phẩm Trung

ương 1 - Pharbaco

2 Meyerthitic

300 Viên nén 300mg

Manitol, HPC, natri starch glycolat,

L-MgS, talc, HPMC 606, HPMC 615, PEG 6000, titan

dioxyd

Công ty Liên doanh Meyer-

BPC

3 Denesity Viên nang

Dầu cọ, sáp ong, lecithin, aerosil,

simethicol, sorbitol, nipazil,

nipasol, gelatin…

Công ty cổ phần Dược phẩm CPC1 Hà Nội

STT Tên sản

phẩm

Dạng bào chế

Hàm lượng Tá dược Hãng sản xuất

4 Thiogamma

600 Oral

Viên nén bao phim 600mg

HPMC, aerosil, MCC, lactose monohydrate, NaCMC, talc, simeticone, MgS, macrogol

6000, natri dodecyl sulphate

Công ty dược phẩm đa quốc gia

Worwag Pharma

1.2 Một số phương pháp định lượng acid alpha lipoic

Năm 2012, Parula B Patel và cộng sự xây dựng phương pháp định lượng ALA

trong nguyên liệu và trong viên nén bằng phương pháp đo quang phổ hấp thụ tử ngoại, trong đó ALA được hòa tan trong dung môi methanol, tiến hành quét phổ ở bước sóng từ 200 - 400nm cho thấy ALA có cực đại hấp thụ ở bước sóng 322 nm (ở phương pháp A), 309 nm (ở phương pháp B), diện tích dưới đường cong được đo từ 310 - 350 nm (ở phương pháp C), từ 270 - 330 nm (ở phương pháp D) Kết quả thẩm định phương pháp phân tích cho thấy ở bước sóng  max, dung môi và các tá dược không ảnh hưởng tới độ hấp thụ của dung dịch thử và dung dịch mẫu, phương pháp có tính tuyến tính cao với hệ số R2 lần lượt là 0,999 (ở phương pháp A), 1,0 (ở phương pháp B), 0,999 (ở phương pháp C), 0,999 (ở phương pháp D) ở nồng độ ALA từ 150 - 1500 g/ml, tỷ lệ thu hồi 99,52  0,56%, RSD dưới 2%, LOD và LOQ lần lượt là 1,64 g/ml và 5,49 g/ml (ở phương pháp D) Phương pháp phù hợp cho việc xác định hàm lượng ALA trong nguyên liệu và trong các dạng bào chế [24]

Năm 2018, Simone Jacobus Berlitz và cộng sự sử dụng phương pháp sắc ký lỏng

hiệu năng cao để định lượng đồng thời hai chất resveratrol và ALA trong viên Cột C18 được sử dụng với pha động gồm acetonitril và acid phosphoric 0,01M với tỷ lệ 60:40, Detector UV 235 nm Kết quả là phương pháp có tính đặc hiệu cao, các tá dược được sử dụng trong công thức viên không ảnh hưởng đến thời gian lưu và diện tích pic của ALA, phương pháp có độ tuyến tính cao với hệ số tương quan R2 > 0,99 ở nồng độ resveratrol từ 5 - 50 g/ml và ALA từ 30 - 120 g/ml với ALA, độ đúng và độ chính xác với RSD < 5% [25]

1.3 Một số nghiên cứu cải thiện độ tan và độ ổn định của acid alpha lipoic

Năm 2005, Yukio Suenaga và cộng sự nghiên cứu tạo ra dạng muối ALA với kiềm

thổ hoặc hydroxyd kiềm trong môi trường nước Tác giả có đề cập 1 vài ví dụ, ví dụ 1: hòa tan 0,97 g NaOH trong 94 g nước cất, thêm 5,0 g ALA ở nhiệt độ phòng hoặc thấp hơn (làm mát bằng nước) Hỗn hợp được khuấy đến khi ALA hòa tan hoàn toàn và được

trung hòa để thu được dung dịch muối natri của ALA với hàm lượng đo được là 100,4% Dung dịch sau đó được xử lý bằng phương pháp phun sấy để thu được 5,1 g muối natri ALA dạng bột hơi vàng Kết quả các đặc tính của sản phẩm như sau: điểm nóng chảy (247 - 257oC), tỷ lệ ALA:Na+ = 1:1 (mol/mol), muối natri ALA tạo thành ổn định trong thử nghiệm ở nhiệt độ cao, độ hòa tan 34 g/ 100 g nước (cao hơn so với ALA nguyên liệu là 0,01 g/ 100 g nước Ví dụ 2: sử dụng phương pháp sản xuất với quy mô lên 500g ALA/mẻ Hòa tan 98,4 g NaOH trong 9390 g nước cất, sau đó thêm 504,0 g ALA dưới nhiệt độ phòng hoặc thấp hơn (làm mát bằng nước) Hỗn hợp này được khuấy đến khi ALA hòa tan hoàn toàn và được trung hòa để thu được dung dịch muối natri của ALA với hàm lượng đo được là 100,3% Ví dụ 3: tạo muối kali của ALA, phương pháp tiến hành tương tự như ví dụ 1, các thông số: lượng KOH sử dụng là 1,36 g, lượng nước cất là 93,6 g, lượng ALA là 5,0 g Kết quả hàm lượng của dung dịch này đo được là 102,1% Ví dụ 4: tạo muối calci của ALA, phương pháp tiến hành tương tự như ví dụ 1, các thông số: lượng Ca(OH)2 là 1,31 g, lượng nước cất là 1000 g, lượng ALA là 7,18 g Dung dịch được cô đặc và sấy khô ở 60oC thu được 7,94 g muối calci của ALA tinh thể màu trắng với hàm lượng đo được là 98,1% [35]

Năm 2005, Annegret Jannasch và cộng sự nghiên cứu tạo ra dạng muối trometamol

của ALA Tác giả đề cập một vài ví dụ, ví dụ 1: 12,1 g (0,1 mol) trometamol được thêm vào dung dịch 41,2 g (0,2 mol) acid R- thioctic trong 220 ml ethanol 96% Đun nóng trong khi khuấy đến 55oC Thêm 1 g chất trợ lọc Diacel vào dung dịch, đun nóng trong 20 phút ở 55 - 57oC, lọc đến khi dung dịch trong, làm nguội từ từ và khuấy ở -5oC đến -100oC trong 2 giờ Kết quả thu được 58,0 g muối trometamol của ALA (đạt 88,6% so với lý thuyết) Ví dụ 2: 41,2 g (0,2 mol) acid R- thioctic được hòa tan trong 600 ml ethanol khan; sau đó 24,2 g (0,2mol) trometamol được thêm vào đồng thời khuấy đều và gia nhiệt hỗn hợp đến 50 - 55oC Thêm 2 g chất trợ lọc Diacel vào dung dịch, đun nóng trong 10 phút ở 50 - 55oC, lọc đến khi dung dịch trong, làm nguội từ từ trong 3 - 4 giờ và khuấy thêm 4 - 5 giờ ở -5oC đến -10oC Kết quả thu được 55,5 g muối trometamol của ALA (đạt 84,9% so với lý thuyết) Ví dụ 3: 41,2 g (0,2 mol) acid R- thioctic được hòa tan trong 230 ml ethanol khan, sau đó 24,2 g (0,2 mol) trometamol được thêm vào đồng thời khuấy đều và gia nhiệt hỗn hợp đến 55 - 60oC Hút lọc đến khi dung dịch trong, làm nguội từ từ đến 0oC đến 5oC và khuấy thêm 2 - 4 giờ ở 0oC đến 5oC Lọc hút, rửa bằng ethanol lạnh và sấy khô Kết quả thu được 61,0 g muối trometamol của ALA (đạt 93,1% so với lý thuyết) Ví dụ 4: 41,2 g (0,2 mol) acid R- thioctic được hòa tan trong 600 ml ethanol khan, sau đó 24,2 g (0,2 mol) trometamol được thêm vào đồng thời khuấy đều và gia nhiệt hỗn hợp đến 50 - 55oC Thêm 2 g chất trợ lọc Diacel vào dung dịch, khuấy trong 20 phút, lọc hút đến khi dung dịch trong, làm nguội từ từ và khuấy trong 4 giờ ở -5oC đến -10oC Lọc hút, rửa bằng ethanol lạnh và sấy khô Kết quả thu

được 56,1 g muối trometamol của ALA (đạt 85,7% so với lý thuyết) Muối tạo ra được xác định bằng mẫu nhiễu xạ bột tia X, đường cong DSC (đo nhiệt lượng quét vi phân), bởi các dạng tinh thể điển hình trong môi trường thích hợp, độ hòa tan và/ hoặc tốc độ hòa tan khác nhau, cũng như các đặc tính trơn chảy khác nhau Nhìn chung, muối trometamol của acid lipoic đều có điểm nóng chảy cao hơn so với ALA nguyên liệu (từ 115,2 - 118,4oC), khả năng hòa tan và độ tan cũng được cải thiện [26]

Năm 2011, Borsa M nghiên cứu bào chế viên nén chứa muối của ALA với các tác

nhân kiềm (trometamol, cystamin, piperazin) để nhằm nâng cao độ tan, độ ổn định của ALA Kết quả cho thấy sự khả quan khi nhiệt độ nóng chảy, độ tan, độ ổn định của viên nén chứa các muối trên cao hơn so với nguyên liệu ALA Tốt nhất là muối của kiềm piperazin, cho kết quả thử độ hòa tan đạt 102,62% (ở viên có độ cứng 40 - 90N) và 103,01% (ở viên có độ cứng 90 - 120N) sau 50 phút Về độ ổn định ở điều kiện lão hóa cấp tốc (40  2oC, RH 70  5%) viên nén muối piperazin cho thấy ổn định trên 100 ngày trong khi viên nén chứa ALA chỉ còn dưới 20% dược chất [14]

Năm 2013, Gerald Rimbach và cộng sự đã phân tích sự cải thiện về độ ổn định của

R(+) - ALA ở các phức hợp ALA với các cyclodextrin (dạng α, β, G2 - β, γ) Kết quả cho thấy RALA - (γ-Cyclodextrin) là phức hợp tốt nhất so với phần còn lại Kết quả phân tích nhiệt quét vi sai thấy không xuất hiện pic nhiệt ở nhiệt độ khảo sát 30 - 100oC, rất ít R-ALA bị mất đi trong quá trình tạo phức hợp với γ - Cyclodextrin Ngoài ra, phức hợp đó còn khả năng ổn định tốt với nhiệt độ 25oC hoặc 70 oC, độ ẩm tương đối 100% trong 30 phút, 1 giờ, 2 giờ, 5 giờ, 24 giờ, 48 giờ và pH 1,2 (37oC trong 1 giờ) Hình thái của các phức hợp của ALA với các cyclodextrin khác nhau tùy vào loại cyclodextrin sử dụng nhưng phức hợp với γ - Cyclodextrin cho tinh thể đặc trưng nhất với các hạt có hình que [32]

Năm 2018, Yi-Xuan Li và cộng sự đã phân tán hiệu quả ALA trong dung dịch nước

chứa tinh bột amylose tự nhiên và octenylsuccinylat hóa cao, với độ ổn định cao để tránh sự phân hủy nhiệt và oxy hóa của ALA Sự ổn định này là nhờ sự hình thành phức hợp V-amylose Tinh bột được octenylsuccinylat hóa cao có hiệu quả trong việc ổn định ALA so với tinh bột tự nhiên do tính chất lưỡng tính và kỵ nước của các nhóm thế trong

tinh bột biến tính Hơn nữa, độ ổn định trong quá trình tiêu hóa ở dạ dày và ruột non in vitro và sự giải phóng ALA chậm trong quá trình tiêu hoá cho thấy tinh bột

octenylsuccinylat hóa cao có thể sử dụng chất mang tiêu hóa ALA với khả năng giải phóng kiểm soát [37]

Năm 2021, Trần Văn Vinh đã xây dựng được công thức bào chế viên nén acid alpha

lipoic 300 mg đạt tiêu chuẩn độ hòa tan theo USP41, quy mô 1000 viên/lô, đã chọn được công thức cơ bản qua nghiên cứu sàng lọc, đã xác định được không gian thiết kế và công thức bào chế tối ưu bằng phần mềm SAS JMP pro13, công thức tối ưu có thành phần

như sau: ALA 300,0 mg, Avicel PH120 120,0 mg, natri croscamelose 25,0 mg, HPC EF 12,2 mg, EDTA 1,0 mg, menthol 12,0 mg, poloxamer188 6,0 mg, natri stearyl fumarat 19,1 mg, aerosil 19,1 mg, talc 9,6 mg, dung dịch đệm phosphat pH 8 210 mg, ethanol 96% 90mg, dicalci phosphat vừa đủ 680 mg Tác giả còn xây dựng được quy trình bào chế viên nén acid alpha lipoic 300 mg, quy mô 1000 viên/lô Tác giã đã đánh giá được tính ổn định của quy trình và xác định được thông số kỹ thuật trọng yếu của quy trình bào chế như: thời gian trộn bột kép trên máy nhào trộn cao tốc GHL10 là 6 phút với tốc độ cánh đảo 140 vòng/phút, thời gian chém tạo hạt 6 phút với tốc độ chém 900 vòng/phút, tốc độ cánh đảo 140 vòng/phút, sấy hạt trên máy tầng sôi DIOSNA MINILAB với thông số nhiệt độ gió vào 40oC, nhiệt độ gió ra 35oC, công suất gió 80%, áp suất rũ túi lọc 2 bar, thời gian sấy se là 20 phút, sấy khô 30 phút Thời gian trộn đồng nhất trên máy trộn lập phương là 8 phút với tốc độ 40 vòng/phút, dập viên trên máy dập viên quay tròn 8 chày Shaki với tốc độ dập viên là 6 vòng/phút Ngoài ra, tác giả đã bước đầu đánh giá được độ ổn định của viên nén acid alpha lipoic 300 mg ở điều kiện dài hạn và lão hóa cấp tốc và kết quả cho thấy viên ổn định trong thời gian nghiên cứu ở điều kiện dài hạn [6]

Năm 2023, Nguyễn Ngọc Gia Bảo nghiên cứu chế tạo tinh thể muối của ALA với

một số base: trometamol, L-lysin Với muối trometamol lipoat, phương pháp sử dụng để tạo muối là sự kết hợp của ba phương pháp: bay hơi một phần dung môi, làm lạnh dung môi và sử dụng đối dung môi Muối trometamol lipoat có màu vàng nhạt, nhiệt độ nóng chảy 118,6 - 120,0oC, hiệu suất tạo muối 83,4% Với muối L-lysin lipoat, phương pháp tạo muối sử dụng là bay hơi dung môi Muối L-lysin lipoat có màu vàng đến vàng nâu, nhiệt độ nóng chảy 183,5 - 190,0oC, hiệu suất tạo muối 74,07% Tác giả đã khẳng định được cấu trúc của hai muối trometamol lipoat và L-lysin lipoat bằng các phổ IR (Phổ hồng ngoại), 1H-NMR (Phổ cộng hưởng từ hạt nhân proton), 13C-NMR (Phổ cộng hưởng từ hạt nhân carbon 13), XRD (Nhiễu xạ tia X) Ngoài ra, tác giả đã bước đầu đánh giá được ổn định về mặt cảm quan và hàm lượng của sản phẩm muối trometamol lipoat, so sánh với dạng ALA tự do Kết quả đánh giá độ ổn định ở điều kiện dài hạn (30  2oC, độ ẩm tương đối 75  5%) cho thấy về mặt cảm quan, mẫu ALA và muối trometamol lipoat không có sự thay đổi đáng kể nào cả, tuy nhiên về mặt hàm lượng, các mẫu ALA có sự suy giảm về hàm lượng, trong khi đó hàm lượng ALA trong mẫu muối trometamol ALA gần như không thay đổi Kết quả đánh giá độ ổn định ở điều kiện lão hóa cấp tốc (40  2oC, độ ẩm tương đối 75  5%) cho thấy mẫu ALA suy giảm hàm lượng nhiều hơn so với mẫu ở điều kiện dài hạn, hàm lượng chỉ còn 92,35  0,85%, còn mẫu muối trometamol ALA ít có sự thay đổi về hàm lượng trong suốt 2 tháng [5]

CHƯƠNG 2: ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Nguyên vật liệu, thiết bị

2.1.1 Nguyên vật liệu

Bảng 2.1 Nguyên vật liệu dùng trong nghiên cứu

5 Natri carboxy methyl celulose Trung Quốc TCCS

JP-CHP

15 Natri acetat Xylong Scientific Co.,

Ltd (Trung Quốc) TKHH

 Viên đối chiếu: Viên nén bao phim Thiogamma® 600 Oral Số lô sản xuất: 389602

Hạn sử dụng: 01/06/2026 Tỷ lệ DC:TD = 2,5:1 với thành phần: ALA, HPMC, aerosil, MCC, lactose monohydrate, NaCMC, talc silicone gồm có talc và simeticone, MgS, macrogol 6000, natri dodecyl sulphate

2.1.2 Thiết bị

Bảng 2.2 Thiết bị dùng trong nghiên cứu

6 Máy đo độ trơn chảy ERWEKA Granule Tester GTL Đức

12 Máy đo quang phổ UV-VIS HITACHI U-5100 Nhật Bản

17 Các dụng cụ thí nghiệm khác

2.2 Nội dung nghiên cứu

2.2.1 Đánh giá được ảnh hưởng của một số tá dược kiềm đến độ tan và độ hòa tan của ALA

2.2.2 Bước đầu xây dựng được công thức bào chế viên nén ALA 200 mg

2.3 Phương pháp nghiên cứu

2.3.1 Phương pháp bào chế viên nén ALA 200 mg

Phương pháp bào chế: Tạo hạt ướt

Bảng 2.3 Thành phần công thức viên nén ALA 200 mg

Mô tả quy trình bào chế:

- Cân các nguyên liệu theo công thức - Hòa tan tá dược kiềm trong dung môi nước cho tới khi tá dược kiềm hòa tan hoàn toàn

- Rây tá dược độn qua rây 0,25 mm - Tạo hỗn hợp bột kép gồm dược chất và tá dược độn, tiến hành trộn thủ công trong cối, trộn đều trong khoảng 15 - 20 phút cho tới khi thu được khối bột đồng nhất

- Tạo khối ẩm: cho từ từ dung dịch tá dược kiềm vào bột kép trộn đều tới khi thu được khối ẩm vừa đủ

- Trộn hỗn hợp bột trên với tá dược hấp phụ trong khoảng 10 phút - Xát hạt qua rây 1 mm

- Sấy hạt trong tủ sấy ở nhiệt độ 40oC, thời gian sấy khoảng 8 - 10 giờ, tới hàm ẩm từ 1,0 - 2,0%

- Sửa hạt qua rây 0,85 mm - Rây tá dược rã, tá dược trơn qua rây 0,18 mm - Trộn đồng nhất: trộn hạt sau sửa với tá dược rã ngoài, tá dược trơn chảy, chống dính trong túi PE, trộn đều khoảng 5 - 8 phút cho tới khi thu được hỗn hợp đồng nhất

- Dập viên: trên máy dập viên quay tròn, chày tròn đường kính 9 mm, điều chỉnh lực nén và bề dày viên sao cho viên có khối lượng 300 mg và độ cứng viên từ 7 - 9 kP

2.3.2 Phương pháp đánh giá một số đặc tính của ALA

a Xác định hình thái tiểu phân của ALA

Xác định hình dạng của nguyên liệu ALA bằng kính hiển vi quang học

b Đánh giá độ tan của ALA trong một số môi trường

Tiến hành xác định độ tan của ALA trong môi trường (acid hydrocloric pH 1,2, đệm acetat pH 4,5, đệm phosphat pH 6,8, đệm phosphat pH 8,0 và trong nước) như sau:

+ Cho 50ml môi trường khảo sát và một lượng dư ALA khoảng 1 g vào bình định mức 100ml, nút kín

+ Lắc hỗn hợp trong bể lắc điều nhiệt ở điều kiện 25oC, tốc độ 50 vòng/phút trong 24 giờ

+ Sau thời gian 24 giờ lấy mẫu ra, ly tâm 5000 vòng/phút trong 10 phút + Hút lớp dịch ly tâm phía trên, lọc qua màng 0,45 m, pha loãng đến nồng độ thích hợp, định lượng chất tan, từ đó tính độ tan của ALA trong mỗi dung dịch thử dựa vào kết quả định lượng

c Xác định độ ẩm của nguyên liệu ALA

Độ ẩm của nguyên liệu ALA được xác định theo phương pháp mất khối lượng do làm khô (theo phụ lục 9.6 DĐVN V), tiến hành trong bình hút chân không ở điều kiện

áp suất 1,5 kPa - 2,5 kPa, chứa chất hút ẩm phosphor pentoxyd, ở nhiệt độ phòng Sấy tới hàm ẩm không đổi

d Xác định nhiệt độ nóng chảy

Tiến hành theo phụ lục 6.7, phương pháp 1 DĐVN V theo các bước sau: Cho khối bột (hạt) cần đo nhiệt độ nóng chảy vào ống mao dẫn bằng thủy tinh, đường kính ống khoảng 1,5 mm đã hàn 1 đầu, sau đó đặt vào buồng đo của máy đo nhiệt nóng chảy AZ-MELT, cài nhiệt độ đo từ 30 tới 120oC, nhấn nút bắt đầu đo, quan sát và đọc kết quả nhiệt độ khi khối bột bắt đầu nóng chảy và nhiệt độ nóng chảy hoàn toàn, tiến hành lặp lại 3 lần, lấy kết quả trung bình

e Đánh giá khối lượng riêng biểu kiến bằng phương pháp gõ đến thể tích không đổi

Tiến hành đo thể tích biểu kiến của bột (hạt) trên thiết bị ERWEKA với khối lượng bột m (g) tương ứng khoảng 20 ml cho vào ống đong 50 ml; đọc thể tích thô (Vthô) Gõ liên tục trong 3 phút theo chương trình đã định bằng máy đo khối lượng riêng ERWEKA thu được thể tích biểu kiến (Vbk)

2.3.3 Xây dựng phương pháp định lượng ALA bằng phương pháp quang phổ hấp thụ tử ngoại UV-Vis

Chuẩn bị dung dịch gốc ALA có nồng độ 1000 g/ml với dung môi pha mẫu là ethanol 50%

Tiến hành quét phổ ở bước sóng từ 200 - 400 nm, tìm  max Từ dung dịch gốc pha dãy dung dịch ALA có nồng độ lần lượt 200, 250, 400, 500, 600, 750 g/ml trong dung môi pha mẫu Đo độ hấp thụ của các dung dịch này ở bước sóng  max Xây dựng mô hình tuyến tính biểu diễn mối tương quan giữa mật độ quang và nồng độ dung dịch ALA Mô hình tuyến tính được coi là phù hợp nếu hệ số tương quan R2 > 0,99

2.3.4 Đánh giá chỉ tiêu chất lượng của cốm

a Xác định hàm ẩm của cốm

Sử dụng phương pháp mất khối lượng do làm khô, được trình bày như ở mục 2.3.2 Yêu cầu: Cốm dập viên có độ ẩm từ 1,0 – 2,0%

b Xác định tốc độ trơn chảy của cốm

Xác định tốc độ chảy trên máy ERWEKA GWF với đường kính lỗ phễu 10 mm

c Xác định hàm lượng ALA trong cốm

Dung dịch thử: nghiền mịn một lượng cốm, cân chính xác một lượng bột tương ứng với 100 mg ALA, cho vào bình định mức 100 ml, thêm khoảng 80 ml ethanol 50% vào bình, siêu âm 60 phút, thêm ethanol 50% vừa đủ tới vạch, lắc đều, lọc dịch qua màng lọc 0,45 m, hút chính xác 5 ml dịch lọc này cho vào bình định mức 10 ml, thêm ethanol 50% vừa đủ tới vạch lắc đều

Mẫu trắng: ethanol 50%

Đo mật độ quang của dung dịch thu được ở bước sóng  max 334 nm Tính nồng độ ALA trong dung dịch theo đường chuẩn xây dựng được theo cách tiến hành ở phần thẩm định phương pháp định lượng Thực hiện định lượng 3 lần, lấy kết quả trung bình

Chuẩn bị cốm thử hòa tan: cân chính xác một lượng cốm tương ứng với 200 mg ALA

Phương pháp xử lý mẫu: hút khoảng 10 ml môi trường thử hòa tan cho vào ống falcon, đem ly tâm 5000 vòng/phút trong thời gian 10 phút, hút lớp dịch phía trên, lọc qua màng lọc 0,45 m, hút chính xác 5 ml dịch lọc này cho vào bình định mức 10 ml, thêm ethanol tuyệt đối vừa đủ tới vạch lắc đều

So sánh với dung dịch chuẩn được chuẩn bị như sau: Cân chính xác khoảng 100 mg ALA vào bình định mức 100 ml, thêm khoảng 80 ml ethanol 50%, lắc hoặc siêu âm cho tan hết, thêm ethanol 50% vừa đủ đến vạch, lắc đều Hút chính xác 5 ml dung dịch này cho vào bình định mức 20 ml, thêm ethanol 50% vừa đủ đến vạch, lắc đều

Tiến hành đo độ hấp thụ của dung dịch thu được ở bước sóng cực đại 334 nm trong cuvet dày 1 cm, mẫu trắng là ethanol 50%

Trong đó: V: thể tích môi trường hòa tan (ml) Vo: thể tích mẫu thử lấy ra ở mỗi thời điểm (ml) Cn: nồng độ dược chất trong mẫu thử ở lần hút mẫu thứ n (mg/ml) m: khối lượng dược chất có trong 1 viên thử (mg)

Yêu cầu: Không ít hơn 70% lượng acid alpha lipoic (C8H14O2S2) so với lượng ghi trên nhãn được hòa tan trong 60 phút

e Độ ổn định

Tiến hành cân một lượng chính xác 0,05 g bột (từ hỗn hợp bột dược chất, chất mang, tá dược kiềm đã trộn đồng nhất) vào ống thủy tinh, đặt trong bếp đun cách thủy ở nhiệt

độ 100oC trong 1 giờ Sau đó định lượng hàm lượng dược chất trong ống sau đun 1 giờ; tiến hành so sánh với mẫu ở môi trường ở nhiệt độ phòng

Phương pháp định lượng: Thêm 5 ml Ethanol 50% vào ống thủy tinh, tiến hành siêu âm 20 phút để dược chất tan hoàn toàn Thêm tiếp 5 ml Ethanol 50%, siêu âm 20 phút Sau đó tiến hành ly tâm ở 5000 vòng/phút trong 10 phút Lọc qua màng lọc 0,45 m; pha loãng đến nồng độ thích hợp để đo quang ở bước sóng 334 nm Tính nồng độ ALA trong dung dịch theo đường chuẩn xây dựng được theo cách tiến hành ở phần thẩm định phương pháp định lượng

f Phổ hồng ngoại biến đổi Fourier (FT - IR)

Nghiền khoảng 1 - 2 mg mẫu dược chất (hoặc mẫu cốm chứa tá dược kiềm) với KBr thành hỗn hợp đồng nhất, dập hỗn hợp thành viên nén có đường kính 13 mm, lực dập 800 mPa Tiến hành quét phổ hồng ngoại trong vùng số sóng 4000 - 400 cm-1

2.3.5 Đánh giá chỉ tiêu chất lượng viên

c Độ mài mòn

Xác định độ mài mòn trên máy ERWEKA TA 10 Cân chính xác khối lượng 6,5 g viên nén đã được loại hết bột rồi cho vào lồng máy đo độ mài mòn quay 25 vòng/phút trong thời gian 4 phút, sau đó làm sạch viên và cân lại khối lượng Độ mài mòn tính theo công thức:

+ Thời gian thử: 30 phút Tiến hành: cho vào mỗi ống thử 1 viên nén, treo giá đỡ ống thử trong cốc có chứa môi trường theo chỉ dẫn được duy trì ở 37  2oC và vận hành thiết bị theo thời gian quy

định, quan sát và đọc kết quả Viên đạt yêu cầu về độ rã khi cả 6 viên đều rã sau thời gian thử, nếu có 1 đến 2 viên không đạt, tiến hành thử lại trên 12 viên Mẫu thử đạt yêu cầu nếu không dưới 16 trong số 18 viên thử rã

e Định lượng hàm lượng dược chất trong viên nén

Dung dịch thử: nghiền mịn một lượng viên nén, cân chính xác một lượng bột tương ứng với 100 mg ALA, cho vào bình định mức 100 ml, thêm khoảng 80 ml ethanol 50% vào bình, siêu âm 60 phút, thêm ethanol 50% vừa đủ tới vạch, lắc đều, lọc dịch qua màng lọc 0,45 m, hút chính xác 5 ml dịch lọc này cho vào bình định mức 10 ml, thêm ethanol 50% vừa đủ tới vạch lắc đều

Mẫu trắng: ethanol 50% Đo mật độ quang của dung dịch thu được ở bước sóng  max 334 nm Tính nồng độ ALA trong dung dịch theo đường chuẩn xây dựng được theo cách tiến hành ở phần thẩm định phương pháp định lượng Thực hiện định lượng 3 lần, lấy kết quả trung bình

Phương pháp xử lý mẫu: hút khoảng 10 ml môi trường thử hòa tan cho vào ống falcon, đem ly tâm 5000 vòng/phút trong thời gian 10 phút, hút lớp dịch phía trên, lọc qua màng lọc 0,45 m, hút chính xác 5 ml dịch lọc này cho vào bình định mức 10 ml, thêm ethanol tuyệt đối vừa đủ tới vạch lắc đều

So sánh với dung dịch chuẩn được chuẩn bị như sau: Cân chính xác khoảng 100 mg ALA vào bình định mức 100 ml, thêm khoảng 80 ml ethanol 50%, lắc hoặc siêu âm cho tan hết, thêm ethanol 50% vừa đủ đến vạch, lắc đều Hút chính xác 5 ml dung dịch này cho vào bình định mức 20 ml, thêm ethanol 50% vừa đủ đến vạch, lắc đều

Tiến hành đo độ hấp thụ của dung dịch thu được ở bước sóng cực đại 334 nm trong cuvet dày 1 cm, mẫu trắng là ethanol 50%

Trong đó: V: thể tích môi trường hòa tan (ml) Vo: thể tích mẫu thử lấy ra ở mỗi thời điểm (ml)