luận án tiến sĩ nghiên cứu phân tích thành phần cấu trúc hóa học và định lượng hợp chất có tác dụng bảo vệ gan của hai loài bàn tay ma

Mát sá công bá gÅn ây tÃp trung nghiên cāu vào thành phÅn hóa hãc và ho¿t tính cÿa lá cây Bàn tay ma ß nh°ng ch°a có nhāng nghiên cāu về tác dăng bÁo vá gan cÿa d°āc liáu này [10-15].. S

VÀ CÔNG NGHà VIàT NAM

Bà GIÁO DĂC VÀ ĐÀO T¾O VIàN HÀN LÂM KHOA HâC VÀ CÔNG NGHà VIàT NAM

-

BÙI VN TRUNG

CĂA HAI LOÀI BÀN TAY MA

Chuyên ngành: Hóa phân tích Mã sá: 9440118

LUÀN ÁN TI¾N SĨ HÓA HàC

NG¯äI H¯âNG DÀN KHOA HâC:

1 GS.TS Ph¿m Hùng Viát

2 PGS.TS D°¢ng Hßng Anh

Hà Nội – 2023

Tôi xin cam oan:

LuÃn án này là công tình nghiên cāu cÿa tôi d°ãi sự h°ãng dÁn cÿa GS.TS Ph¿m Hùng Viát và PGS.TS D°¢ng Hßng Anh

Các sá liáu, kÁt quÁ trong luÃn án cÿa tôi là trung thực và ch°a °āc công bá trong công trình nào khác

Hà Nội, ngày tháng nm 2023 Tác giÁ luÁn án

Bùi Vn Trung

LuÃn án này °āc hoàn thành t¿i Phòng thí nghiám trãng iểm Công nghá phân tích phăc vă Kiểm ánh môi tr°ång và An toàn thực ph¿m – Tr°ång Đ¿i hãc Khoa hãc tự nhiên – Đ¿i hãc Quác gia Hà Nái, Vián Hóa sinh biển – Vián Hàn lâm Khoa hãc và Công nghá Viát Nam và Vián Kiểm nghiám thuác Trung °¢ng Trong suát quá trình thực hián luÃn án, tác giÁ ã nhÃn °āc rÃt nhiều sự giúp ÿ quý báu cÿa các thÅy cô, các nhà khoa hãc, các ßng nghiáp, b¿n bè và gia ình

Vãi tÃm lòng chân thành và biÁt ¢n sâu sÅc, tôi xin °āc gÿi låi cÁm ¢n tãi GS.TS Ph¿m Hùng Viát và PGS.TS D°¢ng Hßng Anh, nhāng ng°åi thÅy vô cùng tÃn tâm và nhiát huyÁt ã ánh h°ãng, h°ãng dÁn và giúp ÿ tôi trong suát quá trình hãc tÃp cũng nh° thực hián luÃn án ThÅy và cô ã luôn quan tâm, giúp ÿ, áng viên và t¿o mãi iều kián thuÃn lāi cho tôi ể hoàn thián luÃn án này

Tôi xin gÿi låi cÁm ¢n chân thành tãi tÃp thể các thÅy cô t¿i Phòng Nghiên cāu cÃu trúc – Vián Hóa sinh biển, ặc biát là PGS.TS Phan Văn Kiám, ng°åi thÅy ã h°ãng dÁn tôi trong nhāng b°ãc Åu tiÁp cÃn vãi chuyên môn về hóa hãc các hāp chÃt thiên nhiên, là tiền ề ể tôi phân lÃp, chiÁt tách các chÃt từ d°āc liáu Nhāng kiÁn thāc quý báu thÅy truyền ¿t không nhāng là nền tÁng giúp tôi phát triển ể thực hián mát sá nái dung lãn cÿa luÃn án, mà còn ang rÃt hāu ích vãi nhāng công viác cÿa tôi hián t¿i

Tôi xin trân trãng cÁm ¢n Ban Lãnh ¿o Vián và các anh/chá trong Khoa VÃt lý – Đo l°ång, Vián Kiểm nghiám thuác Trung °¢ng ã t¿o iều kián về thåi gian, c¢ sç vÃt chÃt, trang thiÁt bá hián ¿i cho tôi thực hián luÃn án

Tôi xin trân trãng cÁm ¢n Ban Giám ác cùng các cán bá phòng Đào t¿o, Hãc vián Khoa hãc và Công nghá - Vián Hàn lâm Khoa hãc và Công nghá Viát Nam ã thiÁt kÁ ch°¢ng trình và kÁ ho¿ch ào t¿o hāp lý cho tôi cũng nh° luôn giúp ÿ káp thåi các thÿ tăc trong hãc tÃp ể tôi hoàn thành luÃn án này úng thåi h¿n

Tôi xin bày tß lòng biÁt ¢n chân thành và sâu sÅc tãi toàn thể gia ình, b¿n bè và nhāng ng°åi thân ã luôn quan tâm, khích lá, áng viên tôi trong suát quá trình hãc tÃp, nghiên cāu

Tác giÁ

Bùi Vn Trung

MĀC LĀC

LäI CAM ĐOAN i

LäI CÀM ¡N i

MĂC LĂC i

DANH MĂC CHĀ VIÀT TÄT iv

DANH MĂC BÀNG vii

DANH MĂC HÌNH viii

Mæ ĐÄU 1

CH¯¡NG 1 TàNG QUAN 3

1.1 Táng quan về bài thuác <Bàn tay ma= 3

1.2 Táng quan về hai loài d°āc liáu H terminalis và H lobata 4

1.2.1 Hã QuÅn hoa (Proteaceae) 4

1.2.2 Chi Heliciopsis Sleum 6

1.2.3 Loài Bàn tay ma trÅng - Heliciopsis terminalis (Kurz) Sleumer 7

1.1.4 Loài Bàn tay ma ß - Heliciopsis lobata (Merr.) Sleumer 9

1.1.5 So sánh hai loài Bàn tay ma qua các nghiên cāu ã công bá 13

1.1.6 Tri thāc sÿ dăng cây thuác Bàn tay ma 15

1.2 Mát sá ph°¢ng pháp ánh giá tác dăng bÁo vá gan 17

1.2.1 Đánh giá tác dăng bÁo vá tÁ bào gan trên mô hình in vitro 17

1.2.2 Đánh giá tác dăng bÁo vá gan trên mô hình in vivo 21

1.2.3 Ph°¢ng h°ãng áp dăng các mô hình bÁo vá gan trong luÃn án 22

1.3 ChÃt ánh dÃu cÿa d°āc liáu và ph°¢ng pháp xác ánh 23

1.3.1 ChÃt ánh dÃu cÿa d°āc liáu và āng dăng 23

1.3.2 Ph°¢ng pháp xác ánh chÃt ánh dÃu cÿa d°āc liáu 26

1.3.3 Ph°¢ng pháp xác ánh chÃt ánh dÃu có tác dăng bÁo vá gan trong d°āc liáu Bàn tay ma 26

1.4 Tóm tÅt các vÃn ề ề tài luÃn án cÅn giÁi quyÁt 27

CH¯¡NG 2 ĐàI T¯ĀNG VÀ PH¯¡NG PHÁP NGHIÊN CĀU 29 2.1 Đái t°āng nghiên cāu 29 2.2 Ph°¢ng pháp nghiên cāu 30 2.2.1 Áp dăng các ph°¢ng pháp phân tích hóa lý hián ¿i ể phân tích cÃu trúc mát sá thành phÅn hóa hãc cÿa hai loài Bàn tay ma 31 2.2.2 Đánh giá tác dăng bÁo vá gan cÿa hai loài Bàn tay ma 33 2.2.3 Xây dựng quy trình ánh tính và ánh l°āng chÃt ánh dÃu có tác dăng bÁo vá gan cÿa hai loài Bàn tay ma 36 CH¯¡NG 3 KÀT QUÀ VÀ THÀO LUÂN 38 3.1 CÃu trúc cÿa mát sá thành phÅn hóa hãc °āc phân lÃp từ d°āc liáu Bàn tay ma trÅng và d°āc liáu Bàn tay ma ß 38 3.1.1 Phân tính xác ánh cÃu trúc mát sá thành phÅn hóa hãc từ loài Bàn tay ma trÅng

(H terminalis) 38

3.1.2 Phân tích xác ánh cÃu trúc mát sá thành phÅn hóa hãc từ loài Bàn tay ma ß (H

lobata) 54 3.2 Tác dăng bÁo vá gan cÿa hai loài d°āc liáu Bàn tay ma 72 3.2.1 Tác dăng bÁo vá gan cÿa hai loài Bàn tay ma trên mô hình in vivo 72 3.2.2 Tác dăng bÁo vá tÁ bào gan cÿa các hāp chÃt phân lÃp từ loài Bàn tay ma trÅng

(H terminalis) và loài Bàn tay ma ß (H lobata) 80

3.2.3 Mát sá tác dăng liên quan Án khÁ năng bÁo vá gan cÿa hāp chÃt 4-hydroxy-1-β-D-glucopyranoside 83

3,5-Dimethoxy-3.2.4 Đánh giá ác tính cÿa d°āc liáu Bàn tay ma ß 86 3.3 Xây dựng quy trình ính tính và ánh l°āng hāp chÃt 3,5-dimethoxy-4-hydroxy-1-

β-D-glucopyranoside trong d°āc liáu Bàn tay ma 88

3.3.1 Xác ánh chÃt ánh dÃu có tác dăng bÁo vá gan từ d°āc liáu Bàn tay ma ß 88 3.3.2 Xây dựng qui trình ánh tính 3,5-dimethoxy-4-hydroxy-1-β-D-glucopyranoside trong d°āc liáu Bàn tay ma 90 3.3.3 Xây dựng qui trình ánh l°āng 3,5-dimethoxy-4-hydroxy-1-β-D-glucopyranoside trong d°āc liáu Bàn tay ma 91

3.3.4 Quy trình ánh tính và ánh l°āng

3,5-dimethoxy-4-hydroxy-1-β-D-glucopyranoside trong d°āc liáu Bàn tay ma 98

3.3.5 S¢ bá xác ánh hàm l°āng 3,5-dimethoxy-4-hydroxy-1-β-D-glucopyranoside trong mÁu HL11 ã tinh chÁ 99

3.3.6 Th¿m ánh quy trình ánh tính và ánh l°āng glucopyranoside trong d°āc liáu Bàn tay ma 101

3,5-dimethoxy-4-hydroxy-1-β-D-3.3.7 Đánh l°āng 3,5-dimethoxy-4-hydroxy-1-β-D-glucopyranoside trong cao chiÁt n°ãc d°āc liáu Bàn tay ma ß 108

CH¯¡NG 4 KÀT LUÂN VÀ KIÀN NGHà 111

4.1 KÁt luÃn 111

4.2 KiÁn nghá 112

DANH MĂC CÔNG Bà LIÊN QUAN ĐÀN LUÂN ÁN 113

TÀI LIàU THAM KHÀO 114

DANH MĀC CHĀ VI¾T TÂT

13C-NMR Carbon-13 Nuclear Magnetic

Resonance Spectroscopy Phá cáng h°çng từ h¿t nhân 13C

1H-NMR Proton Nuclear Magnetic

Resonance Spectroscopy Phá cáng h°çng từ h¿t nhân 1H

ALT Alanine aminotransferase Enzyme alanine aminotransferase

AOAC international

Association of Official Analytical Collaboration International

Hiáp hái các tá chāc hóa phân tích quác tÁ chính tháng

AST Aspartate aminotransferase Enzyme aspartate aminotransferase

Spectroscopy

Phá l°ÿng sÅc tròn nhằm xác ánh á quay cực cÿa mát ßng phân quang hãc trong mát phân tÿ chÃt hāu c¢ có mát hoặc nhiều h¢n carbon bÃt ái

COSY Correlation Spectroscopy Phá hai chiều t°¢ng quan 1H-1H

DEPT

Distortionless Enhancement by Polarisation Transfer Spectroscopy

Kỹ thuÃt tăng c°ång tín hiáu phá NMR cÿa 13C mà không bá biÁn d¿ng pic nhå sự chuyển phân cực phá chuyển phân cực cÿa 1H

DPPH 1,1- diphenyl-2-picrylhydrazyl 1,1- diphenyl-2-picrylhydrazyl

Kí hiáu Ti¿ng Anh Dißn giÁi

Half maximal effective

EMA European Medicines Agency C¢ quan D°āc ph¿m châu Âu

carcinoma cell GepG2

Dòng tÁ bào ung th° biểu mô gan ç ng°åi HepG2

HKE-293A Human embryonic kidney 293 cell

Dòng tÁ bào gác thÃn ç phôi ng°åi HKE-293A

HMBC Heteronuclear Mutiple Bond Connectivity Spectroscopy

Phá t°¢ng tác dá h¿t nhân (13C-1H) gián tiÁp qua nhiều liên kÁt

HR-ESI-MS High Resolution Electrospray Ionization Mass Spectrometry

Phá khái l°āng phân giÁi cao sÿ dăng ngußn ion hóa bằng phun ián tÿ

Single-Quantum Coherence

Phá t°¢ng tác dá h¿t nhân (13C-1H) trực tiÁp qua 1 liên kÁt

Inhibitory concentration at 50%

Nßng á āc chÁ 50 % ái t°āng thÿ nghiám

Kí hiáu Ti¿ng Anh Dißn giÁi

bằng ph°¢ng pháp so màu

Enhancement Spectroscopy

Phá cáng h°çng từ tăng c°ång nhå hiáu āng Nuclear Overhauser

RAW 264.7 Mammalian cell line Dòng tÁ bào ¿i thực bào RAW 264.7 RSD Relative standard deviation Đá lách chu¿n t°¢ng ái

TBARs thiobarbituric acid reactive substances

C¢ chÃt phÁn āng vãi acid thiobarbituric

TLC Thin layer chromatography SÅc ký lãp mßng

(CH3)4Si °āc sÿ dăng làm chÃt chu¿n xác ánh á chuyển dách hóa hãc cÿa các h¿t nhân °āc nghiên cāu

WHO World Health Organization Tá chāc Y tÁ thÁ giãi

DANH MĀC BÀNG

BÁng 2.1 Liều cao chiÁt sÿ dăng cho chuát thÿ nghiám 34

a BÁng 3.1 Sá liáu phá NMR cÿa hāp chÃt HT9 47

BÁng 3.2 Sá liáu phá NMR cÿa hāp chÃt HL12 và hāp chÃt tham khÁo 64

BÁng 3.3 KhÁ năng bÁo vá tÁ bào HepG2 cÿa mÁu phân lÃp từ d°āc liáu Bàn tay ma trÅng (H terminalis) 81

BÁng 3.4 KhÁ năng bÁo vá tÁ bào HepG2 cÿa mÁu phân lÃp từ d°āc liáu Bàn tay ma ß (H lobata) 82

BÁng 3.5 KhÁ năng gây ác tÁ bào cÿa các mÁu trên dòng tÁ bào HEK-293A 87

BÁng 3.6 KÁt quÁ thÿ á tan cÿa hāp chÃt, 5-dimethoxy-4-hydroxy-1-β-D glucopyranoside trong mát sá dung môi phân cực 92

BÁng 3.7 KÁt quÁ khÁo sát thåi gian siêu âm mÁu 96

BÁng 3.8 Ch°¢ng trình pha áng ánh l°āng HL11 trong d°āc liáu Bàn tay ma ß 98

BÁng 3.9 KÁt quÁ xác ánh hàm l°āng glucopyranoside trong mÁu HL11 101

3,5-dimethoxy-4-hydroxy-1-β-D-BÁng 3.10 KÁt quÁ ánh giá á lặp l¿i cÿa thông sá mÁu chu¿n 103

BÁng 3.11 Nßng á và dián tích pic cÿa các mÁu ánh giá á tuyÁn tính 104

BÁng 3.12 KÁt quÁ ánh giá á lặp l¿i và á chính xác trung gian 105

BÁng 3.13 KÁt quÁ ánh giá á úng cÿa ph°¢ng pháp 106

BÁng 3.14 KÁt quÁ ánh giá á lặp l¿i và á chính xác trung gian 109 a

DANH MĀC HÌNH

Hình 1.1 Các hāp chÃt phenyl glycosid °āc phân lÃp từ lá cây Bàn tay ma trÅng 8

Hình 1.2 Mát sá bá phÃn cÿa cây Bàn tay ma trÅng và Bàn tay ma ß 13

Hình 2.1 MÁu tiêu bÁn D°āc liáu và bát d°āc liáu Bàn tay ma trÅng 29

Hình 2.2 MÁu tiêu bÁn D°āc liáu và bát d°āc liáu Bàn tay ma ß 29

Hình 2.3 S¢ ß nghiên cāu d°āc liáu Bàn tay ma ß và Bàn tay ma trÅng 30

aHình 3.1 S¢ ß phân lÃp và tinh chÁ các hāp chÃt từ loài Bàn tay ma trÅng (H terminalis) 39

Hình 3.2 CÃu trúc hóa hãc cÿa hāp chÃt HT1 40

Hình 3.3 CÃu trúc hóa hãc cÿa hāp chÃt HT2 41

Hình 3.4 CÃu trúc hóa hãc cÿa hāp chÃt HT3 42

Hình 3.5 CÃu trúc hóa hãc cÿa hāp chÃt HT4 42

Hình 3.6 CÃu trúc hóa hãc cÿa hāp chÃt HT5 43

Hình 3.7 CÃu trúc hóa hãc cÿa hāp chÃt HT6 44

Hình 3.8 CÃu trúc hóa hãc cÿa hāp chÃt HT7 45

Hình 3.9 CÃu trúc hóa hãc cÿa hāp chÃt HT8 46

Hình 3.10 CÃu trúc hóa hãc và các t°¢ng tác HMBC, COSY cÿa hāp chÃt HT9 47

Hình 3.16 CÃu trúc hóa hãc cÿa hāp chÃt HT10 53

Hình 3.17 Qui trình phân lÃp và tinh chÁ các hāp chÃt từ cây Bàn tay ma ß (H lobata) 55

Hình 3.18 CÃu trúc hóa hãc cÿa hāp chÃt HL1 56

Hình 3.19 CÃu trúc hóa hãc cÿa hāp chÃt HL2 57

Hình 3.20 CÃu trúc hóa hãc cÿa hāp chÃt HL3 57

Hình 3.21 CÃu trúc hóa hãc cÿa hāp chÃt HL4 58

Hình 3.22 CÃu trúc hóa hãc cÿa hāp chÃt HL5 59

Hình 3.23 CÃu trúc hóa hãc cÿa hāp chÃt HL7 60

Hình 3.24 CÃu trúc hóa hãc cÿa hāp chÃt HL8 60

Hình 3.25 CÃu trúc hóa hãc cÿa hāp chÃt HL9 61

Hình 3.26 CÃu trúc hóa hãc cÿa hāp chÃt HL10 62

Hình 3.27 CÃu trúc hóa hãc cÿa hāp chÃt HL11 63

Hình 3.28 CÃu trúc hóa hãc cÿa hāp chÃt HL12 và hāp chÃt tham khÁo 63

Hình 3.35 CÃu trúc hóa hãc cÿa hāp chÃt HL13 70

Hình 3.36 CÃu trúc hóa hãc cÿa hāp chÃt HL14 71

Hình 3.37 Tỷ lá chuát thí nghiám còn sáng sau khi uáng mÁu thÿ 73

Hình 3.38 Ành h°çng cÿa cao chiÁt n°ãc các d°āc liáu Bàn tay ma trên hình Ánh giÁi phÁu ¿i thể gan chuát 74

Hình 3.39 Ành h°çng cÿa cao chiÁt n°ãc các d°āc liáu Bàn tay ma lên sự thay ái tỷ lá % khái l°āng gan chuát trên khái l°āng chuát nghiên cāu 75

Hình 3.40 Ành h°çng cÿa cao chiÁt n°ãc các d°āc liáu Bàn tay ma lên ho¿t á enzyme gan ALT (U/L) ç các lô chuát nghiên cāu 76

Hình 3.41 Ành h°çng cÿa cao chiÁt n°ãc các d°āc liáu Bàn tay ma lên ho¿t á enzyme gan AST (U/L) ç các lô chuát nghiên cāu 77

Hình 3.42 Ành h°çng cÿa cao chiÁt n°ãc các d°āc liáu Bàn tay ma lên c¢ chÃt cÿa TBARs trên các lô chuát nghiên cāu 78 Hình 3.43 Tác áng cÿa hāp chÃt HL11 lên nßng á các cytokine t¿i thåi iểm 24h 84 Hình 3.44 Tác áng cÿa hāp chÃt HL11 lên nßng á các cytokine t¿i thåi iểm 48h 85

Hình 3.45 So sánh tín hiáu hāp chÃt 1,3-diol) trong hai loài d°āc liáu 89 Hình 3.46 Phá UV-VIS cÿa các chÃt HL9, HL10 và HL11 t¿i các vá trí pic chÃt xuÃt hián trên sÅc ký ß cÿa ba chÃt 93 Hình 3.47 SÅc ký ß mÁu hßn hāp HL9, HL10 và HL11 ç thể tích tiêm 5 µl và 10 µl phân tích ç b°ãc sóng 278 nm 94 Hình 3.48 SÅc ký ß cÿa các dung dách °āc phân tích ç b°ãc sóng 278 nm 97 Hình 3.49 SÅc ký ß mÁu trÅng (A) và mÁu nguyên liáu HL11 (B) và á tinh khiÁt cÿa pic HL11 (C) 100 Hình 3.50 SÅc ký ß ánh giá á ặc hiáu cÿa ph°¢ng pháp: A – mÁu chu¿n, B – mÁu thÿ ánh l°āng 3,5-dimethoxy-4-hydroxy-1-β-D-glucopyranoside 102 Hình 3.51 Mái t°¢ng quan tuyÁn tính giāa dián tích pic và nßng á chÃt phân tích 104 Hình 3.52 KÁt quÁ xác ánh giãi h¿n ánh l°āng cÿa ph°¢ng pháp 107 Hình 3.53 SÅc ký ß mÁu cao chiÁt n°ãc d°āc liáu Bàn tay ma ß 109

(Z)-5,5'-(hexadec-8-ene-1,16-diyl)bis(benzene-Mâ ĐÄU

Khí hÃu gió mùa cùng vãi sự a d¿ng về áa hình, thá nh°ÿng ã t¿o nên sự phong phú về thÁm thực vÃt ç Viát Nam Sự °u ãi Ãy cÿa thiên nhiên cùng vãi kiÁn thāc y hãc cá truyền qua hàng ngàn năm phát triển ã giúp sàng lãc °āc rÃt nhiều d°āc liáu, bài thuác, ph°¢ng thāc chāa trá quý báu Mặc dù ngày nay y hãc hán ¿i rÃt phát triển, nh°ng y hãc cá truyền ang °āc sÿ dăng ráng rãi ể bÁo vá, chăm sóc sāc khße nhân dân ta [1-3] Tuy nhiên, ể tìm ra °āc mát d°āc liáu hoặc mát bài thuác tát, quá trình sàng lãc truyền tháng Ãy th°ång phÁi trÁi qua nhāng thÿ nghiám trên ng°åi rÃt lâu dài, không thể tránh khßi nhāng rÿi ro cho sāc khße bánh nhân

Dùng các bằng chāng khoa hãc làm sáng tß tác dăng cÿa các d°āc liáu, bài thuác trong dân gian là cách giúp nhân dân và các y, bác sĩ có thể ánh giá mát cách chính xác công dăng nhāng d°āc liáu ang l°u hành và sÿ dăng hián nay Đây là cũng là ph°¢ng án ể tìm ra các d°āc liáu mãi, lo¿i lãc dÅn các d°āc liáu ít hoặc không có tác dăng ra khßi danh măc các cây thuác t¿i Viát Nam Từ ó khẳng ánh l¿i vai trò iều trá cÿa các d°āc liáu quý ể có ph°¢ng án bÁo tßn, phát triển chúng

Bài thuác <Bàn tay ma=, ã °āc nhóm nghiên cāu liên ngành do GS.TS Ph¿m Hùng Viát chÿ trì nghiên cāu trong ch°¢ng trình Phát triển Khoa hãc Công nghá vùng Tây BÅc giai o¿n 2017 – 2019, gßm 3 thành phÅn d°āc liáu ph¢i khô: thân cây Bàn tay ma, phÅn trên mặt Ãt cây GiÁo cá lam và thân cây Cà gai leo Bài thuác ã °āc chāng minh tác dăng bÁo vá gan, lāi mÃt và °āc cÃp bằng GiÁi pháp hāu ích theo QĐ sá 79345/QĐ-SHTT, ngày 07/11/2018 cÿa Căc Sç hāu trí tuá [4] Trong bài thuác trên, GiÁo cá lam và Cà gai leo là hai vá °āc liáu ã °āc chāng minh là có tác dăng bÁo vá gan tát, và cũng ã °āc nghiên cāu kĩ về thành phÅn hóa hãc cho h°ãng tác dăng bÁo vá gan [5-8] Trong khi ó, vá thuác có hàm l°āng lãn nhÃt, °āc xem là vá chÿ trong bài thuác này, là Bàn tay ma thì vÁn ch°a °āc nghiên cāu nhiều theo h°ãng tác dăng iều trá bánh về gan

Ngoài ra, theo thông tin từ kÁt quÁ iều tra cÿa nhóm nghiên cāu cÿa PGS.TS TrÅn Văn ¡n (Tr°ång ¿i hãc D°āc Hà Nái), có hai loài d°āc liáu cùng có tên là Bàn tay ma là loài Bàn tay ma trÅng Heliciopsis lobata (Merr.) Sleumer và loài Bàn tay ma

ß Heliciopsis terminalis (Kurz.) Sleumer thuác chi Helicopsis Sleumer Hai loài này

°āc dùng nhiều ç vùng Tây BÅc ể iều trá các bánh về gan d°ãi d¿ng ¢n thành phÅn

hoặc dùng phái hāp vãi các d°āc liáu khác Hình thái hai loài d°āc liáu này khá t°¢ng ßng nhau, khÁ năng bÁo vá gan cÿa hai loài này cũng mãi chß °āc iều tra theo kinh nghiám cÿa dân gian mà ch°a có minh chāng khoa hãc cho tác dăng này Tỷ lá nhÃn biÁt, phân biát °āc hai lo¿i d°āc liáu này chß có khoÁng 40 %, nên viác dùng thay thÁ nhau giāa hai lo¿i d°āc liáu này vÁn ang dißn ra NÁu ít nhÃt mát trong hai loài không có tác dăng bÁo vá gan hoặc có ác tính thì viác sÿ dăng nh° vÃy không nhāng không chāa °āc bánh gan mà còn có thể gây nên nhāng hÃu quÁ không áng có [9]

Mát sá công bá gÅn ây tÃp trung nghiên cāu vào thành phÅn hóa hãc và ho¿t tính cÿa lá cây Bàn tay ma ß nh°ng ch°a có nhāng nghiên cāu về tác dăng bÁo vá gan cÿa d°āc liáu này [10-15] Song song quá trình thực hián luÃn án này, nhóm tác giÁ Byeol Ryu, Đ¿i hãc quác gia Seoul, ã phân lÃp °āc 10 hāp chÃt từ lá cây Bàn tay ma trÅng và ánh giá tác dăng cÿa các hāp chÃt này trên các mô hình in vitro liên quan Án khÁ năng dung n¿p glucose mà không phÁi bÁo vá gan [16]

Do vÃy, ề tài <Nghiên cứu phân tích thành phần, cấu trúc hóa học và định

lượng hợp chất có tác dụng bảo vệ gan của hai loài Ban tay ma= °āc thực hián trên

ái t°āng là hai loài Bàn tay ma trÅng (H terminalis) và Bàn tay ma ß (H lobata) vãi

các măc tiêu sau: (i) Xác ánh °āc thành phÅn hóa hãc và cÃu trúc cÿa các hāp chÃt hāu c¢ °āc phân lÃp từ hai loài Bàn tay ma bằng các ph°¢ng pháp phân tích hóa lý hián ¿i; (ii) Đánh giá °āc tác dăng bÁo vá gan cÿa hai loài Bàn tay ma và (iii) Xây dựng °āc quy trình ánh tính và ánh l°āng °āc chÃt ánh dÃu có tác dăng bÁo vá gan cÿa hai loài Bàn tay ma có á chính xác và á tin cÃy cao nhằm có thể áp dăng quy trình này trong thực tÁ

CH¯¡NG 1 TàNG QUAN 1.1 Táng quan về bài thuác <Bàn tay ma=

Bài thuác <Bàn tay ma= có ngußn từ ông lang Nguyßn QuyÁt ThÅng – Hái Y hãc cá truyền tßnh BÅc K¿n, gßm các d°āc liáu khô: 30 g thân cây Bàn tay ma trÅng

(Heliciopsis terminalis Kurz.), 5 g phÅn trên mặt Ãt cÿa cây GiÁo cá lam (Gynostemma pentaphyllum Thunb.) và 10 g thân cây Cà gai leo (Solanum procumbens Lour.) Bài

thuác ã °āc chāng minh tác dăng bÁo vá gan và lāi mÃt, °āc cÃp bằng GiÁi pháp hāu ích theo QĐ sá 79345/QĐ-SHTT, ngày 07/11/2018 cÿa Căc Sç hāu trí tuá [4]

Bài thuác này ã °āc sàng lãc từ 152 bài thuác iều trá các bánh gan, mÃt cÿa

ßng bào vùng Tây BÅc [17] Qua thÿ nghiám tác dăng in vivo trên mô hình chuát nhÅt

trÅng chÿng Swiss., cao chiÁt n°ãc bài thuác thể hián tác dăng bÁo vá gan khi làm giÁm các triáu chāng ho¿i tÿ và viêm gan trên chuát gây ác bằng paracetamol; tác dăng lāi mÃt qua viác làm tăng khái l°āng mÃt tiÁt ra khi sÿ dăng thuác Trong mô hình thí nghiám ã thực hián, liều gÃp ôi liều thông th°ång cÿa bài thuác cho tác dăng bÁo vá gan và lāi mÃt ều tát h¢n liều thông th°ång Bài thuác cũng °āc chāng minh là an toàn trên mô hình chuát thí nghiám khi cho chuát uáng liều tái a không thÃy chuát chÁt và không xuÃt hián bÃt kì biểu hián nào cÿa ác tính cÃp Ngoài ra, sau 4 tuÅn thÿ nghiám ác tính bán tr°ång dißn ç liều gÃp ôi liều thông th°ång cÿa bài thuác, các biểu hián bá nhißm ác cÿa chuát thí nghiám cũng không °āc quan sát thÃy [18]

Trong ba thành phÅn cÿa bài thuác, GiÁo cá lam và Cà gai leo ã °āc nghiên cāu rÃt nhiều và ều °āc chāng minh tác dăng bÁo vá gan Đái vãi GiÁo cá lam, thành phÅn chính t¿o nên tác dăng bÁo vá gan là saponin, liều ¿t ßnh khi thÿ tác dăng bÁo vá gan trên chuát quy ái ra liều cho ng°åi là khoÁng 20 g, trong khi liều dùng trong bài thuác là 5 g Đái vãi Cà gai leo, tác dăng bÁo vá gan °āc chāng minh là chß do nhóm glycoalkaloid t¿o nên L°āng glycoalkaloid l¿i tÃp trung chÿ yÁu ç quÁ (0,45 %), lá (0,36 %) và rß (0,20 %), trong khi ç thân – bá phÃn dùng trong bài thuác chß là 0,08 % Theo các kÁt quÁ ã công bá phía trên, có thể nói cà gai leo không óng vai trò quan trãng trong tác dăng bÁo vá gan cÿa bài thuác Tuy nhiên, khi sÿ dăng phái hāp các thành phÅn vãi nhau, vai trò cÿa chúng trong bài thuác cũng rÃt phāc t¿p

Riêng vá thuác Bàn tay ma, hàm l°āng trong bài thuác là khá lãn, mặc dù bài thuác Bàn tay ma ã °āc công bá, nh°ng hai loài Bàn tay ma ß và trÅng còn sÿ dăng

nhÅm lÁn trong nhân dân vãi tỷ lá cao và ch°a có minh chāng khoa hãc nhiều về công dăng bÁo vá gan cÿa hai loài d°āc liáu này [9] TÃp trung nghiên cāu hai vá thuác Bàn tay ma vãi ánh h°ãng tác dăng bÁo vá gan s¿ giúp cung cÃp bằng chāng khoa hãc ể ánh giá úng Ån vai trò và tác dăng thực tÁ cÿa hai loài d°āc liáu này Qua ó có thể có c¢ sç ể tái °u hóa bài thuác <Bàn tay ma= qua viác sÿ dăng lo¿i d°āc liáu phù hāp hoặc ể xác ánh các chÃt ánh dÃu ể kiểm soát chÃt l°āng cÿa d°āc liáu, cÿa bài thuác và các sÁn ph¿m từ d°āc liáu này

1.2 Táng quan về hai loài d°ÿc liáu H terminalis và H lobata

Hai loài Heliciopsis terminalis (Kurz.) Sleumer và Heliciopsis lobata (Merr.)

Sleumer ç Viát Nam °āc sÿ dăng chung vãi tên là Bàn tay ma Nhiều n¢i trong cáng ßng vÁn sÿ dăng lÁn lán hai loài này ể chāa cùng mát lo¿i bánh mà ch°a có nhiều kiÁn thāc ể phân biát hai loài này CÁ hai loài H terminalis và H lobata ều thuác chi

Heliciopsis Sleum, hã QuÅn hoa (Protaceae)

1.2.1 Họ Quắn hoa (Proteaceae)

Hã QuÅn hoa (Proteaceae) còn có tên gãi khác là hã Chẹo thui, hã C¢m vàng hay hã Đũng,&[19] là mát hã t°¢ng ái lãn, vãi khoÁng 80 chi và 1.700 loài [20, 21] Tên

Proteaceae bÅt ngußn từ tên thÅn Proteus cÿa Hy L¿p, mát vá thÅn có thể thay ái nhiều

d¿ng, nó phÁn ánh sự a d¿ng về mặt hình thái cÿa hã thực vÃt này [22]

Hã Proteaceae hián t¿i °āc chia ra thành 7 phân hã, bao gßm: Bellendenoideae,

Caranarvonioideae, Eidotheoideae, Grevilleoideae, Persoonioideae, Proteoideae và

Sphalmioideae [23]

Hã QuÅn hoa th°ång phân bá ç nhiều n¢i trên thÁ giãi, a d¿ng nhÃt ç Úc, tiÁp Án là ç Nam Phi, Nam Mỹ, New Caledonia, New Guinea, Malesia, Nam và Đông Á, Châu Phi, Trung Mỹ, Madagascar, New Zealand, Fiji, nam Ân Đá, Sri Lanka, Vanuatu, và Micronesia [20, 21, 23, 24] æ Viát Nam có 3 chi: Grevillea, Helicia, Heliciopsis vãi khoÁng 15 loài [19, 25]

Nhìn chung, các cây trong hã Proteaceae th°ång là các cây băi hoặc cây thân gß lâu năm, mát sá loài cây có thể cao lên tãi h¢n 40 m, tuy nhiên cũng có mát sá loài thuác chi Stirlingia là cây thân thÁo Cây th°ång l°ÿng tính hoàn toàn, nh°ng ôi khi cũng ¢n tính cùng gác hoặc ¢n tính khác gác, nhiều lo¿i trong hã này có căm <rß proteoid= [20, 22, 23]

<Rß proteoid= là lo¿i rß ặc biát, phát triển theo mùa theo mùa, °āc t¿o ra ể giúp cây thích nghi vãi các lo¿i Ãt nghèo dinh d°ÿng [26] Đây là nhāng rß ngÅn, dày ặc, °āc sinh ra theo chiều ngang trên rß bình th°ång và °āc gÅn rÃt nhiều lông hút Chúng chÿ yÁu °āc hình thành trong mùa tăng tr°çng và lăi dÅn vào cuái mùa rßi °āc thay thÁ l¿i vào năm sau Ho¿t áng cÿa rß proteoid cũng t°¢ng tự nh° viác cáng sinh vãi nÃm Mycorrhiza ç các hã khác, nhằm t¿o ra bề mặt ráng h¢n ể tăng khÁ năng hÃp thu trong môi tr°ång mà các chÃt dinh d°ÿng và n°ãc khan hiÁm [20, 22]

Lá mãc so le hoặc cũng có tr°ång hāp mãc ái hoặc mãc vòng, lá mãc ¢n hoặc lá kép lông chim, hiÁm khi có lá hình chân chim, th°ång có xẻ răng c°a ç mép lá Lá có thể có cuáng hoặc không cuáng, gân lá hình lông chim hoặc ôi khi là gân song song hoặc hình bàn tay, mát sá tr°ång hāp rút gãn thành gân ¢n Lá th°ång xanh, a d¿ng về kích th°ãc, hình dáng và ặc iểm mép lá Không có lá kèm [20]

Căm hoa ¢n hoặc kép, mãc ç nách lá, cành, thân hoặc ngãn, th°ång không phân nhánh, hoặc hiÁm khi phân nhánh Hoa nç theo chiều ngang thành từng cặp hoặc ôi khi ¢n lẻ, căm hoa chùm, ôi khi là bông hoặc tă l¿i thành Åu Lá bÅc cÿa cặp hoa th°ång nhß, ôi khi cùng lãn lên vãi hoa và hóa gß Lá bÅc cÿa hoa th°ång nhß hoặc không có Hoa l°ÿng tính hoặc hiÁm khi ¢n tính khác gác, ái xāng tßa tròn hoặc ái xāng 2 bên Hoa mÁu 3, 4 hoặc 5, bao hoa th°ång có d¿ng áng khi ang ra nă, cánh hoa ngÅn Nhá 4, ái dián bao hoa Chß nhá th°ång °āc gÅn liền vãi bao hoa và không tách biát Bao phÃn th°ång 2 ô, mç theo chiều dãc BÅu trên, 1 ô, không hoặc có cuáng Noãn 1 hoặc 2 (hoặc nhiều h¢n), ính noãn treo hoặc ính noãn mép QuÁ ¿i, óng hoặc h¿ch H¿t 1 hoặc 2 (hoặc vài Án nhiều), ôi khi có cánh H¿t không có nái nhũ hoặc chß ể l¿i vÁt Phôi th°ång thẳng, lá mÅm dày hay mßng, giàu chÃt béo Rß mÅm ngÅn ç d°ãi [23, 27]

Nhå có hoa ẹp và tuái thã cây t°¢ng ái dài, nhiều loài trong hã QuÅn hoa ã °āc sÿ dăng phá biÁn ể trang trí, thÃm chí mát sá loài có hoa ẹp còn °āc trßng ể xuÃt kh¿u Trßng cây thuác hã Proteaceae là mát ngành công nghiáp phát triển m¿nh, t¿o ra công ăn viác làm ç các Ãt n°ãc mà nhāng cây hoa này °āc trßng, th°ång là ç nhāng vùng không sÁn xuÃt nông nghiáp [28] Mát sá loài có hoa ẹp °āc trßng ể

kinh doanh là Banksia L.f., Leucadendron R.Br., Leucospermum R.Br và Protea L

Các loài thuác chi Aulax Berg., Grevillea R.Br ex Knight, Isopogon R.Br ex Knight,

Mimetes Salisb, Paranomus Salisb, Serruria Salisb and Telopea R.Br °āc sÿ dăng ç

māc á thÃp h¢n [26] Ngoài viác công dăng làm cây cÁnh, các loài Grevillea, Hakea

Schrad & J.C.Wendl và Macadamia F.Muell °āc còn trßng ể sÁn xuÃt thực ph¿m, làm

hàng rào hoặc chÅn gió

Vãi sự a d¿ng về thực vÃt, măc ích sÿ dăng cÿa các loài thuác hã QuÅn hoa cũng khác nhau Trong lĩnh vực d°āc liáu, rÃt nhiều cây thuác thuác hã này ã °āc nhân dân sàng lãc và āng dăng trong iều trá bánh cho cáng ßng [1, 2, 19, 29, 30]

1.2.2 Chi Heliciopsis Sleum

Các cây thuác chi này là d¿ng cây gß, ¢n tính khác gác Lá ¢n, mãc so le, nguyên hoặc chia thùy hoặc lá kép lông chim Căm hoa bông hoặc chùm, rÃt hiÁm chia nhánh, hay mãc thành từng cặp Lá bÅc cÿa cặp hoa thẳng, hình dùi hoặc hình mác, không răng Lá bÅc cÿa hoa th°ång răng sãm Bao hoa thẳng, mßng Cánh hoa hình chùy Án elip, cuán ngoài lúc ang còn nă Nhá hoa gÅn nh° không có chß nhá, dính vào cánh hoa Bao phÃn hình thuôn; h¢i nhãn Nhá lép có trong hoa cái H¿t phÃn nhß 3 thùy, có màng ngoài nh° l°ãi TuyÁn mÃt 4, råi nhau BÅu nhăy có 2 noãn Núm nhăy chÿ yÁu là hình chùy BÅu lép có trong hoa ực QuÁ h¿ch, vß quÁ ngoài tr¢n, mßng; vß quÁ giāa xáp, hoặc có nhiều sāi mềm xuyên tâm, ôi khi tiêu giÁm khi chín; vß quÁ trong cāng, hóa gß, hiÁm khi mßng, mặt ngoài có lß l°ãi H¿t 1 và hình cÅu hoặc h¿t 2 và bán cÅu, vß hát mßng, lá mÅm béo [19, 23]

Chi Heliciopsis Sleum có khoÁng 10 loài, phân bá ç Đông Nam Á, Đông

Himalaya Trung Quác có 3 loài, trong ó có 2 loài ặc hāu [23]

æ Viát Nam có hai loài là H terminalis và H lobata °āc gãi vãi nhiều tên khác

nhau [2, 3, 30, 31] GÅn ây, tên gãi Bàn tay ma °āc sÿ dăng phá biÁn nhÃt Sç dĩ có tên gãi là <Bàn tay ma= vì theo truyền thuyÁt cÿa ng°åi Tày (Cao Bằng, BÅc K¿n), cây mãc ç các rừng thiêng, n¢i an táng ng°åi chÁt, lá cây xẻ thuỳ nh° nhāng bàn tay kháng lß, canh giā n¢i an nghß cÿa nhāng ng°åi ã khuÃt [3, 30] Hình thái hai loài này t°¢ng ái giáng nhau, nên viác phân biát hai loài này trong nhân dân vÁn còn nhiều khó khăn Năm 2017, nhóm nghiên cāu cÿa PGS.TS TrÅn Văn ¡n, Tr°ång Đ¿i hãc D°āc Hà Nái ã tiÁn hành nghiên cāu ể phân biát hai loài này và cũng ã tiÁn hành iều tra tình hình nhÃn biÁt cÿa hai loài Bàn tay ma ç mát sá vùng dân tác ç BÅc K¿n, n¢i mà d°āc liáu này ang °āc sÿ dăng phá biÁn ç Viát Nam [9]

1.2.3 Loài Bàn tay ma trắng - Heliciopsis terminalis (Kurz) Sleumer

Tên khoa hác : Heliciopsis terminalis (Kurz.) Sleumer

Tên Viát Nam : Bàn tay ma trÅng, Đúng, M¿ s°a phân thùy

1.2.3.1 Đặc điểm thực vật

Loài Bàn tay ma trÅng là lo¿i cây thân gß, có chiều cao từ 5 Án 15 m, °ång kính 35 – 50 cm Cành non có lông t¢ màu gß sÅt, sáng bóng Lá l°ÿng hình, phiÁn lá ¢n hoặc xẻ ba thùy Án xẻ hình lông chim; cuáng lá dài 1 – 2,5 cm ái vãi lá ¢n, và 4 – 5 cm ái vãi lá xẻ thùy; phiÁn lá mßng dai, có màu sáng bóng khi già, gác hình nêm Án nhß hẹp dÅn, mép nguyên, ßnh h¢i nhãn, nhãn hoặc ôi khi h¢i sÅc nhãn; gân phă hình m¿ng nái rõ trên cÁ hai bề mặt PhiÁn lá ¢n hình mác Án thuôn dài, kích th°ãc 12-35 × 4-10 cm PhiÁn lá xẻ kích th°ãc 25-60 × 15-50 cm, 1 – 7 ôi thùy, xoan h¢i tròn

Căm hoa ç nách lá hoặc có hoa ç cành, hiÁm khi ç Åu nhánh ngÅn, có nhiều lông; lá bÅc cÿa các cặp hoa dài và hẹp kích th°ãc 0,5 – 2 mm; lá bÅc hoa dài và hẹp, ca 0,5 mm Bao hoa màu trÅng hoặc h¢i vàng Căm hoa ực dài 10 – 20 cm Căm hoa cái mÃp, dài 15 – 22 cm Hoa ực: cuáng dài 5 – 7 mm; bao hoa 1,1 – 1,4 cm; bao phÃn ca 2,5 mm; nhá hoa nhẵn; vòi nhá hình chùy Hoa cái: cuáng hoa 8 – 10 mm; bao hoa ca 1,2 cm; cao 1,5 mm; bÅu dăc d¿ng trāng, nhẵn; vòi nhăy ca 1 cm, ßnh ± nén; Åu nhăy ç bên QuÁ h¢i nâu, hình elip, kích th°ãc 3-4,5 × 1,7-3 cm; vß ngoài ca dày 0,5 mm; vß quÁ giāa ca dày 1,5 mm, sāi mềm hÅu nh° không có khi khô; vß quÁ trong dày 0,5 – 1,5 mm Hoa nç từ tháng 3 Án tháng 6; quÁ từ tháng 8 Án tháng 11 [25, 32, 33]

1.2.3.2 Phân bố

Cây mãc ç rừng m°a, d°ãi 100 m Án 700 m, có n¢i còn tìm thÃy lo¿i này mãc ç á cao tãi 1400 m Cây phân bá chÿ yÁu ç vùng Đông Nam Á nh° Viát Nam, Lào, Campuchia, Thái Lan, Myanma và vùng phía nam cÿa Trung Quác [2, 30, 34] æ Trung Quác, Bàn tay ma trÅng °āc tìm thÃy ç phía Đông QuÁng Đông, phía Đông Nam QuÁng Tây, HÁi Nam, phía BÅc Án Đông Nam Vân Nam [32]

æ Viát Nam, Bàn tay ma trÅng °āc phân bá ç các tßnh QuÁng Ninh (huyán Móng Cái, Hà Cái), Hà Nái (huyán Ba Vì), Đà Nẵng (huyán HÁi Vân, Liên Chiểu), Kon Tum (huyán ĐÅc Tô, Ngãc Pan), ĐÅc LÅc (huyán ĐÅc Mil, Đāc Minh), Lâm Đßng (huyán Di Linh, Đinh trang Th°āng), Khánh Hòa (TP Nha trang, huyán Phú Hāu) [2, 32, 35]

1.2.3.3 Bộ phận dùng và công dụng

Rß, vß, lá có vá nh¿t, chát, tính mát, có ít ác; có tác dăng thanh nhiát, giÁi ác; bá thÃn, an thÅn [2] æ Viát Nam và Trung Quác, Bàn tay ma trÅng ang °āc nhân dân sÿ dăng làm thuác, nh°ng cách dùng mßi n¢i l¿i khác nhau [32]

Vß thân và lá Bàn tay ma trÅng °āc cho là có công dăng kiềm chÁ vi khu¿n và thanh nhiát giÁi ác æ Viát Nam, Bàn tay ma trÅng °āc sÿ dăng làm thuác cháng ác, chāa viêm tăy [2, 35] æ Vân Nam (Trung Quác), vß và lá cây °āc dùng làm thuác tránh thai; còn ç QuÁng Tây, °āc dùng trá viêm tuyÁn mang tai [2]

1.2.3.4 Thành phần hóa học cÿa cây Bàn tay ma trắng

Thành phÅn hóa hãc cÿa cây Bàn tay ma trÅng ít °āc nghiên cāu tr°ãc ây Song song vãi luÃn án này, nhóm nghiên cāu cÿa tác giÁ Byeol Ryu và cáng sự t¿i tr°ång Đ¿i hãc Quác gia Seoul ã phân lÃp và xác ánh °āc 10 hāp chÃt thuác nhóm glycosid từ cao chiÁt (methanol 70 %) cÿa lá cây Bàn tay ma trÅng trßng t¿i huyán Phú L°¢ng, tßnh Thái Nguyên, trong ó có 5 hāp chÃt lÅn Åu tiên °āc công bá (Hình 1.1) [16]

Hình 1.1. Các hāp chÃt phenyl glycosid °āc phân lÃp từ lá cây Bàn tay ma trÅng [16]

Đặc biát trong các hāp chÃt mãi, có tãi 4 hāp chÃt macrocylic glycosid (1-4), ây

là nhāng hāp chÃt chuyển hóa thā cÃp, rÃt hiÁm tìm thÃy trong tự nhiên Bên c¿nh ó, nhóm nghiên cāu ã chāng minh rằng mát sá hāp chÃt phân lÃp từ loài này có khÁ năng

giúp tăng dung n¿p glucose trên mô hình in vitro Đây là nghiên cāu Åu tiên °āc công

bá về khÁ năng cÁi thián hÃp thu °ång huyÁt cÿa cây Bàn tay ma trÅng [16]

Bên c¿nh nhāng hāp chÃt ã °āc phân lÃp, gÅn ây nhóm nghiên cāu cÿa PGS.TS TrÅn Văn ¡n ã tiÁn hành xác ánh các nhóm chÃt chính trong các bá phÃn cÿa cây Bàn tay ma trÅng KÁt quÁ cho thÃy thân, rß và lá Bàn tay ma trÅng có chāa nhiều các hāp chÃt nhóm flavonoid, °ång khÿ và polyphenol Ngoài ra còn có các hāp chÃt khác nh° caroten, polysarcharid, caroten, sterol và acid amin [9]

1.1.4 Loài Bàn tay ma đỏ - Heliciopsis lobata (Merr.) Sleumer

Tên khoa hác : Heliciopsis lobata (Merr.) Sleumer

Tên Viát Nam : Bàn tay ma, Đũng, Đìa chăn

1.1.2.1 Đặc điểm thực vật

Loài Bàn tay ma ß cũng là lo¿i cây thân gß, có chiều cao khoÁng 5 – 20 m Cành non và lá non có lông măng màu gß sÅt [2, 33, 35, 36] Lá l°ÿng hình, phiÁn lá ¢n hoặc xẻ hình lông chim; cuáng lá dài 4 – 8 cm; phiÁn lá có lông, gác hình nêm, có khía dãc ç mặt trăc dãc theo các gân hình m¿ng sáng bóng, mép nguyên, ßnh h¢i nhãn; gân m¿ng nái rõ PhiÁn lá ¢n thuôn dài, kích th°ãc 10-25 × 5-7 cm PhiÁn lá hình lông chim, kích th°ãc 20-60 × 20-40 cm, 2 – 8 ôi thùy, các thùy h¢i tròn Căm hoa hình chùy, nhiều lông; lá bÅc cÿa cặp hoa hình mác, ca 1 mm Căm hoa ực dài 7 – 12 cm Căm hoa cái dài 2 – 5 cm Bao hoa màu vàng nh¿t, có lông t¢ Hoa ực: cuáng hoa dài 1 – 2 mm Án không cuáng; bao hoa dài 0,8 – 1,2 cm; bao phÃn ca 2mm; nhá hoa nhẵn Hoa cái: cuáng ca 3mm; bao hoa ca 1 cm, nhiều lông; bÅu hình trāng, nhẵn; vòi nhăy ca 8 mm, ßnh hình chùy; Åu nhăy ç bên QuÁ màu xanh h¢i vàng, hình elipsoid Án hình elipsoid d¿ng hình trāng, h¢i bá nén, kích th°ãc 7-9 × 5-6 cm; vß quÁ ngoài ca dày 1 mm; vß quÁ giāa dày 2 – 4 mm, nhiều sāi mềm và bền khi khô; vß quÁ trong dày 3 – 4 mm Ra hoa từ tháng 5 Án tháng 7; ra quÁ tháng 11 Án tháng 12 [2, 35, 36]

1.1.2.2 Phân bố, sinh thái

Khác vãi sự phân bá ráng rãi cÿa cây Bàn tay ma trÅng, cây Bàn tay ma ß ch°a thÃy nói Án ç các n°ãc khác trên thÁ giãi mà chß thÃy xuÃt hián ç Viát Nam và ç vùng HÁi Nam, Trung Quác [3, 27, 36] æ Viát Nam, cây Bàn tay ma ß chÿ yÁu phân bá rÁi rác ç các tßnh miền núi phía BÅc nh° Lào Cai, Yên Bái, Hà Giang, BÅc K¿n, L¿ng S¢n, Tuyên Quang, Phú Thã (huyán Thanh S¢n), BÅc Giang, Vĩnh Phúc (huyán Tam ĐÁo) [30, 35] Ngoài ra còn phân bá ç Ninh Bình và ç Nghá An [35]

Bàn tay ma ß thuác lo¿i cây gß nhÿ, mãc nhanh trong các rừng cây lá ráng th°ång xanh thÿ sinh do khai thác gß, trên Ãt ferralit ß vàng, có nhiều mùn và tÅng Ãt thát sâu Đá cao phân bá th°ång chß vài trăm mét, song không v°āt quá á cao 800 m Cây mãc từ h¿t, sau 8 – 10 năm mãi có hoa quÁ nhiều, cây tái sinh tự nhiên tát từ h¿t QuÁ cây chín có thể ăn °āc [3, 30]

1.1.2.3 Công dụng và bộ phận dùng

Theo dân gian, bá phÃn dùng cÿa Bàn tay ma ß là toàn cây, ã ph¢i hay sÃy khô GÅn ây mát sá nhóm nghiên cāu tÃp trung khai thác vào thành phÅn hóa hãc và công dăng cÿa lá cây D°āc liáu Bàn tay ma ß có vá nh¿t, tính mát, có tác dăng thanh nhiát, giÁi ác [3]

Theo iều tra, toàn cây Bàn tay ma °āc ßng bào ng°åi Dao ç vùng núi phía BÅc cÅt nhß, ph¢i khô, sÅc n°ãc ể uáng vãi liều từ 60 – 90 g ể chāa bánh thÃp khãp, nÃu n°ãc tÅm cho phă nāa sau sinh ể cháng au nhāc, phăc hßi sāc khße Ngoài ra, d°āc liáu này cũng °āc ng°åi ta dùng ể chāa bánh lao h¿ch, viêm gan virus [3, 30, 35]

æ Trung Quác, lá cây Bàn tay ma ß °āc dùng ể iều trá mát sá bánh viêm nh° viêm tai giāa, viêm bàng quang và ç mát sá vùng ng°åi ta còn dùng ể iều trá ung th° theo kinh nghiám cÿa dân gian [15]

Mát sá bài thuác sÿ dăng Bàn tay ma ß t¿i Viát Nam theo tác giÁ Nguyßn ViÁt Thân iều tra °āc trong cáng ßng t¿i Viát Nam [30] nh° sau:

+ Bài thuốc chữa phong thấp, đau mỏi xương khớp: Vß rß cây Bàn tay ma 12 g, Ngũ gia bì 12 g, Âm th¿ch quyÁt (Humata repens), sÅc uáng chung, ngày 1 thang

+ Chữa viêm gan vàng da lâu ngày: Gß cây Bàn tay ma (cÁ vß) 15g, Hài nhi cúc

15 g, Cß mÃt gÃu 10 g, Nhân trÅn 10 g, Nghá vàng 10 g, sÅc uáng mßi ngày 1 thang, dùng trong 7-10 ngày (1 liáu trình), sau 1 tuÅn dùng tiÁp mát liáu trình nāa

+ Bài thuốc chữa sản phụ sau khi sinh mệt mỏi, đau nhāc người: Cành lá cây Bàn

tay ma từ 1-2 kg, sÅc n°ãc tÅm

1.1.2.4 Thành phần hóa học

Mặc dù theo dân gian, bá phÃn dùng cÿa Bàn tay ma ß là toàn cây, tuy nhiên các nghiên cāu gÅn ây chß tÃp trung nghiên cāu vào thành phÅn hóa hãc và công dăng cÿa mát sá thành phÅn hóa hãc °āc phân lÃp từ lá cây này

Nghiên cāu về các hāp chÃt cÿa cây Bàn tay ma ß °āc công bá vào năm 2006 bçi nhóm nghiên cāu cÿa tác giÁ Q Q He, Đ¿i hãc D°āc Trung Quác Nhóm nghiên cāu này ã phân lÃp và xác ánh °āc cÃu trúc cÿa 03 hāp chÃt phenolic glycosid từ dách chiÁt n°ãc sôi cÿa lá cây Bàn tay ma ß trßng t¿i tßnh HÁi Nam, Trung Quác [14] Các hāp chÃt này là các dÁn xuÃt cÿa arbutin, lÅn l°āt là: 62-[(E)-23-hydroxymethyl, 23-

butenoyl] arbutin (1), 62-[(E)-43-hydroxycinnamoyl] arbutin (2) và dihydroxycinnamoyl] arbutin (3)

62-[(E)-33,43-Năm 2008, hāp chÃt phenolic glycosid tiÁp theo °āc ặt tên là

62-E-(23-methyl-23-butenoyl) arbutin (4) từ lá Bàn tay ma ß °āc nhóm tác giÁ M Liu phân lÃp và công

bá vãi cÃu trúc [11]

Cũng trong năm 2008, nhóm nghiên cāu cÿa tác giÁ Dan Li ã sÿ dăng mát sá há sÅc ký cát gßm cát silica gel, nhôm oxyd trung tính và Sephadex LH-20 ể phân lÃp °āc 7 hāp chÃt tiÁp theo từ lá cây Bàn tay ma ß [12] Các hāp chÃt °āc nhóm tác giÁ

phân lÃp và xác ánh cÃu trúc lÅn l°āt là: myricetin (5); myricitrin (6); syringetin-3-O-β -D-glucopyranoside (7); hydroquinone (8); D-1-O-methyl-Myo-inositol (9);

hydroxycinnamoyl] arbutin (13), 2'-[(E)-2'', 5''- dihydroxycinnamoyl] arbutin (14), [(E)-2''-hydroxymethyl-2''-butenylacyl] arbutin (15), 6'-[(E)-4''-hydroxycinnamoyl] arbutin (16), và acid grevillic (17)

6'-Trong các hāp chÃt ã phân lÃp từ các tác giÁ Trung Quác, nhiều hāp chÃt vÁn còn mãi, ch°a °āc nghiên cāu hoặc ánh h°ãng nghiên cāu về tác dăng sinh hãc, tuy nhiên

cũng có nhiều hāp chÃt rÃt phá biÁn và ã °āc chāng minh có tác dăng sinh hãc Că thể nh° sau:

- Myricetin (5) là mát flavonoid tự nhiên, có nhiều trong các lo¿i rau, cÿ, hoa quÁ và có nhiều tác dăng sinh hãc quan trãng Myricetin vãi khÁ năng nái bÃt là cháng oxy hóa và cháng l¿i các gác tự do nên giúp bÁo vá lipid khßi quá trình proxyd hóa lipid [37] Myricetin có thể làm giÁm các tiÁn triển cÿa quá trình ung th° da và ung th° phái

trên mô hình in vivo [38, 39] Myricetin cũng làm āc chÁ quá trình phiên mã ng°āc cÿa

mát sá lo¿i viru nên chÃt này cũng có khÁ năng cháng l¿i sự phát triển cÿa virus b¿ch hÅu và mát sá virus āc chÁ mißn dách ç ng°åi [40, 41] Mát sá tác dăng khác cÿa myricetin có thể kể Án nh° khÁ năng cháng kÁt tÃp tiểu cÅu, cháng ông máu [42],

cháng x¢ vāa áng m¿ch [43, 44], khÁ năng iều trá tiểu °ång trên mô hình in vivo

[45], bÁo vá tÁ bào thÅn kinh khßi sự oxy hóa do stress hoặc trong bánh Parkinson [46] và khÁ năng cháng viêm [45]

- Myricitrin (6) có khÁ năng làm giÁm bãt rái lo¿n chāc năng ty thể thÅn kinh gây ra bçi tác nhân ác thÅn kinh MPP+ và tăng khÁ năng sáng cÿa gen DJ-1, mát tác nhân cÿa gen PARK7, do ó có khÁ năng làm giÁm các thoái hóa thÅn kinh ç ng°åi cao tuái, ặc biát là giÁm các triáu chāng cÿa bánh Parkinson [46, 47]

- Mát sá chÃt °āc phân lÃp bçi nhóm nghiên cāu W Y Qi năm 2016 ã °āc sàng lãc tác dăng cháng ung th° trên dòng tÁ bào gây ung th° d¿ dày MGC-803, tác dăng này ç māc vừa phÁi ái vãi các chÃt trên, riêng chÃt 2'-[(E)-2'', 5''-

dihydroxycinnamoyl] arbutin (14) ç nßng áng 20 μg/ml có thể āc chÁ tãi 43 % sự phát

triển cÿa tÁ bào MGC-803 so vãi ái chāng

æ trong n°ãc, nhóm nghiên cāu cÿa tác giÁ Nguyßn Thá Ph°¢ng Lan ã sàng lãc và chāng minh °āc trong lá cây Bàn tay ma ß thu hái t¿i tßnh Cao Bằng có chāa các lãp hāp chÃt steroid, glycoside, triterpen, lipid và este Các phân o¿n dách chiÁt n-hexane, ethyl acetate, n-butanol cÿa cao chiÁt methanol lá Bàn tay ma ß ều có khÁ

năng kháng l¿i các dòng vi khu¿n E Coli, Salmonella, Streptococcus pyogenes, Shigella spp và Staphylococcus aureus [10]

Mát sá hāp chÃt cũng °āc tác giÁ Nguyßn Thá Ph°¢ng Lan phân lÃp °āc, gßm:

-sitosterol (18), β-sitosterol-3-O-β-D-glucopyranosid (19),

stigmast-5,22-dien-24R-3β-ol (20), 3-acetyl-6-oxo-spirostan (21), taraxerol (22)

Cũng qua khÁo sát s¢ bá các nhóm hāp chÃt trong các bá phÃn cÿa cây Bàn tay ma ß, DS Hoàng Thá Quyên cho thÃy các nhóm chÃt chính trong rß, thân và lá cây Bàn tay ma ß gßm flavonoid, °ång khÿ, polyphenol và polysarcharide và sterol [9] Ngoài ra, trong rß và thân cây còn có acid amin và caroten Các kÁt quÁ này phù hāp vãi nhāng nhóm chÃt mà các tác giÁ khác ã nghiên cāu bên trên

1.1.5 So sánh hai loài Bàn tay ma qua các nghiên cứu đã công bố

Trong thực tÁ, cÁ hai loài H terminalis và H lobata cùng °āc sÿ dăng làm thuác và dùng chung tên gãi Bàn tay ma GÅn ây, nhiều n¢i ã nhÃn ra sự khác nhau giāa hai loài này và qua ặc iểm về thực vÃt ặt tên cho hai loài vãi tên gãi dân gian khác nhau là Bàn tay mà trÅng và Bàn tay ma ß t°¢ng āng Đặc iểm thực vÃt cÿa hai loài này nhiều tài liáu vÁn ch°a tháng nhÃt mô tÁ ể phân biát chúng, tác dăng iều trá cÿa hai loài vÁn ch°a °āc minh chāng làm rõ

Hình 1.2. Mát sá bá phÃn cÿa cây Bàn tay ma trÅng (trái) và Bàn tay ma ß (phÁi) [9] Viác phân biát hai loài này cÁ về ặc iểm thực vÃt và tác dăng iều trá là cÅn thiÁt Theo thông tin ch°a °āc công bá từ nhóm nghiên cāu cÿa do PGS.TS TrÅn Văn ¡n, Tr°ång ¿i hãc D°āc Hà Nái, chÿ trì, các tác giÁ ã tiÁn hành phân biát hai loài thông qua ặc iểm thực vÃt, và ặc iểm vi phÁu cÿa chúng (Hình 1.2) Cũng trong nghiên cāu này, lÅn Åu tiên t¿i Viát Nam, hai loài cây Bàn tay ma °āc phân lo¿i và giám ánh tên khoa hãc mát cách Åy ÿ [9] Theo ó, mát sá ặc iểm quan trãng ể giúp nhÃn biÁt và phân biát hai loài này bao gßm:

* Về đặc điểm hình thái:

Nhìn táng thể về hình thái thì hai loài này có mát sá ặc iểm khác nhau có thể sÿ dăng ể nhÃn biÁt hai loài (Hình 1.2) nh° sau [9]:

Cây Bàn tay ma trÃng (H terminalis) Cây Bàn tay ma đß (H lobata)

+ Cao từ 5-10m,

+ Lông nhung tiêu giÁm

+ PhÅn vß thân và vß rß phía trong lãp bÅn màu màu trÅng h¢i vàng

+ PhÅn gß màu trÅng ngà, có nhiều vân ngang màu vàng nh¿t

+ Cuáng lá dài 5-10 cm, °ång kính 5-8 mm, h¢i phình ç gác cuáng

+ PhiÁn lá dài 40-80 cm, ráng 20-40 cm + Mặt trên lá tr°çng thành nhẵn, mặt d°ãi màu nh¿t h¢n, cÁ 2 mặt lá ều không có lông nhung

+ Gân lá lßi rõ ç mặt d°ãi, h¢i lßi ç mặt trên, không có lông

+ Cuáng lá dài 10-20 cm, °ång kính 8-11 mm, phình to ç gác cuáng

+ PhiÁn lá dài 60-120cm, ráng 40-80 cm + Mặt trên lá gÅn nh° không có lông hoặc có lông mãc tÃp trung trên gân lá, mặt d°ãi màu nh¿t h¢n, có lông nhung bao phÿ + Gân lá lßi cÁ 2 mặt, nái nhiều h¢n ç mặt d°ãi, bề mặt °āc bao phÿ bçi lông

* Đặc điểm vi học:

Đặc iểm vi phÁu rß, thân và lá cÿa hai lài này khá t°¢ng ßng nhau, ặc biát là ặc iểm vi phÁu rß thì gÅn nh° giáng nhau hoàn toàn Vãi hình Ánh vi phÁu lá và thân thì có thể phân biát hai loài này thông qua sự xuÃt hián cÿa hình Ánh lông che chç ç loài Bàn tay ma ß, còn loài Bàn tay ma trÅng thì không có [9]

T°¢ng tự nh° vÃy, hình Ánh soi bát lá và bát thân cÿa hai loài cũng t°¢ng tự nhau, chß khác nhau ç ặc iểm về lông che chç có ç loài Bàn tay ma ß, trong khi ó, hình Ánh bát rß cÿa hai loài thì hoàn toàn nh° nhau Điều này cũng phù hāp vãi hình Ánh vi phÁu thân và lá cÿa hai loài [9]

* Về hoá học

Nhóm chāc ặc tr°ng nhÃt cÿa hai loài chính là polyphenol, °āc thể hián qua sự xuÃt hián phÁn āng hóa hãc ặc tr°ng cÿa các nhóm phenyl glycoside [9] Tuy nhiên, ch°a thÃy sự trùng lặp về các chÃt ã công bá cÿa các tác giÁ khác trong hai loài này KÁt quÁ phân tích sÅc ký lãp mßng cÿa nhóm tác giÁ Hoàng Thá Quyên, TrÅn Văn ¡n cũng cho thÃy sự khác nhau về thành phÅn hóa hãc cÿa hai loài d°āc liáu này

1.1.6 Tri thức sử dụng cây thuốc Bàn tay ma

Hai loài Bàn tay ma ß và trÅng có hình thāc t°¢ng ái giáng nhau nên nÁu ch°a từng tiÁp xúc vãi cÁ hai loài hoặc ch°a có kinh nghiám sÿ dăng thì khá khó ể nhÃn biÁt và phân biát hai loài này Tri thāc sÿ dăng hai loài này trong dân gian cũng a d¿ng, viác sÿ dăng nhÅm lÁn có thể Ánh h°çng Án khÁ năng iều trá bánh cÿa d°āc liáu này bçi vì thành phÅn các chÃt hóa hãc trong hai loài là rÃt khác nhau Các kiÁn thāc sÿ dăng ể iều trá bánh °āc viÁt trong các sách d°āc liáu hián nay cũng chß từ iều tra trong nhân dân, nh°ng ch°a có sá liáu rõ ràng [2, 3], thÃm chí có tài liáu còn không tách biát hai loài này trong sÿ dăng iều trá [30]

Trong cùng nghiên cāu trên, nhóm nghiên cāu cÿa PGS.TS TrÅn Văn ¡n, ã tiÁn hành iều tra tri thāc sÿ dăng hai loài Bàn tay ma, vừa là giúp phân biát hai loài, vừa ánh giá °āc tình hình sÿ dăng hai loài ể iều trá bánh trong nhân dân Nhóm nghiên cāu ã tiÁn hành iều tra tri thāc sÿ dăng cÿa ng°åi dân t¿i xã Lăc Bình (huyán B¿ch Thông), xã L¿ng San (huyán Na Rì) và xã Yên Mỹ (huyán Chā Đßn) tßnh BÅc K¿n và thu °āc các tri thāc về phân lo¿i, bá phÃn dùng, cách chÁ biÁn, cách sÿ dăng cũng nh° công dăng và māc á sÿ dăng cây Bàn tay ma t¿i áa ph°¢ng theo ph°¢ng pháp phßng vÃn bán cÃu trúc vãi sá l°āng ng°åi cung cÃp thông tin là 46, thu °āc kÁt quÁ sau:

1.1.6.1 Tỷ lệ nhận biết, tên gọi và thông tin phân biệt các loài

Thông qua hình Ánh minh hãa và mÁu cây t°¢i, có khoÁng 63 % sá ng°åi nhÃn biát °āc mÁu cây ang iều tra là Bàn tay ma Trong ó, ç các áa ph°¢ng có cây Bàn tay ma mãc thì tß lá trÁ låi úng cao h¢n, lên tãi trên 70 %, còn ç áa ph°¢ng không có cây Bàn tay ma mãc thì tß lá này chß khoÁng 30 % mà thôi [9]

Trong sá nhāng ng°åi nhÃn biÁt °āc cây Bàn tay ma, hã ều gãi cây Bàn tay ma là <Mừ phi= ( tiÁng Tày), trong ó dách theo tiÁng Tày <mừ= có nghĩa là bàn tay, <phi= có nghĩa là ma, <mừ phi= nghĩa là bàn tay ma Mát sá ít ng°åi biÁt °āc tiÁng Kinh cÿa cây ang hßi là Bàn tay ma Tuy nhiên, trong nhāng ng°åi nhÃn biÁt °āc cây ang hßi thì chß có 21 ng°åi biÁt °āc có 2 loài Bàn tay ma, trong 21 ng°åi này l¿i chß có 16 ng°åi có khÁ năng phân biát °āc hai loài Bàn tay ma ß và trÅng [9] Tính ra chß có 16/46 ng°åi (chiÁm 35 %) có thể phân biát °āc hai loài này Tß lá này là khá nhß, ch°a kể Án khÁ năng sÿ dăng ể iều trá bánh

Trong nhāng ng°åi có khÁ năng phân biát 2 loài Bàn tay ma, hã ều dùng các ặc iểm hình thái ể nhÃn d¿ng KÁt quÁ nghiên cāu trên cũng cho thÃy, mặc dù có rÃt nhiều ặc iểm thực vÃt có thể dùng ể phân biát hai loài, nh°ng ặc iểm về màu vß

thân, vß gß và màu gß °āc sÿ dăng ể nhÃn thāc nhiều nhÃt Điều này có thể giÁi thích °āc bçi vì ây là hai bá phÃn hay dùng nhÃt cÿa hai loài Bàn tay ma ang nghiên cāu

1.1.6.2 Công dụng cÿa cây Bàn tay ma

Tỷ lá ng°åi cung cÃp tin cho rằng cây Bàn tay ma dùng ể chāa các bánh liên quan Án gan nh°: viêm gan, x¢ gan, tăng men gan, uáng nhiều r°āu bia,&là 41,30 % (t°¢ng āng vãi 19/46 ng°åi cung cÃp tin) Trong ó có 21,05 % ng°åi biÁt công dăng ch°a bánh cÿa cây bàn tay ma ánh giá loài Bàn tay ma ß có tác dăng tát h¢n loài Bàn tay ma trÅng Các triáu chāng °āc bánh °āc mô tÁ că thể là ch°ãng băng, vàng da, vàng mÅt, n°ãc tiểu vàng, sā thát mÿ, sā; nái măn trên l°ng&[9]

Ngoài ra, mát sá rÃt ít ng°åi, khoÁng 2 % cho rằng cây Bàn tay ma còn °āc dùng ể chāa thÃp tim, suy tim, au nhāc x°¢ng khãp

1.1.6.3 Bộ phận dùng, cách chế biến và sử dụng * Bộ phận dùng

Có 15 trong sá 46 ng°åi cung cÃp tin chiÁm (32,61 %) biÁt về bá phÃn dùng cÿa cây Bàn tay ma Bá phÃn dùng °āc trÁ låi nhiều nhÃt là thân và rß, trong ó rß hay °āc sÿ dăng h¢n và °āc ánh giá là có tác dăng tát h¢n thân Khi dùng thân, th°ång dùng 50-60 cm o¿n thân nằm sát mặt Ãt Đôi khi dùng cÁ lá, nh°ng không dùng ể uáng nh° thân và rß mà dùng ể un n°ãc tÅm

* Chế biến

D°āc liáu t°¢i sau khi thu hái về cÅn rÿa s¿ch, thái nhß Có thể dùng t°¢i nÁu dùng trong vài ngày, muán dùng trong thåi gian lâu h¢n cÅn ph¢i khô hoặc sao khô, tuy nhiên gß dß bá măc nên không nên ể lâu

* Cách sử dụng

- Để chāa bánh về gan, th°ång dùng thân và rß (khoÁng 2 nÅm tay d°āc liáu) un sôi vãi n°ãc ít nhÃt 15 phút, g¿n lÃy n°ãc uáng, ngày dùng 2-3 lÅn, có thể kÁt hāp vãi tÅm bằng n°ãc lá Bàn tay ma un sôi Để ¿t °āc hiáu quÁ chāa bánh tát h¢n, có thể dùng phái hāp Bàn tay ma vãi 2-3 d°āc liáu khác [9, 18, 30]

- Chāa bánh về tim nh° suy tim, thÃp tim thì cÅn dùng phái hāp vãi nhiều lo¿i d°āc liáu khác thành các thang thuác uáng [30]

- Chāa bánh au nhāc x°¢ng khãp phÁi phái hāp vãi nhiều lo¿i d°āc liáu khác ể Åp ngoài [2, 3]

- Có thể sÿ dăng n°ãc sÅc loãng từ thân và rß cây Bàn tay ma thay thÁ n°ãc uáng hằng ngày ể tăng c°ång chāc năng gan [9]

* Māc độ đã sử dụng cây thuốc

Māc á sÿ dăng cây Bàn tay ma cÿa ng°åi dân t¿i BÅc K¿n t°¢ng ái cao: 30,43 % ng°åi cung cÃp tin ã từng sÿ dăng cây Bàn tay ma làm thuác, trong sá ó 10,87 % hay dùng và 2,10 % sÿ dùng th°ång xuyên [9]

Cây Bàn tay ma ã °āc sÿ dăng từ lâu åi và tri thāc sÿ dăng cÿa nó °āc truyền miáng từ thÁ há này qua thÁ há khác, tuy nhiên trong vài năm gÅn ây, māc á sÿ dăng °āc ánh giá là tăng lên rõ rát và các thÅy lang cũng thu hái cây thuác vãi sá l°āng lãn h¢n m¿nh làm cho sá l°āng cây trong rừng giÁm i áng kể [2]

Hián nay cây Bàn tay ma °āc thu hái từ rừng là chÿ yÁu, cây ch°a °āc trßng t¿i v°ån Viác mua bán cây Bàn tay ma còn h¿n chÁ, chÿ yÁu vÁn là thu hái từ tự nhiên Trên thá tr°ång giá bán Bàn tay ma khoÁng 5.000-6.000/1 kg d°āc liáu khô [2]

1.2 Một sá ph°¢ng pháp đánh giá tác dāng bÁo vá gan

Gan là mát trong nhāng c¢ quan lãn nhÃt cÿa c¢ thể, Ám nhÃn nhāng chāc năng vô cùng quan trãng ái vãi c¢ thể nh°: biÁn ái thāc ăn thành nhāng chÃt cÅn thiÁt cho sự sáng và phát triển; sÁn xuÃt ra nhiều chÃt quan trãng sÿ dăng cho c¢ thể; giÁi ác và bài tiÁt các chÃt ác trong c¢ thể Bên c¿nh ó, gan cũng t¿o ra mÃt, mát chÃt dách cÅn thiÁt cho sự tiêu hóa [48, 49] Tuy nhiên, thực tÁ hián nay là sá ng°åi mÅc các bánh về gan mÃt ngày càng gia tăng và māc á nghiêm trãng cÿa bánh cũng tăng lên áng kể Các bánh lý gan mÃt phá biÁn nhÃt phÁi kể Án rái lo¿n chāc năng gan, tăng men gan, viêm gan, áp xe gan, x¢ gan, ung th° gan, và bánh lý °ång mÃt

Để h¿n chÁ Ánh h°çng Án sāc khße còn ng°åi, nhiều mô hình nghiên cāu thuác tiền lâm sàng ã °āc āng dăng ể sàng lãc, phát triển thuác mãi cũng nh° kiểm chāng các thuác ang sÿ dăng Mát sá mô hình thÿ nghiám bÁo vá gan in vitro và in vivo °āc sÿ dăng ể sàng lãc tác dăng bÁo vá gan cÿa hai d°āc liáu Bàn tay ma s¿ °āc trình bày trong luÃn án này

1.2.1 Đánh giá tác dụng bảo vệ tế bào gan trên mô hình in vitro

Ph°¢ng pháp ánh giá tác dăng bÁo vá tÁ bào gan trên mô hình in vitro th°ång sÿ

dăng là ph°¢ng pháp chāng minh khÁ năng bÁo vá tÁ bào gan cÿa các mÁu nghiên cāu Trong ó, dòng tÁ bào ung th° gan HepG2 hoặc Hep3B °āc sÿ dăng thay thÁ dòng tÁ bào gan th°ång, các tÁ bào này °āc nuôi cÃy trong môi tr°ång thích hāp ể phát triển [50, 51]

Tác dăng bÁo vá gan °āc ánh giá thông qua viác so sánh sự phát triển cÿa tÁ bào khi gây ác bằng CCl4 hoặc paracetamol vãi tÁ bào °āc nuôi cÃy trong cùng iều kián nh°ng có tác áng cÿa mÁu cÅn nghiên cāu KÁt quÁ này °āc xác ánh thông qua ph°¢ng pháp MTT [52] Māc á duy trì sự phát triển hoặc làm giÁm sự phá hÿy cÿa các tÁ bào ung th° gan khi cÿa mÁu thÿ d°ãi tác áng cÿa chÃt gây ác thể hián tác dăng bÁo vá tÁ bào gan cÿa mÁu nghiên cāu [53] Khi gây ác bằng CCl4 th°ång s¿ cho kÁt quÁ nghiên cāu rõ ràng h¢n là thÿ vãi paracetamol [54]

Ph°¢ng pháp này th°ång °āc áp dăng ể nghiên cāu tác dăng bÁo vá tÁ bào gan cÿa các phân o¿n mÁu nghiên cāu ã °āc làm giàu chÃt ánh h°ãng tác dăng hoặc ể ánh giá tác dăng này cÿa các chÃt ã tinh chÁ [50, 53]

Sau khi xác ánh °āc khÁ năng bÁo vá tÁ bào gan cÿa các mÁu nghiên cāu, nhāng mÁu có tiềm năng s¿ tiÁp tăc °āc xem xét mát sá c¢ chÁ liên quan nh° khÁ năng cháng oxy hóa, khÁ năng quét gác tự do, khÁ năng cháng viêm

1.2.1.1 Đánh giá khả năng chống oxy hóa cÿa mẫu nghiên cāu trên mô hình in vitro

Mát sá tác nhân có khÁ năng gây oxy hóa m¿nh nh° gác tự do hoặc mát sá nhóm chÃt t°¢ng tự (FeSO4, DPPH&) khi vào c¢ thể s¿ gÅn vào các phân tÿ sinh hãc quan trãng nh° protein, lipid, acid nucleic& gây ra nhiều nguy h¿i, iển hình nh° ung th°, x¢ vāa áng m¿ch, phá vÿ tÁ bào, [55] Qua ó, chúng trực tiÁp làm Ánh h°çng Án ho¿t áng sinh lý bình th°ång cÿa c¢ thể, thÃm chí là bÃt ho¿t mát sá c¢ quan trong c¢ thể Khi tiÁp xúc vãi chÃt gây h¿i, c¢ thể s¿ có nhāng phÁn āng ể cháng l¿i các chÃt gây h¿i này [56] Đái vãi các gác tự do và các chÃt gây ra phÁn āng oxy hóa, tÁ bào ç các c¢ quan tiÁp xúc vãi nó s¿ bá phá hÿy, kèm vãi ó s¿ t¿o ra các chÃt có khÁ năng phÁn āng ể ngăn chặn quá trình oxy hóa xÁy ra hoặc làm giÁm bãt tác áng cÿa các phÁn āng Ãy [56]

PhÁn āng oxy hóa iển hình gây ra sự tán h¿i nghiêm trãng cÿa tÁ bào là quá trình peroxyd hóa lipid màng tÁ bào Khi các phÁn āng peroxyd hóa °āc kích ho¿t, màng tÁ bào bá phá hÿy và tÁ bào bá chÁt Vì vÃy, khi mát mÁu nghiên cāu có khÁ năng āc chÁ phÁn āng phÁn āng peroxyd hóa lipid màng tÁ bào càng m¿nh thì ho¿t tính bÁo vá tÁ bào và cháng oxi hóa càng tát C¢ chÁ ánh giá ho¿t tính này dựa trên phÁn āng t¿o cặp cÿa chÃt cÿa acid thiobarbituric (TBA), là sÁn ph¿m trực tiÁp cÿa phÁn āng peroxyd hóa

lipid màng tÁ bào, vãi acid thiobarbituric (TBARs) ể t¿o chÃt hÃp thă quang phá VIS ç b°ãc sóng 532 nm [57]

Áp dăng nguyên lý này, ể kiểm tra tác dăng bÁo vá gan có liên quan Án quá trình cháng oxy hóa hay không, ng°åi ta cho tÁ bào gan hoặc dòng tÁ bào khác t°¢ng tự tiÁp xúc vãi các chÃt oxy hóa (th°ång là FeSO4, DPPH, gác tự do OH˙) [56] MÁu phân tích và chāng d°¢ng °āc °a vào ể ánh giá tác áng cháng oxy hóa Sau quá trình thÿ nghiám, xác ánh sÁn ph¿m cÿa quá trình peroxyd hóa lipid bằng cách cho phÁn āng vãi TBA ể t¿o TBARs và o á hÃp thă ç 532 nm MÁu phân tích có tác dăng cháng oxy hóa càng tát thì sÁn ph¿m cÿa quá trình peroxyd hóa lipid càng ít

Bên c¿nh xác ánh khÁ năng cháng oxy hóa qua phÁn āng TBARs, mÁu phân tích còn có thể °āc ánh giá qua khÁ năng quét gác tự do vãi DPPH ç các māc nßng á khác nhau vãi mÁu ái chāng là acid ascorbic (Vitamin C) hoặc D,L-³ tocopherol (Vitamin E), quercetin, acid gallic& và o quang ç b°ãc sóng thích hāp [58, 59]

1.2.1.2 Đánh giá khả năng chống viêm thông qua tác nhân nitric oxide và một số cytokine

Viêm là mát phÁn āng có lāi cÿa c¢ thể giúp cháng l¿i sự xâm h¿i cÿa các mÅm bánh hoặc các yÁu tá có h¿i tác áng vào c¢ thể [60] Khi phát hián ra sự xâm nhÃp cÿa yÁu tá bÃt lāi, các d°ÿng bào và các ¿i thực bào s¿ nhÃn biÁt và tiÁt ra các chÃt trung gian ể kích ho¿t các phÁn āng viêm nh° chemokine, cytokine, amin vÃn m¿ch, eicosanoid và mát sá chÃt khác ể phân giÁi protein Tác dăng chính cÿa các chÃt trung gian này là t¿o ra các phÁn āng viêm t¿i chß ể lo¿i bß các tác nhân gây h¿i, các dá vÃt °āc nhÃn d¿ng [61] Hián t°āng các phÁn āng xÁy ra ßng lo¿t này th°ång gÅn liền vãi các áp āng ặc tr°ng cÿa c¢ thể là s°ng, nóng (sát), ß, au Tuy nhiên, phÁn āng viêm này không phÁi lúc nào cũng tát vì nó không thể phân biát °āc âu là tÁ bào gây h¿i và âu là tÁ bào lành [61, 62] Chính vì vÃy trong nhiều tr°ång hāp phÁn āng viêm quá á còn tiêu diát luôn cÁ các tÁ bào lành, làm tán h¿i các c¢ quan bá viêm, thÃm chí còn Ánh °çng Án toàn thân trong tr°ång hāp phÁn āng quá á <bão cytokine= [62, 63] Ngăn chặn các phÁn āng viêm giúp t¿o c¢ hái ể phát hián, khoanh vùng và lo¿i bß các tác nhân gây h¿i bằng cách kÁt hāp vãi các thuác bÁo vá hoặc các bián pháp iều trá thích hāp, ßng thåi cũng giúp c¢ thể t¿m thåi không bá các yÁu tự nhiên nái t¿i làm tán th°¢ng [64]

Viác cháng viêm s¿ °āc thực hián theo hai ph°¢ng án, mát là ngăn chặn và lo¿i bß yÁu tá có h¿i, hai là ngăn chặn các tác nhân trung gian kích ho¿t các phÁn āng viêm C¢ chÁ cÿa các phÁn āng viêm vÁn còn ch°a rõ ràng hoàn toàn, tuy nhiên viác ánh giá kÁt quÁ cÿa phÁn āng viêm ã có mô hình că thể, thông qua xác ánh hàm l°āng các chÃt tiền viêm, là các cytokine, trong huyÁt thanh [61] Các cytokine thông dăng nhÃt hián nay liên quan Án quá trình viêm có thể xác ánh °āc là interleukin-1 (IL-1), interleukin 6 (IL-6), interleukin 10 (IL-10) và yÁu tá ho¿t tÿ khái u (tumor necrosis

factor 3 TNF-³) Trong khi, IL-1, IL-6 và TNF-α là bá ba chÃt trung gian kích ho¿t phÁn

āng viêm (hay còn gãi là các interleukin tiền viêm) [65], IL-10 cũng °āc t¿o ra trong quá trình viêm nh°ng bçi tÁ bào lympho T, và có tác dăng cháng viêm, iều tiÁt quá trình viêm trç về cân bằng và bÁo vá các tÁ bào lành trong c¢ thể [66]

Nh° vÃy, trong phép thÿ phÁn āng viêm, mÁu có tác dăng tát là mÁu làm cho hàm

l°āng các cytokine IL-1, IL6 và TNF-³ giÁm i, còn hàm l°āng IL-10 tăng lên Hián

nay viác ánh l°āng các cytokine này trên mô hình in vitro ể ánh giá tác dăng cháng viêm cÿa các mÁu nghiên cāu ã có thể thực hián °āc ráng rãi ç nhiều phòng thí nghiám Trong ó, dòng tÁ bào thÿ tác dăng viêm là dòng tÁ bào ¿i thực bào cÿa chuát

RAW 264.7 °āc kích ho¿t t¿o phÁn āng viêm bằng cách cho tiÁp xúc vãi ác tá cÿa vi khu¿n (th°ång sÿ dăng lipopolysaccharid – LPS) có mặt mÁu thÿ ç các nßng á khác nhau [31, 67] Các bá kit thÿ nghiám th°¢ng m¿i cũng ã °āc thiÁt kÁ sẵn giúp phép thÿ ¢n giÁn và có á chính xác cao [68, 69]

Nitric oxide (NO) °āc táng hāp bçi nhiều lo¿i tÁ bào khác nhau trong c¢ thể, cùng vãi các cytokine IL-1, IL6 và TNF-α, NO °āc xem nh° là mát trong nhāng tín hiáu quan trãng giúp kích ho¿t các phÁn āng mißn dách và phÁn āng viêm trong c¢ thể ể cháng l¿i các tác nhân gây h¿i bên ngoài tÃn công [70-73] Āc chÁ sÁn sinh NO cũng chính là āc chÁ sự kích thích quá trình viêm

Quá trình ánh giá khÁ năng āc chÁ sÁn sinh NO cÿa mÁu nghiên cāu cũng °āc thực hành trên dòng tÁ bào ¿i thực bào cÿa chuát RAW 264.7 °āc kích ho¿t sÁn sinh NO bằng cách cho tiÁp xúc vãi ác tá cÿa vi khu¿n (th°ång sÿ dăng lipopolysaccharid – LPS) có mặt mÁu thÿ ç các nßng á khác nhau [74] MÁu sau nghiên cāu °¢c phÁn āng t¿o màu vãi thuác thÿ Griess ể o á hÃp thă quang và tính toán l°āng NO sinh ra trong quá trình phÁn āng [75]

Gan Ám nhiám nhiều vai trò quan trãng, và tiÁp xúc và phân giÁi nhiều lo¿i ái t°āng khác nhau, nên khÁ năng gặp phÁi chÃt ác h¿i hoặc các vi khu¿n, virus gây bánh là khó tránh khßi Khi gan gặp vÃn ề, NO cùng vãi các tín hiáu mißn dách khác °āc kích thích ể sinh ra nhiều h¢n nhằm kích ho¿t các phÁn āng mißn dách và viêm cháng l¿i các tác nhân gây h¿i PhÁn āng mißn dách và phÁn āng viêm th°ång là phÁn āng có lāi cho c¢ thể, nh°ng khi nó °āc kích ho¿t quá māc s¿ gây ra rÃt nhiều tác h¿i, cÅn phÁi kiểm soát Nh° vÃy, ánh giá tác dăng āc chÁ sÁn sinh NO và ánh giá các thông sá cÿa IL-1, IL6, TNF-α và IL-10 là mát trong nhāng nái dung liên quan cÅn °āc nghiên cāu khi ánh giá tác dăng bÁo vá gan [76, 77]

1.2.2 Đánh giá tác dụng bảo vệ gan trên mô hình in vivo

Các phép thÿ trên mô hình in vivo °āc tiÁn hành tr°ãc khi nghiên cāu sâu h¢n về hóa hãc ể khẳng ánh tác dăng cÿa mÁu thÿ, ể xác ánh liều dùng cÿa mÁu thÿ hoặc

ể khẳng ánh các kÁt quÁ sau khi ã nghiên cāu in vitro tr°ãc khi sÿ dăng cho ng°åi

Tác dăng bÁo vá gan in vivo th°ång °āc tiÁn hành trên mô hình chuát cáng hoặc chuát nhÅt gây ác gan bằng CCl4 hoặc paracetamol ç liều cao [78-82]

Đánh giá tác dăng bÁo vá gna tr°ãc hÁt ng°åi ta quan tâm Án sự thay ái hình thái gan Theo ó, các chß tiêu ban Åu s¿ °āc xem xét là tß lá khái l°āng gan, hình thái gan (quan sát hình Ánh giÁi phÁu ¿i thể gan, và mô bánh hãc vi phÁu) [78, 80]

Khi tiÁp xúc vãi các tác nhân gây ác gan, c¢ chÁ giÁi ác gan s¿ °āc kích ho¿t ể cháng l¿i tác áng cÿa chÃt ác Khi ó, tÁ bào gan s¿ bá phá hÿy mát phÅn, giÁi phóng ra các enzyme alanine transaminase (ALT) và aspartate transaminase (AST), ây là hai enzyme có nhiều nhÃt ç tÁ bào gan, khi tÁ bào gan bá vÿ s¿ giÁi phóng vào trong máu khiÁn cho nßng á hai enzyme này tăng lên nhiều so vãi bình th°ång [82] Kèm theo ó là quá trình peroxyd hóa lipid màng tÁ bào gan, và quá trình kích thích sÁn sinh ra glutathion (GSH) ể cháng l¿i các tác nhân oxy hóa xÁy ra t¿i gan [80, 81]

Nh° vÃy, khi gan bá gây ác, hàm l°āng enzyme ALT, AST trong máu tăng lên, các sÁn ph¿m cÿa quá trình peroxyd hóa lipid (c¢ chÃt cÿa acid thiobarbituric) và hàm l°āng GSH t¿i gan tăng lên Các chß sá này °āc xác ánh bằng các bá kit thuác thÿ và ph°¢ng pháp ánh l°āng t°¢ng āng

Mát sá chß tiêu khác cũng phÁn ánh māc á tán th°¢ng gan nh° chß sá ALP (alkaline phosphate), chß sá bilirubin và cholesterol toàn phÅn cũng phÁn ánh māc á

tán th°¢ng gan [83, 84] Tuy nhiên, các chß sá này thay ái còn phă thuác vào tr¿ng thái ho¿t áng cÿa các c¢ quan khác ALP °āc sinh ra chÿ yÁu bçi các tÁ bào gan, x°¢ng và thÃn, do ó chß sá ALP tăng không chß liên quan Án rái lo¿n chāc năng gan mà còn liên quan Án rái lo¿n chāc năng cÿa x°¢ng, cÿa thÃn [83, 85] Bilirubin có ngußn gác từ viác quá trình phá hÿy các tÁ bào hßng cÅu (do già i và chÁt hoặc do bánh lý tan máu) và °āc chuyển hóa ç gan rßi ào thÁi qua °ång tiêu hóa, tiÁt niáu [86] Tăng chß sá bilirubin có thể do chāc năng gan kém hoặc tan hßng cÅu trong máu [85, 87, 88] Còn vãi cholesterol, mặc dù °āc táng hāp và ester chính t¿i gan, nh°ng viác tăng cholesterol còn phă thuác vào chÁ á ăn, tuái tác, cân nặng, māc á vÃn áng& chā không phÁi tăng cholesterol toàn phÅn là nghĩ ngay Án tán th°¢ng gan [89] Do ó, các chß sá ALP, bilirubin và cholesterol toàn phÅn cũng là các chß sá ể ánh giá chāc năng gan nh°ng không phÁi lúc nào cũng °āc °a vào ể ánh giá tác dăng bÁo vá gan trong các mô hình các nghiên cāu ánh giá tác dăng bÁo vá gan in vivo

Để ánh giá tác dăng bÁo vá gan cÿa mÁu nghiên cāu, chuát °āc chia thành các lô khác nhau, trong ó có lô chāng d°¢ng, chāng bánh, chāng sinh lý và các lô sÿ dăng mÁu nghiên cāu ç các liều khác nhau KhÁ năng bÁo vá gan cÿa mÁu nghiên cāu °āc ánh giá thông qua khÁ năng phăc hßi các chß sá và tr¿ng thái gan so vãi chāng sinh lý và chāng bánh lý [78-82]

Nhāng mÁu nghiên cāu có tác dăng bÁo vá gan còn °āc ánh giá thêm ác tính cÃp ç mô hình in vitro và in vivo ể xác ánh á an toàn cho ng°åi sÿ dăng

Trên mô hình in vitro, xác ánh ác tính trên tÁ bào °āc thực hián theo ph°¢ng pháp cÿa Monks [90] Đây là ph°¢ng pháp thÿ á ác tÁ bào °āc thực hián theo ph°¢ng pháp thÿ á ác tÁ bào ung th° in vitro °āc Vián Ung th° Quác gia Hoa Kỳ (National Cancer Institute – NCI) xác nhÃn là phép thÿ á ác tÁ bào chu¿n nhằm sàng lãc, phát hián các chÃt có khÁ năng kìm hãm sự phát triển hoặc diát TBUT ç iều kián in vitro

Trên mô hình in vivo, ác tính cÃp cÿa mÁu nghiên cāu °āc ánh giá theo h°ãng

dÁn cÿa Bá Y tÁ ã ban hành [91]

1.2.3 Phương hướng áp dụng các mô hình bảo vệ gan trong luận án

Do kiÁn thāc sÿ dăng các d°āc liáu Bàn tay ma trong nhân dân theo iều tra còn ch°a có tính nhÃt quán cao [9], viác ánh giá tác dăng bÁo vá gan cÿa hai loài d°āc liáu

này là cÅn thiÁt Để khẳng ánh tác dăng bÁo vá gan cÿa các d°āc liáu, luÃn án s¿ tiÁn hành ánh giá tác dăng bÁo vá gan ßng thåi trên hai ph°¢ng dián:

+ Đánh giá tác dăng bÁo vá gan trên mô hình in vivo cÿa hai d°āc liáu qua cao

chiÁt n°ãc cÿa hai d°āc liáu (ph°¢ng pháp sÅc thuác truyền tháng)

+ Đánh giá tác dăng bÁo vá gan cÿa các thành phÅn hóa hãc ã phân lÃp °āc từ

hai d°āc liáu trên mô hình in vitro

KÁt quÁ bÁo vá gan trên mô hình in vivo cÿa cao chiÁt n°ãc và các thành phÅn hóa hãc có ho¿t tính bÁo vá gan s¿ giúp khẳng ánh tác dăng bÁo vá gan cÿa d°āc liáu nghiên cāu Sau khi tác dăng bÁo vá gan °āc ánh giá, d°āc liáu s¿ °āc ánh giá á an toàn qua phép thÿ ác tính cÃp, phép thÿ ác tÁ bào th°ång Các ho¿t chÃt có á an toàn cao s¿ °āc ánh giá tiÁp mát sá c¢ chÁ bÁo vá gan nh° khÁ năng cháng oxy hóa, āc chÁ sÁn sinh yÁu tá NO và āc chÁ/cÁm āng cytokine tiền viêm

1.3 ChÃt đánh dÃu căa d°ÿc liáu và ph°¢ng pháp xác đßnh

Thực vÃt ã °āc chāng minh là ngußn tài nguyên d°āc liáu lãn nhÃt ã và ang °āc con ng°åi sÿ dăng ể iều trá bánh Viác āng dăng khoa hãc công nghá ể phát triển và hián ¿i hóa lĩnh vực y, d°āc cá truyền ang là xu thÁ hián nay trên thÁ giãi Bên c¿nh viác sÿ dăng d°āc liáu ể phát triển các ngußn thuác mãi, viác ánh giá tác dăng iều trá, kiểm soát chÃt l°āng cÿa các d°āc liáu hián hành là rÃt quan trãng [92-97] Kiểm soát chÃt l°āng d°āc liáu gÅn liền vãi các ặc tính cÿa d°āc liáu và các thành phÅn hóa hãc ặc tr°ng hay còn gãi là <chÃt ánh dÃu hóa hãc= (chemical markers) cÿa d°āc liáu (sau ây s¿ °āc gãi tÅt là <chÃt ánh dÃu=)

1.3.1 Chất đánh dấu của dược liệu và ứng dụng

Nhiều d°āc liáu vÁn °āc nhân dân ta sÿ dăng ể iều trá bánh, nh°ng không phÁi d°āc liáu nào cũng °āc kiểm soát chÃt l°āng mát cách khoa hãc [2, 3, 35, 98] Để có °āc d°āc liáu °āc tát, cÅn phÁi °āc tiÁn hành kiểm soát chÃt l°āng từ khâu trßng trãt cho Án khâu thu hái, chÁ biÁn và sÿ dăng [92, 93, 95, 96, 99] Muán vÃy, bên c¿nh có các ph°¢ng pháp phân tích hián ¿i, cÅn phÁi nghiên cāu xác ánh °āc các thành phÅn chính quyÁt ánh tác dăng cÿa d°āc liáu mãi có thể ánh giá °āc tÃt cÁ các khâu trong quá trình trên Các thành phÅn chính nh° vÃy cÿa d°āc liáu °āc gãi là các chÃt ánh dÃu cÿa d°āc liáu

Theo Tá chāc Y tÁ thÁ giãi (World Health Oganization – WHO), chÃt ánh dÃu cÿa d°āc liáu là nhāng chÃt ái chiÁu mà °āc xác ánh thành phÅn về mặt hóa hãc cÿa d°āc liáu Ãy ChÃt này có thể óng góp hoặc không óng góp về mặt iều trá cÿa d°āc liáu [94] Tuy nhiên ái vãi nhiều chÃt, cho dù chÃt Ãy góp phÅn vào tác dăng iều trá, nh°ng bằng chāng về hiáu quÁ iều trá lâm sàng cÿa các chÃt Ãy không phÁi lúc nào cũng sẵn có Vì vÃy, WHO và C¢ quan d°āc ph¿m châu Âu (European Medicines Agency – EMA) h°ãng dÁn lựa chãn chÃt ánh dÃu theo hai tiêu chí:

+ ChÃt ánh dÃu phÁi có tác dăng iều trá hoặc có tác dăng sinh hãc liên quan Án tác dăng iều trá cÿa d°āc liáu [94, 100]

+ NÁu các chÃt tìm °āc cÿa d°āc liáu mà không có tác dăng, d°āc liáu và các sÁn ph¿m liên quan cÿa d°āc liáu có thể °āc kiểm soát chÃt l°āng bằng các chÃt ánh dÃu vãi các thành phÅn ặc tr°ng khác [94]

Sá l°āng d°āc liáu hián nay rÃt lãn, nh°ng nhāng d°āc liáu ã °āc tìm ra chÃt ánh dÃu và có chÃt ánh dÃu °āc sÿ dăng ể kiểm soát chÃt l°āng là ch°a nhiều [1-3, 35] Mát sá chÃt ánh dÃu iển hình ang °āc sÿ dăng trong các d°āc iển [98, 101-103], nh°:

+ Artemisinin dùng ánh tính và ánh l°āng Thanh hao hoa vàng; acid ganoderic A dùng ánh tính và ánh l°āng NÃm linh chi; silymarin dùng ánh tính và ánh l°āng cao khÁ sāa; gentiopicrin dùng ánh tính và ánh l°āng d°āc liáu TÅn giao; lobetyolin dùng ánh tính ĐÁng sâm; curcumin dùng ánh tính và ánh l°āng Nghá; notoginsenosid R1, ginsenosid Rg1, ginsenosid Rb1 dùng ánh tính và ánh l°āng Tam thÃt; ginsenosid Re, ginsenosid Rb1 và ginsenosid Rg1 dùng kiểm tra chÃt l°āng d°āc liáu nhân sâm;& + Trong tr°ång hāp ch°a xác ánh °āc chÃt chính có tác dăng, nhóm chÃt có thể °āc sÿ dăng làm chÃt ánh dÃu cÿa d°āc liáu nh° tr°ång hāp cÿa d°āc liáu GiÁo cá lam (ánh l°āng bằng saponin toàn phÅn), NgÁi cāu và QuÁ (dùng tinh dÅu là nhóm chÃt ánh dÃu)&

ChÃt ánh dÃu th°ång là thành phÅn hóa hãc chính và ¿i dián cho tác dăng sinh hãc chính cÿa d°āc liáu nên nÁu có ph°¢ng pháp ánh tính, ánh l°āng thích hāp, chÃt ánh dÃu cÿa d°āc liáu mang Án nhiều giá trá thực tißn trong āng dăng phát triển và kiểm soát chÃt l°āng d°āc liáu [104], gßm:

- Kiểm tra chất lượng dược liệu: D°āc liáu °āc kiểm tra theo các giám sát cÿa

c¢ quan quÁn lý hoặc °āc c¢ sç sÁn xuÃt kiểm tra tr°ãc khi °a vào dây chuyền sÁn xuÃt theo quy ánh cÿa GMP theo các tiêu chu¿n c¢ sç, tiêu chu¿n d°āc iển

- Phân biệt nguồn gốc các loại dược liệu và xác định vùng trồng dược liệu: Các

d°āc liáu °āc trßng ç các vùng khác nhau, iều kián trßng khác nhau có thể s¿ cho thành phÅn các chÃt trong d°āc liáu khác nhau Qua hàm l°āng các chÃt ánh dÃu và tỷ lá hàm l°āng các chÃt ánh dÃu có thể phân biát °āc ngußn gác cÿa các d°āc liáu Ngoài ra, qua hàm l°āng cÿa các chÃt ánh dÃu có thể lựa chãn °āc vùng trßng tát nhÃt hoặc iều kián nuôi trßng tát nhÃt cho d°āc liáu

- Xác định thời gian thu hái: Hàm l°āng các chÃt trong d°āc liáu có thể thay ái

theo mùa, theo thåi gian trßng trãt, ặc biát là các d°āc liáu là lá hoặc quÁ thì Ánh h°çng rÃt nhiều bçi mùa thu hái CÅn xác ánh hàm l°āng các chÃt ánh dÃu cÿa d°āc liáu ể lựa chãn thåi iểm thu hái hāp lý, cho hàm l°āng chÃt lãn nhÃt

- Xác định bộ phận dùng cÿa dược liệu: Bá phÃn dùng cÿa d°āc liáu khác nhau

cũng có thể thành phÅn hóa hãc cÿa chúng cũng khác nhau nhiều do măc ích táng hāp các chÃt cÿa các bá phÃn d°āc liáu là khác nhau Các d°āc liáu tr°ãc ây °āc dùng theo kinh nghiám cÿa nhân dân, sau này khi các ph°¢ng tián phân tích hián ¿i phát triển ã dÅn xác ánh °āc các chÃt ánh dÃu riêng cho từng bá phÃn dùng Khi Ãy, bá phÃn dùng nào cÿa cây phù hāp nhÃt vãi tác dăng iều trá s¿ °āc lựa chãn ể sÿ dăng thông qua các chÃt ánh dÃu

- Xác định điều kiện bảo quản và thời hạn sử dụng cÿa dược liệu: Nhiều chÃt trong

d°āc liáu có á án ánh không cao, nhÃt là các chÃt dß bá oxy hóa hoặc nhāng chÃt dß bá phân hÿy bçi nhiát á Xác ánh °āc ích danh các chÃt ánh dÃu cÿa d°āc liáu và xây dựng °āc ph°¢ng pháp ánh l°āng các chÃt s¿ giúp theo dõi °āc á án ánh cÿa d°āc liáu, qua ó xác ánh °āc thåi gian bÁo quÁn cÿa d°āc liáu Dựa vào các iều kián bÁo quÁn khÅc nghiát ể phân hÿy các chÃt trong d°āc liáu, ánh giá hàm l°āng chÃt ánh dÃu ç các iều kián Ãy s¿ giúp xác ánh °āc iều kián án ánh nhÃt cÿa d°āc liáu và xây dựng °āc tiêu chí bÁo quÁn thích hāp cho d°āc liáu

- Xây dựng qui trình chiết xuất trong sản xuất các sản phẩm từ dược liệu: ChÃt

ánh dÃu th°ång là chÃt ¿i dián cho ho¿t tính sinh hãc cÿa các d°āc liáu Sau khi xác ánh °āc các chÃt ánh dÃu và ph°¢ng pháp ánh l°āng chÃt ánh dÃu, chÃt ánh dÃu

°āc sÿ dăng nhằm tái °u hóa qui trình chiÁt xuÃt hoặc tinh chÁ ể sÁn xuÃt cao, sÁn ph¿m từ d°āc liáu Các iều kián tái °u sao cho hàm l°āng chÃt ánh dÃu có °āc trong sÁn ph¿m là lãn nhÃt, hiáu quÁ kinh tÁ cao nhÃt

- Āng dụng trong nghiên cāu thuốc mới: RÃt nhiều ho¿t chÃt tân d°āc °āc nghiên

cāu phát triển từ các thành phÅn hóa hãc cÿa d°āc liáu Từ các chÃt ánh dÃu cÿa d°āc liáu, ng°åi ta có thể ánh giá tác dăng tiền lâm sàng, lâm sàng qua các pha rßi sÿ dăng làm chÃt Ãy ể āng dăng trong sÁn xuÃt thuác ç qui mô công nghiáp hoặc từ khung cÿa chÃt ánh dÃu, ng°åi ta có thể thay ái cÃu trúc ể tái °u hóa tác dăng cÿa các chÃt này, nhằm nâng cao hiáu quÁ iều trá

1.3.2 Phương pháp xác định chất đánh dấu của dược liệu

Từ các ặc tr°ng và vai trò cÿa ánh dÃu, các tiêu chí cÿa chÃt °āc lựa chãn là chÃt ánh dÃu cÿa mát d°āc liáu s¿ gßm [94, 100]:

+ Các chÃt ánh dÃu nên là chÃt mà có khÁ năng ánh giá °āc bằng các ph°¢ng pháp thông th°ång nh° TLC, HPTLC, HPLC, hoặc GC

+ Các chÃt ánh dÃu khác nhau có thể °āc lựa chãn cho cùng mát d°āc liáu khi nó °āc chu¿n bá bằng các cách khác nhau hoặc theo tác dăng iều trá khác nhau cÿa d°āc liáu Ãy

+ ChÃt ánh dÃu cho mát d°āc liáu có thể là mát chÃt hoặc mát nhóm chÃt ặc tr°ng cÿa d°āc liáu

1.3.3 Phương pháp xác định chất đánh dấu có tác dụng bảo vệ gan trong dược liệu Bàn tay ma

Theo h°ãng dÁn cÿa WHO và EMA, ph°¢ng pháp lựa chãn chÃt ánh dÃu cho d°āc liáu Bàn tay ma s¿ °āc dự kiÁn lựa chãn nh° sau [94, 95]: