ppxnsh sáng thứ 4 nhóm 1

Các chỉ số xét nghiệm sinh hóa máu cơ bản:Ure máu, Creatinin huyết thanh, AST SGOT, ALT SGPT, GGT, ALP, Bilirubin, Albumin, đường huyết Glucose, mỡ máu, xét nghiệm ion đồ, acid Uric.. Vậ

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH

KHOA KHOA HỌC SINH HỌC

BÁO CÁO THỰC HÀNH

THỰC HÀNH PHƯƠNG PHÁP XÉT NGHIỆM SINH HÓA

Ngành học : Công nghệ sinh học Môn học : TH PP Xét Nghiệm Sinh Hóa

TP Thủ Đức, 7/2024

THỰC HÀNH PHƯƠNG PHÁP XÉT NGHIỆM SINH HÓA

i

MỤC LỤC

MỤC LỤC i

DANH SÁCH CÁC HÌNH ii

DANH SÁCH CÁC BẢNG iii

Bài 1 Chuẩn đoán protein và ứng dụng 4

1.1 Tổng quan 4

1.1.1 Mục đích 4

1.1.2 Ý nghĩa 4

1.1.3 Ứng dụng 4

1.2 Vật liệu và phương pháp thực hiện 5

1.2.1 Vật liệu 5

1.2.2 Phương pháp thực hiện 5

Bài 2: CHUẨN ĐOÁN GLUCOSE VÀ ỨNG DỤNG 8

2.1 Tổng quan 8

2.2 Vật liệu và phương pháp nghiên cứu 8

2.2.1 Thời gian và địa điểm nghiên cứu 8

2.2.2 Vật liệu nghiên cứu 9

2.2.3 Phương pháp nghiên cứu 9

2.3 Kết quả 11

2.3.1 Thí nghiệm 1 11

2.3.2 Thí nghiệm 2 11

BÀI 3: CHUYỂN HÓA LIPID 13

3.1 Tổng quan tài liệu 13

3.1.1 Lipid 13

3.1.2 Mục đích của thí nghiệm 13

3.2 Vật liệu, thiết bị và phương pháp thực hiện 13

3.2.1Vật liệu và thiết bị 13

3.2.2 Phương pháp thực hiện 13

3.3 Kết quả và thảo luận 15

3.3.1 Kết quả 15

3.3.2 Thảo luận 18

ii

DANH SÁCH CÁC HÌNH

Hình 1.1 Kết quả sau khi lắc đều và quan sát 5

Hình 1.2 Kết quả sau khi đun cách thủy 1 phút 6

Hình 1.3 Kết quả sau khi chạy trên thiết bị 7

Hình 2.1 Ống nghiệm chứa thuốc thử Fehling 11

Hình 2.2 Kết quả định lượng glucose trên máy sinh hóa bán tự động 11

Hình 3.1 Sự hòa tan của lipid với các chất có trong ống nghiệm 15

Hình 3.2 Sự hình thành nhũ tương của lipid 16

Hình 3.2 Dung dịch sau khi chuẩn độ bằng KOH 0,1 N 17

iii

DANH SÁCH CÁC BẢNG Bảng 1.1 Bảng số liệu định tính lipid với thuốc thử Bảng 2.1 Bảng số liệu định tính glucose với thuốc thử Bảng 3.1 Quy trình xét nghiệm sinh hóa bán tự động

4

Bài 1: Chuẩn đoán protein và ứng dụng 1.1 Tổng quan

Protein ảnh hưởng trực tiếp đến các hoạt động sinh lý bình thường

Gồm có 3 thành phần chính: albumin, globulin và fibrinogen

Nồng độ protein trong máu thay đổi hoặc xuất hiện protein trong nước tiểu → 003E dấu hiệu bất thường về sức khỏe

1.1.1 Mục đích

Xét nghiệm y học phổ biến

Chẩn đoán và theo dõi bệnh lý

Đánh giá chức năng của các cơ quan trong cơ thể

Các chỉ số xét nghiệm sinh hóa máu cơ bản:Ure máu, Creatinin huyết thanh, AST (SGOT), ALT (SGPT), GGT, ALP, Bilirubin, Albumin, đường huyết (Glucose), mỡ máu, xét nghiệm ion đồ, acid Uric

1.1.2 Ý nghĩa

Protein trong máu: 60-80 g/L, trong đó albumin từ 38 - 54 g/L và globulin từ 26-42 g/L Tăng hoặc giảm protein trong máu do: viêm tụy cấp, viêm tủy xương, loét dạ dày tá tràng, đái tháo đường, hội chứng thận hư, viêm cầu thận mạn

Protein nước tiểu: bình thường trong nước tiểu sẽ không có protein hoặc có một lượng rất nhỏ dưới dưới 150 mg/24 giờ

Nếu protein xuất hiện trong nước tiểu: Nhiễm trùng đường tiết niệu, các bệnh lý suy giảm chức năng thận, mang thai

1.1.3 Ứng dụng

Sự hấp thụ và giữ nước/ tạo nhũ/ cố định mùi -> sản xuất thực phẩm

Khả năng hóa tan-> Sản xuất thực phẩm lông, đồ uống

Kết tủa thuận nghịch và không thuận nghịch: thu nhận chế phẩm protein

5

Tinh chất điện ly/ kết muối tách riêng các loại protein khác nhau

Biến tinh protein: bảo quản chế phẩm

Biểu hiện quang học: tinh sạch và xác định protein

1.2 Vật liệu và phương pháp thực hiện

1.2.1 Vật liệu

Ống nghiệm, bếp đun, thiết bị sinh hóa bán tự động, pipet, cân, ống nghiệm

Lòng trắng trứng, NaOH 40%, CuSO4 1%, mẫu nước tiểu, HNO3 đậm đặc, NaCl bão hòa

1.2.2 Phương pháp thực hiện

1.2.2.1 Biến tính protein

* Phản ứng nhận diện các liên kết peptide

Mục đích nhận diện nhanh sự có mặt của protein trong máu hoặc nước tiểu

6

Hình 1.1 Kết quả sau khi lắc đều và quan sát

* Nhiệt và acid yếu

Lấy 5 ống nghiệm cho vào mỗi ống 1mL lòng trắng trứng cho thêm các dung dịch như bảng:

Bảng 1.1 Bảng số liệu lipid với thuốc thử

Lòng trắng

Đem các ống nghiệm trên đun cách thủy 1 phút :

Hình 1.2 Kết quả sau khi đun cách thủy 1 phút

* Định lượng albumin trên thiết bị sinh hóa bán tự động

7

Mẫu được chuẩn bị vào 3 ống với ống 1 chỉ chứa mẫu 2 ống còn lại thêm vào 18µl thuốc thử Đem 3 ống đi ử trong vòa 20 phút Sử dụng thiết bị sinh hóa bán tự động để kiểm tra chỉ số albumin của mẫu

Hình 1.3 Kết qua sau khi chạy trên thiết bị

1.3 Kết quả và kết luận

Sau khi đun cách thủy các ống nghiệm thấy được sự phản ứng của lồng trắng trứng với các chất dùng dể kiểm chứng thấy có sự bắt màu với thuốc thử, các ống nghiệm khác có các phản ứng khác nhau có màu đậm nhạt dựa vào các chất thử khác nhau

Kết quả sau khi kiểm tra bằng thiết bị sinh hóa bán tự động, chỉ số albumin trong mẫu

ăn, nồng độ đường trong máu tăng lên

Các tế bào muốn tiếp nhận glucose đòi hỏi tuyến tụy phải sản xuất đủ insulin để

“mở khóa vạn năng” chỉ đường cho glucose đến gặp tế bào Khi nhiều tế bào nhận được glucose, lượng đường trong máu sẽ trở lại bình thường Lượng glucose dư thừa sẽ được

dự trữ ở gan dưới dạng glycogen Glycogen đóng vai trò giúp cơ thể hoạt động khi đói

Cụ thể, nếu bạn không ăn uống trong thời gian ngắn, nồng độ glucose trong máu sẽ giảm xuống Tuyến tụy tiết ra hormone glucagon, kích hoạt sự phân hủy glycogen thành glucose, giúp nồng độ đường trong máu trở lại mức bình thường

Glucose đóng vai trò rất quan trọng đối với cơ thể Hầu hết các tế bào (thần kinh, máu…) đều dựa vào glucose để hoạt động Não là cơ quan cần nhiều glucose nhất Các

tế bào thần kinh liên tục sử dụng glucose cho các hoạt động suy nghĩ, học tập, ghi nhớ, làm việc… Nếu không nhận đủ glucose, các tế bào thần kinh không thể kết nối với các

tế bào khác trong cơ thể để thực hiện hoạt động của mình

Trị số glucose bình thường trong máu: 3,9 - 5,5 mmol/L và trong nước tiểu thường không có glucose

2.2 Vật liệu và phương pháp nghiên cứu

2.2.1 Thời gian và địa điểm nghiên cứu

Thời gian:13h30, ngày 24 tháng 04 năm 2024

Địa điểm: Tòa BIO, tòa nhà A1,trường Đại học Nông Lâm TP HCM

● Pha thuốc thử Benedict:

Dung dịch A: Na2CO3 + Natri citrate dyhidrate + nước cất Dung dịch B: CuSO4 + nước cất

● Pha thuốc thử Fehling

Dung dịch A: CuSO4.5H2O + nước cất

Dung dịch B: Kali natri tartrate + NaOH + nước cất

-Tiến hành thí nghiệm

10

●Phản ứng với thuốc thử Benedict

Chuẩn bị 5 ống nghiệm kí hiệu A, B, C, D, E cho vào mỗi ống nghiệm 0.2mL mẫu vào 2mL thuốc thử Lắc đều, đun cách thủy và quan sát hiện tượng trong 5 phút

● Phản ứng với thuốc thử Fehling

Bảng 2.1 Bảng số liệu định tính glucose với thuốc thử

Đơn vị

(mL)

Ống nghiệm A

Ống nghiệm B

Ống nghiệm C

Ống nghiệm D

Ống nghiệm E

2.2.3.2 Thí nghiệm 2:Định lượng glucose bằng thiết bị sinh hóa bán tự động

Chuẩn bị 3 ống nghiệm và mix mẫu

Ống 1: Cho 1 mL thuốc thử Glucose và 10 µL mẫu chất chuẩn Glucose

Ống 2: Cho 1 mL thuốc thử Glucose và 10 µL mẫu (a)

Ống 3: Cho 1 mL thuốc thử Glucose và 10 µL mẫu (b)

Đặt 3 ống nghiệm vào thiết bị sinh hóa bán tự động và ủ trong 10 phút Sau đó, tiến hành đo mẫu ở chế độ End Point Cuối cùng, ghi nhận kết quả và so sánh, đánh giá hàm lượng Glucose trong mẫu

11

2.3 Kết quả

2.3.1 Thí nghiệm 1

Hình 2.1 Ống nghiệm chứa thuốc thử Fehling

Sau khi đun cách thủy các ống nghiệm chứa thuốc thử Fehling thì có 3 ống (C), (D) và (E) xuất hiện kết tủa và đổi màu còn (A) và (B) không xuất hiện kết tủa cũng không đổi màu Từ đó cho thấy ống nghiệm (C), (D) và (E) lượng kết tủa tăng dần còn

ở ống nghiệm (A) và (B) không có sự hình thành kết tủa ở đáy ống nghiệm nên có thể kết luận rằng 2 ống nghiệm này chứa đường không khử

2.3.2 Thí nghiệm 2

Hình 2.2 Kết quả định lượng glucose trên thiết bị sinh hóa bán tự động

12 Kết quả đo cho thấy hàm lượng đường trong 2 mẫu đã chọn là 1.319g/dl và 1.411g/dl

3.1.2 Mục đích của thí nghiệm

Quan sát sự nhũ hóa của lipid và sự tan của lipid trong các dung môi phân cực và không phân cực Xác định hàm lượng acid béo tự do có trong mẫu dầu thực vật

3.2 Vật liệu, thiết bị và phương pháp thực hiện

3.2.1Vật liệu và thiết bị

Hóa chất: Dầu ăn, ethanol 99%, NaOH 2%, Na2CO3 10% KOH 0,1N,

phenolphthalein 1%, nước cất, dietyl ete, chlorofom, thuốc thử

Dụng cụ và thiết bị: Ống nghiệm, micropipet, buret, ống đong, bình tam giác, bếp đun, máy xét nghiệm sinh hóa bán tự động

Quan sát hiện tượng phản ứng giữa dầu ăn với các chất

3.2.2.3 Thí nghiệm 3: xác định chỉ số acid và hàm lượng acid béo tự do

Thực hiện thí nghiệm như sau: cân 1 g dầu cho vào bình erlen, sau đó hòa tan bằng 100 mL Ethanol 96%, đun trên bếp đến khi tan hoàn toàn giọt dầu Tiếp theo cho

5 – 10 giọt phenolphthalein 1%, dùng đũa thủy tinh khuấy đều Tiến hành chuẩn độ dung dịch trên bằng KOH 0,1 N đến khi xuất hiện màu hồng nhạt bền trong vòng 15 giây Ghi nhận số liệu và tính toán trị số acid WAV và hàm lượng acid béo tự do WFFA bằng công thức sau:

Trong đó:

WAV: là trị số acid c: là nồng độ của dung Các dụng cụ và thiết bị được chuẩn bị cho thí nghiệm bao gồm: ống nghiệm, bình tam giác, cốc, buret, ống đong, bếp đun, micropipet, cân phân tích, máy xét nghiệm sinh hóa bán tự động Prietest SMART của hãng ROBONIK (India)

Các hóa chất được chuẩn bị bao gồm: ethanol 96%, phenolphthalein 1%, KOH 0,1 N, nước cất, dietyl ete, chlorofom, Na2CO3 10%, NaOH 2%, aceton Bộ kit

Cholesterol CHOD/PAP Monoreagent của hãng Centronic GmbH (Germany)

dịch KOH (mol/L) v: là thể tích dung dịch

KOH đã sử dụng (mL) m: là khối lượng

mẫu thử (g)

WFFA = 0,5 x WAV Trong đó:

WFFA: là hàm lượng acid béo tự do

WAV: là trị số acid

15

3.2.2.4 Thí nghiệm 5: Định lượng cholesterol toàn phần trên thiết bị sinh hóa bán

tự động

Thực hiện thí nghiệm dựa trên bảng 3.3 sau đó đọc kết quả hàm lượng

Cholesterol trong mẫu dầu thực vật

Bảng 3.1 Quy trình xét nghiệm sinh hóa bán tự động

Ống nghiệm 3: Dầu ăn không tan trong ethanol, tạo thành lớp nổi phía trên

Hình 3.1 Sự hòa tan của lipid với các chất có trong ống nghiệm

Ống nghiệm 3: Một phần dầu ăn có nhũ tương với NaOH 2%, làm hỗn hợp

bị vẫn đục nhẹ, một phần dầu ăn không phản ứng nỗi lên phía trên

Lipid tan tốt trong dung môi không phân cực và tan ít hoặc không tan trong dung môi phân cực

3.3.2.4 Thí nghiệm 5

Từ kết quả phân tích, cho ta thấy được hàm lượng Cholesterol từ mẫu dầu ăn thấp hơn

so với mẫu chuẩn Cụ thể, hàm lượng Cholesterol từ mẫu là 63,58 mg/dL (Trị số bình

thường của cholesterol toàn phần là dưới 200 mg/dL)

- Từ chỉ số Cholesterol của mẫu, cho thấy dầu ăn này không gây hại cho sức

khỏe