miễn dịch bài 1

Trang 1 KỸ THUẬT KẾT TỦA KHUẾCH TÁN TRÊN THẠCHAgar gel immunodiffusion test –AGID testNguyên tắc- Kháng nguyên và kháng thể khuếch tán trong thạch Trang 2 2Chuẩn bị – Kháng nguyên: huyế

KỸ THUẬT KẾT TỦA

KHUẾCH TÁN TRÊN THẠCH

(Agar gel immunodiffusion test –

AGID test)

Nguyên tắc

- Kháng nguyên và kháng thể

khuếch tán trong thạch

- Khi gặp nhau sẽ kết hợp tạo thành

đường kết tủa trắng mờ đục

Chuẩn bị

– Kháng nguyên: huyết thanh gà (kháng nguyên)

– Huyết thanh: huyết thanh thỏ (đã được chích kháng

nguyên)

– Để có được huyết thanh thỏ phải thực hiện chích thỏ

– Quá trình chích từ 4 đến 6 lần

– Lần chích thứ nhất cách lần chích thứ 2 là 2 tuần

– Những lần chích sau cách nhau 1 tuần

– Lần chích cuối cùng cách 12 ngày đến 18 ngày giết

thỏ (Nuôi thỏ khỏang 2 tháng)

– Giết thỏ thu họach huyết thanh

– Kháng nguyên: huyết thanh gà

– Kháng thể: Kháng thể thỏ kháng kháng thể gà

– Chuẩn bị môi trường thạch:

- 12,5gr agar + 80gr NaCl + 5gr phenol trong 1lit

nước cất

- Đun cách thủy cho đến khi tan hết

- Lọc qua gối cellulose khi thạch đang nóng chảy

Chuẩn bị

Cách thực hiện

• Hút 4-5ml thạch nhỏ vào lame (2/3 lame)

• Lame phải sạch và khơ

• Lame được để trên mặt bàn bằng phẳng cho

đến khi thạch đơng lại

• Thạch phải dày khỏang 3mm

CÁCH ĐỔ THẠCH

Lưu ý bề dày và mặt phẳng của mặt thạch

Đặt lam thạch vào tủ lạnh khoảng 10 phút

để mặt thạch cứng lại

 Để vào trong ngăn mát tủ lạnh chừng 10 phút

cho thạch thật cứng

 Dùng ống chích đục 4 hoặc 6 lỗ

 Gồm:1 lỗ trung tâm, 4 lỗ xung quanh sao cho

khoảng cách các lỗ tương đối đều nhau

Cách đục lỗ trên mặt thạch

– Đặt lame vào trong đĩa petri (đã để sẵn bông

gòn vo tròn và thấm nước để xung quanh đĩa

petri)

– Cho kháng thể thỏ vào lỗ giữa và kháng thể

gà vào các lỗ xung quanh, mỗi lỗ khoảng

20µl- 50µl sao cho vừa với mặt thạch

– Ủ ở 37C

– Đọc kết quả 2 lần: sau 24h và 48h

Cách nhỏ kháng thể thỏ vào lỗ giữa

Chú ý trong quá trình thực hiện phản ứng:

- Mặt thạch phải phẳng khơng được lồi lõm

- Cho lame đã đục lỗ vào đĩa petri mới cho KT

thỏ và KT gà vào các lỗ

- Phải tạo độ ẩm

Đọc kết quả sau 24 – 48 tiếng

• PS: kháng thể chuẩn

(positive serum)

• AG: kháng nguyên

chuẩn (antigen)

- Giếng 1: dương tính

- Giếng 2: dương tính

yếu

- Giếng 3: âm tính