Miễn dịch bài 5: Kháng thể

KHÁNG THỂ TS BSTY Đinh Xuân Phát KN  ĐƯMD thích ứng đặc hiệu KN  Đáp ứng miễn dịch dịch thể - Lympho B  tương bào  kháng thể - Lympho T CD4 loại (TH2) - APC: tế bào tua, đại thực bào, lympho B Phim: Humoral Immune Response Animation Cấu trúc kháng thể 2H + 2L = 150 kD 100 kDa 45 kDa 50 kDa 25 kDa Cấu trúc kháng thể: loại Cấu trúc phân tử KT Sự ổn định: m e có vùng định để bù cho số cầu nối disulfit khơng có vùng lề (hinge) Nối disulfit: disulfide bonds Vùng biến đổi (V, variable): VH, VL Hinge chứa nhiều proline Vùng định (C, Constant): CH1, CH2, CH3, CH4 Trình tự axit amin chuỗi nhẹ - Axit amin 100-110 tính từ đầu amin chuỗi nặng nhẹ có tính biến đổi cao, gọi vùng biến đổi V - Đầu carbon chuỗi nhẹ có trình tự bảo tồn nên gọi vùng định Chỉ có loại trình tự bảo toàn chuỗi nhẹ, gọi kappa lambda Trên người, 60% chuỗi nhẹ có trình tự kappa, 40% lambda Trên chuột, 95% kappa 5% lambda Mỗi phân tử KT mang loại kappa lambda - Bản thân trình tự chuỗi lambda lại chia thành phân nhóm người phân nhóm chuột Trình tự axit amin chuỗi nặng - Axit amin 100-110 tính từ đầu amin chuỗi nặng nhẹ có tính biến đổi cao, gọi vùng biến đổi V - Phần cịn lại, tính đến tận đầu carbon chuỗi nặng, có trình tự bảo tồn nên gọi vùng định Trình tự bảo tồn chuỗi nặng chia thành lớp: mu, gamma, delta, alpha, epsilon Trình tự axit amin chuỗi nặng - Độ dài vùng định 330 aa lớp alpha, gamma, delta 440 aa lớp mu epsilon Trình tự lớp alpha có khác biệt nhỏ phân thành phân lớp alpha-1 alpha-2; tương tự, lớp gamma phân thành phân lớp người - Chuỗi nặng định lớp kháng thể tương ứng: IgM, IgG, IgD, IgA, and IgE + Mỗi lớp KT có chuỗi nhẹ kappa lambda + Mỗi phân tử KT chứa chuỗi nặng giống hệt chuỗi nhẹ giống hệt Các lớp kháng thể (Ig) Hình dạng lớp KT: lớp 80% KT huyết IgG IgM can be converted to IgA?? Người: lớp Heo: khơng IgE Trâu bị: IgA, IgG, IgM Gà: IgA, IgM, IgY (tương ứng IgG) IgD Chỉ diện bề mặt lympho B trưởng thành chưa hoạt hóa (B ngây thơ) Chức năng: chưa rõ, nghi có vai trị q trình trưởng thành hoạt hóa lympho B IgE -Hàm lượng thấp huyết (0.0003 mg/ml) hoạt tính mạnh -Tác nhân số dị ứng: sốc phản vệ, sốt cỏ (hey fever) phát ban (hives) -Bám vào thụ thể Fc bạch cầu ưa kiềm tế bào mast -Người hay bị dị ứng thường có mức IgE cao bình thường khoảng 5% + IgE cao -> dị ứng + IgG cao -> IgE trở nên thấp so với Ig khác  giảm dị ứng IgE tế bào Mast - 5-15mg IgA sản xuất tiết vào màng nhầy ruột ngày - loại thụ thể Fcε1 (ái lực cao) (ái lực thấp) - Xét nghiệm dị ứng: cách đo lượng IgE đặc hiệu cho loại KN mục tiêu (allergen) Isotype, Allotype, Idiotype Xem xét KT protein KN  thuật ngữ epitope KN KT: -Isotype: khác biệt lớp KT (IgM, IgG, IgA…), định vùng định C hai chuỗi H, nghĩa có isotype Isotypy, Allotypy, Idiotypy -Allotype: Cùng phân lớp KT epitope KN, từ nhiều cá thể khác loài; định vùng C H L -Idiotype: phân lớp KT cá thể, epitope KN khác nhau, định vùng biến đổi V chuỗi H L Kháng thể đơn dòng Kohler and Milstein Sản xuất kháng thể đơn dòng - Myeloma: sống mãi - Tương bào: sản xuất kháng thể đơn dòng - Hybridoma: sống để sản xuất kháng thể đơn dịng Q trình tạo tế bào Hybridoma: - Myeloma: phải thiếu gen mã hóa enzyme hypoxanthine-guanine phosphoribosyltransferase (HGPRT), thymidine kinase enzyme quan trọng trình tạo lập purine (adenine guanine, base ATP GTP) pyrimidine (TTP) Môi trường HAT HAT Medium (hypoxanthine-aminopterinthymidinemedium) Aminopterin ức chế tổng hợp dNTP Hypoxanthine thymidine cung cấp nguyên liệu tạo lập purine pyrimidine Kháng thể đơn dòng Sản xuất kháng thể đơn dòng - Tương bào plasma: thu từ lách - Kỹ thuật tiếp hợp: xung điện (electrofusion) - Môi trường nuôi cấy sau tiếp hợp (10-14 ngày để chọn lọc): hypoxanthine-aminopterinthymidine (HAT) Aminopterin ức chế khả tổng hợp nucleotide từ axit hữu axit amin Hypoxanthine nguồn purin để tổng hợp GTP nhờ HGPRT Thymidine dùng để tổng hợp TTP nhờ thymidine kinase Sự tổng hợp thông qua đường tận dụng (salvage pathway) Thụ thể lympho B (BCR) Là Ig có phần protein xuyên màng tế bào (mIg) kết hợp với Iga/Igb có cấu trúc xuyên màng Iga/Igb: phần chịu trách nhiệm phát động đường truyền tín hiệu sau KN bám lên thụ thể Ig Ig Superfamily Tất có chung đặc điểm: chứa chuỗi axit amin có cấu trúc cuộn gấp đặc trưng globulin miễn dịch (Ig domain or fold) Thụ thể Fc (Ig Superfamily) Poly IgR: thụ thể hỗ trợ vận chuyển IgA màng nhầy Phản ứng trung hòa (NA) Phản ứng trung hòa (NA)