So sánh trọng lượng quả được thụ tinh bằng hạt phấn dưa hấu Citrullus lanatusThuberg Matsum.. Dưa hấu sau khi thụ phấn bằng hạt phấn bảo quản trong dung môi acetone..38Hình 3.6: Hình thá
Vật liệu và phương pháp
Vật liệu
1.1 Địa điểm và thời gian nghiên cứu
+ Phòng công nghệ tế bào Phòng thí nghiệm Công Nghệ Tế Bào, Khoa Công Nghệ Sinh Học Trường Đại học Mở Thành phố Hồ Chí Minh.
+ Vườn dưa tại lô 60, ấp Bưng Còng, xã Thanh Tuyền, huyện Dầu tiếng, tỉnh Bình Dương và vườn dưa đường Phạm Văn Triệu, xã Bình Trinh Đông, huyện Tân Trụ, tỉnh Long An.
– Giống Dưa hấu hắc mỹ nhân TN 1386 của Công ty giống Phú nông
Hoa đực hoa dưa hấu tại vườn dưa ở lô 60, ấp Bưng Còng, xã Thanh Tuyền, huyện Dầu tiếng, tỉnh Bình Dương và vườn dưa đường Phạm Văn Triệu, xã Bình Trinh Đông, huyện Tân Trụ, tỉnh Long An.
Hình 2.1 Vườn dưa thực hiện thí nghiệm
1.3 Thiết bị và dụng cụ
Phòng chuẩn bị môi trường, phòng hấp khử trùng, phòng bảo quản hóa chất: nồi hấp, máy nước cất, lò vi sóng, tủ lạnh, tủ sấy, máy đo pH, cân kỹ thuật, cân phân tích, đĩa Petri, Erlen, Eppendorf, đũa thủy tinh, Bercher.
Phòng cấy vô trùng: tủ cấy, máy điều hòa, dao cấy, kẹp, đèn cồn.
▪ Dung môi hữu cơ: acetone
Phương pháp nghiên cứu
2.1 Kiểm tra khả năng sống của hạt phấn dưa hấu Citrullus lanatus
(Thunberg) Matsum & Nakai sau khi bảo quản
Hình 2.1 Hoa đực dưa hấu mới nở
▪ Mục đích thí nghiệm: tìm ra thời gian thích hợp để bảo quản hạt phấn.
▪ Vật liệu thí nghiệm: phấn hoa dưa hấu lúc mới nở và phấn hoa dưa hấu được bảo quản.
▪ Mô tả thí nghiệm: thu nhận hạt phấn của cây dưa hấu khi hoa bắt đầu nở Sử dụng dao mổ tách bao phấn ra khỏi hoa chứa trong eppendoft 2ml, mỗi eppendoft chứa 0.03 ± 0,01 g bao phấn Đem bao phấn đi sấy ở nhiệt độ 40 o C trong vòng 1 giờ Sau đó ngâm với dung môi acetone 30 phút, thay dung môi đến khi dung môi bảo quản có màu trong suốt Sau đó bảo quản hạt phấn trong thời gian 5 ngày, 10 ngày và 15 ngày liên tiếp Sau các khoảng thời gian bảo quản, tiến hành nhuộm với thuốc nhuộm TTC, đợi 36 – 48 giờ, đọc kết quả Hạt phấn sống sẽ có màu nhuộm màu đỏ bên trong màng tế bào, hạt phấn chết sẽ không bắt màu.
▪ Thời gian thực hiện: Từ ngày 20/9 đến 24/10.
▪ Thí nghiệm được bố trí theo kiểu hoàn toàn ngẫu nhiên Mỗi nghiệm thức lặp lại
▪ Chỉ tiêu đánh giá: tỉ lệ hạt phấn sống / tổng số hạt phấn Hạt phấn sống là hạt phấn tế bào còn hoạt động có chứa enzyme dehydrogenase ty thể sẽ cho kiểm tra TTC dương tính Enzyme dehydrogenase ty thể làm giảm muối tetrazolium và chuyển nó thành một formazon màu đỏ dưới ánh sáng khả kiến
▪ Kết quả thí nghiệm được xử lý bằng phần mềm Statgraphics Plus 3.0, sự khác biệt có ý nghĩa ở mức 0,05 của giá trị được thể hiện bởi các chữ cái kèm theo, phân hạng Duncan.
Hình 2.2 Trạng thái hạt phấn sau khi nhuộm TTC 36 – 48 giờ
Bảng 1: Nghiệm thức kiểm tra khả năng sống của hạt phấn sau khi bảo quản dưa hấu Citrullus lanatus (Thunberg) Matsum & Nakai trong dung môi acetone
Nghiệm thức Thời gian (ngày) ĐC 0
2.2 Quan sát hình thái hạt phấn dưa hấu Citrullus lanatus (Thuberg)
▪ Mục đích thí nghiệm: xác định và mô tả hình thái hạt phấn trước và sau khi bảo quản.
▪ Vật liệu thí nghiệm: hạt phấn dưa hấu lúc nở và hạt phấn bảo quản sau 5, 10 và
15 ngày trong dung môi acetone.
▪ Mô tả thí nghiệm: hạt phấn sau khi thu nhận và hạt phấn sau khi bảo quản ở các khoảng thời gian 5 ngày, 10 ngày và 15 ngày liên tiếp, được nhuộm trong acetocarmine và quan sát dưới kính hiển vi quang học theo sơ đồ 2.
▪ Thời gian thực hiện: từ ngày 20/9 đến 24/10
Hình 2.3: Sơ đồ nhuộm hạt phấn hoa dưa hấu bằng acetocarmine
2.3 Kiểm tra tỉ lệ thụ tinh của hạt phấn bảo dưa hấu Citrullus lanatus
(Thunberg) Matsum & Nakai trong dung môi acetone
▪ Mục đích thí nghiệm: khảo sát khả năng thụ tinh của hạt phấn sau khi bảo quản.
▪ Vật liệu thí nghiệm: hạt phấn dưa hấu lúc nở và hạt phấn bảo quản sau 5, 10 và
15 ngày trong dung môi acetone.
▪ Mô tả thí nghiệm: hạt phấn sau khi được bảo quản trong dung môi acetone ở 5 ngày, 10 ngày và 15 ngày liên tiếp sẽ được thụ phấn Hoa cái trước khi nở 1 ngày được bao lại bằng giấy chống thấm nước nhằm cách ly hoa cái khỏi các nguồn hạt phấn khác Khi hoa cái nở, sử dụng 0.03 ± 0,01 g bao phấn thụ phấn trên mỗi hoa cái Sau đó bao lại hoa cái, tiếp tục ghi nhận kết quả và thống kê.
▪ Thí nghiệm được bố trí theo kiểu hoàn toàn ngẫu nhiên với số lần lặp lại 5 lần.
▪ Thời gian thực hiện: 24/10 đến 05/11.
▪ Chỉ tiêu đánh giá: tỉ lệ đậu trái/ cây.
▪ Kết quả thí nghiệm được xử lý bằng phần mềm Statgraphics Plus 3.0, sự khác biệt có ý nghĩa ở mức 0,05 của giá trị được thể hiện bởi các chữ cái kèm theo, phân hạng Duncan.
Bảng 2: Nghiệm thức thí nghiệm thí nghiệm kiểm tra tỉ lệ thụ tinh của hạt phấn bảo dưa hấu Citrullus lanatus (Thunberg) Matsum & Nakai trong dung môi acetone
Nghiệm thức Thời gian (ngày) ĐC 0
2.4 So sánh trọng lượng quả được thụ tinh bằng hạt phấn dưa hấu
Citrullus lanatus (Thuberg) Matsum & Nakai trong dung môi hữu cơ aceton e
▪ Mục đích thí nghiệm: So sánh trọng lượng quả dưa hấu trong từng khoảng thời gian bảo quản hạt phấn khác nhau.
▪ Vật liệu thí nghiệm: hạt phấn dưa hấu lúc nở và hạt phấn bảo quản sau 5, 10 và
15 ngày trong dung môi acetone.
▪ Mô tả thí nghiệm: hoa cái dưa hấu được thụ phấn từ hạt phấn được bảo quản trong dung môi acetone bảo quản ở nhiệt độ - 5 ± 2 o C Hạt phấn sau khi được bảo quản trong dung môi acetone ở 5 ngày, 10 ngày và 15 ngày liên tiếp sẽ được thụ phấn Hoa cái trước khi nở 1 ngày được bao lại bằng giấy chống thấm nước nhằm cách ly hoa cái khỏi các nguồn hạt phấn khác Khi hoa cái nở, sử dụng 0.03 ± 0,01 g bao phấn thụ phấn trên mỗi hoa cái Sau đó bao lại hoa cái, tiếp tục chăm sóc thu nhận quả Tiến hành ghi nhận và thống kê.
▪ Thí nghiệm được bố trí theo kiểu hoàn toàn ngẫu nhiên với số lần lặp lại 5 lần.
▪ Thời gian thực hiện: 05/11 đến 10/11.
▪ Chỉ tiêu đánh giá: trọng lượng quả.
▪ Kết quả thí nghiệm được xử lý bằng phần mềm Statgraphics Plus 3.0, sự khác biệt có ý nghĩa ở mức 0,05 của giá trị được thể hiện bởi các chữ cái kèm theo,phân hạng Duncan.
Bảng 3 Nghiệm thức thí nghiệm thí nghiệm so sánh trọng lượng quả được thụ tinh bằng hạt phấn dưa hấu Citrullus lanatus (Thuberg) Matsum & Nakai trong dung môi hữu cơ acetone
Nghiệm thức Thời gian (ngày) ĐC 0
2.5 So sánh chất lượng hạt cây dưa hấu Citrullus lanatus (Thuberg) Matsum & Naikai
▪ Mục đích thí nghiệm: So sánh chất lượng hạt trong từng khoảng thời gian bảo quản hạt phấn khác nhau.
▪ Vật liệu thí nghiệm: hạt phấn dưa hấu lúc nở và hạt phấn bảo quản sau 5, 10 và
15 ngày trong dung môi acetone.
▪ Mô tả thí nghiệm: sau khi thu nhận trái, tiến hành tách hạt dưa hấu và rữa kỹ phơi khô Sau đó ghi nhận và thống kê kết quả.
▪ Thí nghiệm được bố trí theo kiểu hoàn toàn ngẫu nhiên với số lần lặp lại 5 lần.
▪ Thời gian thực hiện: 24/10 đến 05/11.
▪ Chỉ tiêu đánh giá: tỉ lệ hạt chắc / tổng số hạt.
▪ Kết quả thí nghiệm được xử lý bằng phần mềm Statgraphics Plus 3.0, sự khác biệt có ý nghĩa ở mức 0,05 của giá trị được thể hiện bởi các chữ cái kèm theo, phân hạng Duncan.
Bảng 4 Nghiệm thức thí nghiệm so sánh chất lượng hạt cây dưa hấu Citrullus lanatus (Thuberg) Matsum & Naikai
Nghiệm thức Thời gian (ngày) ĐC 0
2.6 Kiểm tra độ nảy mầm của hạt dưa hấu Citrullus lanatus (Thuberg)
▪ Mục đích thí nghiệm: kiểm tra độ nảy mầm của hạt dưa hấuCitrullus lanatus
(Thunberg) Matsum & Nakai được thụ tinh bằng hạt phấn bảo quản trong dung môi acetone.
▪ Vật liệu thí nghiệm: hạt dưa hấu được tách ở các quả trong từng nghiệm thức.
▪ Mô tả thí nghiệm: sau khi tiến hành tách hạt dưa hấu ở quả trong từng nghiệm thức khác nhau Tiến hành ươm hạt trên bông ẩm và ghi nhận kết quả
▪ Thời gian thực hiện: từ ngày 11/05/2020 đến 05/06/2020
▪ Thí nghiệm được bố trí theo kiểu hoàn toàn ngẫu nhiên với số lần lặp lại 15 lần.
▪ Chỉ tiêu đánh giá: tỉ lệ nảy mầm hạt = số hạt nảy mầm / tổng số hạt.
▪ Kết quả thí nghiệm được xử lý bằng phần mềm Statgraphics Plus 3.0, sự khác biệt có ý nghĩa ở mức 0,05 của giá trị được thể hiện bởi các chữ cái kèm theo,phân hạng Duncan.
